含有抗igf-1受体抗体的组合物和获得所述抗体的方法

专利名称：含有抗igf-1受体抗体的组合物和获得所述抗体的方法
含有抗IGF-1受体抗体的组合物和获得所述抗体的方法
本申请是申请日为2005年12月20日、申请号为200580048584. 9、发明名称为“含有抗IGF-I受体抗体的组合物和获得所述抗体的方法”的发明专利申请的分案申请。
参考相关申请
本申请要求2004年12月22日提交的美国临时专利申请系列60/638，961的利益， 且在此引用作为参考。发明领域
本申请提供了涉及抗IGF-I受体抗体的组合物和方法。
发明背景
胰岛素样生长因子I和2 (分别为IGF-I和I GF-2)促进多种哺乳动物细胞类型的分化和增殖。
IGF-I和IGF-2两者随血浆广泛地在整个身体中循环。其通过结合并激活IGF-I 受体(IGF-IR)来对细胞产生其作用。IGF-IR是酪氨酸激酶生长因子受体家族的成员。其氨基酸序列与胰岛素受体的氨基酸序列具有大约70%的同一性。
异常的IGF-1、IGF-2、和/或IGF-IR的活性与许多医学状况相关联，所述医学状况包括不同类型的癌症、生长缺陷(例如，肢端肥大症、巨人症和身材矮小症(small stature))、牛皮癣、动脉粥样硬化、血管成形术后血管的平滑肌再狭窄(restonsis)、糖尿病、微血管增生、神经病变、肌肉质量减少(loss of muscle mass)和骨质疏松症。
序列。
附图概述图I提供了编码轻链可变结构域LI至L52和重链可变结构域Hl至H52的核苷酸图2提供了轻链可变结构域LI至L52的氨基酸序列。⑶R和FR区被标示。图3提供了重链可变结构域Hl至H52的氨基酸序列。⑶R和FR被标示。图4提供了轻链可变结构域LI至L52的轻链CDRl区的氨基酸序列。也提供了成组的相关CDR序列的共有序列。
图5提供了轻链可变结构域LI至L52的轻链⑶R2区的氨基酸序列。也提供了成组的相关CDR序列的共有序列。
图6提供了轻链可变结构域LI至L52的轻链⑶R3区域的氨基酸序列。也提供了成组的相关CDR序列的共有序列。
图7提供了重链可变结构域Hl至H52的重链⑶Rl区的氨基酸序列。也提供了成组的相关CDR序列的共有序列。
图8提供了重链可变结构域Hl至H52的重链⑶R2区的氨基酸序列。也提供了成组的相关CDR序列的共有序列。
图9提供了重链可变结构域Hl至H52的重链⑶R3区的氨基酸序列。也提供了成组的相关CDR序列的共有序列。


图10提供了融合至人I gGlFc区域(下划线标示的)的人IGF-1R细胞外结构域的14氨基酸序列，其具有caspace-3切割位点(粗体)。
图11提供了融合至人IgGlFc区域(下划线标示的)的人胰岛素受体的细胞外结构域的氨基酸序列。
图12提供了在C末端与鸡抗生物蛋白融合的人IGR-IR细胞外结构域(包括信号肽)的蛋白序列。在该图中，将IGF-IR E⑶中的起始Met指定为位置I。
图13提供了人K轻链抗体恒定区和人IgGl重链抗体恒定区的多肽序列。
图14提供了举例说明4个噬菌体展示的抗体对IGF-IR-Fc分子的结合显著好于其对胰岛素受体-Fe或鼠类Fe的结合的图。
图15提供了举例说明某些抗体与IGF-I和IGF-2竞争对IGF-1R的结合的能力的图。
图16提供了举例说明某些抗体抑制32D hu IGF-1R+IRS-1细胞生长的能力的图。
图17提供了举例说明某些抗体抑制Balb/C 3T3hu IGF-1R细胞生长的能力的图。
发明概述
在一个方面，本发明提供了分离的抗原结合蛋白，其包含a.包含选自下列序列的轻链CDR3 i.与选自图6中所示L1-L52的轻链CDR3序列的CDR3序列相差不超过总共2个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链⑶R 3序列；ii.M X1X2X3X4X5P X6X7Q X8X9X10XiiP X12T;和 iv. Q S Y X13X14X15N X16X17X18 ；b.包含选自下列序列的重链 CDR3 :i.与选自图9中所示的H1-H52的重链CDR3序列的CDR3序列相差不超过总共3个氨基酸的添加、置换和 / 或缺失的重链 CDR3 序列；ii. X19X20X21X22X23X24X25X26X27F D I; iii. X28X29X3tlX31X32X 33X34X35X36X37X38M D V;iv.D S S X39;或c. (a)的轻链 CDR3 序列和(b)的重链 CDR3 序列；其中X1是谷氨酰胺残基或谷氨酸残基，X2是丙氨酸残基、甘氨酸残基、苏氨酸残基或丝氨酸残基，X3是亮氨酸残基、苯丙氨酸残基或苏氨酸残基，X4是谷氨酰胺残基、谷氨酸残基或组氨酸残基，X5是苏氨酸残基、甲硫氨酸残基、色氨酸残基或缬氨酸残基，X6是甘氨酸残基、丙氨酸残基、缬氨酸残基、亮氨酸残基、异亮氨酸残基、脯氨酸残基、苯丙氨酸残基、甲硫氨酸残基、色氨酸残基或半胱氨酸残基，X7是苏氨酸残基、丙氨酸残基或丝氨酸残基，X8是精氨酸残基、丝氨酸残基、亮氨酸残基或丙氨酸残基，X9是天冬酰胺残基、丝氨酸残基或组氨酸残基，X10是天冬酰胺残基或丝氨酸残基，X11是色氨酸残基、缬氨酸残基、酪氨酸残基、脯氨酸残基或苯丙氨酸残基，X12是亮氨酸残基、酪氨酸残基或异亮氨酸残基，X13是天冬氨酸残基或谷氨酰胺残基，X14是丝氨酸残基或脯氨酸残基，X15是丝氨酸残基、酪氨酸残基、天冬氨酸残基或丙氨酸残基，X16是谷氨酰胺残基、精氨酸残基、缬氨酸残基或色氨酸残基，X17是精氨酸残基、缬氨酸残基、异亮氨酸残基或无残基，X18是缬氨酸残基或无残基，X19是谷氨酸残基或无残基，X2tl是酪氨酸残基、甘氨酸残基、丝氨酸残基或无残基，X21是丝氨酸残基、天冬酰胺残基、色氨酸残基、谷氨酸残基、天冬氨酸残基或无残基，X22是丝氨酸残基、天冬氨酸残基、色氨酸残基、丙氨酸残基、精氨酸残基、苏氨酸残基、谷氨酰胺残基、亮氨酸残基、谷氨酸残基或无残基，X23是丝氨酸残基、甘氨酸残基、天冬酰胺残基、苏氨酸残基、色氨酸残基、 缬氨酸残基、丙氨酸残基或异亮氨酸残基，X24是精氨酸残基、谷氨酰胺残基、酪氨酸残基、 缬氨酸残基、丙氨酸残基、甘氨酸残基、丝氨酸残基、苯丙氨酸残基，或色氨酸残基，X25是天冬酰胺残基、亮氨酸残基、天冬氨酸残基、苏氨酸残基、色氨酸残基、酪氨酸残基、缬氨酸残基、丙氨酸残基，或组氨酸残基，X26是天冬氨酸残基、丝氨酸残基、天冬酰胺残基，或谷氨酰胺残基，X27是丙氨酸残基或脯氨酸残基，X28是丙氨酸残基或无残基，X29是谷氨酸残基、 酪氨酸残基、甘氨酸残基或无残基，X3tl是精氨酸残基、丝氨酸残基或无残基，X31是甘氨酸残基、天冬氨酸残基、缬氨酸残基、丝氨酸残基或无残基，X32是丝氨酸残基、天冬氨酸残基、甘氨酸残基或无残基，X33是苯丙氨酸残基、天冬氨酸残基、酪氨酸残基、甘氨酸残基、丝氨酸残基、组氨酸残基、色氨酸残基或无残基，X34是色氨酸残基、天冬氨酸残基、酪氨酸残基、丝氨酸残基或无残基，X35是天冬氨酸残基、谷氨酸残基、精氨酸残基、丝氨酸残基、甘氨酸残基、酪氨酸残基，或色氨酸残基，X36是酪氨酸残基、赖氨酸残基、异亮氨酸残基、亮氨酸残基或苯丙氨酸残基，X37是酪氨酸残基、丝氨酸残基、苯丙氨酸残基、天冬氨酸残基或甘氨酸残基，X38是甘氨酸残基、天冬酰胺残基，或酪氨酸残基，X39是缬氨酸残基、甘氨酸残基，或丝氨酸残基，且所述抗原结合蛋白特异性地结合人IGF-1R。在一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含氨基酸序列，所述序列选自a.与图4中所示的L1-L52的CDRl序列相差总共不超过6个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的轻链CDRl序列；b.与图5中所示的L1-L52的CDR2序列相差总共不超过2个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的轻链 CDR2序列；c.与图6中所示的L1-L52的CDR3序列相差总共不超过3个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的轻链⑶R3序列；d.与图7中所示的H1-H52的⑶Rl序列相差总共不超过2个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的重链CDRl序列；e.与图8中所示的H1-H52 的CDR2序列相差总共不超过5个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的重链CDR2序列； 和f.与图9中所示的H1-H52的⑶R3序列相差总共不超过4个氨基酸残基的添加、置换和 /或缺失的重链CDR3序列。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自a.与图4中所示的L1-L52的CDRl序列相差总共不超过5个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的轻链CDRl序列；b.与图5中所示的L1-L52的CDR2序列相差总共不超过I个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与图6中所示的L1-L52的CDR3序列相差总共不超过2个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与图7中所示的H1-H52的CDRl序列相差总共不超过I个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的重链⑶Rl序列；e.与图8中所示的H1-H52的⑶R2序列相异总共不超过4个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与图9中所示的 H1-H52的⑶R3序列相异总共不超过3个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的重链⑶R3 序列；在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自a.与图4中所示的L1-L52的CDRl序列相异总共不超过4个氨基酸残基的添加、置换和 /或缺失的轻链CDRl序列；b.图5中所示的L1-L52的轻链CDR2序列；c.与图6中所示的 L1-L52的CDR3序列相异总共不超过I个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的轻链CDR3 序列；d.图7中所示的H1-H52的重链⑶Rl序列；e.与图8中所示的H1-H52的⑶R2序列相异总共不超过3个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与图9中所示的H1-H52的CDR3序列相异总共不超过2个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的重链CDR3序列；在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自a.与图4中所示的L1-L52的CDRl序列相异总共不超过3个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的轻链CDRl序列；b.图6中所示的L1-L52的轻链CDR3序列；c.与图 8中所示的H1-H52的CDR2序列相异总共不超过2个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的重链⑶R2序列；和d.与图9中所示的H1-H52的⑶R3序列相异总共不超过I个氨基酸的添加、置换或缺失的重链CDR3序列。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自a.与图4中所示的L1-L52的CDRl序列相异总共不超过2个氨基酸残基的添加、置换和/或缺失的轻链⑶Rl序列；b.与图8中所示的H1-H52 的CDR2序列相异总共不超过I个氨基酸的添加、置换或缺失的重链CDR2序列；和c.图9 中所示的H1-H52的重链CDR3序列。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含氨基酸序列，所述氨基酸序列选自a.与图4中所示的L1-L52的CDRl序列相异总共不超过I个氨基酸残基的添加、置换或缺失的轻链⑶Rl序列；和b.图8中所示的H1-H52的重链CDR2序列。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含图4中所示的L1-L52 的CDRl序列。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含序列，所述序列选自a.选自 i. RSSQSLLHSNGYNYLD、ii. RASQ(G/S) (I/V) (G/S)X(Y/F)L(A/N)和 iii. RSSQS(L/I) XXXXX 的轻链 CDRl 序列；b.选自 i. LGSNRAS、ii. AASTLQS 和 iii. EDNXRPS 的轻链 CDR2 序列；c.选自i. SSNWWS、ii. XYYWS 和 iii. SYAM(S/Η)的重链 CDRl 序列；和 d.选自 i. (E/I) (I/V) (Y/N) (H/Y) SGST (N/Y) YNPSLKS;和 ii. XIS (G/S) SG (G/S) STYYADSVKG 的重链 CDR2 序列；其中，括号内包括的氨基酸残基符号代表序列中相同位置的可选择的残基，各X独立地是任何氨基酸残基，各Z独立地是甘氨酸残基、丙氨酸残基、缬氨酸残基、亮氨酸残基、异亮氨酸残基、脯氨酸残基、苯丙氨酸残基、甲硫氨酸残基、色氨酸残基，或半胱氨酸残基。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含重链CDR3序列，该序列与图9中所示的 H1-H52的CDR3序列相异总共不超过2个氨基酸的添加、置换和/或缺失。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含重链CDR3序列，该序列与图9中所示的H1-H52的 CDR3序列相异总共不超过I个氨基酸的添加、置换和/或缺失。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含图9中所示的H1-H52的重链CDR3序列。在另一个实施方案中， 所述分离的抗原结合蛋白包含2个氨基酸序列，所述序列选自a.与图4中所示的L1-L52 的CDRl序列相异总共不超过6个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDRl序列；b.与图5中所示的L1-L52的CDR2序列相异总共不超过2个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与图6中所示的L1-L52的CDR3序列相异总共不超过3个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与图7中所示的H1-H52的CDRl序列相异总共不超过2个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链⑶Rl序列；e.与图8中所示的H1-H52的 CDR2序列相异总共不超过5个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与图9中所示的H1-H52的CDR3序列相异总共不超过4个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链CDR3序列。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含3个氨基酸序列，所述序列选自a.与图4中所示的L1-L52的CDRl序列相异总共不超过6个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDRl序列；b.与图5中所示的L1-L52的CDR2序列相异总共不超过2 个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与图6中所示的L1-L52的CDR3序列相异总共不超过3个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与图7中所示的H1-H52的⑶Rl序列相异总共不超过2个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链⑶Rl序列；e.与图8中所示的H1-H52的CDR2序列相异总共不超过5个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链⑶R2序列；和f.与图9中所示的H1-H52的⑶R3序列相异总共不超过4个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链CDR3序列。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含4个氨基酸序列，所述序列选自a.与图4中所示的L1-L52的CDRl序列相异总共不超过6个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDRl序列；b.与图5中所示的L1-L52 的CDR2序列相异总共不超过2个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与图6中所示的L1-L52的CDR3序列相异总共不超过3个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与图7中所示的H1-H52的CDRl序列相异总共不超过2个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链⑶Rl序列；e.与图8中所示的H1-H52的⑶R2序列相异总共不超过5个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链⑶R2序列；和f.与图9中所示的H1-H52 的CDR3序列相异总共不超过4个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链CDR3序列。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含5个氨基酸序列，所述序列选自a.与图4 中所示的L1-L52的CDRl序列相异总共不超过6个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链 ⑶Rl序列；b.与图5中所示的L1-L52的⑶R2序列相异总共不超过2个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与图6中所示的L1-L52的CDR3序列相异总共不超过3 个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与图7中所示的H1-H52的CDRl序列相异总共不超过2个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链CDRl序列；e.与图8中所示的H1-H52的CDR2序列相异总共不超过5个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与图9中所示的H1-H52的⑶R3序列相异总共不超过4个氨基酸的添加、置换和 /或缺失的重链CDR3序列。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含a.与图 4中所示的L1-L52的CDRl序列相异总共不超过6个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链 CDRl序列；b.与图5中所示的L1-L52的CDR2序列相异总共不超过2个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDR2序列；c.与图6中所示的L1-L52的CDR3序列相异总共不超过3 个氨基酸的添加、置换和/或缺失的轻链CDR3序列；d.与图7中所示的H1-H52的CDRl序列相异总共不超过2个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链CDRl序列；e.与图8中所示的H1-H52的CDR2序列相异总共不超过5个氨基酸的添加、置换和/或缺失的重链CDR2序列；和f.与图9中所示的H1-H52的⑶R 3序列相异总共不超过4个氨基酸的添加、置换和 /或缺失的重链CDR3序列。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含a.轻链可变结构域，其包含i.图4中所示的轻链CDRl序列；ii.图5中所示的轻链CDR2序列；和iii.图6中所示的轻链⑶R3序列；b.重链可变结构域，其包含i.图7中所示的重链⑶Rl 序列;ii.图8中所不的重链⑶R2序列;和iii.图9中所不的重链⑶R3序列;或c. (a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含a.轻链⑶R1、⑶R2和⑶R3序列，所述各序列分别与选自L1-L52的相同轻链可变结构域序列的⑶R1XDR2和⑶R3序列同一 ；b.各自分别与选自H1-H52的相同重链可变结构域序列的⑶R1、⑶R2和⑶R3序列同一的重链⑶R1、⑶R2和⑶R3序列；或c. (a)的轻链CDR1、CDR2和CDR3序列和(b)的重链CDR1、CDR2和CDR3序列。
在另一个方面，本发明提供了分离的抗原结合蛋白，其包含a.轻链可变结构域序列，其选自i.与图2中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列具有至少80%的同一性的氨基酸序列包含图2中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列的至少15个连续氨基酸残基的氨基酸序列由与图I中所示的编码L1-L52的轻链可变结构域序列的多核苷酸序列具有至少80%的同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在中等严紧条件下与由图I中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列组成的多核苷酸的互补序列杂交；b.重链可变结构域序列，其选自i.与18图2中所示的H1-H52的重链可变结构域序列具有至少80%的同一性的氨基酸序列；ii.包含图2中所示的H1-H52的重链可变结构域序列的至少15个连续氨基酸残基的氨基酸序列由与图I中所示的编码H1-H52的重链可变结构域序列的多核苷酸序列具有至少 80%的同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在中等严紧条件下与由图I所示的H1-H52的重链可变结构域序列组成的多核苷酸的互补序列杂交；或c. Ca)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域；其中所述抗原结合蛋白结合人IGF-1R。在一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含 a.轻链可变结构域序列，其选自i.与图2中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列具有至少85%的同一性的氨基酸序列；ii.包含图2中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列的至少25个连续氨基酸残基的氨基酸序列；iii.由与图I中所示的编码L1-L52的轻链可变结构域序列的多核苷酸序列具有至少85%的同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在高度严紧条件下与由图I所示的L1-L52的轻链可变结构域序列组成的多核苷酸的互补序列杂交；b.重链可变结构域序列，其选自i.与图2中所示的H1-H52的重链可变结构域序列具有至少85%的同一性的氨基酸序列包含图2中所示的H1-H52的重链可变结构域序列的至少25个连续氨基酸残基的氨基酸序列由与图I中所示的编码H1-H52的重链可变结构域序列的多核苷酸序列具有至少85%的同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列；和iv.由多核苷酸序列编码的氨基酸序列，所述多核苷酸序列在高度严紧条件下与由图I中所示的H1-H52的重链可变结构域序列组成的多核苷酸的互补序列杂交；或c) (a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含a.轻链可变结构域序列，其选自i.与图2中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列具有至少90%的同一性的氨基酸序列包含图2中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列的至少35个连续氨基酸残基的氨基酸序列；和iii.由与图I中所示的编码L1-L52的轻链可变结构域序列的多核苷酸序列具有至少90%的同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列jPb.重链可变结构域序列，其选自i.与图2中所示的H1-H52的重链可变结构域序列具有至少90%的同一性的氨基酸序列包含图2中所示的H1-H52的重链可变结构域序列的至少35个连续氨基酸残基的氨基酸序列；和iii.由与图I中所示的编码H1-H52的重链可变结构域序列的多核苷酸序列具有至少90%的同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列；或c) (a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含a.轻链可变结构域序列，其选自i.与图2中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列具有至少95%的同一性的氨基酸序列；ii.包含图2中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列；和iii.由与图I中所示的编码L1-L52的轻链可变结构域序列的多核苷酸序列具有至少95%的同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列；和b.重链可变结构域序列，其选自i.与图2中所示的H1-H52的重链可变结构域序列具有至少95%的同一性的氨基酸序列；ii.包含图2中所示的H1-H52的重链可变结构域序列的至少50个连续氨基酸残基的氨基酸序列；和iii.由与图I中所示的编码H1-H52的重链可变结构域序列的多核苷酸序列具有至少95%的同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列； 或c) (a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含a.轻链可变结构域序列，其选自i.与图2中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列具有至少97%的同一性的氨基酸序列；ii.包含图2中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列的至少75个连续氨基酸残基的氨基酸序列；和iii.由与图I中所示的编码L1-L52的轻链可变结构域序列的多核苷酸序列具有至少97%的同一'丨生的多核苷酸序列编码的氨基酸序列jPb.重链可变结构域序列，其选自i.与图2中所示的H1-H52的重链可变结构域序列具有至少97%的同一性的氨基酸序列；ii.包含图2中所示的H1-H52的重链可变结构域序列的至少75个连续氨基酸残基的氨基酸序列；和iii.由与图I中所示的编码H1-H52的重链可变结构域序列的多核苷酸序列具有至少97%的同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列；或c) (a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含a.轻链可变结构域序列，其选自i.与图2中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列具有至少99%的同一性的氨基酸序列；ii.包含图2中所示的L1-L52的轻链可变结构域序列的至少90个连续氨基酸残基的氨基酸序列；和iii. 由与图I中所示的编码L1-L52的轻链可变结构域序列的多核苷酸序列具有至少99%的同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列；和匕重链可变结构域序列，其选自i.与图2中所示的H1-H52的重链可变结构域序列具有至少99%的同一性的氨基酸序列；ii.包含图 2中所示的H1-H52的重链可变结构域序列的至少90个连续氨基酸残基的氨基酸序列；和 iii.由与图I中所示的编码H1-H52的重链可变结构域序列的多核苷酸序列具有至少99% 的同一性的多核苷酸序列编码的氨基酸序列；或c) (a)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域。在另一个实施方案中，分离的抗原结合蛋白包含a.轻链可变结构域，其选自图2中所示的L1-L52 ；b.选自图3中所示的H1-H52的重链可变结构域序列；或c. Ca)的轻链可变结构域和(b)的重链可变结构域。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包含选自下列组合的轻链可变结构域和重链可变结构域的组合L1H1、L2H2、L3H3、L4H4、 L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、LllHlU L12H12、L13H13、L14H14、L15H15、L16H16、 L17H17、L18H18、L19H19、L20、H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、L25H25、L26H26、 L27H27、L28H28、L29H29、L30H30、L31H31、L32H32、L33H33、L34H34、L35H35、L36H36、L37H37、 L38H38、L39H39、L40H40、L41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、L47H47、L48H48、 L49H49、L50H50、L51H51和L52H52。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白还包含a.图13的K轻链恒定序列，b.图13的I gGl重链恒定序列或c.图13的κ轻链恒定序列和图13的I gGl重链恒定序列。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白， 当结合IGF-IR时a.抑制IGF-lR;b.激活IGF_lR;c.与参照抗体交叉竞争对IGF-IR的结合；d.与所述参照抗体结合相同的IGF-IR的表位；e.结合IGF-1R，该结合具有基本上与所述参照抗体相同的Kd ;或f.结合IGF-1R,其解离率(off rate)基本上与所述参照抗体相同；其中所述参照抗体包含选自下列组合的轻链和重链可变结构域序列的组合L1H1、 L2H2、L3H3、L4H4、L5H5、L6H6、L7H7、L8H8、L9H9、L10H10、L11H11、L12H12、L13H13、L14H14、 L15H15、L16H16、L17H17、L18H18、L19H19、L20、H20、L21H21、L22H22、L23H23、L24H24、 L25H25、L26H26、L27H27、L28H28、L29H29、L30H30、L31H31、L32H32、L33H33、L34H34、L35H35、 L36H36、L37H37、L38H38、L39H39、L40H40、L41H41、L42H42、L43H43、L44H44、L45H45、L46H46、 L47H47、L48H48、L49H49、L50H50、L51H51和L52H52。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白，当与人IGF-IR结合时，抑制IGF-I和/或IGF-2对所述人IGF-IR的结合。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白在选自血清、IGF-I和GF-2的生长刺激物存在的情况下抑制癌症的生长高于80%。在另一个实施方案中，所述癌细胞是MCF-7人乳腺癌细胞。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白以高于其对于人胰岛素受体的选择性至少50倍的选择性结合人IGF-1R。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白在体内抑制肿瘤的生长。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白抑制IGF-IR介导的酪氨酸磷酸化。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白特异性地结合非人灵长类、食蟹猴(cynomologous monkey)、黑猩猩、非灵长类哺乳动物、卩齿齿动物、小鼠、大鼠、仑鼠、豚鼠、 猫或狗的IGF-1R。在另一个实施方案中，所述分离的抗原结合蛋白包括a.人抗体；b.人源化抗体；c.嵌合抗体；d.单克隆抗体；e.多克隆抗体；f.重组抗体；g.抗原结合抗体片段; h.单链抗体；i.双抗体；j.三链抗体；k.四链抗体(tetrabody) ; I. Fab片段；m. F(ab，)2 片段；n.结构域抗体(domainantibody) ;o. IgD 抗体;p. IgE 抗体;q. IgM 抗体;r. IgGl 抗体；s. IgG2抗体；t. IgG3抗体；u. IgG4抗体；或v.具有至少一个减少形成H链内二硫键的趋势的铰链区内突变的IgG4抗体。
在另一个实施方案中，本发明提供了分离的多核苷酸，该多核苷酸包含编码所述抗原结合蛋白的轻链、重链或两者的序列。在一个实施方案中，所述多核苷酸包含图I的轻链可变结构域核酸序列和/或图I的重链可变结构域核酸序列。在另一个实施方案中，质粒包含所述分离的多核苷酸。在另一个实施方案中，所述质粒是表达载体。在另一个实施方案中，分离的细胞包含所述多核苷酸。在另一个实施方案中，所述细胞的染色体包含所述多核苷酸。在另一个实施方案中，所述细胞是杂交瘤细胞。在另一个实施方案中，表达载体包含所述核酸。在另一个实施方案中，所述细胞是CHO细胞。在另一个实施方案中，本发明提供了制备结合人IGF-IR的抗原结合蛋白的方法，其包括在允许所述分离的细胞表达所述抗原结合蛋白的条件下温育所述细胞。
在另一个方面，本发明提供了包含所述抗原结合蛋白的药物组合物。在一个实施方案中，本发明提供了在受试者中治疗病症的方法，其包括给所述受试者施用所述药物组合物，其中可通过在所述受试者中减少IGF-IR的活性来治疗所述病症。在另一个实施方案中，所述受试者是人类。在另一个实施方案中，所述病症是多发性骨髓瘤、液体肿瘤 (liquid tumor)、肝癌、胸腺疾病(thymus disorder)、T细胞介导的自身免疫疾病、内分泌紊乱(endocronological disorder)、局部缺血或神经变性疾病(neurodegenerative disorder)。在另一个实施方案，所述液体肿瘤选自急性淋巴细胞性白血病(ALL)和慢性髓细胞性白血病(CML);其中所述肝癌选自肝癌、肝细胞癌、胆管癌、血管肉瘤、血管肉瘤、 肝胚细胞瘤；其中所述胸腺疾病选自胸腺瘤和甲状腺炎，其中所述T细胞介导的自身免疫疾病选自多发性硬化症、类风湿性关节炎、全身性红斑狼疮(SLE)、格雷夫斯病、桥本甲状腺炎、重症肌无力、自身免疫性甲状腺炎、白塞病(Bechet’s Disease),其中所述内分泌紊乱选自II型糖尿病、甲状腺功能亢进、甲状腺功能减退、甲状腺炎、肾上腺皮质功能亢进和肾上腺皮质功能减退；其中所述局部缺血是心脏梗塞后局部缺血(post cardiac infarct ischemia)，或其中所述神经变性病症是阿耳茨海默氏病。在另一个实施方案中，所述病症选自肢端肥大症、膀胱癌、肾母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生症、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、结肠直肠癌、子宫颈癌、滑膜肉瘤、与转移类癌瘤相关的腹泻、分泌肠道血管活性妝的肿瘤(vasoactive intestinal peptide secreting tumors)、巨人症、 牛皮癣、动脉粥样硬化、血管的平滑肌再狭窄、不适当的微血管增殖、成胶质细胞瘤、成神经管细胞瘤、头和颈鳞状上皮细胞癌、口腔癌、口腔白斑、前列腺上皮内瘤形成(prostate intraepithelial neoplasia)、肛门癌、食管癌、胃癌、骨癌、转移癌、真性红细胞增多症、与氧化应激相关的良性病症、早产儿视网膜病、急性呼吸窘迫综合征、对乙酰氨基酚的过度剂量、支气管肺发育异常、囊性纤维化、肺纤维化和糖尿病性视网膜病。在另一个实施方案中，所述方法还包括给所述受试者施用第二疗法。在另一个实施方案中，在给所述受试者施用所述药物组合物之前和/或与此同时和/或之后施用所述第二疗法。在另一个实施方案中，所述第二疗法包括放照治疗、手术或第二药物组合物。在另一个实施方案中，所述第二药物组合物包含药剂，所述药剂选自皮质类固醇、止吐药、盐酸昂丹司琼、盐酸格拉司琼、甲氧氯普胺(metroclopramide)、多潘立酮、氟派唳醇、赛克利嗪、劳拉西泮、丙氯拉嗪、 地塞米松、甲氧异丁嗪、托吡西隆、癌症疫苗、GM-CSF抑制剂、GM-CSF DNA疫苗、基于细胞的疫苗、树突细胞疫苗、重组病毒疫苗、热激蛋白(HSP)疫苗、同种异体肿瘤疫苗(allogeneic tumor vaccine)、自体肿瘤疫苗、止痛剂、布洛芬、萘普生、三水杨酸胆碱镁、盐酸氧可酮、 抗血管生成(anti-angiogenic agent)、抗血管剂(anti-vascular agent)、贝伐单抗、抗 VEGF抗体、抗VEGF受体抗体、可溶性VEGF受体片段、抗TWEAK抗体、抗TWEAK受体抗体、可溶性TWEAK受体片段、AMG 706、AMG 386、抗增殖剂、法呢基蛋白转移酶抑制剂(farnesyl protein transferase inhibitor)、αν β 3 抑制剂、αν β 5 抑制剂、ρ53 抑制剂、ki t 受体抑制剂、ret受体抑制剂、I3DGFR抑制剂、生长激素分泌抑制剂、血管生成素抑制剂 (angiopoietin inhibitor)、肿瘤浸润性巨卩遼细胞抑制剂、c-fms抑制剂、抗c_fms抗体、 CSF-I抑制剂、抗CSF-I抗体、可溶性c-fms片段、培维索孟、吉西他滨、panitumumab、依立替康(irinothecan)、和SN-38。在另一个实施方案中，所述方法包括给所述受试者施用第三疗法。在另一个实施方案中，所述病症是癌症，所述第二疗法包括施用panitumumab,且所述第三疗法包括施用吉西他滨。在另一个实施方案中，所述病症选自肢端肥大症、膀胱癌、 肾母细胞瘤、卵巢癌、胰腺癌、良性前列腺增生、乳腺癌、前列腺癌、骨癌、肺癌、结肠直肠癌、 子宫颈癌、滑膜肉瘤、与转移的类癌瘤相关的腹泻、血管活性肠肽分泌型肿瘤、巨人症、牛皮癣、动脉粥样硬化、血管的平滑肌再狭窄、不适当的微血管增殖、成胶质细胞瘤、成神经管细胞瘤、头与颈鳞状上皮细胞癌、口腔癌、口腔白斑症、前列腺上皮内瘤形成、肛门癌、食管癌、 胃癌、骨癌、转移癌、真性红细胞增多症、涉及氧化应激的良性病症、早产儿视网膜病、急性呼吸窘迫综合征、对乙酰氨基酚的过量、支气管肺发育异常、囊性纤维化、肺纤维化和糖尿病性视网膜病。
在另一个方面，本发明提供了增加受试者寿命的方法，其包括给所述受试者施用所述药物组合物。
在另一个方面，本发明提供了在需要其的受试者中减少IGF-IR活性的方法，其包括给所述受试者施用所述药物组合物。
在另一个方面，本发明提供了在需要其的受试者中减少IGF-IR信号转导的方法， 其包括给所述受试者施用所述药物组合物。
在另一个方面，本发明提供了在需要其的受试者中抑制IGF-I和/或IGF-2对I GF-IR的结合的方法，其包括给所述受试者施用所述药物组合物。
发明详述
本发明提供了涉及结合胰岛素样生长因子受体(“IGF-1R”)的分子的组合物、22试剂盒和方法，所述分子包括激动或拮抗IGF-IR的分子，例如抗IGF-IR抗体、抗体片段和抗体衍生物，例如拮抗性抗IGF-IR抗体、抗体片段或抗体衍生物。也提供了包含编码结合 IGF-IR的多肽的整体或部分的核苷酸序列的核酸及其衍生物和片段(例如编码抗IGF-IR 抗体的整体或部分、抗体片段或抗体衍生物的核酸)、包含这些核酸的质粒和载体以及包含这些核酸和/或载体以及质粒的细胞或细胞系。提供的方法包括，例如制备、鉴定或分离结合IGF-IR的分子例如抗IGF-IR抗体的方法，确定分子是否结合IGF-IR的方法，确定分子是否激动或拮抗IGF-IR的方法，制备包含结合IGF-IR的分子的组合物例如药物组合物的方法，和给受试者施用结合IGF-IR的分子的方法，例如用于治疗由IGF-IR介导的病症的方法，和用于在体内或体外激动或拮抗IGF-1R、IGF-I和/或IGF-2的生物学活性的方法。
使用标准的单或三字母缩写标示多核苷酸和多肽序列。除非另外指出，多肽序列在左边具有其氣基末端，在右边具有其竣基末端以及单链核酸序列，双链核酸序列的上面的链在左边具有其5’末端，在右边具有其3’末端。也可通过说明其与参照序列的不同之处来描述特定的多肽或多核苷酸序列。
特定轻链和重链可变结构域的多核苷酸和多肽序列示于图1、2和3中，其中将其标记为，例如，LI (“轻链可变结构域1”)、H1 (“重链可变结构域I”)等。通过组合轻链的名称和重链可变结构域的名称来表示包含来自图2和3的轻链和重链的抗体。例如，“L4H7” 表示包含L4的轻链可变结构域和Η7的重链可变结构域的抗体。
除非此处另外定义，所用的与本发明相关的科学和技术术语将具有由本领域技术人员通常理解的意思。此外，除非上下文另外要求，单数术语包括复数而复数术语包括单数。一般地，用于此处描述的细胞和组织培养、分子生物学、免疫学、微生物学、遗传和蛋白质以及核酸化学和杂交的术语学和技术是本领域内熟知和常用的术语和技术。除非另外说明，通常按照在整个本说明书中引用和描述的本领域熟知的和各种一般和更专业的参考资料中描述的常规方法进行本发明的方法和技术。参见，例如，Sambrook等人Molecular Cloning:A Laboratory Manual,第 2 版，Cold Spri ng Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1989)和 Ausubel 等人,Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Associates(1992),和 Harlow and Lane Antibodies:A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (1990)，其在此引用作为参考。按照厂商说明书进行酶促反应和纯化技术，如通常在本领域内实现的或如此处所描述的。所用的与此处描述的分析化学、合成有机化学和医学和药物化学的实验室方法和技术相关的术语学是本领域熟知的和常用的术语学。可将标准的技术用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送以及患者的治疗。
下列术语，除非另外指出，将理解为具有下列意思
术语“分离的分子”(其中所述分子是例如多肽、多核苷酸或抗体)是分子，依赖于其来源或衍生的来源，所述分子(I)不与在其天然状态下天然伴随其的组分结合，(2)基本上不含来自相同物种的其他分子，(3)由来自不同物种的细胞表达或(4)非天然地发生。因此，化学合成的或在与来自其天然起源的细胞不同的细胞系统中合成的分子将与其天然结合的组分“分离”。也可用本领域熟知的纯化技术通过分离使分子基本上不含天然结合的组分。可通过本领域内许多熟知的方法测定分子纯度或均质性。例如，可使用聚丙烯酰胺凝胶电泳和使用本领域内熟知的技术对凝胶染色以显示多肽来测定多肽样品的纯度。对于某些目的，可通过HPLC或本领域熟知的用于纯化的其他方法来提供更高的分辨率。
术语“ IGF-IR抑制剂”和“ IGF-IR拮抗剂”可互换使用。各为可检测地抑制IGF-1R 的至少一种功能的分子。相反地，“IGF-1R激动剂”是可检测地增加IGF-IR的至少一种功能的分子。由IGF-IR抑制剂引起的抑制作用不必是完全的，只要使用测定法可检测其。可使用IGF-IR功能的任何测定法，此处提供其实例。可通过IGF-IR抑制剂抑制或通过IGF-IR 激动剂增加的IGF-IR功能的实例，包括对IGF-1、IGF-12和/或另一种IGF-IR激活分子的结合、激酶活性、下游信号转导等。IGF-IR抑制剂和IGF-IR激动剂的类型的实例包括，但不限于，IGF-IR结合多肽例如抗原结合蛋白(例如，IGF-IR抑制性抗原结合蛋白)、抗体、抗体片段和抗体衍生物。
术语“肽”、“多肽”和“蛋白”各自指包含两个或多个通过肽键连接的氨基酸残基的分子。这些术语包括，例如，天然的和人工的蛋白、蛋白片段和蛋白序列的多肽类似物(例如突变蛋白、变体和融合蛋白)以及翻译后修饰或共价或非共价修饰的蛋白。肽、多肽或蛋白可以是单体或多聚体。
如此处所用的，术语“多肽片段”是指与对应的全长蛋白相比，具有氨基末端和/ 或羧基末端缺失的多肽。片段在长度上可以是，例如，至少5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、 20、50、70、80、90、100、150或200个氨基酸。片段在长度上也可以是例如至多1,000,750, 500、250、200、175、150、125、100、90、80、70、60、50、40、30、20、15、14、13、12、11 或 10 个氨基酸。片段还可在其任一末端或两个末端包含一个或多个额外的氨基酸，例如，来自不同的天然发生的蛋白(例如，Fe或亮氨酸拉链结构域)的氨基酸序列或人工氨基酸序列(例如，人工连接体序列)。
本发明的多肽包括已以任何方法和因任何理由修饰的多肽，例如，所述理由是例如(1)减少对蛋白水解的敏感性，(2)减少对氧化的敏感性，(3)改变形成蛋白复合物的结合亲和力，(4)改变结合亲和力，和(4)赋予或改变其他物化或功能特性。类似物包括多肽的突变蛋白。例如，可在天然发生的序列中(例如，在形成分子间接触的结构域以外的多肽部分中)产生单个或多个氨基酸的置换(例如，保守性氨基酸置换)。“保守性氨基酸置换”是基本上不改变亲本序列的结构特征的置换(例如，取代氨基酸不应当倾向于打断亲本序列中发生的螺旋，或破坏表征亲本或其功能性所必需的其他类型的二级结构)° 在 Proteins, Structures and Molecular Principles (Creighton, Ed. , ff.H.Freeman and Company, New York (1984));Introduction to Protein Structure (C. Branden和 J. Tooze, eds.，Garland Publishing, New York, N. Y. (1991));和 Thornton 等人 Nature354:105 (1991)中描述了本领域承认的多肽二级结构和三级结构的实例，所述参考资料各自在此引用作为参考。
本发明也提供了 IGF-IR结合多肽的非肽类似物。非肽类似物通常在制药工业中用作具有类似于模板肽性质的性质的药物。这些类型的非肽化合物称为“肽模拟物(peptide mimetics)”或“拟妝(peptidomimeticsY'Fauchere, J. Adv. Drug Res. 15:29 (1986) ; Veber 和 Freidinger TINS ρ· 392 (1985);和 Evans 等人 J. Med. Chem. 30:1229 (1987)，其在此引用作为参考。在结构上与治疗有用的肽相似的肽模拟物可用于产生等同的治疗或预防功效。一般地，拟肽在结构上与范例多肽(paradigm polypeptide)(即，具有想要的生物化学性质或药理活性的多肽)例如人抗体相似，但任选地通过本领域内熟知的方法使一个或多个肽键被选自下列的键取代一ch2nh—、-CH2S-, -CH2-CH2-, -CH=CH-(顺式和反式)、一COCH2—、一CH(OH)CH2一和一CH2SO—。用相同类型的D氨基酸系统性地置换共有序列的一个或多个氨基酸(例如，D赖氨酸取代L赖氨酸)也可用于产生更稳定的多肽。此外， 可通过本领域已知的方法(Rizo和Gierasch Ann. Rev. Biochem. 61:387 (1992)，此处引用作为参考)例如通过添加能够形成使肽环化的分子内二硫键的内部半胱氨酸残基来产生受限制的肽(constrained peptide),所述肽包含共有序列或基本上相同的共有序列变异。
多肽(例如，抗体)的“变体”包含氨基酸序列，在所述氨基酸序列中，相对于另一个多肽序列，一个或多个氨基酸残基被插入、缺失和/或置换。本发明的变体包括融合蛋白。
多肽的“衍生物”是已通过例如缀合至另一个化学部分例如聚乙二醇、白蛋白(例如，人血清白蛋白)、磷酸化和糖基化被化学修饰的多肽(例如抗体)。除非另外指出，术语 “抗体”包括，除了包含两条全长的重链和两条全长的轻链的抗体外，其衍生物、变体、片段和突变蛋白，下面描述了其实例。
“抗原结合蛋白”是包含结合抗原的部分和任选地支架或构架部分的蛋白，所述支架或构架部分允许所述抗原结合部分采取促进所述抗原结合蛋白对所述抗原结合的构象。 抗原结合蛋白的实例包括抗体、抗体片段(例如，抗体的抗原结合部分)、抗体衍生物和抗体类似物。抗原结合蛋白可包括，例如，可选择的蛋白支架或具有移植的CDR或CDR衍生物的人工支架。这些支架包括，但不限于，包含被导入以例如稳定所述抗原结合蛋白的三维结构的突变的抗体来源的支架以及包含例如生物可相容的聚合物的完全合成的支架。参见，例如，Korndorfer 等人，2003，Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics,第 53 卷,Issue 1:121-129; Roque 等人,2004, Biotechno I. Prog. 20:639-654。此外，可使用妝抗体模拟物(“PAMs”)，以及基于使用纤连蛋白组分作为支架的抗体模拟物的支架。
抗原结合蛋白可具有例如天然发生的免疫球蛋白的结构。“免疫球蛋白”是四聚体分子。在天然发生的免疫球蛋白中，各四聚体由两个相同的多肽链对组成，各对具有一个 “轻”链(大约25kDa)和一个“重”链(大约50-70kDa)。各链的氨基末端部分包含大约100至 110或更多个氨基酸组成的负责抗原识别的可变区。各链的羧基末端部分界定主要负责效应子作用(effector function)的恒定区。人轻链被分类为κ和λ轻链。重链被分类为 μ、δ、Υ、α或ε，并分别将抗体的同种型确定为IgM、IgD、IgG、IgA和IgE。在轻链和重链内，所述可变区和恒定区通过大约12或更多个氨基酸的“ J”区域连接，重链也包含大约 10 或更多个氨基酸的“D” 区域。一般参照，Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, ff. , ed., 第2版，Raven Press，N. Y. (1989))(对于所有目的，以其全文在此引用作为参考)。各轻/ 重链对的可变区形成了抗体结合位点，从而使完整的免疫球蛋白具有两个结合位点。
天然发生的免疫球蛋白链展示了由三个超变区(也称作互补决定区或⑶R)连接的相对保守的框架区(FR)的相同的一般结构。从N端至C端，轻链和重链都包含结构域FR1、 CDRl、FR2、CDR2、FR 3、CDR3和FR4。氨基酸至各结构域的分配Kaba t等人在Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5 版，US Dept, of Health and Human Services, PHS, NIH, NIH Publication no. 91-3242，1991 中的定义一致。
除非另外说明，“抗体”是指完整的免疫球蛋白或与所述完整的抗体竞争特异性结合的其抗原结合部分。可通过重组DNA技术或通过完整抗体的酶促或化学切割产生抗原结合部分。抗原结合部分包括，除其他以外，可包含免疫球蛋白的至少一部分的Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv、结构域抗体(dAb)和互补决定区(CDR)片段、单链抗体(scFv)、嵌合抗体、双抗体、三抗体、四链体和多肽，所述一部分足以赋予对该多肽的特异性抗原结合。
Fab片段是具有\、VH、(^和ChI结构域的单价片段；F (ab’)2片段是具有在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；Fd片段具有Vh和ChI结构域；Fv片段具有抗体的单臂的\和Vh结构域；以及dAb片段具有Vh结构域、' 结构域，或Vh或' 结构域的抗原结合片段(美国专利6，846，634,6, 696，245，美国申请
发明者F·J·卡尔佐, R·V·德什潘德, 蔡美美 申请人:安进公司