速度或爆发力相关基因-actn3多态性速测试剂盒及检测方法
【专利摘要】本发明公开了一种速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒，包括扩增试剂和扩增后的基因分型用试剂；所述扩增试剂包括PCR缓冲液、dNTPs混合物、热启动Taq酶、引物混合物和超纯水；所述基因分型用试剂琼脂糖、TAE缓冲液、DAN分子量标准、DAN无毒染料和DAN上样缓冲液。本发明还公开一种速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性检测方法。本发明的有益效果如下：可以为运动员选材提供快速参考；准确性高，方法简单易操作，检测成本低，便于应用推广。
【专利说明】速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒及检测方法
【技术领域】:
[0001]本发明涉及生物基因检测【技术领域】，具体为一种速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒及检测方法。
【背景技术】:
[0002]近年来，随着分子生物学技术与理论的飞速发展，限制性片段长度多态和单核苷酸多态作为遗传标记技术得到广泛的应用，从而使在基因水平上寻找决定人类运动能力的基因成为可能，并且能更加科学而准确地评估个体的运动状态及运动潜力，也使基因选材成为未来运动员科学遴选的主要研究内容。
[0003]研究表明，ACTN3基因与肌肉爆发力相关，是指导合成α -辅肌动蛋白-3的基因，可分为RR型、RX型和XX三种类型。该基因位于人体第11号染色体，正常情况下，其16号外显子的第1747位核苷酸的碱基为C，指导编码ACTN3蛋白；当该位点C碱基突变为T碱基，第577位的精氨酸链密码子变为终止密码子时，将导致α-辅肌动蛋白-3的缺失，影响肌肉拉伸速度，降低爆发力，世界上约有18%的人存在此多态。
[0004]国内外研究结 果表明，ACTN3基因位点可能是决定运动员爆发力素质的主效基因，CC纯合型爆发力素质优于CT、TT型，该基因可以作为爆发力相关项目运动员的基因选材指标。
[0005]目前常用的基因检测方法有:连接酶检测反应、限制性片段长度多态性分析、直接测序、定量PCR等。但这些方法都存在不同的缺陷，例如操作繁琐、重复性差、准确性不高等问题。
【发明内容】
:
[0006]本发明的目的是针对以上所述ACTN3基因现有检测方法存在的不足，提供一种准确性高、操作简易且检测成本低的速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒。
[0007]本发明另一目的是提供一种速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性检测方法。
[0008]为了实现本发明目的，本发明是采取的技术方案是:速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒，其包括引物混合物，所述引物混合物为:
[0009]SEQ N0.1:5，-GCCCCAAATTCTGCCACCCACAAC-3，；
[0010]SEQ N0.2:5，-GCTGGGAAATGGCTTTAGGGGAGAT-3，；
[0011]SEQ N0.3:5，-CAAGGCAACACTGCCCGAGGCTGAAC-3，；
[0012]SEQ N0.4:5，-CAAGGCAACACTGCCCGAGGCTGAAT-3，。
[0013]且摩尔数比为SEQ N0.1:SEQ N0.2/SEQ N0.3:SEQ N0.4=0.8-1.2:0.32-0.48:1。
[0014]其中浓度为IOuM的所述内参上游引物(SEQ N0.1)用量为0.1-0.3 μ 1，浓度为IOuM的多态性引物(SEQ N0.2，SEQ N0.3)用量为0.04-0.12 μ 1、浓度为IOuM的下游引物(SEQ N0.4) (IOuM)用量为 0.1-0.3 μ L.[0015]所述速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒还包括扩增试剂，所述扩增试剂包括PCR缓冲液、dNTPs混合物、热启动Taq酶和超纯水；
[0016]所述速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒还包括扩增后的基因分型用试剂，所述扩增后的基因分型用试剂包括琼脂糖、TAE缓冲液、DAN分子量标准(DANMarker)、DAN无毒染料和DAN上样缓冲液。
[0017]优选的，所述扩增试剂包括10倍PCR缓冲液(其中，Tris-HClpH8.3100mM;KC1500Mm;MgCl215mM)，各组分浓度为 2.5mM 的 dNTPs 混合物，5υ/μ I 的热启动Taq 酶(Taq HS)用量为 0.1-0.125 μ I。
[0018]优选的，扩增试剂由以下体积的组分组成:
【权利要求】
1.速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒，其包括引物混合物，其特征在于，所述引物混合物为:
SEQ N0.1:5’ -GCCCCAAATTCTGCCACCCACAAC-3’ ；
SEQ N0.2:5’ -GCTGGGAAATGGCTTTAGGGGAGAT-3’ ；
SEQ N0.3:5’ -CAAGGCAACACTGCCCGAGGCTGAAC-3’ ；
SEQ N0.4:5’ -CAAGGCAACACTGCCCGAGGCTGAAT-3’ ；
且摩尔数比为 SEQ N0.1:SEQ N0.2/SEQ N0.3:SEQ N0.4=0.8-1.2:0.32-0.48:1。
2.根据权利要求1所述的速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒，其特征在于，浓度为IOuM的所述内参上游引物用量为0.1-0.3 μ I,浓度为IOuM的多态性引物用量为0.04-0.12 μ 1、浓度为IOuM的下游引物用量为0.1-0.3 μ L.
3.根据权利要求1所述的速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒，其特征在于，还包括扩增试剂，所述扩增试剂包括PCR缓冲液、dNTPs混合物、热启动Taq酶和超纯水。
4.根据权利要求1所述的速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒，其特征在于，还包括扩增后的基因分型用试剂，所述扩增后的基因分型用试剂包括琼脂糖、TAE缓冲液、DAN分子量标准、DAN无毒染料和DAN上样缓冲液。
5.根据权利要求1所述的速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒，其特征在于，所述扩增试剂包括10倍PCR缓冲液:其中，Tris-HCl pH8.3 IOOmM; KCl500Mm;MgCl215mM，各组分浓度为2.5mM的dNTPs混合物，5U/μ I的热启动Taq酶用量为`0.1-0.125 μ I。
6.根据权利要求1所述的速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒，其特征在于，扩增试剂由以下体积的组分组成:
7.根据权利要求6所述的速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性速测试剂盒，其特征在于，扩增试剂由以下体积的组分组成:
8.一种速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性检测方法，其特征在于，其步骤包括， (1)、检材基因组的DAN提取； (2)、扩增和扩增产物的检测分析； 其中，PCR扩增试剂由以下体积的组分组成:
9.根据权利要求8所述的速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性检测方法，其特征在于，由去离子甲酰胺与分子量内标组成上样混合物，将IOul上样混合物与Iul扩增产物或等位基因分析标准物混合，95°C变性5min,做电泳。
10.根据权利要求8所述的速度或爆发力相关基因-ACTN3多态性检测方法，其特征在于，其中所检测的人基因组DNA为使用Chelex法、磁珠提取法或酚/氯仿抽提法对来源样本进行处理得到的DAN ;所述来源样本为来源于人类的滤纸片血斑/ 口腔拭子样本、FTA卡血斑或血液。`
【文档编号】C12Q1/68GK103525906SQ201310342945
【公开日】2014年1月22日 申请日期:2013年8月7日 优先权日:2013年8月7日
【发明者】陈伟民, 张晓文 申请人:广州市体育科学研究所