一种高粱胚芽接种转基因技术的制作方法
【专利摘要】一种高粱胚芽接种转基因技术，属于生物【技术领域】。将高粱种子消毒后，用钢针扎刺种胚接种携带双元载体的农杆菌，后将种子放在接种液中浸泡，加强侵染，再对种子进行暗箱培养，促进农杆菌侵染在体内增殖扩散，转为正常培养成苗后进行转基因鉴定。本方法简便，操作容易，费用低廉。
【专利说明】一种高粱胚芽接种转基因技术
【技术领域】
[0001]一种高粱胚芽接种转基因技术属于生物【技术领域】，更具体的说是一种通过对高粱种胚进行针刺接种加接种液浸泡接种的办法提高转基因接种的效率的方法。
【背景技术】
[0002]高粱转基因技术是采用生物技术方法改造高粱品种，培育具有高产、优质、抗虫、抗病等优良特性新品种的最为有效的技术手段。目前高粱的转基因一般都采用农杆菌浸染愈伤的方法，该方法先要进行愈伤诱导，然后农杆菌浸染，再用组织培养的方法获得转基因苗。由于高粱组织培养难度较大，因此该方法的效率较低，应用困难。
【发明内容】
[0003]本发明的目的是另辟蹊径，采用一种新的技术路线进行高粱转基因的接种处理，以期达到方法易行，操作简单，费用低廉，效果良好的技术效果。
[0004]本发明是这样实现的:
1.一种高粱胚芽接种转基因技术的特征在于，以高粱种子为载体，进行针刺加接种液浸泡反复接种，它包括双元载体接种、高粱种子消毒、无菌水浸种、高粱种接种、接种液浸种、暗箱培养、育苗栽培7个步骤。
[0005]2.双元载体接种:将已经转入双元载体的农杆菌接种到IOOmL的YEP液体培养基中培养2天。
[0006]3.高粱种子消毒:选取100粒饱满的高粱种子首先用70%乙醇消毒3min，然后用84消毒液消毒30min，消毒结束后用灭`菌水漂洗3_4次，完全洗净消毒液。
[0007]4.无菌水浸种:将种子转入灭菌水中常温浸泡12小时。
[0008]5.高粱接种:将浸泡好的种子取出置于已灭菌的刺胚板或培养皿中，用钢针蘸取OD600为0.6的农杆菌接种液扎刺胚芽。
[0009]6.接种液浸种:将刺完的种子放在含有400 μ mo I/L乙酰丁香酮的农杆菌接种液中浸泡1.5小时。
[0010]7.暗箱培养:将处理好的种子置于发芽盒中，22°C恒温培养箱暗培养4天。
[0011]8.育苗栽培:将萌动后的种子单粒播到营养钵中育苗栽培，在出现3片叶时即可进行转基因植株的鉴定。
[0012]本发明的有益效果:一种高粱胚芽接种转基因技术避开了传统的农杆菌浸染愈伤后再组织培养的技术路线，与现有方法相比有以下几个优点:第一，所需时间减少I个月左右，农杆菌浸染法从愈伤诱导到获得转基因一般需要3-4个月，本方法从接种开始到鉴定完成只需2个月；第二，本方法对技术要求不高，而高粱组织培养难度大，愈伤易褐化，因此对实验者的技术要求高，而本方法不涉及组织培养过程，因此大大降低了技术难度；第三，本方法所需费用较少，现有的转基因技术需要借助植物组织培养技术，而组织培养的各种试剂较贵，而且需要建立组培室并配备大量的仪器设备才能开展工作，而本发明免除了这部分的花费，节约了大量资金。
[0013]【具体实施方式】:
下面结合具体实施例对本发明进行进一步的描述。
[0014]实施例1:将S1390载体转入到高粱品系U68的植株中
1.双元载体接种:将已经转入S1390双元载体的农杆菌接种到IOOmL的YEP液体培养
基中培养2天。
[0015]2.高粱种子消毒:选取高粱品系U68种子300粒首先用70%乙醇消毒3min，然后用84消毒液消毒30min，消毒结束后用灭菌水漂洗3_4次，完全洗净消毒液。
[0016]3.无菌水浸种:将种子转入灭菌水中常温浸泡12小时。
[0017]4.高粱接种:将浸泡好的U68种子取出置于已灭菌的刺胚板或培养皿中，用钢针蘸取OD6tltl为0.6的农杆菌接种液扎刺胚芽。
[0018]5.接种液浸种:将刺完的种子放在含有400 μ mo I/L乙酰丁香酮的农杆菌接种液中浸泡1.5小时。
[0019]6.暗箱培养:将处理好的种子置于发芽盒中，22°C恒温培养箱暗培养4天。
[0020]7.育苗 栽培:将萌动后的种子单粒播到营养钵中育苗栽培，在出现3片叶时即可进行转基因植株的鉴定。
[0021]通过以上步骤在216株U68幼苗中获取了 23株转基因植株。历时50天，比现有的转基因技术减少30天左右。
[0022]实施例2:将SRnai载体转入到高粱品系3042B的植株中
1.双元载体接种:将已经转入SRnai双元载体的农杆菌接种到IOOmL的YEP液体培养
基中培养2天。
[0023]2.高粱种子消毒:选取高粱品系3042B种子500粒首先用70%乙醇消毒3min，然后用84消毒液消毒30min，消毒结束后用灭菌水漂洗3_4次，完全洗净消毒液。
[0024]3.无菌水浸种:将种子转入灭菌水中常温浸泡12小时。
[0025]4.高粱接种:将浸泡好的3042B种子取出置于已灭菌的刺胚板或培养皿中，用钢针蘸取OD6tltl为0.6的农杆菌接种液扎刺胚芽。
[0026]5.接种液浸种:将刺完的种子放在含有400 μ mo I/L乙酰丁香酮的农杆菌接种液中浸泡1.5小时。
[0027]6.暗箱培养:将处理好的种子置于发芽盒中，22°C恒温培养箱暗培养4天。
[0028]7.育苗栽培:将萌动后的种子单粒播到营养钵中育苗栽培，在出现3片叶时即可进行转基因植株的鉴定。
[0029]通过以上步骤在457株3042B幼苗中获取了 87株转基因植株。历时50天，比现有的转基因技术减少30天左右。
【权利要求】
1.一种高粱胚芽接种转基因技术的特征在于，以高粱种子为载体，进行针刺加接种液浸泡反复接种，它包括双元载体接种、高粱种子消毒、无菌水浸种、高粱种接种、接种液浸种、暗箱培养、育苗栽培7个步骤。
2.双元载体接种:将已经转入双元载体的农杆菌接种到IOOmL的YEP液体培养基中培养2天。
3.高粱种子消毒:选取100粒饱满的高粱种子首先用70%乙醇消毒3min，然后用84消毒液消毒30min，消毒结束后用灭菌水漂洗3_4次，完全洗净消毒液。
4.无菌水浸种:将种子转入灭菌水中常温浸泡12小时。
5.高粱接种:将浸泡好的种子取出置于已灭菌的刺胚板或培养皿中，用钢针蘸取OD_为0.6的农杆菌接种液扎刺胚芽。
6.接种液浸种:将刺完的种子放在含有400ymol/L乙酰丁香酮的农杆菌接种液中浸泡1.5小时。
7.暗箱培养:将处理好的种子置于发芽盒中，22°C恒温培养箱暗培养4天。
8.育苗栽培:将萌动的种子单粒播到营养钵中育苗栽培，3叶期即可进行转基因植株的鉴定。·
【文档编号】C12N15/82GK103849644SQ201210522442
【公开日】2014年6月11日 申请日期:2012年12月7日 优先权日:2012年12月7日
【发明者】李杰勤, 王丽华, 詹秋文, 林平, 张俊, 赵庭, 万海波, 周青, 王茂辉, 刘井良, 李万祥 申请人:安徽科技学院