一种含有重组胶原蛋白多肽的植物油体护肤乳液的制作方法

一种含有重组胶原蛋白多肽的植物油体护肤乳液的制作方法
【专利摘要】本发明涉及一种含有重组胶原蛋白多肽的植物油体护肤乳液，更具体的说本发明涉及的乳液新配方，包括水相成分，乳化剂为羧乙基纤维素，以红花油体作为基质的油相成分，功效成分为含Col的拟南芥油体，偶合剂PEG600，防腐剂尼泊金甲酯和丙酯，香精为藏红花香精，本发明通过乳化技术，将含有Col的拟南芥油体和红花油体基质均匀的分布在乳液中，由于植物油体比表面积相对较大，乳液更容易被皮肤所吸收，可以在皮肤表面形成一层透气保护膜另外，植物油体可以作为天然的乳化剂，使Col分配在油体中，使其更容易被皮肤吸收，有效地延缓或抑制皮肤的衰老和恢复或修复皮肤创伤。
【专利说明】一种含有重组胶原蛋白多肽的植物油体护肤乳液

【技术领域】
[0001] 本发明属于化妆品制造【技术领域】，尤其是涉及一种重组胶原蛋白多肽的植物油体 的护肤乳液。

【背景技术】
[0002] 胶原是生物体内一种纤维蛋白，主要存在于皮肤、骨、软骨及肌腱等组织中，占人 体或其他动物体总蛋白含量的25%?33%。胶原蛋白因其优良的生物学特性而广泛地应 用于生物医用材料领域。因此，如何进行高纯度、高产率的具有生物活性的胶原的提取一直 是广大研究者关注的课题。胶原蛋白的类型多，已经发现有26种，分布于皮肤、肌腱等组织 中，其中，皮肤中约85%的胶原蛋白属于IV型，IV型胶原是含量最多研究最透彻的胶原， 占生物体胶原总量的90%左右。IV型胶原一般为白色、透明、无分支的原纤维，是由两条相 同的a I(IV)链和一条a 2 (IV)链组成的异质胶原（Heterotypic Collagen)。a I(IV)和 a 2 (IV)肽链的螺旋区含有338个（Gly-X-Y)重复序列，X常为脯氨酸，Y常为轻脯氨酸或 羟赖氨酸。因此，甘氨酸约占1/3,脯氨酸和羟脯氨酸占1/5以上，还有大量的羟赖氨酸和丙 氨酸。α链中吡咯环的存在使N-C键不能自由旋转，构成左手螺旋，螺距为0. 87ηη，每转一 圈约有3. 3个氨基酸残基。三条α链依靠侧链残基相连，最小氨基酸甘氨酸残基位于三股 螺旋内侧，螺距为96nm，每圈有36个氨基酸残基，形成了原胶原（tropo collagen)分子特 有的三股螺旋结构。
[0003] 胶原蛋白在很多方面都具有生物学功能，包括：（1)胶原蛋白能保护皮肤，提高皮 肤的弹性，胶原蛋白在调节表皮更新再生中发挥重要的作用，胶原蛋白可促进细胞粘附和 细胞增殖；(2)胶原蛋白具有止血性能；（3)胶原蛋白具有很低的免疫原性；(4)胶原蛋白 作为细胞生长的依附和支架物，能诱导上皮细胞等增殖、分化和移行；（5)胶原蛋白是细胞 外基质的骨架，其特有的三螺旋结构，使其不论作为形成新组织的骨架被吸收，还是被宿主 同化，都表现出良好的生物相容性。
[0004] 胶原蛋白结构和功能特点的多样性和复杂性，决定了其在许多领域的重要地位以 及良好的应用前景。
[0005] (一）在食品方面的应用
[0006] 胶原蛋白本身就可以作为一种食品，食用胶原蛋白一般来源于动物的真皮、肌腱 和骨胶原，其外观通常为白色，口感柔和，味道清淡，易消化。但多数情况下胶原蛋白在食品 中会被用作功能物质或营养成分。
[0007] (二）在化妆品方面的应用
[0008] 胶原蛋白具有保湿作用、修复皮肤、美白和润泽头发等作用，使胶原蛋白的这些美 容作用，已经广泛应用于化妆品中。
[0009] (三）在生物医学领域中的应用
[0010] 低免疫抗原性、生物相容性、止血作用和可生物降解性是胶原蛋白作为生物医学 材料的优势所在。近年来，英美等国采用注射性胶原来整复面部软组织的各种损伤。我国 研制的胶原注射剂已广泛应用于美容界，在延缓皮肤衰老、重建受损肌肤等方面取得了良 好的效果，是一种理想的医用材料。
[0011] (四）在造纸工业中的应用
[0012] 作为原料的应用：胶原纤维分子中含有大量的羧基、氨基、羟基，而纤维素中也含 有大量羟基和少量羧基，正是由于这两种天然高分子中含有许多的活性基团和活性部位， 可通过化学或物理的方法制成复合材料，用于制造书面革、膜塑包装材料、壁纸、生活用纸、 遮光纸、农副产品包装材料、生物胶原包装纸、复合生物降解材料等。
[0013] 利用植物生物反应器生产药用蛋白，近年来越来越受到人们的关注，油体蛋白是 油体中主要的膜蛋白。油体蛋白是碱性的疏水蛋白，三个部分组成油体蛋白：亲脂的C端和 N端，和中间疏水区域，它是通过磷脂膜进入到油体内部。N端和C端则镶嵌在油体表面，暴 露在细胞质中。油体蛋白具有表面活性剂，使其不能与油体结合。油体的这种非结合性非常 适合用作乳化剂。乳化剂能降低互不相溶的液体间的界面张力，使之成为乳浊液。油体乳 化剂是从天然油料种子中提取出来的，油体蛋白的结构以及它的特异性，使油体在生物技 术中得到广泛的应用，例如它可以作为乳化剂，携带和固定重组蛋白等等。它还可以应用于 纯化、重折叠和固定重组蛋白，在油体表面，目的蛋白与油体蛋白通常通过两种方式结合， 分别是与油体蛋白融合在油体中表达和通过配体作为亲和标签与油体蛋白连接。本发明是 根据植物油体特性，使重组胶原蛋白多肽基因连接在油体蛋白基因的N端或C端，构建融合 基因，使目的蛋白在植物油体中特异性表达，利用油体亲脂疏水的特性，将种子粉碎后，经 不同提取液抽提，回收油相，既可将融合蛋白与细胞内的其他组份分开，简化了分离纯化步 骤，降低了纯化成本与生产成本。
[0014] 近年来，生物基因工程技术长足发展并且影响到了生命科学的方方面面，同时也 给美容化妆品行业都带来了全新的发展机遇，化妆品已经从传统的化学美容、植物美容向 生物美容与基因美容发展。例如，传统的皮肤护理仅局限于油膜覆盖与保持水分等物理方 法，而现在美容护肤理念开始转向细胞水平的护理，因此含高亲和力的生物因子物质的化 妆品应运而生。如今，国际上越来越多的医药及生物工程技术专家投身于该研究领域，许多 国家也都瞄准生物化妆品这一巨大市场，开发生物美容产品。将以生物工程技术制得的生 长因子、透明质酸和核酸等应用于化妆品，这一新的研究动态也使人们认识到生物化妆品 将给化妆品品质带来根本性的变化。
[0015] 生物化妆品是指应用生物工程技术及其制品制得的化妆品，其主要成分生物活性 多肽大部分是细胞生长因子，它们在体内含量极微，但生物活性极高，对多种细胞生理功能 和代谢活动发挥生物调节作用，直接或间接地影响多种类型细胞的生长、分裂、分化、增殖 和迁移，在美容护肤、整形外科、烧伤溃疡以及各种皮肤病的伤口修复与愈合中有重要作 用。胶原蛋白经过稳定的结构修饰或特殊的的保护处理后，以一定的有效浓度添加到化妆 品中，可以有效的与皮肤细胞发生作用，促进上皮细胞营养代谢，保护皮肤，预防由于各种 原因导致的皮肤损伤。正常护肤品种添加活性细胞生长因子还可以有效促进皮下胶原细 胞的功能，加速皮肤胶原细胞的生长，使细胞加速分泌胶原，从而达到抗皱及延缓衰老的作 用。


【发明内容】

[0016] 本发明目的在于提供一种含有重组胶原蛋白多肽的植物油体护肤乳液，充分发挥 重组胶原蛋白多肽的油体透皮吸收作用。
[0017] 本发明提供的这种护肤乳液通过以下技术方案予以实现：一种含有重组胶原蛋 白多肽（Col)活性多肽的护肤乳液，由以下重量份的原料制成：油性原料20% (其中甘油 10 % )，乳化剂10 %，偶合剂3 %，防腐剂0. 25 %，香精2 %，营养添加剂8 %，维生素 C5 %其 余为去离子水。
[0018] 本发明制备一种含有重组胶原蛋白多肽（Col)护肤乳液的制备方法，包括以下步 骤进行制备：首先将植物油体提取出来，然后将水加入到油体中，混合均匀；然后逐级加入 甘油和乳化剂羧乙基纤维素，偶合剂PEG600,搅拌均匀，高剪切在1000rpm-30000rpm下乳 化，在均质机中乳化10_20min ;最后，搅拌均匀后再加入防腐剂尼泊金甲酯和尼泊金丙酯 的混合液和营养添加剂含有重组胶原蛋白多肽的植物油体和维生素 C以及藏红花香精，搅 拌均匀后即成本发明品。
[0019] 本发明是利用镶嵌于油体表面的油体蛋白与重组胶原蛋白多肽的融合表达产物 可直接作为活性成分用于护肤品的开发，简化了生长因子与乳化剂（或保护剂）混合的加 工工艺，降低了生产成本。同时可以保护重组胶原蛋白多肽蛋白的生物活性，将重组胶原蛋 白多肽活性多肽利用油体蛋白的特性，通过植物油体包裹，定位在油体表面，通过乳化均质 技术，可以使重组胶原蛋白多肽蛋白很均匀地分布在护肤乳液中，通过油体的透皮吸收作 用，使其容易发挥作用。本发明工艺简单，功效显著，成本降低，所以本发明的技术方案为优 质的技术方案。

【专利附图】

【附图说明】
[0020] 图1油体表达Col基因的载体示意图（油体表达重组胶原蛋白多肽基因的载体示 意图）
[0021] 图2红花油体显微图
[0022] 图3含有Col蛋白的拟南芥油体的直观图（含有重组胶原蛋白多肽的拟南芥油体 的直观图）
[0023] 图4含有Col蛋白的拟南芥油体的活性检测（含有重组胶原蛋白多肽的拟南芥油 体的活性检测）
[0024] 图5含有Col植物油体的乳液直观图（含有重组胶原蛋白多肽护肤乳液的直观 图） 具体实施例
[0025] 实施例1重组胶原蛋白多肽在植物油体中表达
[0026] 根据植物密码子的偏好性对从GENBANK中找到的重组胶原蛋白多肽Col的核苷酸 序列进行改造，将植物中含量较少的稀有氨基酸密码子替换成植物偏好的密码子。根据密 码子的简并性消除在本实验中所用到的酶切位点，送去上海生工生物工程有限公司进行人 工合成重组重组胶原蛋白多肽基因 （SEQ ID NO. 1)。
[0027] 实施例2克隆菜豆种子特异启动子与终止子
[0028] 克隆菜豆启动子和终止子基因，为了从菜豆基因组序列中克隆种子特异启动子 与终止子，利用引物，采用标准的多聚酶链式反应（PCR)，从菜豆基因组DNA中扩增得到 1548bp和1220bp的DNA片段，扩增的片段经限制性内切酶消化，克隆到pUC57克隆载体 中，保存备用。经测序，其喊基序列如序列表SEQ ID NO. 2和SEQ ID NO. 3所不。
[0029] 菜豆启动子引物
[0030] Primer5F ：GAATTCATTGTACTCCCAG
[0031] Primer5R ：AGTAGAGTAGTATTGAATATGAG
[0032] 菜豆终止子引物
[0033] tem5F ：AATAAGTATGAACTAAAATGC
[0034] tem5R ： TTAGTTGGTAGGGTGCTAGGAA
[0035] 实施例3构建植物特异表达载体pOBT
[0036] 将pUC57-菜豆启动子的克隆载体用限制性内切酶pstl和NcoI消化，回收目的片 段菜豆启动子序列，同时用pstl和NcoI消化基本质粒p0 (以pl301为基本骨架，将其T-DNA 区进行改造，除了保留有T-DNA区的NOS基因外其余基因均被35S和Bar基因替换，以pEGAD 质粒为模板，利用 35S-F 上游引物 47bp cggggtaccAtccgtcaacatggtggagcacgacacgcttgtc tact 和 Bar-R 下游弓 I物 54bp cggaattcactagttcagatctcggtgacgggcaggaccggacggggcggaa cc进行PCR，扩增得到35S-Bar基因，利用kpnl和SpeI酶切位点将其插入到pCAMBIA1301 载体T-DNA区的NOS基因前，构建了 pl301-35S-Bar-N0S基本质粒，简写为p0质粒），将菜 豆启动子（用来启动油体蛋白与重组胶原蛋白多肽的融合基因）与基本质粒PO连接，转化 大肠杆菌，获得POB中间载体；将pUC57-终止子的克隆载体用HindIII和kpnl消化，回收 目的片段菜豆终止子，同时用这两个酶消化P〇B中间载体，将终止子与酶切后的pOB载体连 接，转化大肠杆菌，获得植物特异表达载体pOBT。
[0037] 实施例4拟南芥油体蛋白基因的克隆
[0038] 取拟南介种子，提取DNA基因组，用引物：
[0039] I：CCATGGCGGATACAGCTAGAGG
[0040] 2 ：CACCGGGTGGAGTAGTGTGCTGG
[0041] 进行扩增拟南芥油体蛋白基因，经测序，其喊基序列如序列表SEQ ID NO. 4所不； 扩增的片段经限制性内切酶（NcoI酶和EcoRI酶）消化，克隆到pUC57克隆载体中，保存备 用。
[0042] 实施例5构建含有拟南芥油体蛋白与重组胶原蛋白多肽融合基因的植物油体特 异表达载体POBT-Col
[0043] 以克隆得到的拟南芥油体蛋白基因和重组重组胶原蛋白多肽基因为模板，设计融 合基因引物，通过融合PCR技术，获得oleosin-Col融合基因，经测序，其碱基序列如序列表 SEQ ID NO. 5所示。将融合基因用限制性内切酶NcoI与HindIII进行酶切，同时用这两个 酶对pOBT载体进行酶切，然后将融合基因与酶切后的pOBT载体连接，转化大肠杆菌，产生 pOBT-Col植物油体表达载体。
[0044] 拟南芥油体蛋白与重组胶原蛋白多肽融合基因引物
[0045] I ：CCATGGCGGATACAGCTAGAGG
[0046] 2 ：CACCGGGTGGAGTAGTGTGCTGG
[0047] 3 ：CCAGCACACTACTCCACCCGGT
[0048] 4：CCCAAGCTTCCACCGGC
[0049] 实施例6Flora dip方法进行的遗传转化
[0050] 首先，侵染前一天将野生型拟南芥和亚麻芥植株浇水浇透；将农杆菌工程菌株接 种至 50ml 含有三抗（100 μ g/ml Rif、50 μ g/ml Str 和 50 μ g/ml Kan)的 YEP 液体培养基 中，进行预培养（180rpm/min，28°C );取预培养的农杆菌7ml加入到含有三抗的YEP液体 培养基中，进行扩大培养，直至0D5900 = 1.0?1.2 ;把农杆菌菌液移到离心管中，20°C， 4000rpm离心20min，收集菌体，去除三抗培养基。用Flora-DipBuf f er重悬菌体，使其0D590 达到0.8?0.9。转化前剪掉种荚、开花和露白的花芽。在钵体四周插上适当高度的竹签， 以便支撑倒过来进行侵染的钵体。将拟南芥的茎部和叶片基部浸入重悬的农杆菌菌液中， 静置7分钟，然后吸弃过多的菌液。平放转化后的钵体，用塑料薄膜等保湿过夜，第二天可 稍露一小缝，第三天正常放置。一周后可进行第二次侵染。待种子成熟后，可隔天采摘发黄 成熟的荚，收获种子。
[0051] 实施例7筛选表达量高的转基因株系
[0052] 转基因株系在温室或大田经生长与发育，然后开花结籽，形成转基因 Tl代种子， 当Tl代种子收获后，每株转基因植株取200-1000mg，在提取液中抽提油体蛋白与重组胶原 蛋白多肽的融合蛋白，经酶联免疫技术检测重组重组胶原蛋白多肽的表达量，筛选出高表 达的转基因株系，高表达的株系表达量达到3586. 85pg/ml。
[0053] 实施例8含有重组胶原蛋白多肽的油体制备
[0054] 从含有重组胶原蛋白多肽蛋白的转基因油料作物种子中提取含有重组胶原蛋白 多肽蛋白的油体，保存备用，具体方法如下：（1)取〇. Img转基因种子，放入研钵中，加入 Iml PBS，用研棒充分研磨。直至溶液变浑池，看不见种粒。放入离心机10000rpm，4°C，离 心IOmin; (2)离心后溶液分为三层，即表层为白色油状层，中间层液体，和底层沉淀。将上 层油体部分和液体部分混合均匀，全部吸出，注意不要吸出底层沉淀，将吸出的液体转移至 另一离心管中，加？85，离心10000印111，4°(：,10111丨11，重复1、2步骤，3?4次。（3)将重复1、2 步骤离心后吸出的液体加500 μ 1的PBS混匀，在离心机中4°C，lOOOOrpm，离心lOmin。（4) 此时离心后分为两层，为上层油脂部分和下层液体部分，将下层液体吸出，弃掉。再重复3、 4步骤，3?4次。
[0055] 实施例9油体中重组胶原蛋白多肽的含量测定
[0056] 转基因株系在温室或大田经生长与发育，然后开花结籽，形成转基因 Tl代种子， 当Tl代种子收获后，每株转基因植株取200-1000mg，在提取液中抽提油体蛋白与重组胶原 蛋白多肽的融合蛋白，采用ELISA法，按照ELISA试剂盒（长春百金生物科技有限公司）说 明书操作，检测油体中重组胶原蛋白多肽的表达量，经计算，拟南芥油体中重组胶原蛋白多 肽的表达量为3586. 85pg/ml。
[0057] 实施例10油体中重组胶原蛋白多肽的活性检测
[0058] 1、收集对数期细胞NIH3T3细胞使用细胞计数板计数，96孔平底板中每孔加入 IOOul细胞液，细胞数为6000个左右。
[0059] 2.、37°C，5% C02培养24h，置显微镜下观察细胞单层铺满孔底。此时，轻倒出96 孔板中的完全培养基，每孔加入IOOul的饥饿培养基。
[0060] 3.、5% C02,37°C培养24小时，设7个梯度加药，每孔lOOul，设2个复孔。同时使 用纯品蛋白bFGF作为阳性对照，野生型拟南芥种子油体作为阴性对照。
[0061] 4、5% C02,37°C培养48小时，每孔加25ul浓度为0. 5%的MTT溶液，
[0062] 5、5% C02,37°C继续培养4h后终止培养，弃培养液。
[0063] 6、每孔加入120ulDMS0,低速振荡lOmin，紫色结晶充分溶解后用酶联免疫检测仪 在570nm波长下测定。结果见图4。
[0064] 实施例11红花油体的提取
[0065] (1)取200?IOOOmg野生型红花种子，放入研钵中，加入Iml Buffer A，用研棒充 分研磨。直至溶液变浑池，看不见种粒。放入离心机12000rpm，4°C，离心30min;
[0066] (2)离心后溶液分为三层，即表层为白色油状层，中间层液体，和底层沉淀。将上层 油体部分和液体部分混合均匀，全部吸出，注意不要吸出底层沉淀，将吸出的液体转移至另 一离心管中，加 BufferB,离心18000rpm，4°C，IOmin,重复1、2步骤，3?4次。
[0067] (3)将重复1、2步骤离心后吸出的液体加500μ 1的BufferC混匀，在离心机中 4°C，18000rpm，离心 lOmin。
[0068] (4)此时离心后分为两层，为上层油脂部分和下层液体部分，将下层液体吸出，弃 掉。再重复3、4步骤，3?4次。
[0069] Buffer A：0. 6M Sucrose,0. 5M NaCl,0. 05M Tris-HCl(pH = 7. 0)；
[0070] Buffer B ：0. 4M Sucrose,0. 5M NaCl,0. 05M Tris-HCl (pH = 7. 0)；
[0071] Buffer C :20mM Na2HPO4, 20mM NaCl (pH = 7. 0)。
[0072] 实施例12护肤乳液配方筛选
[0073] -种含有重组胶原蛋白多肽的护肤乳液，由以下重量份的原料制成：5% -25% 保湿剂（红花油体），10 %甘油，10 % -25 %乳化剂（羧乙基纤维素），1.5 % -8 %偶合剂 (PEG600)，0.05% -0.5%防腐剂（尼泊金甲酯和尼泊金丙酯混合液），1% -10%营养添加 剂（含有重组胶原蛋白多肽蛋白的拟南芥油体）和5%-20%维生素 C，适量香精，其余为 去离子水，本发明设计了正交实验，通过稳定性实验和活性检测，确定出最佳的乳液配方为 10%油性原料（红花油体），1〇%甘油，10%乳化剂（羧乙基纤维素），3%偶合剂（PEG600)， 0. 25%防腐剂（尼泊金甲酯和尼泊金丙酯混合液），0. 5%香精，8%营养添加剂（含有重组 胶原蛋白多肽蛋白的拟南芥油体），5%维生素 C。
[0074] 实施例13护肤乳液制备方法
[0075] 本发明制备一种含有重组胶原蛋白多肽护肤乳液的制备方法，包括以下步骤进行 制备：首先将植物油体提取出来，然后将水加入到油体中，混合均匀；然后逐级加入甘油和 乳化剂羧乙基纤维素，偶合剂PEG600,搅拌均匀，高剪切在1000rpm-30000rpm下乳化，在均 质机中乳化10_20min ;最后，搅拌均匀后再加入防腐剂尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的混合液 和营养添加剂含有重组胶原蛋白多肽的植物油体和维生素 C以及藏红花香精，搅拌均匀后 即成本发明品。
[0076] 实施例14护肤乳液稳定性实验
[0077] (1)在40°C电热恒温培养箱中放置30-50天，恢复室温后观察，并没有分层现象， 稳定性良好；
[0078] (2)24小时之内，在0°C -50°C之间来回频繁变化，如此反复操作15-30天，恢复室 温后观察，没有分层现象，稳定性良好；
[0079] (3)在_5°C冰箱和40°C的电热恒温培养箱中各放1天，如此反复操作5-7天，恢复 室温后观察，没有出现分层现象，稳定性良好；
[0080] (4)在40°C的电热恒温培养箱中放置5-7天，然后在(TC -5°C冰箱中放置5-7天， 接下来再放入40°C _50°C的电热恒温培养箱中放置30天，恢复室温后观察，稳定性良好。
[0081] 通过上述实验观察，油性原料10%，甘油10%，乳化剂10%，偶合剂3%，防腐剂 0. 25 %，香精0. 5 %，营养添加剂8 %，维生素 C5 %，这一乳液配方的稳定性较好。
[0082] 实施例15含有重组胶原蛋白多肽油体的护肤乳液功效
[0083] 首先对护肤乳液进行抗氧化功效检测，选用邻苯三酚法检测对超氧阴离子自由基 的清除作用，结晶紫法检测对轻自由基的清除作用，DPH法检测对总自由基的清除作用。
[0084] 然后对美白功效进行检测，采用酪氨酸酶抑制法，取4支试管分别编号为Cl、C2、 Tl、T2,按照表1的顺序在各管中加入相应的试剂，CUTl在加入酪氨酸酶之前先放入37°C 水浴锅内l〇min，然后再加入酪氨酸酶，然后将Cl、C2、ΤΙ、T2共同放入共同放入37°C水浴 锅内lOmin，取出分别测定Cl、C2、ΤΙ、T2各管在475nm处的吸光度值，做三次平行。
[0085] 采用上述这种方法测定以下不同配方的护肤品的超氧阴离子自由基的清除率、羟 自由基清除率、总自由基清除率、酪氨酸酶抑制率。
[0086] 组成1 (本发明）：油性原料（红花油体）10%，甘油10%，乳化剂（羧乙基纤维 素）10%，偶合剂（PEG600)3%，防腐剂（尼泊金甲酯和尼泊金丙酯混合液）0. 25%，香精 (藏红花香精）〇. 5 %，营养添加剂（含有28694. 8pg重组胶原蛋白多肽的拟南芥油体）8 %， 维生素 C5% ;
[0087] 组成2 :油性原料（红花油体）10%，甘油10%，乳化剂（羧乙基纤维素）10%，偶 合剂（PEG600) 3%，防腐剂（尼泊金甲酯和尼泊金丙酯混合液）0.25%，香精（藏红花香 精）0. 5%，维生素 C5% ;
[0088] 组成3:油性原料（甘油）20%，乳化剂（羧乙基纤维素）10%，偶合剂 (PEG600)3 %，防腐剂（尼泊金甲酯和尼泊金丙酯混合液）0.25%，香精（藏红花香 精）0. 5 %，营养添加剂（含有23005. 12pg重组胶原蛋白多肽的拟南芥油体）8 %，维生素 C5% ；
[0089] 组成4:油性原料（甘油）20%，乳化剂（羧乙基纤维素）10%，偶合剂 (PEG600)3 %，防腐剂（尼泊金甲酯和尼泊金丙酯混合液）0.25%，香精（藏红花香 精）0.5%，营养添加剂（28694.8pgCol纯品）8%，维生素 C5% ;
[0090] 比较这四种组成配方的护肤品对超氧阴离子自由基的清除率、羟自由基清除率、 总自由基清除率、酪氨酸酶抑制率，结果如下。
[0091] 表1反应液组成与体积
[0092]

【权利要求】
1. 一种含有重组胶原蛋白多肽的植物油体，其特征在于：利用重组DNA技术将构建了 含有Col基因的植物油体特异性表达载体pOBT-Col，转化至油料作物中，经筛选鉴定获得 转基因受体植物，经过培养收获转基因种子，从转基因种子中分离提取含有重组胶原蛋白 多肽的植物油体。
2. -种含有重组胶原蛋白多肽（Col)活性多肽的植物油体护肤乳液，其特征在于：它 包括下列重量百分比的各成分 保湿剂 5%-25% 甘油 10% 乳化剂 10%-25% 偶合剂 1.5%-6% 防腐剂 0.05%-0.5% 营养添加剂1%-1〇% 维生素C5%-20% 香精 适量 其余为去离子水。
3. 根据权利要求2所述的护肤乳液，其特征在于：保湿剂为红花油体和甘油，营养添加 剂为重组胶原蛋白多肽活性多肽的拟南芥油体和维生素C。
4. 根据权利要求2所述的护肤乳液，其特征在于：所述的防腐剂为尼泊金甲酯和尼泊 金丙酯的混合物，偶合剂为PEG600,乳化剂为羧乙基纤维素，香精为藏红花香精。
5. 根据权利要求2所述的护肤乳液，其特征在于：按照以下步骤进行制备：首先将植 物油体提取出来，然后将水加入到油体中，混合均匀：然后逐级加入甘油和乳化剂羧乙基 纤维素，偶合剂PEG600,搅拌均匀，高剪切在1000rpm-30000rpm下乳化，在均质机中乳化 10-20min;最后，搅拌均匀后再加入防腐剂尼泊金甲酯和尼泊金丙酯的混合液和营养添加 剂重组胶原蛋白多肽活性多肽的植物油体以及藏红花香精，搅拌均匀后即成本发明品。
【文档编号】C12N15/66GK104274343SQ201310300893
【公开日】2015年1月14日 申请日期:2013年7月9日 优先权日:2013年7月9日
【发明者】杨晶, 李校堃, 李海燕, 王沥浩, 王文慧, 郭咏昕, 王艳芳 申请人:吉林农业大学