一种微囊藻群体细胞的计数方法
【专利摘要】本发明公开了一种微囊藻群体细胞的计数方法，首先定量采取微囊藻水华爆发盛期的自然水体的水样1L，再将采集到的水样经孔径约为0.45μm的微孔滤膜过滤，然后将过滤后附着在微孔滤膜上的微囊藻群体样品悬浮在含有10mL10-3mol/L?EDTA溶液的100mL烧杯中，然后向其中加入100个小玻璃珠后1600rm/min磁力搅拌100min，获得完全分散的单细胞微囊藻样品且无破损，最后采用血球计数板计数微囊藻细胞数目。本发明体现了简化实验步骤，耗时较短，可准确计数微囊藻群体细胞的数目。
【专利说明】一种微囊藻群体细胞的计数方法
【技术领域】
[0001]本发明属于水体污染控制领域，特别是涉及一种微囊藻群体细胞的计数方法。
【背景技术】
[0002]微囊藻(Microcystis sp.)是全球广布性的水华蓝藻种类,也是我国富营养化水体中最常见的蓝藻水华主要构成种类。微囊藻在实验室培养条件下通常以单细胞或双细胞形式存在，而在野外自然水体中是以大量肉眼可见的群体形式存在。现在有关野外微囊藻群体细胞的计数方法有漩涡震荡法、煮沸法、二氧化钛或紫外线处理法，然而在漩涡震荡法作用下囊藻群体细胞无法完全分散为单细胞，而在煮沸法、二氧化钛或紫外线处理法作用下微囊藻群体细胞均有不同程度的破损，因而上述计数方法均不同程度地降低了微囊藻群体细胞计数的准确性。
【发明内容】
[0003]本发明的目的就在于提供一种微囊藻群体细胞的计数方法，用于人工供水系统、湖泊、水库和池塘等各种淡水水体经常爆发蓝藻水华的水体中微囊藻密度的监控，用于自然水体中微囊藻细胞数目的常规监测及微囊藻水华的预警与防治。
[0004]为了解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是:一种微囊藻群体细胞的计数方法，包括下述步骤:
[0005]( I)定量采取微囊藻水华爆发盛期的自然水体的水样；
[0006](2)将采集到的水样经孔径不大于2 μ m的筛网过滤，微囊藻样品附着在筛网上；
[0007](3)将过滤后附着在筛网上的微囊藻群体样品再次悬浮在浓度为10_3mol/L EDTA溶液的烧杯中；
[0008](4)向上述烧杯加入小玻璃珠后，磁力搅拌；
[0009](5)吸取显微镜下观察已完全分散开来的微囊藻单细胞样品，采用血球计数板计数微囊藻细胞数目。
[0010]所述步骤⑵中，所述筛网为孔径0.45μπι的微孔滤膜或孔径不大于2μπι的筛乡目。
[0011]所述步骤(3)中，利用移液枪吸取EDTA溶液反复冲洗筛网，直至微囊藻群体完全从筛网上洗脱下来。
[0012]所述步骤(4)中，在磁力搅拌过程中，在显微镜下每过5分钟查看微囊藻群体细胞分散过程，直至微囊藻群体细胞完全分散为单细胞。
[0013]所述步骤(4)中，磁力搅拌速度1000-2000转/min，磁力搅拌时间90_110min。
[0014]所述步骤(5)中，吸取微囊藻单细胞样品前，要混合均匀后再吸取，并将血球计数板计数微囊藻细胞数目换算成每升水样的微囊藻细胞数量。
[0015]本发明的有益效果是:可以克服漩涡震荡法作用下囊藻群体细胞无法完全分散为单细胞及煮沸法、二氧化钛或紫外线处理法作用下微囊藻群体细胞均有不同程度的破损的缺陷，可准确计数自然水体中微囊藻群体细胞的数目。实验步骤简单，耗时较短，且可准确提高计数微囊藻群体细胞的数目。广泛应用于人工供水系统、湖泊、水库和池塘等各种淡水水体微囊藻水华的防控。
【专利附图】
【附图说明】
[0016]图1是微囊藻群体在本发明方法作用下第一实施例的形态的变化。
[0017]图2是微囊藻群体在本发明方法作用下第二实施例的形态的变化。
【具体实施方式】
[0018]下面结合【具体实施方式】和附图对本发明作进一步详细说明:
[0019]本发明的微囊藻群体细胞的计数方法，包括下述步骤:
[0020]( I)定量采取微囊藻水华爆发盛期的自然水体的水样；
[0021](2)将采集到的水样经孔径不大于2 μ m的筛网过滤，微囊藻样品附着在筛网上；
[0022](3)将过滤后附着在筛网上的微囊藻群体样品再次悬浮在浓度为10_3mol/L EDTA溶液的烧杯中；
[0023](4)向上述烧杯加入小玻璃珠后，磁力搅拌；
[0024](5)吸取显微镜下观察已完全分散开来的微囊藻单细胞样品，采用血球计数板计数微囊藻细胞数目。
[0025]所述步骤⑵中，所述筛网为孔径0.45μπι的微孔滤膜或孔径不大于2μπι的筛乡目。
[0026]所述步骤(3)中，利用移液枪吸取EDTA溶液反复冲洗筛网，直至微囊藻群体完全从筛网上洗脱下来。
[0027]所述步骤(4)中，在磁力搅拌过程中，在显微镜下每过5分钟查看微囊藻群体细胞分散过程，直至微囊藻群体细胞完全分散为单细胞。
[0028]所述步骤(4)中，磁力搅拌速度1000-2000转/min，磁力搅拌时间90_110min。
[0029]所述步骤(5)中，吸取微囊藻单细胞样品前，要混合均匀后再吸取，并将血球计数板计数微囊藻细胞数目换算成每升水样的微囊藻细胞数量。
[0030]高速磁力搅拌结合玻璃珠的作用，在EDTA溶液的配合下可将细菌及真菌细胞的胞外多糖洗脱下来且不破坏细菌或真菌细胞的完整性。
[0031]实施例1本发明方法应用于自然水体微囊藻细胞密度监测的实例
[0032]使用本发明计数天津市津河流域2013年7月3日八里台段爆发微囊藻水华时的微囊藻细胞数目:
[0033](I)利用IL的采水器采取津河微囊藻水华爆发盛期的自然水体的水样IL ; (2)将采集到的津河水样经孔径约为0.45 μ m的微孔滤膜过滤，微囊藻样品则附着在微孔滤膜上 ；
[0034](3)将过滤后附着在微孔滤膜上的微囊藻群体样品再次悬浮在含有10mL10_3mol/L EDTA溶液的IOOmL烧杯中；
[0035](4)向上述IOOmL烧杯加入100个小玻璃珠后，1600rm/min磁力搅拌90_110min ；(见图1)[0036](5)吸取显微镜下观察已完全分散开来的微囊藻单细胞样品，采用血球计
[0037]数板计数微囊藻细胞数目。
[0038]所述步骤(3)中，利用移液枪吸取EDTA溶液反复冲洗筛网，直至微囊藻群体完全从筛网上洗脱下来。
[0039]所述步骤(4)中，在磁力搅拌过程中，在显微镜下每过5分钟查看微囊藻群体细胞分散过程，直至微囊藻群体细胞完全分散为单细胞。
[0040]所述步骤(5)中，吸取微囊藻单细胞样品前，要混合均匀后再吸取。
[0041]经本发明的方法的实施得到2013年7月3日津河八里台段爆发微囊藻水华时的微囊藻细胞(含铜绿微囊藻M.aeruginosa和鱼害微囊藻M.1chthyoblabe)密度为
2.42X 108ind/L。
[0042]实施例2本发明方法应用于养殖水体微囊藻细胞密度监测的实例
[0043]2013年7月5日在天津农学院鲤鱼良种场，依据本发明方法测得鲤鱼良种场3号池养殖水体的微囊藻细胞(含铜绿微囊藻M.aeruginosa和鱼害微囊藻M.1chthyoblabe)密度为 6.42X 107ind/L。
[0044]方法同实施例1，只是将孔径0.45 μ m的微孔滤膜换成孔径不大于2 μ m的筛絹，结果见图2。
[0045]以上所述的实施例仅用于说明本发明的技术思想及特点，其目的在于使本领域内的技术人员能够理解本发明的内容并据以实施，不能仅以本实施例来限定本发明的专利范围，即凡本发明所揭示的精神所作`的同等变化或修饰，仍落在本发明的专利范围内。
【权利要求】
1.一种微囊藻群体细胞的计数方法，其特征在于，包括下述步骤: (1)定量采取微囊藻水华爆发盛期的自然水体的水样； (2)将采集到的水样经孔径不大于2μ m的筛网过滤，微囊藻样品附着在筛网上； (3)将过滤后附着在筛网上的微囊藻群体样品再次悬浮在浓度为10_3mol/LEDTA溶液的烧杯中； (4)向上述烧杯加入小玻璃珠后，磁力搅拌； (5)吸取显微镜下观察已完全分散开来的微囊藻单细胞样品，采用血球计数板计数微囊藻细胞数目。
2.根据权利要求1所述的微囊藻群体细胞计数的方法，其特征在于，所述步骤(2)中，所述筛网为孔径0.45 μ m的微孔滤膜或孔径不大于2 μ m的筛絹。
3.根据权利要求1所述的微囊藻群体细胞计数的方法，其特征在于，所述步骤(3)中，利用移液枪吸取EDTA溶液反复冲洗筛网，直至微囊藻群体完全从筛网上洗脱下来。
4.根据权利要求1所述的微囊藻群体细胞计数的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，在磁力搅拌过程中，在显微镜下每过5分钟查看微囊藻群体细胞分散过程，直至微囊藻群体细胞完全分散为单细胞。
5.根据权利要求4所述的微囊藻群体细胞计数的方法，其特征在于，所述步骤(4)中，磁力搅拌速度1000-2000转/min，磁力搅拌时间90_110min。
6.根据权利要求1所述的微囊藻群体细胞计数的方法，其特征在于，所述步骤(5)中，吸取微囊藻单细胞样品前，要混合均匀后再吸取，并将血球计数板计数微囊藻细胞数目换算成每升水样的微囊藻细胞数量。
【文档编号】C12Q1/06GK103484523SQ201310425334
【公开日】2014年1月1日 申请日期:2013年9月18日 优先权日:2013年9月18日
【发明者】毕相东, 张树林, 郭永军, 戴伟, 邢克智 申请人:天津农学院