用于对流行性感冒进行治疗以及诊断的组合物以及方法

用于对流行性感冒进行治疗以及诊断的组合物以及方法
【专利摘要】本发明提供了新的人类抗流行性感冒抗体以及相关的组合物和方法，其中所述的抗体与一种基质2蛋白(M2)同型四聚体的构象抗原决定簇发生了结合。这些抗体被用在流行性感冒感染的诊断以及治疗当中。
【专利说明】用于对流行性感冒进行治疗以及诊断的组合物以及方法
[0001] 本申请是2008年11月12日递交的申请号为200880123932. 8,发明名称为"用于 对流行性感冒进行治疗以及诊断的组合物以及方法"的分案申请。
[0002] 相关申请
[0003] 本申请要求享有申请日为2007年11月12日的临时申请USSN60/987353、申请日 为2007年11月12日的临时申请USSN60/987355、申请日为2008年5月16日的临时申请 USSN61/053840、以及申请日为2008年9月8日的临时申请USSN61/095208中的权益，上述 文献中的全部内容均作为一个整体在本发明中被引入作为参考。 发明领域
[0004] 本发明大体上涉及对流行性感冒感染的治疗、诊断以及监控。本发明更加具体的 涉及到识别流行性感冒基质2蛋白-特异性抗体的方法以及它们的制造和使用。这样的抗 体可以被有效的用在药物组合物中，用于对流行性感冒进行预防以及治疗，并且用于对流 行性感冒的感染进行诊断以及监控。

【背景技术】
[0005] 在美国，流行性感冒病毒每年感染了 5-20 %的人群并且导致30000-50000例的死 亡。尽管流行性感冒疫苗是预防感染的首要方法，在美国同样可以利用四种抗病毒药物： 金刚烧胺（amantadine),金刚乙胺（rimantadine),奥司他韦（oseltamivir)以及扎那米韦 (zanamivir)。到2005年12月为止，仅仅奥司他韦（TAMIFLU?)被推荐用来进行A型流行 性感冒的治疗，这是因为所述病毒对金刚烷胺以及金刚乙胺的抗性增强，这种抗性的增强 是由于存在于所述病毒的M2蛋白中的氨基酸取代而产生的。
[0006] 由A型流行性感冒的病毒感染而引发的疾病以其周期性的性质为代表。抗原的漂 变以及漂移使得每年有不同的A型菌株出现。不仅如此，所述的高度致病性的菌株侵入普 遍人群中的威胁加强了对于流行性感冒感染的新的治疗方法的需求。所述的中和抗体的主 要片段指向所述的红血球凝集素以及神经氨糖酸苷酶蛋白的多态性区域。因此，这样的一 种中和性的单克隆抗体大概应当仅仅能够命中一个或者几个菌株。近来的焦点专注于相对 而言不变的基质2 (M2)蛋白。一种作用于基质2蛋白（M2)的中和性单克隆抗体可能应当 适合于对所有的A型流行性感冒菌株进行治疗。
[0007] 在一种形成离子通道的同型四聚体中发现了所述的基质2蛋白（M2)，并且其被认 为能够帮助所述的病毒在进入所述细胞中时脱除外壳。在发生感染之后，可以在所述的细 胞表面上找到丰富的基质2蛋白。随后其被导入到所述的病毒粒子外壳中，在所述的病毒 粒子外壳中仅仅包括全部外壳蛋白的大约2%。所述的基质2蛋白的细胞外结构域（M2e) 很短，所述的氨基末端上的2-24个氨基酸陈列在所述的细胞之外。抗基质2蛋白单克隆抗 体（Anti-M2MAb)迄今为止已经作用于这种线性序列。因此，它们对于细胞表达的基质2蛋 白不会表现出期望的结合性质，包括在天然的基质2蛋白的构象抗原决定簇上的结合。
[0008] 因此，在本领域存在一种对于新的抗体的长期需求，其中所述的抗体能够与所述 的细胞表达的基质2蛋白以及所述的天然基质2蛋白的构象抗原决定簇进行结合。


【发明内容】

[0009] 本发明提供了完全人类单克隆抗体，其中所述的单克隆抗体能够特异性的作用于 基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)。任选的，所述的抗体是从人类供体的B细胞中分离得 到的。范例性的单克隆抗体包括本发明中所描述的8ilO,21B15以及23K12。可以选择的， 所述的单克隆抗体是一种这样的抗体，其与8il0, 21B15以及23K12在同样的表位上进行结 合。所述的抗体在本发明中分别被称为人类基质2蛋白细胞外结构域（huM2e)抗体。所述 的人类基质2蛋白细胞外结构域（huM2e)抗体具有下述性质中的一种或者多种：a)在一种 流行性感冒病毒的基质2细胞外结构域（M2e)多肽的细胞外结构域中的表位上进行结合； b)与感染了 A型流行性感冒的细胞进行结合；或者c)与A型流行性感冒病毒进行结合。 [0010] 所述的人类基质2蛋白细胞外结构域（huM2e)抗体结合的表位是一种基质2蛋 白多肽的非线性表位。优选的，所述的表位包括所述的基质2蛋白细胞外结构域（M2e)多 肽的氨基末端区域。更加优选的，所述的表位完全的或者部分的包括所述的氨基酸序列 SLLTEV(序列识别号：42)。最为优选的，所述的表位包括存在于所述的基质2蛋白细胞外 结构域（M2e)多肽的位置2、5以及6上的氨基酸，其中所述的编号与序列识别号1中的编 号一致。所述的存在于位置2处的氨基酸是丝氨酸；存在于位置5处的氨基酸是苏氨酸；并 且存在于位置6处的氨基酸是谷氨酸。
[0011] 一种人类基质2蛋白细胞外结构域（huM2e)抗体中含有重链可变区域以及轻链可 变区域，其中所述的重链可变区域中含有序列识别号44或者50中所示的氨基酸序列，并 且所述的轻链可变区域中含有序列识别号46或者52中所示的氨基酸序列。优选的，所述 的三个重链互补决定区域（CDR)中包括一种氨基酸序列，其中所述的氨基酸序列与下述氨 基酸序列具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或者更高的同一性4￥￥13(序列识别 号：72)，FIYYGGNTKYNPSLKS (序列识别号：74)，ASCSGGYCILD (序列识别号：76)，SNYMS (序 列识别号：1〇3)，VIYSGGSTYYADSVK (序列识别号：105)，CLSRMRGYGLDV (序列识别号：107) (通过Kabat方法进行测定）或者ASCSGGYCILD (序列识别号：76)，CLSRMRGYGLDV (序列识别 号：107)，GSSISN(序列识别号：109)，FIYYGGNTK(序列识别号：110)，GSSISN(序列识别号： 111)，GFTVSSN(序列识别号：112)，VIYSGGSTY(序列识别号：113)(通过Chothia方法进行 测定），并且所述的三个轻链互补决定区域（CDR)中包括一种氨基酸序列，其中所述的氨基 酸序列与下述氨基酸序列具有至少90%、92%、95%、97%、98%、99%或者更高的同一性： RASQNIYKYLN(序列识别号：59)，AASGLQS (序列识别号：61)，QQSYSPPLT (序列识别号：63)， RTSQSISSYLN(序列识别号：92)，AASSLQSGVPSRF (序列识别号：94)，QQSYSMPA (序列识别号： 96)(通过Kabat方法进行测定）或者RASQNIYKYLN (序列识别号：59)，AASGLQS (序列识别 号：61)，QQSYSPPLT (序列识别号：63)，RTSQSISSYLN(序列识别号：92)，AASSLQSGVPSRF(序 列识别号：94)，QQSYSMPA (序列识别号：96)(通过Chothia方法进行测定）。所述的抗体与 基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)进行了结合。
[0012] 所述的基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)抗体的重链来自于一种生殖系V(可变 的）基因，例如，所述的免疫球蛋白重链可变区域4(IgHV4)生殖系基因或者免疫球蛋白重 链可变区域3生殖系基因。
[0013] 本发明所述的基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)抗体包括可变的重链（VH)区域， 其中所述的重链区域是由人类免疫球蛋白重链可变区域4(IgHV4)生殖系基因序列或者免 疫球蛋白重链可变区域3生殖系基因序列进行编码的。免疫球蛋白重链可变区域4生殖系 基因序列在例如 Accession numbers (登录号）L10088、M29812、M95114、X56360 #&M95117 中有所表示。免疫球蛋白重链可变区域3生殖系基因序列在例如Accession numbers (登录 号）X92218、X70208、Z27504、M99679以及AB019437中有所表示。本发明所述的基质2蛋 白的细胞外结构域（M2e)抗体包括一个由一种核酸序列编码的重链可变区域，其中所述的 核酸序列与所述的免疫球蛋白重链可变区域4生殖系基因序列或者免疫球蛋白重链可变 区域3生殖系基因序列具有至少80%的同源性。优选的，所述的核酸序列与所述的免疫球 蛋白重链可变区域4生殖系基因序列或者免疫球蛋白重链可变区域3生殖系基因序列具有 至少90 %、95 %、96 %、97 %的同源性，并且更加优选的，与所述的免疫球蛋白重链可变区域 4生殖系基因序列或者免疫球蛋白重链可变区域3生殖系基因序列具有至少98^^99%的 同源性。所述的基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)抗体的重链可变区域与所述的由免疫球 蛋白重链可变区域4(IgHV4)生殖系基因序列或者免疫球蛋白重链可变区域3(IgHV3)生殖 系基因序列编码的重链可变区域的氨基酸序列具有至少80%的同源性。优选的，所述的基 质2蛋白的细胞外结构域（M2e)抗体的重链可变区域的氨基酸序列与所述的由免疫球蛋白 重链可变区域4 (IgHV4)生殖系基因序列或者免疫球蛋白重链可变区域3 (IgHV3)生殖系基 因序列编码的氨基酸序列具有至少90195196197%的同源性，并且更加优选的，与由 所述的免疫球蛋白重链可变区域4 (IgHV4)生殖系基因序列或者免疫球蛋白重链可变区域 3 (IgHV3)生殖系基因序列编码的序列具有至少98%、99%的同源性。
[0014] 本发明所述的基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)抗体同样包括可变的轻链（')区 域，其中所述的轻链区域是由人类免疫球蛋白kappa可变区域l(IgKVl)生殖系基因序列进 行编码的。人类免疫球蛋白kappa可变区域1轻链可变生殖系基因序列在例如Accession numbers X59315、X59312、X59318、J00248以及Y14865中有所表示。可以选择的，所述的基 质2蛋白的细胞外结构域（M2e)抗体包括由一种核酸序列编码的轻链可变区域，其中所述 的核酸序列与所述的免疫球蛋白kappa可变区域1 (IgKVl)生殖系基因序列具有至少80% 的同源性。优选的，所述的核酸序列与所述的免疫球蛋白kappa可变区域l(IgKVl)生殖系 基因序列具有至少90%、95%、96%、97%的同源性，并且更加优选的，与所述的免疫球蛋白 kappa可变区域1生殖系基因序列具有至少98 %、99 %的同源性。所述的基质2蛋白的细胞 外结构域（M2e)抗体的轻链可变区域与所述的由免疫球蛋白kappa可变区域l(IgKVl)生 殖系基因序列编码的轻链可变区域的氨基酸序列具有至少80%的同源性。优选的，所述的 基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)抗体的轻链可变区域的氨基酸序列与所述的由免疫球蛋 白kappa可变区域l(IgKVl)生殖系基因序列编码的氨基酸序列具有至少90%、95%、96%、 97%的同源性，并且更加优选的，与由所述的免疫球蛋白kappa可变区域l(IgKVl)生殖系 基因序列编码的序列具有至少98 %、99 %的同源性。
[0015] 在另外一个方面，本发明提供了一种包括本发明所述的人类基质2蛋白细胞外结 构域（huM2e)抗体的组合物。在各种不同的方面中，所述的组合物中进一步的包括一种抗 病毒药物，一种病毒侵入抑制剂或者一种病毒吸附抑制剂。所述的抗病毒药物是例如一种 神经氨糖酸苷酶抑制剂，一种透明质酸（HA)抑制剂，一种唾液酸抑制剂或者一种基质2蛋 白离子通道抑制剂。所述的基质2蛋白离子通道抑制剂是例如金刚烷胺或者金刚乙胺。所 述的神经氨糖酸苷酶抑制剂是例如扎那米韦，或者奥司他韦的磷酸盐。在一个进一步的方 面，所述的组合物中进一步包括第二种抗A型流行性感冒的抗体。
[0016] 在一个进一步的方面，依照本发明所述的人类基质2蛋白细胞外结构域（huM2e) 抗体与一种治疗试剂或者一种可探测性标记进行了可操作的连接。
[0017] 除此之外，本发明提供了一种刺激免疫应答、治疗、预防或者缓解流行性感冒病毒 感染所带来的症状的方法，其中所述的方法是通过向宿主施用一种人类基质2蛋白细胞外 结构域（huM2e)抗体的方式来实现的。
[0018] 任选的，进一步的向所述的宿主施用另外一种试剂，所述的试剂是例如，但不局限 于，一种流行性感冒病毒抗体，一种抗病毒药物例如神经氨糖酸苷酶抑制剂，透明质酸（HA) 抑制剂，唾液酸抑制剂或者基质2蛋白（M2)离子通道抑制剂，一种病毒侵入抑制剂或者一 种病毒吸附抑制剂。所述的基质2蛋白离子通道抑制剂是例如金刚烷胺或者金刚乙胺。所 述的神经氨糖酸苷酶抑制剂是例如扎那米韦，或者奥司他韦的磷酸盐。所述的宿主患有或 者具有发展成为流行性感冒病毒感染的倾向，例如，一种自身免疫性疾病或者是一种炎性 障碍。
[0019] 在另外一个方面，本发明提供了一种向宿主施用本发明所述的人类基质2蛋白细 胞外结构域（huM2e)抗体的方法，其中所述的施用发生在所述的宿主被暴露于流行性感冒 病毒中的之前和/或之后。例如，可以使用本发明中所述的人类基质2蛋白细胞外结构域 (huM2e)抗体来治疗或者预防排斥性流行性感冒的感染。所述的人类基质2蛋白细胞外结 构域（huM2e)抗体是以足以促进病毒的清除或者消除感染了 A型流行性感冒的细胞的剂量 来进行施用的。
[0020] 同样被包括在本发明之内的是一种在患者体内测定一种流行性感冒病毒感染是 否存在的方法，所述的方法通过下述方式来实现：将一种来自于所述患者的生物学样本与 一种人类基质2蛋白细胞外结构域（huM2e)抗体进行接触；对与所述的生物学样本发生结 合的所述抗体的剂量进行探测；并且将与所述的生物学样本发生结合的所述抗体的所述剂 量与一个对照值进行比较。
[0021] 本发明进一步提供了一种包括人类基质2蛋白细胞外结构域（huM2e)抗体的诊断 用试剂盒。
[0022] 本发明的其他特征以及优点将通过下面的详细描述以及权利要求而变得显而易 见并且其被涵盖在下述的详细描述以及权利要求之内。

【专利附图】

【附图说明】
[0023] 附图1表示的是在存在有或者不存在有游离的基质2蛋白肽的情况下，本发明中 所述的三种抗体以及对照的人类14C2抗体与293-人胚肾细胞（HEK)进行的结合，其中所 述的293-人胚肾细胞使用一种基质2蛋白表达构建体或者对照载体进行了转染。
[0024] 附图2A以及B是曲线图，表示的是与A型流行性感冒/PR/8/32发生结合的人类 单克隆抗体。
[0025] 附图3A是一个图表，表示的是基质2蛋白（M2)变体的细胞外结构域的氨基酸序 列。
[0026] 附图3B以及C是柱状图表，表示的是人类单克隆抗流行性感冒抗体与附图3A中 所示的基质2蛋白变体所进行的结合。
[0027] 附图4A以及B是柱状图表，表示的是经过丙氨酸分区突变后，人类单克隆抗流行 性感冒抗体与基质2蛋白肽所进行的结合。
[0028] 附图5是一系列的柱状图表，表示的是单克隆抗体8il0以及23K12与基质2蛋白 (M2)之间所进行的结合，这代表着流行性感冒菌株A/香港/483/1997序列在所述的中国仓 鼠卵巢（CH0)细胞系DG44中进行了稳定的表达。
[0029] 附图6A是一个图表，表示的是抗基质2蛋白抗体与变化的基质2蛋白肽之间进行 的交叉反应性结合。
[0030] 附图6B是一个图表，表示的是基质2蛋白抗体对截短型基质2蛋白肽而言的结合 活性。
[0031] 附图7是一个曲线图，表示的是利用人类抗流行性感冒单克隆抗体进行治疗的感 染了流行性感冒的小鼠的存活情况。
[0032] 附图8是一个图解，表示的是所述的抗基质2蛋白抗体在基质2蛋白的细胞外结 构域（M2e)的N-末端中的一个高度保守的区域内发生的结合。
[0033] 附图9是一个图表，表示的是在酶联免疫吸附试验（ELISA)中，克隆于粗上清液中 的抗基质2蛋白大鼠抗人类单克隆抗体（rHMAb)与流行性感冒的结合，而所述的对照抗基 质2蛋白细胞外结构域（M2e)单克隆抗体14C2并不能容易的与病毒进行结合。
[0034] 附图10是一系列的照片，表示的是抗基质2蛋白大鼠抗人类单克隆抗体（rHMAb) 与感染了流行性感冒的细胞所进行的结合。犬肾（MDCK)细胞经过或者没有经过A型流行 性感冒/PR/8/32的感染并且在24小时之后对来自于粗上清液中的抗体结合进行测试。通 过所述的荧光微量检测技术（FMAT)平板扫描仪对数据进行收集。
[0035] 附图11是一个图表，表示的是克隆于粗上清液中的抗基质2蛋白大鼠抗人类单克 隆抗体（rHMAb)与细胞所进行的结合，其中所述的细胞利用所述的流行性感冒亚型H3N2、 HK483、以及VN1203基质2蛋白进行了转染。将编码与流行性感冒菌株H3N2、HK483、以及 VN1203相应的全长基质2蛋白cDNA的质粒与一种模拟的质粒对照瞬间转染到293细胞内。 测试所述的14C2、8il0,23K12,以及21B15单克隆抗体与所述转染体之间的结合，并且使用 一种AF647-偶联型抗人类免疫球蛋白G次级抗体进行探测。图中表示的是荧光激活的细 胞分拣器（FACS)分析后，所述的特异性的单克隆抗体结合的平均荧光强度。

【具体实施方式】
[0036] 本发明提供了完全人类单克隆抗体，其中所述的单克隆抗体能够特异性的作用于 所述的基质2蛋白（M2)多肽的细胞外结构域。所述的抗体在本发明中分别被称为人类基 质2蛋白细胞外结构域（huM2e)抗体。
[0037] 基质2蛋白（M2)是一个有96个氨基酸的跨膜蛋白，其以一种同型四聚体的形式 存在于流行性感冒病毒以及病毒感染性细胞的表面之上。基质2蛋白含有一个有23个氨 基酸的细胞外结构域（M2e)，所述的细胞外结构域高度保守的穿过（across) A型流行性感 冒菌株。自从1918年在全国流行的菌株之后，仅有几个氨基酸发生了改变，因此基质2蛋 白细胞外结构域对于流行性感冒的治疗而言是一个有吸引力的目标。在先前的研究中，对 于所述的基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)具有特异性的单克隆抗体是通过一种肽的免疫 作用而得到的，其中所述的肽与所述的基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)的线性序列相对 应。与之形成对照的是，本发明提供了一种新的方法，其中在细胞系内表达完全长度的基质 2蛋白（M2)，这样一来能够对与这种细胞表达的基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)发生结 合的人类抗体进行识别。已经表明，所述的人类基质2蛋白细胞外结构域（huM2e)抗体能 够与存在于所述的基质2蛋白-转染细胞以及天然基质2蛋白上的构象抗原决定簇进行结 合，可以与感染了流行性感冒的细胞进行结合，或者可以与所述的病毒自身进行结合。所述 的人类基质2蛋白的细胞外结构域（huM2e)抗体不与所述的线性基质2蛋白的细胞外结构 域（M2e)肽进行结合，但是它们的确能够与几种天然的基质2蛋白变体进行结合，也能够经 由cDNA的转染作用在细胞系内进行表达。因此，本发明能够对人类单克隆抗体进行识别以 及制备，其中所述的人类单克隆抗体对于非常宽范围的A型流行性感冒病毒菌株表现出新 的特异性。这些抗体可以进行诊断性的应用，用于对A型流行性感冒的感染进行识别，并且 可以进行治疗性的应用，用于对A型流行性感冒的感染进行治疗。
[0038] 本发明所述的人类基质2蛋白的细胞外结构域（huM2e)抗体具有下述性质中的一 种或者多种：所述的人类基质2蛋白的细胞外结构域（huM2e)抗体结合于a)存在于一种流 行性感冒病毒的基质2蛋白（M2)多肽的细胞外结构域内的一个表位；b)结合于感染了 A型 流行性感冒的细胞；和/或c)结合于A型流行性感冒病毒（S卩，病毒粒子）。本发明所述的 人类基质2蛋白的细胞外结构域（huM2e)抗体经由免疫效应器机制对感染了流行性感冒的 细胞进行消除并且通过与流行性感冒病毒粒子的结合促进了病毒的直接清除，其中所述的 免疫效应器机制是例如抗体依赖细胞介导的细胞毒性作用（ADCC)。本发明所述的人类基质 2蛋白的细胞外结构域（huM2e)抗体与所述的基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)多肽的氨 基末端区域进行结合。优选的，本发明所述的人类基质2蛋白的细胞外结构域（huM2e)抗 体与所述的基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)多肽的氨基末端进行结合，其中所述的N-末 端的蛋氨酸残基是空键。范例性的基质2蛋白的细胞外结构域（M2e)序列包括在下面的表 格I中列出的那些序列。
[0039] 表格 I
[0040]

【权利要求】
1. 一种重组抗-基质2蛋白细胞外结构域（M2e)抗体，所述的抗体包括：由包括序列识 别号：43所示核酸序列的核酸序列进行编码的重链可变区域，以及由包括序列识别号：45 所示核酸序列的核酸序列进行编码的轻链可变区域。
2. 根据权利要求1所述的抗体，其中所述包括序列识别号：43所示核酸序列的核酸序 列是一种cDNA，以及所述包括序列识别号：45所示核酸序列的核酸序列是一种cDNA。
3. 根据权利要求1所述的抗体，其中所述序列识别号：43所示的核酸序列是一种 cDNA，以及所述序列识别号：45所示的核酸序列是一种cDNA。
4. 一种载体，所述载体具有包括序列识别号：43所示核酸序列的核酸序列，以及包括 序列识别号：45所示核酸序列的核酸序列。
5. 根据权利要求4所述的载体，其中所述包括序列识别号：43所示核酸序列的核酸序 列是一种cDNA，或者所述包括序列识别号：45所示核酸序列的核酸序列是一种cDNA。
6. 根据权利要求4所述的载体，其中所述的载体是适合进行核酸繁殖或者复制的载 体。
7. 根据权利要求4所述的载体，其中所述的载体是适合表达所述核酸的载体。
8. 根据权利要求6或者7所述的载体，其中所述的载体包括病毒、质粒、或者柯斯载体。
9. 根据权利要求8所述的载体，其中所述的载体是重组病毒。
10. 根据权利要求9所述的载体，其中所述的病毒包括来自于哺乳动物基因中的启动 子。
11. 根据权利要求10所述的载体，其中所述的哺乳动物基因是人类基因。
12. 根据权利要求9所述的载体，其中所述的病毒包括来自于病毒或者逆转录病毒基 因组中的启动子。
13. 根据权利要求12所述的载体，其中所述的病毒或者逆转录病毒是多瘤病毒，禽痘 病毒，腺病毒，牛乳突淋瘤病毒，鸟类肉瘤病毒，细胞巨化病毒（CMV)，B型肝炎病毒或者猿 猴病毒40 (SV40)。
14. 一种重组抗-基质2蛋白细胞外结构域（M2e)抗体，所述的抗体包括编码具有序列 识别号：44所示氨基酸序列的重链可变区域的核酸序列，以及编码具有序列识别号：46所 示氨基酸序列的轻链可变区域的核酸序列。
15. 根据权利要求15所述的抗体，其中所述编码具有序列识别号：44所示氨基酸序列 的重链可变区域的核酸序列是一种cDNA，以及所述编码具有序列识别号：46所示氨基酸序 列的轻链可变区域的核酸序列是一种cDNA。
16. -种载体，所述载体包括编码具有序列识别号：44所示氨基酸序列的重链可变区 域的核酸序列，以及编码具有序列识别号：46所示氨基酸序列的轻链可变区域的核酸序 列。
17. 根据权利要求16所述的载体，其中所述编码具有序列识别号：44所示氨基酸序列 的重链可变区域的核酸序列是一种cDNA，以及所述编码具有序列识别号：46所示氨基酸序 列的轻链可变区域的核酸序列是一种cDNA。
18. 根据权利要求16所述的载体，其中所述的载体是适合进行核酸繁殖或者复制的载 体。
19. 根据权利要求16所述的载体，其中所述的载体是适合表达所述核酸的载体。
20. 根据权利要求18或者19所述的载体，其中所述的载体包括病毒、质粒、或者柯斯载 体。
21. 根据权利要求20所述的载体，其中所述的载体是重组病毒。
22. 根据权利要求21所述的载体，其中所述的病毒包括来自于哺乳动物基因中的启动 子。
23. 根据权利要求22所述的载体，其中所述的哺乳动物基因是人类基因。
24. 根据权利要求21所述的载体，其中所述的病毒包括来自于病毒或者逆转录病毒基 因组中的启动子。
25. 根据权利要求24所述的载体，其中所述的病毒或者逆转录病毒是多瘤病毒，禽痘 病毒，腺病毒，牛乳突淋瘤病毒，鸟类肉瘤病毒，细胞巨化病毒（CMV)，B型肝炎病毒或者猿 猴病毒40 (SV40)。
26. -种重组抗-基质2蛋白细胞外结构域（M2e)抗体，所述的抗体包括：由包括序列 识别号：49所示核酸序列的核酸序列进行编码的重链可变区域，以及由包括序列识别号： 51所示核酸序列的核酸序列进行编码的轻链可变区域。
27. 根据权利要求26所述的抗体，其中所述包括序列识别号：49所示核酸序列的核酸 序列是一种cDNA，以及所述包括序列识别号：51所示核酸序列的核酸序列是一种cDNA。
28. 根据权利要求26所述的抗体，其中所述序列识别号：49所示的核酸序列是一种 cDNA，以及所述序列识别号：51所示核酸序列是一种cDNA。
29. -种载体，所述载体具有包括序列识别号：49所示的核酸序列的核酸序列，以及包 括序列识别号：51所示的核酸序列的核酸序列。
30. 根据权利要求29所述的载体，其中所述包括序列识别号：49所示核酸序列的核酸 序列是一种cDNA，以及所述包括序列识别号：51所示核酸序列的核酸序列是一种cDNA。
31. 根据权利要求29所述的载体，其中所述的载体是适合进行核酸繁殖或者复制的载 体。
32. 根据权利要求29所述的载体，其中所述的载体是适合表达所述核酸的载体。
33. 根据权利要求31或者32所述的载体，其中所述的载体包括病毒、质粒、或者柯斯载 体。
34. 根据权利要求33所述的载体，其中所述的载体是重组病毒。
35. 根据权利要求34所述的载体，其中所述的病毒包括来自于哺乳动物基因中的启动 子。
36. 根据权利要求35所述的载体，其中所述的哺乳动物基因是人类基因。
37. 根据权利要求34所述的载体，其中所述的病毒包括来自于病毒或者逆转录病毒基 因组中的启动子。
38. 根据权利要求37所述的载体，其中所述的病毒或者逆转录病毒是多瘤病毒，禽痘 病毒，腺病毒，牛乳突淋瘤病毒，鸟类肉瘤病毒，细胞巨化病毒（CMV)，B型肝炎病毒或者猿 猴病毒40 (SV40)。
39. -种重组抗-基质2蛋白细胞外结构域（M2e)抗体，所述的抗体包括编码具有序列 识别号：50所示氨基酸序列的重链可变区域的核酸序列，以及编码具有序列识别号：52所 示氨基酸序列的轻链可变区域的核酸序列。
40. 根据权利要求39所述的抗体，其中所述编码具有序列识别号：50所示氨基酸序列 的重链可变区域的核酸序列是一种cDNA，以及所述编码具有序列识别号：52所示氨基酸序 列的轻链可变区域的核酸序列是一种cDNA。
41. 一种载体，所述载体包括编码具有序列识别号：50所示氨基酸序列的重链可变区 域的核酸序列，以及编码具有序列识别号：52所示氨基酸序列的轻链可变区域的核酸序 列。
42. 根据权利要求41所述的载体，其中所述编码具有序列识别号：50所示氨基酸序列 的重链可变区域的核酸序列是一种cDNA，以及所述编码具有序列识别号：52所示氨基酸序 列的轻链可变区域的核酸序列是一种cDNA。
43. 根据权利要求41所述的载体，其中所述的载体是适合进行核酸繁殖或者复制的载 体。
44. 根据权利要求41所述的载体，其中所述的载体是适合表达所述核酸的载体。
45. 根据权利要求43或者44所述的载体，其中所述的载体包括病毒、质粒、或者柯斯载 体。
46. 根据权利要求45所述的载体，其中所述的载体是重组病毒。
47. 根据权利要求46所述的载体，其中所述的病毒包括来自于哺乳动物基因中的启动 子。
48. 根据权利要求47所述的载体，其中所述的哺乳动物基因是人类基因。
49. 根据权利要求46所述的载体，其中所述的病毒包括来自于病毒或者逆转录病毒基 因组中的启动子。
50. 根据权利要求49所述的载体，其中所述的病毒或者逆转录病毒是多瘤病毒，禽痘 病毒，腺病毒，牛乳突淋瘤病毒，鸟类肉瘤病毒，细胞巨化病毒（CMV)，B型肝炎病毒或者猿 猴病毒40 (SV40)。
【文档编号】C12N15/63GK104059143SQ201410103093
【公开日】2014年9月24日 申请日期:2008年11月12日 优先权日:2007年11月12日
【发明者】A·G·格兰德, G·金, T·考克斯, O·奥尔森, J·米特查姆, M·默勒 申请人:特罗科隆科学有限公司