专利名称：检测样品中的甲基化dna的方法
检测样品中的甲基化DNA的方法
技术领域：
本发明涉及从含DNA的样品检测甲基化DNA的方法。
背景技木高等真核生物的染色体DNA中已知构成DNA的碱基之中C(胞嘧啶)的5位被甲基化。这样的DNA的甲基化作为基因表达的控制结构发挥功能。例如，在某基因的启动子 区域存在的富含CpG序列的区域(也称为“CpG岛”或“ CG岛”)被甲基化时，其基因的转录被抑制。此现象也称为“基因的沉默”。对此，当CpG岛不被甲基化时，由于转录因子可结合到启动子，从而基因的转录变得可能。如上所述，DNA的甲基化是基因表达的控制结构之一。即，DNA的甲基化在初期胚发生、组织特异性的基因的表达、作为哺乳动物中特征性的现象的基因印迹及X染色体的失活、染色体的稳定化、DNA复制之时机等各种各样的生理的及病理性的现象中实现重要的作用。再者近年明白，DNA的甲基化的异常、即，由DNA的甲基化所致的基因的沉默，与癌等的疾病相关。因此，对于各种的基因检测甲基化DNA的重要性近年越发增加。检测甲基化DNA的方法在所述技术中已知各种方法,可例举例如亚硫酸氢盐测序法、使用甲基化感受性限制酶的方法、使用甲基化DNA免疫沉降的方法(MeDIP法)等。亚硫酸氢盐测序法是通过亚硫酸氢盐的作用将DNA中的非甲基化胞嘧啶变换为尿嘧啶，通过确定碱基序列，检测DNA中的被甲基化的部位。使用甲基化感受性限制酶的方法是利用甲基化感受性限制酶不可切断被甲基化的识别序列的特点，通过检查其切断结果来检测甲基化DNA。MeDIP法是使用特异性地识别甲基化DNA的抗体或甲基化DNA结合蛋白质来进行免疫沉降，通过将得到的甲基化DNA供于微阵列解析等来检测甲基化DNA。再有，此方法也被称为MeDIP-Chip法。在特开2008-263961号公报中公开了在使用甲基化感受性限制酶的检测甲基化DNA的方法中，使用抗甲基化DNA抗体将样品中的甲基化DNA固定到固相，用甲基化感受性限制酶进行消化处理的方法。如此，甲基化DNA的检测的重要性增加，期望新的检测甲基化DNA的方法的开发。
发明内容本发明的范围仅由随附的权利要求定义，且不以任何程度受此发明内容部分的影响。本发明旨在提供用于检测样品中的甲基化DNA的新的方法。本发明人惊人地发现，通过使可结合到甲基化DNA的蛋白质和甲基化DNA结合，该甲基化DNA不被脱氧核糖核酸酶完全地分解而残留，再者得到的脱氧核糖核酸酶分解产物不给检测步骤带来影响，从而完成本发明。S卩，本发明是(I)检测样品中的甲基化DNA的方法，其包括
使有含甲基化DNA的可能性的样品和可与甲基化DNA结合的蛋白质接触，从而使上述样品中的甲基化DNA和上述蛋白质结合；使通过上述结合步骤得到的样品和至少I种脱氧核糖核酸酶接触，而将上述样品中的DNA分解 '及在通过上述分解步骤得到的样品中，通过与上述蛋白质的结合来检测不被上述脱氧核糖核酸酶分解的甲基化DNA ;其中上述脱氧核糖核酸酶的至少I种是与可分解单链DNA的甲基化感受性限制酶不同的脱氧核糖核酸酶。(2)⑴所述的方法，其中上述可与甲基化DNA结合的蛋白质是抗甲基化DNA抗体或甲基化DNA结合蛋白质。 (3)⑴所述的方法，其中上述可与甲基化DNA结合的蛋白质是抗甲基化DNA抗体。(4) (I)所述的方法，其中上述可与甲基化DNA结合的蛋白质是选自下列的至少I种甲基化DNA结合蛋白质MBD1、MBD2、MBD4 及 MeCP2。(5) (I) ⑷之任一项所述的方法，其中上述样品是由培养细胞株或从活体采集的血液、体液、组织或细胞制备的样品。(6) (I) ⑷之任一项所述的方法，其中上述脱氧核糖核酸酶是选自下列的至少I种脱氧核糖核酸酶I、外切核酸酶I、λ -外切核酸酶、Τ7外切核酸酶、外切核酸酶III、RecJ型外切核酸酶、外切核酸酶T、BAL31核酸酶、緑豆核酸酶、微球菌-核酸酶及T7内切核酸酶。(7) (I) ⑷之任一项所述的方法，其中上述样品是有含单链甲基化DNA的可能性的样品，在检测上述甲基化DNA的步骤中，检测单链甲基化DNA。(8) (I) ⑷之任一项所述的方法，其中在检测上述甲基化DNA的步骤中，使用核酸扩增法、碱基测序法或微阵列法来检测甲基化DNA。根据本发明可提供用于检测样品中的甲基化DNA的新的方法。根据本发明还可省略在以往的检测甲基化DNA的方法中对于检测精度的升高必要的清洗操作及纯化操作。此时，可更简便地检测样品中的甲基化DNA。
图I是伴随以作为合成寡核苷酸的6MeCG寡核苷酸的溶液作为样品，作为脱氧核糖核酸酶使用DNaseI的本发明的检测方法，通过PCR法检测该寡核苷酸的电泳照片。图2是伴随以作为合成寡核苷酸的6MeCG寡核苷酸的溶液作为样品，作为脱氧核糖核酸酶使用外切核酸酶I的本发明的检测方法，通过PCR法检测该寡核苷酸的电泳照片。图3是伴随以从乳癌细胞株MCF7得到的基因组DNA作为样品，作为脱氧核糖核酸酶使用DNaseI的本发明的检测方法，通过PCR法检测甲基化DNA的电泳照片。
图4是伴随以从MCF7细胞得到的基因组DNA作为样品，作为脱氧核糖核酸酶使用外切核酸酶I的本发明的检测方法，通过PCR法检测甲基化DNA的电泳照片。实施方式
以下參照
本发明的优选实施方式。本说明书中“CpG部位”是指在DNA的碱基序列中，胞嘧啶(C)和鸟嘌呤(G)在从5’向3’的方向依此顺序邻接的部位。再有，CpG的“p”的文字表示胞嘧啶和鸟嘌呤之间的
憐Ife~■酷键。本说明书中“甲基化CpG部位”是指胞嘧啶的5位被甲基化修饰的CpG部位。即，在甲基化CpG部位，5-甲基胞嘧啶(甲基化胞嘧啶)和鸟嘌呤在从5’向3’的方向依此顺序邻接。本说明书中“甲基化DNA”是指含至少I个5-甲基胞嘧啶的DNA。在本发明的检测样品中的甲基化DNA的方法(以下也称为“检测方法”)中，首先，使有含甲基化DNA的可能性的样品和可与甲基化DNA结合的蛋白质接触。通过此接触，在该样品中存在甲基化DNA之时,可使甲基化DNA和上述的蛋白质结合(以下，将此步骤称之为“结合步骤”)。在一方面，本发明的检测方法是体外方法。在本发明的检测方法中，与上述的蛋白质结合的甲基化DNA不被以下的步骤中使用的脱氧核糖核酸酶完全地分解。即，通过与上述的蛋白质的结合，甲基化DNA中的5-甲基胞嘧啶及其周边区域免于被脱氧核糖核酸酶分解。提供于本发明的检测方法的样品只要是有含甲基化DNA的可能性的样品，就不特别限定。那样的样品而言，可例举例如，从活体样品制备的含有DNA的样品、含有含至少I个5-甲基胞嘧啶的合成多核苷酸的样品等。活体样品而言，可例举例如培养细胞株、从活体采集的血液、体液、组织、细胞等。本说明书中“血液”是全血、以及从其得到的血清及血浆之任何也可。在本说明书中，“组织”及“细胞”包括从活体采集的组织及细胞的培养物。当有含甲基化DNA的可能性的样品是由从活体采集的血液、体液、组织或细胞制备的样品时，本发明的检测方法的结果可在与DNA的甲基化关联的疾病的诊断或判断中利用。在本发明的实施方式中，从活体样品的含有DNA的样品的制备可根据所述技术中公知的方法来进行。例如，可将含使细胞或组织可溶化的表面活性剂(胆酸钠、十二烷基硫酸钠等)的可溶化液和活体样品混合之后，实施物理处理(搅拌、均化、超声波破碎等)来使活体样品中含的DNA游离到可溶化液中，通过提取DNA来制备样品。在本发明的实施方式中，将提取的DNA通过所述技术中公知的方法纯化也可。从活体样品的DNA的提取及纯化使用市售的试剂盒进行也可。在本发明的实施方式中，样品中的DNA优选是100 IOOObp左右的DNA片段。通过将样品中含的DNA片段化成那样的长度，可使甲基化DNA和可结合到甲基化DNA的蛋白质有效结合。DNA的片段化可通过物理处理、化学处理、限制酶处理等的所述技术中公知的方法来进行。物理处理而言，可例举例如超声波破碎。化学处理而言，可例举例如使用氢氧化钠的碱处理。限制酶处理中，可基于目的DNA的碱基序列适宜选择限制酶，例如可使用MseI、BamHI等。在本发明的实施方式中，优选通过物理处理将样品中的DNA片段化。
在本发明的实施方式中，有在样品中含的可能性的甲基化DNA是单链甲基化DNA也可。即，上述的样品是有含单链甲基化DNA的可能性的样品，后述的检测甲基化DNA的步骤是检测单链甲基化DNA的步骤时，也包括在本发明的范围内。在本发明的实施方式中，在上述的结合步骤之前，也可进行将样品中含的DNA变性为单链的操作。那样的操作在所述技术中公知，例如，可通过将有含甲基化DNA的可能性的样品加热至95°C左右之后，快速冷却至4°C，而将样品中的DNA变成单链。在本发明的实施方式中，可与甲基化DNA结合的蛋白质只要是可识别并结合DNA中的5-甲基胞嘧啶或甲基化CpG部位的蛋白质，就不特别限定。那样的蛋白质而言，可例举例如抗甲基化DNA抗体、甲基化DNA结合蛋白质等。在它们之中，也优选抗甲基化DNA抗体。特别是，在检测单链的甲基化DNA之时，优选使用抗甲基化DNA抗体。抗甲基化DNA抗体而言，可例举抗甲基化胞嘧啶抗体及抗甲基化CpG抗体。在本发明的实施方式中，抗甲基化胞苷抗体也可作为抗甲基化DNA抗体来使用。 在本发明的实施方式中，抗甲基化DNA抗体也可为多克隆抗体及单克隆抗体之任何。另外，作为抗甲基化DNA抗体而言，使用通过将抗甲基化DNA抗体片段化而得到的活性片段也可。那样的活性片段只要是不失向甲基化DNA的特异性结合活性的片段，就不特别限定，可例举例如Fab片段、F(ab' )2片段、sFv片段等。活性片段，例如，可通过将纯化的抗甲基化DNA单克隆抗体用木瓜蛋白酶、胃蛋白酶、胰蛋白酶等的酶切断来制备。在本发明的实施方式中，使用市售的抗甲基化DNA抗体也可。市售的抗甲基化DNA抗体而言，可例举例如表I所示的抗体。表I
厂商抗体名克隆名免疫动物
Calbiochem抗-5-甲基胞嘧啶小鼠mAb16233D3小鼠
abeam5-甲基胞苷33D3小鼠
Eurogentec5-甲基胞苷单克隆小鼠
Aviva System Biology5-甲基胞喃淀33D3小鼠
Novus Biologicals胞卩密淀(5-甲基)多克隆羊
Diagenode5-甲基胞苷单克隆小鼠在本发明的实施方式中，使用通过所述技术中公知的方法制备的抗甲基化DNA抗体也可。抗甲基化DNA抗体，例如，可通过以下的顺序制备。首先，将5-甲基胞嘧啶等的甲基化DNA作为免疫原，根据需要与佐剂一同施用于适宜的哺乳动物(例如大鼠、小鼠等)而免疫。接下来，从免疫的动物的脾脏细胞等，筛选产生对免疫原的抗体的抗体产生细胞来选择。将得到的抗体产生细胞与骨髄瘤细胞融合而得到杂交瘤，通过将其筛选，可得产生有向甲基化DNA的特异性结合活性的抗体的杂交瘤。从将得到的杂交瘤的培养上清或该杂交瘤施用于小鼠的腹腔内而得到的腹水，可得抗甲基化DNA抗体。
产生抗甲基化DNA抗体的杂交瘤而言，可例举例如，在独立行政法人制品评价技术基盘机构(日本国千叶县木更津市上总铼足2-5-8、邮政编码292-0818)，于2009年8月25日以保藏号NITE BP-805保藏的杂交瘤SCR2、以及于2009年9月10日以保藏号NITEBP-810、保藏号NITE BP-811及保藏号NITE BP-812分别保藏的杂交瘤SCRl、SCR3及SCR6。
在本发明的实施方式中，可使用由上述的杂交瘤SCR1、SCR2、SCR3及SCR6产生的抗甲基化DNA抗体。甲基化DNA结合蛋白质而言，可例举例如MBD1(甲基胞嘧啶结合域蛋白I)、MBD2(甲基胞嘧啶结合域蛋白2)、MBD4(甲基胞嘧啶结合域蛋白4)、MeCP2 (甲基CpG结合蛋白2)等。这些的蛋白质自体在所述技术中公知。在本发明的实施方式中，甲基化DNA结合蛋白质只要是可特异性地识别并结合甲基化DNA，是野生型的氨基酸序列中含I个以上的氨基酸的缺失、取代或附加的变异型也可。再有，那样的变异型的制备方法本身在所述技术中公知。在本发明的实施方式中，有含甲基化DNA的可能性的样品和可与甲基化DNA结合的蛋白质的接触可通过向样品中添加该蛋白质来进行。在本发明的实施方式中，可与甲基化DNA结合的蛋白质的添加量不特别限定，只要是可确保此后的检测步骤中可充分地检测的甲基化DNA量的添加量即可。例如，样品中的核酸含量是Ing 10 μ g时，抗甲基化DNA抗体的添加量是Ing 10 μ g左右即可。接触条件(周围温度及时间)根据可结合到甲基化DNA的蛋白质的种类而不同，但通常于4 42°C进行10分钟 24小时左右即可。在本发明的检测方法中，使通过上述的结合步骤得到的样品和至少I种脱氧核糖核酸酶接触来分解该样品中的DNA(以下，将此步骤称之为“分解步骤”)。在此步骤中，未和可与甲基化DNA结合的蛋白质结合的DNA、S卩非甲基化DNA被脱氧核糖核酸酶分解，但与该蛋白质结合的甲基化DNA通过其结合而5-甲基胞嘧啶及其周边区域不分解。即，在本发明的检测方法中，通过上述的结合步骤及分解步骤可除去非甲基化DNA。在本发明的实施方式中，脱氧核糖核酸酶也可为内切核酸酶及外切核酸酶之任何。在本发明的实施方式中，作为脱氧核糖核酸酶也可使用限制酶。此时，DNA切断部位限于该限制酶的识别区域。因此，将在分解步骤得到的样品直接用于后述的检测步骤时，要留意分解物不给之后的检测步骤带来影响。例如，通过使用多种限制酶，可充分地分解非甲基化 DNA。在本发明优选实施方式中，脱氧核糖核酸酶是选自下列的至少I种脱氧核糖核酸酶I (DNaseI)、外切核酸酶I、λ -外切核酸酶、Τ7外切核酸酶、外切核酸酶III、RecJ型外切核酸酶、外切核酸酶T、BAL31核酸酶、緑豆核酸酶、微球菌-核酸酶及Τ7内切核酸酶。在本发明的检测方法中，使用的脱氧核糖核酸酶的至少I种是与可分解单链DNA的甲基化感受性限制酶不同的脱氧核糖核酸酶。其中“可分解单链DNA的甲基化感受性限制酶”是指可不切断单链DNA中的含被甲基化的胞嘧啶的识别序列，仅切断含未甲基化的胞嘧啶的识别序列的限制酶。那样的限制酶而言，可例举例如Hhal。
在本发明的实施方式中，通过上述的结合步骤得到的样品和脱氧核糖核酸酶的接触可通过向样品添加脱氧核糖核酸酶来进行。在本发明的实施方式中，脱氧核糖核酸酶的添加量不特别限定，只要是在之后的检测步骤中可充分地分解非甲基化DNA的添加量即可。例如，在样品中的核酸含量是Ing 10μ g时，DNaseI的添加量是O. I 120U左右即可。接触条件(周围温度及时间)根据脱氧核糖核酸酶的种类而不同，通常是于4 42°C进行10分钟 24小时左右即可。在本发明的检测方法中，通过上述的分解步骤得到的样品直接在以下的检测步骤中使用也可。因此，也可省略用于除去非甲基化DNA的清洗及甲基化DNA的纯化。/在本发明的实施方式中，根据以下的检测步骤中使用的检测手段，实行以在上述的分解步骤得到的样品中含的甲基化DNA作为模板的核酸扩增法也可。扩增DNA的方法本身只要是所述技术中公知的DNA扩增法，就不特别限定。可例举例如IVT(体外转录)扩增法、SPIA(商标)扩增法、GenomiPhi扩增法等。在本发明的检测方法中，通过与在上述的分解步骤得到的样品中的，可结合甲基化DNA的蛋白质的结合来检测不被脱氧核糖核酸酶分解的甲基化DNA(以下，将此步骤称之为“检测步骤”)。本说明书中“检测甲基化DNA的”是指检测甲基化DNA中的目的CpG部位的甲基化的有无，确定甲基化DNA的碱基序列，及解析甲基化DNA中的CpG部位的甲基化的频度。其中“甲基化的频度”是指甲基化DNA中的目的区域中存在的全部的CpG部位或任意的CpG部位之中，甲基化CpG部位的数或其比例。在本说明书中，甲基化DNA的检测是目的DNA的甲基化的判断、甲基化DNA的碱基序列的确定、及甲基化DNA的一井解析等，只要是在上述的分解步骤不被脱氧核糖核酸酶分解的甲基化DNA的检测，就不特别限制。在本发明的实施方式中，检测步骤中使用的方法只要是可检测在上述的分解步骤不被脱氧核糖核酸酶分解的甲基化DNA的方法，就不特别限定，可从所述技术中公知的方法适宜选择。那样的方法而言，可例举核酸扩增法、碱基测序法、微阵列法等。例如，将核酸扩增法用于检测步骤来判断目的DNA的甲基化的有无之吋，使用设计成夹目的DNA中的CpG部位的引物组来实行PCR法，可判断扩增产物中目的DNA的甲基化的有无。另外，通过定量PCR法，可定量样品中的甲基化DNA含量。再者，将作为碱基测序法之一的高速测序法(第二代测序法)用于检测步骤，则可一井解析甲基化DNA。那样的高速测序法中使用的测序仪而言，可例举例如ABI3730 X I (Life Technologies公司)、GSFLX Titanium (Roche 公司)、等。将微阵列法用于检测步骤也可。此时，微阵列虽然不特别限定，但优选是DNA微阵列或DNA芯片。另外,使用GeneChip (注册■商标)(Affymetrix公司)等市售的微阵列也可，使用通过所述技术中公知的方法制备的微阵列也可。将作为有从全基因组区域或指定的区域等间隔提取的碱基序列的探针配置成瓦状的微阵列的铺瓦阵列用于检测步骤，则可一井解析甲基化DNA。在本发明的实施方式中，将微阵列法用于检测步骤时，上述的样品中的DNA优选用所述技术中公知的标记物质标记。从而，本发明的检测方法再包括将样品中的DNA标记的步骤也可。标记物质而言，可例举荧光物质、生物素等的半抗原、放射性物质等。荧光物质而言，可例举Cy3、Cy5、Alexa Fluor (商标)、FITC等。在微阵列法中，通过标记DNA而信号测定变得容易。所述技术中公知将DNA用标记物质标记的方法本身。上述的信号可根据微阵列的种类而为适宜的信号。例如，信号是在与微阵列的各探针杂交的DNA存在之时发生的电信号也可，如上所述样品中的DNA被标记时，是从标记物质发生的荧光、发光、放射线等的信号也可。信号的检测可通过通常的微阵列測定装置中具备的扫描仪来进行。扫描仪而言，可例举例如，GeneChip (注册■商标)扫描仪30007G (Affymetrix公司)等。接下来根据实施例详细地说明本发明，但本发明不限于这些实施例。实施例实施例I作为检测对象的甲基化DNA，使用作为含6个5-甲基胞嘧啶的寡核苷酸的6MeCG寡核苷酸。以下示6MeCG寡核苷酸的碱基序列。< 6MeCG 寡核苷酸 >5' -CGAGGTCGACGGTATTGATm5cGAGTATm5cGATAGTm5cGATATm5cGATATm5cGATATm5cGATATACAACGTCGTGACTGG-3' (SEQ ID NO 1)(碱基序列中的“m5c”示5_甲基胞嘧啶。)(I)样品的制备将IOpM的6MeCG寡核苷酸的水溶液作为6MeCG寡核苷酸溶液来制备。将6MeCG寡核苷酸溶液于95°C加热10分钟而使变性之后，在冰上静置I分钟。从变性的6MeCG寡核苷酸的溶液取2μ 1，将其作为输入样品。将残留的溶液作为提供于本发明的检测方法的样
品O(2)样品和抗甲基化DNA抗体的接触将上述的样品分成两份，向ー份添加抗甲基化DNA抗体(Iyg)而作为待测样品(100μ I),向另ー份不添加抗甲基化DNA抗体而作为对照样品(ΙΟΟμΙ)。将各样品于25 °C温育2小吋。本实施例中使用的抗甲基化DNA抗体是从在独立行政法人制品评价技术基盘机构(日本国千叶县木更津市上总铼足2-5-8、邮政编码292-0818)于2009年8月25日以保藏号NITEBP-805保藏的杂交瘤SCR2得到的单克隆抗体。(3)由脱氧核糖核酸酶的DNA的分解向上述的待测样品及对照样品各添加1μ I作为脱氧核糖核酸酶的I种的DNaseI (2U/μ I :ΝΕΒ公司)，于37°C反应I小时。反应后，通过将各样品于75°C加热10分钟来使DNaseI失活。(4)甲基化DNA的检测为了检查样品中是否残留6MeCG寡核苷酸，进行定量PCR法。(i) PCR反应液的制备将下述的试剂混合而制备12 μ I的反应液。
权利要求
1.检测样品中的甲基化DNA的方法，其包括 使有含甲基化DNA的可能性的样品和可与甲基化DNA结合的蛋白质接触，从而使上述样品中的甲基化DNA和上述蛋白质结合； 使通过上述结合步骤得到的样品和至少I种脱氧核糖核酸酶接触，而将上述样品中的DNA分解 '及 在通过上述分解步骤得到的样品中，通过与上述蛋白质的结合来检测不被上述脱氧核糖核酸酶分解的甲基化DNA ;其中 上述脱氧核糖核酸酶的至少I种是与可分解单链DNA的甲基化感受性限制酶不同的脱氧核糖核酸酶。
2.权利要求I所述的方法，其中 上述可与甲基化DNA结合的蛋白质是抗甲基化DNA抗体或甲基化DNA结合蛋白质。
3.权利要求I所述的方法，其中 上述可与甲基化DNA结合的蛋白质是抗甲基化DNA抗体。
4.权利要求I所述的方法，其中 上述可与甲基化DNA结合的蛋白质是选自下列的至少I种甲基化DNA结合蛋白质MBDI、MBD2、MBD4 及 MeCP2。
5.权利要求I 4之任一项所述的方法，其中 上述样品是由培养细胞株或从活体采集的血液、体液、组织或细胞制备的样品。
6.权利要求I 4之任一项所述的方法，其中 上述脱氧核糖核酸酶是选自下列的至少I种脱氧核糖核酸酶I、外切核酸酶I、λ -外切核酸酶、Τ7外切核酸酶、外切核酸酶III、RecJ型外切核酸酶、外切核酸酶T、BAL31核酸酶、绿豆核酸酶、微球菌-核酸酶及Τ7内切核酸酶。
7.权利要求I 4之任一项所述的方法，其中 上述样品是有含单链甲基化DNA的可能性的样品， 在检测上述甲基化DNA的步骤中，检测单链甲基化DNA。
8.权利要求I 4之任一项所述的方法，其中 在检测上述甲基化DNA的步骤中，使用核酸扩增法、碱基测序法或微阵列法来检测甲基化DNA。
全文摘要
检测样品中的甲基化DNA的方法为了更简便地得到甲基化DNA样品，使用使有含甲基化DNA的可能性的样品和可与甲基化DNA结合的蛋白质接触，从而使样品中的甲基化DNA和蛋白质结合，使得到的样品和至少1种脱氧核糖核酸酶接触而将样品中的DNA分解，在得到的样品中，通过与蛋白质的结合检测不被脱氧核糖核酸酶分解的甲基化DNA的方法。在此方法中，脱氧核糖核酸酶的至少1种是与可分解单链DNA的甲基化感受性限制酶不同的脱氧核糖核酸酶。
文档编号C12Q1/68GK102653787SQ20121005573
公开日2012年9月5日 申请日期2012年2月28日 优先权日2011年2月28日
发明者梶田昌裕, 酒井绫子 申请人:希森美康株式会社