一种丝胶蛋白多肽1及其制备和应用
【技术领域】
[0001]本发明涉及生物技术多肽制备领域，具体涉及丝胶蛋白多肽制备领域。
[0002]
技术背景
[0003]丝胶蛋白是一种丝胶状蛋白质，为球蛋白。约占蚕丝量的20%?30%，丝胶蛋白由外到内由I，II，III，IV种蛋白质组成。总体分子构象主要为无规卷曲，分子空间结构松散、无序含有β结构存在，但无α螺旋结构。丝胶蛋白链上有许多侧链较长的氨基酸，如精氨酸赖氨酸、谷氨酸、甲硫氨酸、色氨酸、酪氨酸等，以及许多极性亲水基团(如一0Η、一C00H、一ΝΗ2、> NH等)处于多肽链表面，这些亲水性基团可使体内水分传递至皮肤角质层而结合，使皮肤保持一定水分，从而使皮肤柔软而光滑。它与人体皮肤角质层中含有一定数量的天然调湿因子作用相似。
[0004]然而，丝胶蛋白是具有20个氨基酸的蛋白质，分子量较大。现在一般认为分子量较小的水溶性丝胶具有优异的调湿和保湿作用，能使皮肤中水分含量保持适当使皮肤光滑、柔软且富有弹性。但是，丝胶蛋白如果进一步进行酶解，可分别得到不同分子量的丝肽和丝氨酸等产品。它们不含生理活性成分，且对人体可能产生危害的重金属和其他有机物通常附着在丝胶中。因此，如何才能让分解后的丝胶蛋白分子量较小，且具有原蛋白质的功效，一直是一个难以协调的问题。
【发明内容】
[0005]发明目的
针对现有丝胶蛋白化妆品的现状，发明一种丝胶蛋白多肽及制备和应用，制备的丝胶蛋白多肽，该多肽应用于化妆品，其分子量较小，且具有原丝胶蛋白的功效。
[0006]技术方案
本发明为一种丝胶蛋白多肽，其序列为MSPSRATTTVHHTDNASIRGP。制备步骤包括(I)取丝胶粉500g，按照质量/体积=1:1-3加入去离子水中溶解；(2)将丝胶溶液速冷至4-10°C ；
(3)在4-10°C离心，10000-15000rpm, 30-60分钟，取上清；(4)采用旋转蒸发仪，将上清溶液浓缩；(5)待溶液冷却后，加入水解酶，在20-40°C反应30-60分钟；(6)离心2000-3000rpm，5-10分钟，取上清；(7)将上清液加入ρΗ5.0-6.0的缓冲液中，搅拌，离心10000-15000rpm，30-60分钟，得到沉淀物；(8)将沉淀物复溶于pH6.4-7.2缓冲液中，采用透析法，分离出分子量为1600-3400Da的多肽，即得。所述的水解酶，可以是凝血酶、溶菌酶等。所述的丝胶蛋白多狀，在制备化妆品中的应用。
[0007]本发明涉及多肽委托上海生工合成。
[0008]有益效果
本发明的制备得到的丝胶蛋白多肽，经蛋白质序列测定，序列为MSPSRATTTVHHTDNASIRGP,纯度大于70%。实验表明，该多肽能保湿的作用，作用与原丝胶蛋白相当。
[0009]
【具体实施方式】
[0010]实施例1
取丝胶粉500g，加入500ml去离子水中溶解；将丝胶溶液速冷至4°C ；在4°C离心，1000rpm,60分钟，取上清；采用旋转蒸发仪，将上清溶液浓缩；待溶液冷却后，加入溶菌酶，在37°C反应30分钟；离心3000rpm，5分钟，取上清；将上清液加入pH5.0-6.0的缓冲液中，搅拌，离心10000rpm，60分钟，得到沉淀物；将沉淀物复溶于pH6.4-7.2缓冲液中，采用透析法，分离出分子量为1600-3400Da的多肽，即得。采用固相蛋白质自动测序仪测定该多肽的序列为 MSPSRATTTVHHTDNASIRGP，纯度为 81.1%。
[0011]实施例2
取丝胶粉500g，加入100ml去离子水中溶解；将丝胶溶液速冷至10°C ；在10°C离心，15000rpm，30分钟，取上清；采用旋转蒸发仪，将上清溶液浓缩；待溶液冷却后，加入凝血酶，在37°C反应30分钟；离心2000rpm，10分钟，取上清；将上清液加入pH5.0-6.0的缓冲液中，搅拌，离心15000rpm，30分钟，得到沉淀物；将沉淀物复溶于pH6.4-7.2缓冲液中，采用透析法，分离出分子量为1600-3400Da的多肽，即得。采用固相蛋白质自动测序仪测定该多肽的序列为MSPSRATTTVHHTDNASIRGP，纯度为77.3%。
[0012]实施例3
将实施例1制备的多肽添加入乳膏基质中。分别取不同浓度的丝胶蛋白2.0mg/ml、丝胶蛋白多肽溶液(0.5，1.0，2.0mg/ml)以1.25 μ L / cm2涂敷密度短期I次涂敷，轻轻拍打至吸收，测定12小时后角质层水分含量。数据计算:皮肤水合度变化率(％)=[皮肤水合度(测试时)-皮肤水合度(对照时)]/皮肤水合度(对照时)X 100 %。将实验重复三次，2.0mg/ml丝胶蛋白、0.5，1.0,2.0,mg/ml丝胶蛋白多肽溶液的皮肤水合度率分别提高了为37.12、28.61,38.61,48.02%。
[0013]同时，分别取不同浓度的丝胶蛋白2.0mg/ml、丝胶蛋白多肽溶液(0.5，1.0，
2.0mg/ml)以1.25 μ L / cm2涂敷密度短期I次涂敷，轻轻拍打至吸收，测定12小时后使用前后表皮的水分经皮肤散失，将实验重复三次。初始对照的透皮失水值分别为21.1 g /(m2.h)、20.2 g / (m2.h)、20.4 g / (m2.h )和 20.3 g / (m2.h )使用 2.0mg/ml 丝胶蛋白、0.5，1.0，2.0，mg/ml丝胶蛋白多肽溶液至12 h时，透皮失水分别达到14.5 g /(m2*h)、13.6g / (m2*h)、12.3 g / (m2.1ι)和 10.6 g / (m2.1ι)，均有不同程度的降低。
[0014]可见，丝胶蛋白多肽溶液能显著性提高皮肤水合度率，有效地降低皮肤的透皮水分蒸发，具有保湿的作用，且与原型丝胶蛋白相比，其保湿作用不变。
【主权项】
1.一种丝胶蛋白多肽，其特征在于，序列为MSPSRATTTVHHTDNASIRGP。2.根据权利要求1所述丝胶蛋白多肽的制备方法，其特征在于，步骤包括(I)取丝胶粉500g，按照质量/体积=1:1-3加入去离子水中溶解；(2)将丝胶溶液速冷至4-10°C; (3)在4-10°C离心，10000-15000rpm, 30-60分钟，取上清；(4)采用旋转蒸发仪，将上清溶液浓缩；(5)待溶液冷却后，加入水解酶，在20-40°C反应30-60分钟；(6)离心2000-3000rpm，5_10分钟，取上清；(7)将上清液加入ρΗ5.0-6.0的缓冲液中，搅拌，离心10000-15000rpm，30-60分钟，得到沉淀物；(8)将沉淀物复溶于pH6.4-7.2缓冲液中，采用透析法，分离出分子量为1600-3400Da的多肽，即得。3.根据权利要求书2所述丝胶蛋白多肽的制备方法，其特征在于，所述的水解酶是凝血酶、溶菌酶。4.根据权利要求书I所述的丝胶蛋白多肽在制备化妆品中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种丝胶蛋白多肽，涉及生物技术多肽制备领域。其序列为MSPSRATTTVHHTDNASIRGP。制备步骤包括（1）取丝胶粉500g，按照质量/体积=1:1-3加入去离子水中溶解；（2）将丝胶溶液速冷至4-10℃；（3）在4-10℃离心，10000-15000rpm，30-60分钟，取上清；（4）采用旋转蒸发仪，将上清溶液浓缩；（5）待溶液冷却后，加入水解酶，在20-40℃反应30-60分钟；（6）离心2000-3000rpm，5-10分钟，取上清；（7）将上清液加入pH5.0-6.0的缓冲液中，搅拌，离心10000-15000rpm，30-60分钟，得到沉淀物；（8）将沉淀物复溶于pH6.4-7.2缓冲液中，采用透析法，分离出分子量为1600-3400Da的多肽，即得。所述的丝胶蛋白多肽，在制备化妆品中的应用。本发明制备的丝胶蛋白多肽纯度大于70%。实验表明，该多肽能保湿的作用，作用与原丝胶蛋白相当。
【IPC分类】A61K8/65, C07K14/435, A61Q19/00, C12P21/06
【公开号】CN104946716
【申请号】CN201510449667
【发明人】罗瑞雪
【申请人】苏州普罗达生物科技有限公司
【公开日】2015年9月30日
【申请日】2015年7月28日