专利名称：准噶尔无叶豆EsDREB基因的用途的制作方法
准噶尔无叶豆EsDREB基因的用途技术领域
本发明属于作物遗传育种领域，具体涉及到准噶尔无叶豆中转录因子EsDREB基因的功能和在植物抗逆上的用途。具体的说涉及转EsDREB基因的植物增强了对干旱胁迫， 高盐胁迫，冷胁迫，热胁迫的抗性。
背景技术：
干旱，盐等非生物胁迫是限制植物生长发育和作物产量的主要因素，每年导致作物减产达50%以上。常规育种方法改良作物的抗逆性受到周期长、优异种质资源缺乏的限制。近年来的转录组学、蛋白组学和基因表达调控的研究初步揭示了植物干旱胁迫的作用分子机理。目前，利用分子手段分离胁迫相关基因用来提高植物的抗逆能力，已经成为植物抗逆分子生物学的研究热点和植物抗逆基因工程重要的研究方向。
DREB 转录因子(Dehydration Responsive Element Binding protein),即干旱应答元件结合蛋白，属于AP2/EREBP类基因家族，特异存在于植物中。DREB与抗逆基因启动子区域中的DRE/CRT (dehydration-responsive element)顺式作用兀件结合，其核心序 TACCGACAT，启动下游一系列的有DRE顺式作用元件的抗逆基因的表达，广泛参与干旱、高盐，热等胁迫应答反应，从而能从整体上提高植物的综合抗逆性。
自1994年Yamaguchi-Shinozaki从拟南芥中首次检测到DRE作用的蛋白因子并命名为DREBl以来，DREB/CBF转录因子基因的克隆一直是植物分子生物学的热点。目前已从拟南芥、水稻、玉米、小麦、黑麦、大豆、西红菜，棉花，芦荟等大量植物中分离并鉴定出调控干早、高盐及低温耐性的DREB基因，并利用这些基因得到了抗逆性增强的拟南芥、烟草、 油菜、西红柿、小麦等转基因植株。但目前关于DREB的研究主要集中于草本植物领域，对于木本植物研究较少。由于木本植物生命周期长，并且其抵御外界不良环境侵害的因素会多于草本植物，其分子机制应该也更为复杂。对木本植物DREB的研究主要以杨树和桉树为主。另外，有关DREB/CBF类抗逆境转录因子DREB的功能及转录调控的研究大部分来自模式植物拟南芥及经济作物水稻，小麦等，而对自然界天然存在的抗逆能力极强的植物资源却尝试较少。实际上，植物中还存在大量的DREB基因及其家族尚待挖掘和研究。尤其从极端抗旱的超旱生木本资源植物中挖掘DREB基因并进行抗逆育种尚鲜见报道。而从本土抗逆植物资源中克隆抗逆相关基因并改良农作物不失为一种新的尝试。因此，从本土超旱生荒漠植物中寻找新的DREB转录因子，在基因工程水平上培育抗干旱，耐低温，耐高盐等新的作物品种具有重要意义。
准噶尔无叶豆(Eremosparton songoricum(Litv. ) Vass.)系豆科无叶豆属超旱生无叶灌木，仅片断化分布于新疆古尔班通古特沙漠流动沙丘上，是典型的流沙先锋植物。该种是我国的单属种植物类群，西北荒漠植被中的标志性种，稀有种。由于长期生活在极端恶劣的流动沙丘环境中，沙漠干旱、少雨、大风、沙埋等环境塑造了准噶尔无叶豆抗旱的形态学及生理学特性，表现在该种为小半灌木，叶极端退化，以营养枝执行光合作用，故称“无叶豆”;具有超强的根吸水能力以及细胞持水能力，并保持高效的光合能力。此外，长期的环境压力使得该种具有抗旱，抗高温，抗风蚀沙埋等抵抗多种非生物胁迫的能力，其体内必定蕴含着丰富的抗逆基因资源。准噶尔无叶豆作为天然抗逆性极强的典型荒漠沙生植物，开展该种的抗旱相关DREB转录因子基因的克隆，对于深入发利用抗逆基因资源，定向培育植物新品种均有重要价值。发明内容
本发明的目的是提供一种准噶尔无叶豆EsDREB基因的用途，该基因用于转化植物，提高植物的多种非生物胁迫抗性，其中提高植物多种非生物胁迫抗性的方法是用准噶尔无叶豆EsDREB基因转化目标植物，获得转基因植物。本发明用农杆菌介导的叶盘法将 EsDREB基因转化到野生型烟草中，并研究其在烟草中的抗逆功能，为EsDREB基因在其它植物中的应用提供了很好的基础。
本发明所述的一种准噶尔无叶豆EsDREB基因的用途，该基因用于转化植物，提高植物的多种非生物胁迫抗性，其中提高植物多种非生物胁迫抗性的方法是用准噶尔无叶豆 EsDREB基因转化目标植物，获得转基因植物，具体操作按下列步骤进行
a、用Kpn I和Pst I分别酶切pMD19-T-EsDREB质粒载体和植物真核表达空载体 PCAMBIA1301,回收，连接，转化大肠杆菌细胞，经质粒PCR和双酶切鉴定，将EsDREB基因构建到植物表达载体PCAMBIA1301中，得到重组质粒pCAMBIA1301_EsDREB ；
b、将步骤a中的重组质粒pCAMBIA1301_EsDREB导入农杆菌中，得到带有重组质粒的农杆菌；
C、将步骤b带有重组质粒的农杆菌用叶盘转化法转化目标植物；
d、目标植物转基因阳性苗的鉴定；
e、利用转基因目标植物的体系验证EsDREB基因的抗逆功能。
所述基因为准噶尔无叶豆EsDREB基因的核苷酸序列
TTCTTCCTCAAATGCCTTCTGGGTCGTTCTTCTTTCGATCCAGCTTGGGATTATTTTGCCAGCAAATTA GGTATTTGTTTCAACTATTTTATTGATTGACATTTTCCCTGTATATAATAAATGAGTGCAACTTGCATGCACAAGTT AGTGAAAAATCACAACAAAGGGGATGCATCTAAGTCCCTGGCCGATACATTGGCAAGATGGAAAGAGTATAATGCCC GGCTTGAATTGAGTAATGAAGCCGAGAAGCCTGTTAGGAAAGTTCCTGCCAAGGGATCAAAAAAGGGGTGTATGAAA GGTAAAGGAGGACCCGAGAATTCGCGCTGTAACTACAGAGGTGTTAGGCAAAGGACTTGGGGCAAGTGGGTTGCTGA GATTCGAGAGCCAAACAGAGGGAATAGGCTCTGGTTGGGGACGTTTTCGAATGCAGTTGGCGCTGCTCTTGCTTATG ATGAAGCTGCAAGGGCAATGTATGGTTCTTGTGCGCGCCTCAACTTTCCCAATGTACAAGTTTCCAATTTCTCTCAG CTGGAAGCTTCAAAAGCTTCTCCAGCCGGCTCTGCGATGGTAATATCAGAGAATACCGAGTCCATGATATTGCCAAA CAACTCGGGGGTAGATGCAACTGAAGATGTTGACATGGAACGTCTTTCATTATCGCTAAGCGTGGCTGTGAATCATG AGGAAGGGGAGGGTGACTCAGGGTCAGGGACCAGTTCCTCCGATCCTTCATTGTCTTGATGTAAGTTTTGCAT
EsDREB基因的氨基酸序列
MSATCMHKLVKNHNKGDASKSLADTLARWKEYNARLELSNEAEKPVRKVPAKGSKKGCMKGKGGPENSR CNYRGVRQRTWGKWVAEIREPNRGNRLWLGTFSNAVGAALAYDEAARAMYGSCARLNFPNVQVSNFSQLEASKASPA GSAMVISENTESMILPNNSGVDATEDVDMERLSLSLSVAVNHEEGE⑶SGSGTSSSDPSLS。
所述多种非生物胁迫抗性为抗干旱胁迫，抗高盐胁迫，抗冷胁迫，抗热胁迫。
步骤d目标植物为烟草。
本发明所述的准噶尔无叶豆EsDREB基因的用途，该基因为准噶尔无叶豆EsDREB 基因，EsDREB基因其核苷酸序列
TTCTTCCTCAAATGCCTTCTGGGTCGTTCTTCTTTCGATCCAGCTTGGGATTATTTTGCCAGCAAATTA GGTATTTGTTTCAACTATTTTATTGATTGACATTTTCCCTGTATATAATAAATGAGTGCAACTTGCATGCACAAGTT AGTGAAAAATCACAACAAAGGGGATGCATCTAAGTCCCTGGCCGATACATTGGCAAGATGGAAAGAGTATAATGCCC GGCTTGAATTGAGTAATGAAGCCGAGAAGCCTGTTAGGAAAGTTCCTGCCAAGGGATCAAAAAAGGGGTGTATGAAA GGTAAAGGAGGACCCGAGAATTCGCGCTGTAACTACAGAGGTGTTAGGCAAAGGACTTGGGGCAAGTGGGTTGCTGA GATTCGAGAGCCAAACAGAGGGAATAGGCTCTGGTTGGGGACGTTTTCGAATGCAGTTGGCGCTGCTCTTGCTTATG ATGAAGCTGCAAGGGCAATGTATGGTTCTTGTGCGCGCCTCAACTTTCCCAATGTACAAGTTTCCAATTTCTCTCAG CTGGAAGCTTCAAAAGCTTCTCCAGCCGGCTCTGCGATGGTAATATCAGAGAATACCGAGTCCATGATATTGCCAAA CAACTCGGGGGTAGATGCAACTGAAGATGTTGACATGGAACGTCTTTCATTATCGCTAAGCGTGGCTGTGAATCATG AGGAAGGGGAGGGTGACTCAGGGTCAGGGACCAGTTCCTCCGATCCTTCATTGTCTTGATGTAAGTTTTGCAT
EsDREB基因氨基酸序列
MSATCMHKLVKNHNKGDASKSLADTLARWKEYNARLELSNEAEKPVRKVPAKGSKKGCMKGKGGPENSR CNYRGVRQRTffGKffVAEI REPNRGNRLWLGTFSNAVGAALAYDEAARAMYGSCARLNFPNVQVSNFSQLEASKASP AGSAMVISENTESMILPNNSGVDATEDVDMERLSLSLSVAVNHEEGE⑶SGSGTSSSDPSLS
本发明是在专利申请号201110377962. 5的基础上进一步研究，以超旱生沙漠植物准噶尔无叶豆中的DREB转录因子基因EsDREB为研究对象，利用烟草体系对该基因功能进行了研究，证实了该转录因子基因具有抗干旱，抗高盐，抗低温和高温胁迫的能力。特别珍贵的是，对于干旱和高盐胁迫，转基因烟草既提高了抗逆性，同时还保持了与没有胁迫的烟草几乎相等的生物量。这种不以抑制植物生长为基础的提高植物多种抗逆性的基因在作物遗传育种上有非常重要的应用价值。
本发明所述的准噶尔无叶豆EsDREB基因的用途，该基因适用于烟草、棉花、小麦或水稻等的抗干旱胁迫，抗高盐胁迫，抗冷胁迫，抗热胁迫。
图I为本发明pCAMBIA1301-EsDREB植物表达载体构建示意图。
图2为本发明pCAMBIA1301_EsDREB质粒PCR电泳图，其中M为分子量Maker DL2000 ;泳道I是没有模板的PCR阴性对照；泳道2是空载质粒pCAMBIA1301的PCR结果； 泳道3-8是随机挑选的pCAMBIA1301-EsDREB阳性转化子。
图3为本发明pCAMBIA1301_EsDREB双酶切电泳图，其中M为分子量Maker DL2000 ;泳道1-4是随机挑选的阳性转化子的双酶切结果；泳道5是空载质粒pCAMBIA1301 的双酶切结果。
图4为本发明转基因烟草鉴定的PCR电泳图，其中M为分子量MakerDL2000 ;泳道 I是没有模板的PCR阴性对照；泳道2-17是随机挑选的待检测转EsDREB基因的烟草植株的DNA为模板的PCR结果；泳道16是以阳性转化质粒pCAMBIA1301-EsBREB为模板的PCR结果。
图5为本发明转基因烟草鉴定的RT-PCR电泳图，M为分子量MakerDL2000 ;泳道 I是没有模板的RT-PCR阴性对照；泳道2-10是随机挑选的待检测转EsDREB基因的烟草植株的cDNA为模板的RT-PCR结果；泳道11是阳性转化质粒pCAMBIA1301_EsDREB为模板的 PCR结果。
图6为本发明调控下游基因表达图，干旱胁迫条件下(左图)和盐胁迫下(右图)， 各个检测的下游基因在野生型烟草，转基因烟草株系下的胁迫前(Oh)和胁迫后(3h)各个基因的表达量结果。
图7为本发明两周大苗胁迫表型图，每组图片从左到右依次为胁迫前，胁迫后， 恢复正常生长后；每组图片从上到下依次为野生型烟草幼苗，转EsDREB基因的烟草株系 I (D6)，转基因株系2 (D4)，其中，A组图片没有胁迫情况下，野生型和转基因烟草胁迫前， 胁迫后和恢复后的生长情况组图片是干旱胁迫下，野生型和转基因烟草胁迫前，胁迫后和恢复后的生长情况；C组图片是盐胁迫情况下，野生型和转基因烟草胁迫前，胁迫后和恢复后的生长情况；D组图片是冷胁迫情况下，野生型和转基因烟草胁迫前，胁迫后和恢复后的生长情况；E组图片是热胁迫条件下，野生型和转基因烟草胁迫前，胁迫后和恢复后的生长情况。
图8为本发明两周大苗胁迫后生物量图，每组图片的左图是各种生长情况下，野生型和转基因烟草的形态指标(根长，根数量，叶片数)统计结果，右图是相对应的生物量 (鲜重)数据，其中，A组图片是没有胁迫情况下的各项形态指标和生物量统计结果；往下依次为B组的干旱胁迫，C组的盐胁迫，D组的冷胁迫，E组的热胁迫的各项形态指标和生物量统计结果，I为形态，2为鲜重。
图9为本发明两周大幼苗胁迫后生理指标图，比较了野生型植株和两个转基因株系在各种胁迫处理后脯氨酸，丙二醛和叶绿素含量的变化(总左至右)，其中A组图片是没有胁迫情况下的以上三种生理指标的比较结果；往下依次为B组的干旱胁迫，C组的盐胁迫，D组的冷胁迫，E组的热胁迫的各项生理指标结果，I为脯氨酸含量，2为丙二醛含量，3 为叶绿素含量。
图10为本发明两月大苗胁迫表型图，从左到右依次为胁迫前，胁迫后和恢复2周后的野生型和转基因株系间的表型图；从上至下依次为干旱胁迫，盐胁迫，冷胁迫，热胁迫情况下的野生型和转基因株系在胁迫前，胁迫后和复水后的表型图，I为野生型植株，2-4 为转基因植株。
图11为本发明两月大苗胁迫后的存活率，其中A为干旱胁迫，B为盐胁迫，C为冷胁迫，D为热胁迫的存活率，□代表的是野生型植株的存活率，胃代表的是转基因植株的存活率。
具体实施方式
在下列实施例中，未注明具体条件的实验方法，通常按常规实验操作进行，如《精编分子生物学实验指南》(F.M奥斯伯，R.E.金斯顿，J. G塞德曼主编，马学军，舒跃龙译，北京科学出版社，2004)和植物基因工程(王关林，方宏筠主编，北京科学出版社，2009)中所述的方法进行；
实施例
所述基因为准噶尔无叶豆EsDREB基因核苷酸序列
TTCTTCCTCAAATGCCTTCTGGGTCGTTCTTCTTTCGATCCAGCTTGGGATTATTTTGCCAGCAAATTAGGTATTTGTTTCAACTATTTTATTGATTGACATTTTCCCTGTATATAATAAATGAGTGCAACTTGCATGCACAAGTTAGTGAAAAATCACAACAAAGGGGATGCATCTAAGTCCCTGGCCGATACATTGGCAAGATGGAAAGAGTATAATGCCCGGCTTGAATTGAGTAATGAAGCCGAGAAGCCTGTTAGGAAAGTTCCTGCCAAGGGATCAAAAAAGGGGTGTATGAAAGGTAAAGGAGGACCCGAGAATTCGCGCTGTAACTACAGAGGTGTTAGGCAAAGGACTTGGGGCAAGTGGGTTGCTGAGATTCGAGAGCCAAACAGAGGGAATAGGCTCTGGTTGGGGACGTTTTCGAATGCAGTTGGCGCTGCTCTTGCTTATGATGAAGCTGCAAGGGCAATGTATGGTTCTTGTGCGCGCCTCAACTTTCCCAATGTACAAGTTTCCAATTTCTCTCAGCTGGAAGCTTCAAAAGCTTCTCCAGCCGGCTCTGCGATGGTAATATCAGAGAATACCGAGTCCATGATATTGCCAAACAACTCGGGGGTAGATGCAACTGAAGATGTTGACATGGAACGTCTTTCATTATCGCTAAGCGTGGCTGTGAATCATGAGGAAGGGGAGGGTGACTCAGGGTCAGGGACCAGTTCCTCCGATCCTTCATTGTCTTGATGTAAGTTTTGCAT
EsDREB基因氨基酸序列
MSATCMHKLVKNHNKGDASKSLADTLARWKEYNARLELSNEAEKPVRKVPAKGSKKGCMKGKGGPENSR CNYRGVRQRTWGKWVAEIREPNRGNRLWLGTFSNAVGAALAYDEAARAMYGSCARLNFPNVQVSNFSQLEASKASPA GSAMVISENTESMILPNNSGVDATEDVDMERLSLSLSVAVNHEEGEGDSGSGTSSSDPSLS ；
pCAMBIA1301-EsDREB重组质粒载体的构建
用Kpn I和Pst I两个限制性内切酶分别酶切pMD19_EsDREB基因的质粒和空载体PCAMBIA1301，并回收，连接，筛选测序，构建出pCAMBIA1301-EsDREB载体(载体构建示意图见图1)，转化大肠杆菌DH5a感受态细胞，经蓝白斑筛选，质粒PCR鉴定(图2)及质粒双酶切(图3)确定阳性重组质粒pCAMBIA1301-EsDREB ；
农杆菌介导的叶盘法转化烟草
农杆菌感受态细胞的制备
挑取LBA4404单菌落接种于5mL YEB液体培养基(含链霉素100mg/mL，利福平 100mg/mL)中，温度28°C，250rpm培养过夜；吸取2mL培养物转入50mLYEB液体培养基中， 继续培养至0D600值为O. 5左右(约4小时)；
将菌液转至无菌离心管中，冰浴30min，5000rpm离心5min ；
用I. 6mL 20mmol/L无菌CaCl2重悬菌体,加入400 μ L无菌甘油，混勻后，按每管 200 μ L分装于无菌I. 5mL微量离心管中，液氮中速冻lmin，温度_80°C保持备用；
冻融法将重组质粒pCAMBIA1301_EsDREB转入农杆菌
在灭菌的1.5mL离心管中加入20(^1^新鲜制备的1^八4404感受态细胞及IOyL 鉴定正确的阳性质粒pCAMBIA1301-EsDREB混匀后冰浴30min ；
将离心管移入温度42°C水浴锅中，水浴60s (切忌振荡)；
立即将离心管置于冰中，2-3min后再移入温度37°C水浴锅中水浴5min ；
向离心管中加入800 μ L YEB液体培养基，在温度37°C恒温振荡器上以260r/min 培养lh，4000rpm离心5min，弃上清，取剩余菌体均匀涂布于YEB选择培养基(含链霉素 100mg/mL,卡那霉素50mg/mL,利福平100mg/mL)表面,待菌体完全被吸收后,将平板倒置于温度28°C培养箱中培养48h，待培养基上长出单菌落后，进行菌落PCR，筛选阳性重组子；
在YEB液体培养基中，温度28°C培养48h，然后将菌液制备成甘油菌，温度_20°C保存，用于后续实验；
烟草遗传转化
叶盘制备及预处理
将烟草种子(品种为Petite Havana SRl)用浓度75%酒精浸泡30s，I % NaClO浸泡lOmin，无菌水冲洗5遍，接种于MS培养基上，16h光照，温度28°C培养30d，即为烟草无菌苗，取无菌苗叶片剪出叶圆盘，预培养2-3d，材料切口处刚刚开始膨大时即可进行浸染；
农杆菌的活化和制备
取温度_80°C冰箱内保存的农杆菌菌液100 μ L接种到3mL YEB液体培养基中，温度28°C，180rpm过夜培养，取活化菌液200 μ L加灭菌的50%甘油200 μ L保存于离心管中， 放于温度_20°C冰箱中备用，取活化菌液或上述备用菌液100 μ L加入IOmL的YEB液体培养基中，温度28°C，180rpm振荡培养至0D600值为O. 6-0. 8，将菌液分装到50mL三角瓶中，用于侵染；
侵染和共培养
于超净工作台上，将菌液倒入无菌小培养皿中，将经过预培养处理的叶盘放入活化后的菌液中，浸泡10-15min，用灭菌的吸水纸将侵染过的叶盘表面菌液吸干后，将叶盘放于分化培养基上，温度28 °C,暗培养48h ；
选择分化培养和生根培养
暗培养结束后，将叶盘放于选择分化培养基上培养(50mg/L潮霉素)，以后每 10-15d继代一次，选择培养2-3周后，叶盘周围分化出抗性芽，待抗性芽长至2-3cm，切下插入到选择生根培养基中，进行生根培养，2-3周长出不定根，得到转EsDREB基因的烟草植株;
转基因烟草的鉴定
转基因烟草的潮霉素筛选
将收获的TO代种子经消毒后(消毒方法同上)播种于含有50 μ g/ml的潮霉素的 MS培养基上，温度28°C，16h光照培养14天左右，可见转基因植株呈深绿色，子叶健康，而野生型植株发芽缓慢，萌发率极低( 4% )，植株小，呈黄绿色，有的植株子叶畸形，之后将潮霉素筛选后的阳性植株移入营养土中培养至收获，用收获的Tl代种子重复以上步骤，直至获得T2代种子；
转基因烟草的DNA检测
潮霉素筛选的同时，用分子手段对转基因烟草做进一步的鉴定，用CTAB法提取转基因烟草叶片总DNA，以野生型烟草总DNA为阴性对照，以阳性重组质粒 DH5 a -pCAMBIA1301-EsDREB 为阳性对照，用 EsDREB 基因全长引物(DL-f :5’ TTC TTCCTC AAATGCCTTCTGG3’ 和 DL_r :5’ ATGCAAAACTTACATCAAGACAATG 3’ )进行 PCR 扩增反应，扩增体系及反应体系如下
权利要求
1.一种准噶尔无叶豆EsDREB基因的用途，其特征在于该基因用于转化植物，提高植物的多种非生物胁迫抗性，其中提高植物多种非生物胁迫抗性的方法是用准噶尔无叶豆EsDREB基因转化目标植物，获得转基因植物，具体操作按下列步骤进行 a、用KpnI和PstI分别酶切pMD19-T-EsDREB质粒载体和植物真核表达空载体PCAMBIA1301,回收，连接，转化大肠杆菌细胞，经质粒PCR和双酶切鉴定，将EsDREB基因构建到植物表达载体PCAMBIA1301中，得到重组质粒pCAMBIA1301-EsDREB ； b、将步骤a中的重组质粒pCAMBIA1301-EsDREB导入农杆菌中，得到带有重组质粒的农杆菌； C、将步骤b带有重组质粒的农杆菌用叶盘转化法转化目标植物； d、目标植物转基因阳性苗的鉴定； e、利用转基因目标植物的体系验证EsDREB基因的抗逆功能。
2.根据权利要求I所述的用途，其特征在于所述基因为准噶尔无叶豆EsDREB基因的核苷酸序列TTCTTCCTCAAATGCCTTCTGGGTCGTTCTTCTTTCGATCCAGCTTGGGATTATTTTGCCAGCAAATTAGGTATTTGTTTCAACTATTTTATTGATTGACATTTTCCCTGTATATAATAAATGAGTGCAACTTGCATGCACAAGTTAGTGAAAAATCACAACAAAGGGGATGCATCTAAGTCCCTGGCCGATACATTGGCAAGATGGAAAGAGTATAATGCCCGGCTTGAATTGAGTAATGAAGCCGAGAAGCCTGTTAGGAAAGTTCCTGCCAAGGGATCAAAAAAGGGGTGTATGAAAGGTAAAGGAGGACCCGAGAATTCGCGCTGTAACTACAGAGGTGTTAGGCAAAGGACTTGGGGCAAGTGGGTTGCTGAGATTCGAGAGCCAAACAGAGGGAATAGGCTCTGGTTGGGGACGTTTTCGAATGCAGTTGGCGCTGCTCTTGCTTATGATGAAGCTGCAAGGGCAATGTATGGTTCTTGTGCGCGCCTCAACTTTCCCAATGTACAAGTTTCCAATTTCTCTCAGCTGGAAGCTTCAAAAGCTTCTCCAGCCGGCTCTGCGATGGTAATATCAGAGAATACCGAGTCCATGATATTGCCAAACAACTCGGGGGTAGATGCAACTGAAGATGTTGACATGGAACGTCTTTCATTATCGCTAAGCGTGGCTGTGAATCATGAGGAAGGGGAGGGTGACTCAGGGTCAGGGACCAGTTCCTCCGATCCTTCATTGTCTTGATGTAAGTTTTGCAT EsDREB基因的氨基酸序列MSATCMHKLVKNHNK⑶ASKSLADTLARWKEYNARLELSNEAEKPVRKVPAKGSKKGCMKGKGGPENSRCNYRGVRQRTffGKffVAEIREPNRGNRLffLGTFSNAVGAALAYDEAARAMYGSCARLNFPNVQVSNFSQLEASKASPAGSAMVISENTESMILPNNSGVDATEDVDMERLSLSLSVAVNHEEGE⑶SGSGTSSSDPSLS。
3.根据权利要求I所述的用途，其特征在于多种非生物胁迫抗性为抗干旱胁迫，抗高盐胁迫，抗冷胁迫，抗热胁迫。
4.根据权利要求I所述的用途，其特征在于步骤c目标植物为烟草。
全文摘要
本发明涉及一种准噶尔无叶豆EsDREB基因的用途，该基因用于转化植物对干旱胁迫，高盐胁迫，冷胁迫，热胁迫多种非生物胁迫的抗性，其中提高植物多种非生物胁迫抗性的方法是用准噶尔无叶豆EsDREB基因转化目标植物，获得转基因植物。本发明用农杆菌介导的叶盘法将EsDREB基因转化到野生型烟草中，并研究其在烟草中的抗逆功能，为EsDREB基因在其它植物中的应用提供了很好的基础。
文档编号C12N15/84GK102978238SQ20121046253
公开日2013年3月20日 申请日期2012年11月16日 优先权日2012年11月16日
发明者李小双, 张道远, 杨红兰, 张元明 申请人:中国科学院新疆生态与地理研究所