专利名称：一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素b1的乳酸菌及其应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及一株发酵饲料用乳酸菌，具体是一株可抑制发酵饲料中霉菌生长、降低黄曲霉毒素含量、改善发酵饲料品质的降低发酵饲料中黄曲霉毒素BI的乳酸菌及其应用。
背景技术：
黄曲霉毒素(Aflatoxin，AFT)是一类结构和理化性质相似的真菌次级代谢物，分别为B1、B2、G1、G2、M1和M2等，在所有黄曲霉毒素中，BI的毒性最强且化学性质最稳定，它具有很强的致癌性、致突变性和致畸形，是国际上认可的A类致癌物。黄曲霉毒素在作物生长过程、饲料加工、贮藏及运输过程中皆可产生。饲料发霉及由此产生的毒素中毒是世界范围内普遍存在的问题，实验证明，动物摄入AFBl后，在肝、肾、肌肉、血、乳汁以及鸡蛋中可检测到黄曲霉毒素BI及其代谢产物，从而造成动物性食品的污染，威胁人类健康。因此掌握黄曲霉毒素的防治措施，对保障粮油食品质量安全和确保动物性食品安全尤为重要。目前，生物去除黄曲霉毒素由于效率高、无毒副作用越来越受到关注。乳酸菌是近年来正在推广的微生物添加剂，一些研究表明乳酸菌的代谢产物乳酸、醋酸、苯乳酸、丙酸和蛋白类等物质具有抑制黄曲霉生长和产毒素的能力，乳酸菌在生长过程中形成的代谢物可以抑制毒素合成或将毒素转化成无毒性的物质，乳酸菌还可通过细胞壁成分吸附黄曲霉毒素，达到去 除真菌毒素的目的。因此乳酸菌在降低饲料中的黄曲霉毒素具有广阔的发展前景。本发明针对上述课题，从分离于自然发酵饲料的130株植物乳杆菌中，筛选出一株具有抑制霉菌、降低黄曲霉毒素、改善发酵饲料品质的植物乳杆菌M-9 (Lactobacillusplantarum M-9)。
发明内容
本发明的目的在于提供一株能够抑制发酵饲料中霉菌生长、降低黄曲霉毒素含量、改善发酵饲料品质的降低发酵饲料中黄曲霉毒素BI的乳酸菌及其应用。本发明的技术方案是:一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素BI的乳酸菌，其特征在于:所述乳酸菌为植物乳杆菌M-9 (Lactobacillus plantarum M_9),从130株植物乳杆菌中筛选出，具有降低发酵饲料中黄曲霉毒素BI含量的特性；已于2012年10月29日，在地址为中国北京市朝阳区大屯路，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号=CGMCC N0.6740。所述植物乳杆菌在发酵饲料中的应用，具体制备方法如下:植物乳杆菌的活化和培养,其特征在于:将冷冻保存的Lactobacillus plantarumM-9接种于MRS液体培养基中，在温度37°C下培养18_22h，如此传代培养2_3次得到所述的活化Lactobacillus plantarum M_9菌种；所述的MRS液体培养基组成如下:10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三钠、ImL吐温80、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰加入IOOOmL蒸馏水，调节pH至6.5，121°C灭菌15min。菌粉制备:将上述活化的菌种离心后，添加菌种保护剂冻干成菌粉，使其含Lactobacillus plantarum M-9 活菌数在 2.0X 10ncfu/g。植物乳杆菌在发酵饲料中的使用方法:向饲料原料中加入煮沸并冷却至室温的自来水，使饲料含水量达到40%。以接种量2X 106cfu/g向全价饲料中接种Lactobacillusplantarum M_9菌粉,充分混勻。准确称取50g饲料原料于真空包装袋中,将包装袋压实以尽量排空空气，用封口机将包装袋封口，常温发酵。发酵饲料的品质检测:全价饲料在恒温发酵期间，在0d，Id, 2山3山4(1和5(1分别进行取样测定霉菌的活菌数和黄曲霉毒素BI等。本发明提供的植物乳杆菌具有下述的积极效果:本发明Lactobacillus plantarum M_9在发酵饲料中具有抑制霉菌生长的特性。本发明Lactobacillus plantarum M-9添加到发酵饲料中可以降低饲料中黄曲霉毒素BI的含量、提闻发酵词料的品质。
具体实施例方式下面结合实施例对本发明作进一步说明；下述实施例只是说明性的，并不限制本发明的保护范围。下述实施例中的实验方法，如无特别说明，均为常规方法。一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素BI的乳酸菌，所述乳酸菌为植物乳杆菌M-9(Lactobacillus plantarum M_9),从130株植物乳杆菌中筛选出，具有降低发酵饲料中黄曲霉毒素BI含量的特性；已于2012年10月29日，在地址为中国北京市朝阳区大屯路，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号=CGMCC N0.6740。所述植物乳杆菌在发酵饲料中的应用，具体制备方法如下:植物乳杆菌的活化和培养,其特征在于:将冷冻保存的Lactobacillus plantarumM-9接种于MRS液体培养基中，在温度37°C下培养18_22h，如此传代培养2_3次得到所述的活化Lactobacillus plantarum M_9菌种；所述的MRS液体培养基组成如下:10g蛋白胨、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三钠、ImL吐温80、
0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰加入IOOOmL蒸馏水，调节pH至6.5，121°C灭菌15min。菌粉制备:将上述活化的菌种离心后，添加菌种保护剂冻干成菌粉，使其含Lactobacillus plantarum M-9 活菌数在 2.0X 10ncfu/g。植物乳杆菌在发酵饲料中的使用方法:向饲料原料中加入煮沸并冷却至室温的自来水，使饲料含水量达到40%。以接种量2X 106cfu/g向全价饲料中接种Lactobacillusplantarum M_9菌粉,充分混勻。准确称取50g饲料原料于真空包装袋中,将包装袋压实以尽量排空空气，用封口机将包装袋封口，常温发酵。实验1:Lactobacillus plantarum M_9在发酵豆柏饲料中抑制霉菌的特性将活化的菌种离心后，添加保护剂冻干成菌粉，以接种量2X 106cfu/g向含水量为40%豆柏饲料中接种Lactobacillus plan tarum M_9菌粉,充分混勻。准确称取50g全价饲料于真空包装袋中，将包装袋压实以尽量排空空气，用封口机将包装袋封口，常温发酵。全价饲料在恒温发酵期间，分别在0d，Id, 2d，3d，4d和5d进行取样，准确称取IOg发酵饲料样品于装有玻璃珠的250mL灭菌三角瓶中，加入90g灭菌蒸馏水，置于摇床上160r/min摇动15min,取0.5mL稀释液用0.85% (w/v)灭菌生理盐水梯度稀释至适当倍数时，选取100 μ L稀释液涂布于马铃薯葡萄糖琼脂培养基(Potato Dextrose Agar), 30°C恒温培养箱中厌氧培养48h后，对霉菌进行计数。发酵豆柏样品在发酵过程中的霉菌动态变化见表I。表I发酵豆柏样品在发酵过程中的霉菌的活菌数变化
权利要求
1.一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素BI的乳酸菌，其特征在于:所述乳酸菌为植物乳杆菌M-9 (Lactobacillus plantarum M_9),从130株植物乳杆菌中筛选出，具有降低发酵饲料中黄曲霉毒素BI含量的特性；该菌菌株已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号=CGMCC N0.6740，保藏日期为2012年10月29日。
2.一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素BI的乳酸菌的活化和培养，其特征在于:将冷冻保存的Lactobacillus plantarum M-9接种于MRS液体培养基中，在温度37°C下培养18_22h，如此传代培养2-3次得到所述的活化Lactobacillus plantarum M_9菌种；所述的MRS液体培养基组成如下:10g蛋白胨 、5g牛肉膏、4g酵母浸粉、20g葡萄糖、2g磷酸氢二钾、5g乙酸钠、2g柠檬酸三钠、ImL吐温80、0.2g硫酸镁、0.05g硫酸锰加入IOOOmL蒸馏水，调节pH至 6.5,121°C灭菌 15min。。
3.一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素BI的乳酸菌菌粉的制备，其特征在于:将活化的菌种离心后，加入菌种保护剂冻成干粉，使其含乳酸菌活菌数在2.0X 10ncfU/g。
4.一株降低发酵饲料中黄曲霉毒素BI的乳酸菌的使用方法，其特征在于:向混合均匀的饲料中加入煮沸并冷却至室温的自来水，使饲料含水量达到40%。以接种量2X 106cfu/g向饲料中接种Lactobacillus plantarum M_9菌粉,充分混勻。准确称取50g全价饲料于真空包装袋中，将包装袋压实以尽量排空空气，用封口机将包装袋封口，常温发酵。
全文摘要
一株在发酵饲料中抑制霉菌生长、降低黄曲霉毒素B1含量，改善发酵饲料品质的乳酸菌及其应用。技术方案是所述乳酸菌为植物乳杆菌M-9(Lactobacillus plantarum M-9)已于2012年10月29日，在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心保藏，保藏号CGMCC No.6740。本发明还公开了该乳酸菌的制备和使用方法。
文档编号C12N1/20GK103205374SQ201310082969
公开日2013年7月17日 申请日期2013年3月15日 优先权日2013年3月15日
发明者于洁, 姚国强, 其木格苏都 申请人:厦门和美科盛生物技术有限公司