专利名称：一种唾液dna保存剂的制作方法
技术领域：
本发明属于医学生物技术领域，具体涉及一种唾液DNA保存剂。
背景技术：
唾液DNA样本采集相对于传统的抽取血液采集DNA的方式来说，是一种对人体无伤害、无痛苦的获取DNA的方法，不易引起被采集者的不适和畏惧心理，该法不会对被收集者造成任何不适，容易被接受，因而能最大限度的扩大基因研究的取样范围，特别适合分子流行病学大规模人群调查。现有技术中，唾液DNA样本的采集主要采用棉签获取口腔黏膜上皮细胞的方式来进行，该方法所采集的DNA量少，保存时需要置于低温下，且该保存时间 短。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术缺陷，提供一种唾液DNA保存剂。本发明的技术方案如下一种唾液DNA保存剂，包括如下质量体积比的组分
三羟曱基氣基曱烷5 10g/100mL
乙二胺四乙酸二钠10 25g/100mL
糖7 17 g/100mL
氯化納I 10 g/1 OOmL
表面活性剂0.5 5 g/1OOmL其溶剂为水，pH值为7. 0 9. 5。在本发明的一个优选实施方案中，所述糖为双糖和多糖中的一种或混合。在本发明的一个优选实施方案中，所述双糖为蔗糖，所述多糖为糖原。在本发明的一个优选实施方案中，所述表面活性剂为吐温、Triton X-100、十二烷基硫酸纳和十~■烧基肌氣酸纳中的一种或几种的混合。在本发明的一个优选实施方案中，所述吐温为吐温20。在本发明的一个优选实施方案中，所述pH值通过盐酸来调节。以上技术方案中，乙二胺四乙酸二钠还可以被同样摩尔量的乙二胺四乙酸等同替代。本发明的有益效果是本发明的唾液DNA保存剂包括如下质量体积比的组分三轻甲基氨基甲烧5 10g/100mL、乙二胺四乙酸二钠10 25g/100mL、糖I 17g/100mL、氯化钠I 10g/100mL和表面活性剂0. 5 5g/100mL，其溶剂为水，pH值为7. 0 9. 5，在室温条件下就能够有效且长时间的对唾液样本中的DNA进行保存，有效解决了现有技术采集唾液样本DNA保存时间短，且需要低温保存的缺陷；本发明成本低廉，配制方法简单，适合工业化生产。
图I为本发明实施例I中样品I、样品2、样品3和样品4的琼脂糖凝胶电泳检测图；图2为本发明实施例I中样品I、样品2、样品3和样品4的实时荧光定量PCR检测结果；
图3为本发明实施例I中样品5和样品6在室温保存和37 C保存的条件下不冋时间段中DNA保存情况的琼脂糖凝胶电泳检测图，其中图3a为起始阶段的琼脂糖凝胶电泳检测图，图3b为第3个月的琼脂糖凝胶电泳检测图，图3c为第6个月的琼脂糖凝胶电泳检测图，图3d为第12个月的琼脂糖凝胶电泳检测图，图3e为第18个月的琼脂糖凝胶电泳检测图。图4为本发明实施例2中样品7、样品8、样品9和样品10的琼脂糖凝胶电泳检测图；图5为本发明实施例2中样品11和样品12在室温保存和37 C保存的条件下不冋时间段中DNA保存情况的琼脂糖凝胶电泳检测图，其中图5a为起始阶段的琼脂糖凝胶电泳检测图，图5b为第3个月的琼脂糖凝胶电泳检测图，图5c为第6个月的琼脂糖凝胶电泳检测图，图5d为第12个月的琼脂糖凝胶电泳检测图，图5e为第18个月的琼脂糖凝胶电泳检测图。图6为本发明实施例3中样品13、样品14、样品15和样品16的琼脂糖凝胶电泳检测图；图7为本发明实施例3中样品17和样品18在室温保存和37°C保存的条件下不同时间段中DNA保存情况的琼脂糖凝胶电泳检测图，其中图7a为起始阶段的琼脂糖凝胶电泳检测图，图7b为第3个月的琼脂糖凝胶电泳检测图，图7c为第6个月的琼脂糖凝胶电泳检测图，图7d为第12个月的琼脂糖凝胶电泳检测图。图8为本发明实施例4中样品19、样品20、样品21和样品22的琼脂糖凝I父电泳检测图；图9为本发明实施例4中样品19、样品20、样品21和样品22的实时荧光定量PCR检测结果；图10为本发明实施例4中样品23和样品24在室温保存和37°C保存的条件下不同时间段中DNA保存情况的琼脂糖凝胶电泳检测图，其中图IOa为起始阶段的琼脂糖凝胶电泳检测图，图IOb为第3个月的琼脂糖凝胶电泳检测图，图IOc为第6个月的琼脂糖凝胶电泳检测图，图IOd为第12个月的琼脂糖凝胶电泳检测图。图11为本发明实施例5中样品25、样品26、样品27和样品28的琼脂糖凝胶电泳检测图；图12为本发明实施例5中样品29和样品30在室温保存和37°C保存的条件下不同时间段中DNA保存情况的琼脂糖凝胶电泳检测图，其中图12a为起始阶段的琼脂糖凝胶电泳检测图，图12b为第3个月的琼脂糖凝胶电泳检测图，图12c为第6个月的琼脂糖凝胶电泳检测图，图12d为第12个月的琼脂糖凝胶电泳检测图。
具体实施例方式以下通过具体实施方式
对本发明的技术方案进行进一步的说明和描述。实施例II、唾液DNA保存剂的配制(I)按下表中的数据称取各组分，并将乙二胺四乙酸二钠完全溶解制成母液。(2)在水中加入其他组分并充分溶解后，加入上述母液充分混合。(3)用盐酸调节pH至下表中的溶液终pH值后，加水定容至所需体积。
项目说明浓度(％,质量体积比)
三羟曱基氣基曱烷生化试剂10
乙二胺四乙酸二钠分析纯10
糖原化学纯5嚴糖分析纯6 氯化钠分析纯 8 Triton X-100 化学纯 1.6 十二坑基肌氨酸納分析纯 0.8 溶液终pH:7.0;2、上述配方配制的唾液DNA保存剂与采集的的四个唾液样本按I : I的体积比充分混合得混合液，取上述混合液各500 u L用全血基因组DNA提取试剂盒(厦门致善生物科技有限公司出品，商品编号4hk021)提取DNA，并分别溶解于100 u L的洗脱液中得相应的四个样品，分别编号样品I、样品2、样品3和样品4。上述四个样品的吸光值检测结果如下表所示
编号A230nmA260nmA280nmA320nm 浓度(ng/u L)纯度
样品 I 0.856I. 3940.8920.235 57.951776~
样品 2 0.909I. 3910.8980. 267 56. 181778~
样品 3 0.948I. 6720.9910. 20973. 171~87~
样品 4 1.098I. 7251~030. 227 74.891~86~
上述四个样品的琼脂糖凝胶电泳检测和实时荧光定量PCR检测的结果分别如图I和图2所不，图I和图2中的1、2、3和4分别为样品I、样品2、样品3和样品4。3、上述配方配制的唾液DNA保存剂与采集的的两个唾液样本按I : I的体积比充分混合得混合液，分别编号样品5和样品6，该两个样品在37°C及室温条件下保存一定时间后取上述混合液各500 u L用全血基因组DNA提取试剂盒(厦门致善生物科技有限公司出品，商品编号4hk021)提取DNA，并分别溶解于100 u L的洗脱液中得相应的两个样品。DNA
浓度的检测结果如下表所示
权利要求
1.一种唾液DNA保存剂，其特征在于包括如下质量体积比的组分三羟曱基氣基曱烷5 10g/100mL乙二胺四乙酸二钠10 25 g/100mL糖7 17 g/100mL氯化納I 10 g/1 OOmL表面活性剂0.5 5 g/1OOmL 其溶剂为水，pH值为7. 0 9. 5。
2.如权利要求I所述的一种唾液DNA保存剂，其特征在于所述糖为双糖和多糖中的一种或混合。
3.如权利要求2所述的一种唾液DNA保存剂，其特征在于所述双糖为蔗糖，所述多糖为糖原。
4.如权利要求I所述的一种唾液DNA保存剂，其特征在于所述表面活性剂为吐温、Triton X-100、十二烷基硫酸钠和十二烷基肌氨酸钠中的一种或几种的混合。
5.如权利要求4所述的一种唾液DNA保存剂，其特征在于所述吐温为吐温20。
6.如权利要求I所述的一种唾液DNA保存剂，其特征在于所述pH值通过盐酸来调节。
全文摘要
本发明公开了一种唾液DNA保存剂。本发明包括如下质量体积比的组分三羟甲基氨基甲烷5～10g/100mL、乙二胺四乙酸二钠10～25g/100mL、糖7～17g/100mL、氯化钠1～10g/100mL和表面活性剂0.5～5g/100mL，其溶剂为水，pH值为7.0～9.5，在室温下就能够有效且长时间的对唾液样本中的DNA进行保存，有效解决了现有技术采集唾液样本DNA保存时间短，且需要低温保存的缺陷；本发明成本低廉，配制方法简单，适合工业化生产。
文档编号C12N15/10GK102676501SQ201210123058
公开日2012年9月19日 申请日期2012年4月24日 优先权日2012年4月24日
发明者占伟, 张华能, 栾国彦, 郑小强, 陈丽娟 申请人:厦门致善生物科技有限公司