本发明属于酶发酵工程领域，具体涉及一种以枇杷皮为原料的复合酵素及其制备方法。
背景技术：
：枇杷是人们喜爱的水果之一，市场需求巨大，枇杷不仅果肉美味，而且其废弃物枇杷皮也具有较好的抗氧化成分。然而，目前对于枇杷皮中抗氧化成本的提取多采取有机试剂提取的方法，如《枇杷皮和芒果皮粗提液抗氧化活性研究》和《枇杷皮色素提取物的体外抗氧化活性研究》。由有机试剂提取出来的成分常需要进行纯化处理，难以大规模制备相应的抗氧化产品，更重要的是，有机试剂残留对于人体健康具有着重大的威胁。利用发酵菌对适宜发酵的原料进行发酵处理，具有可以大批量处理的优势。然而，关于以枇杷皮作为原料进行发酵方面而言，目前的报道很少。在发明人所做的预实验中，利用常规的发酵技术对枇杷皮进行发酵，发酵周期十分长，至少需要55天。更为重要的是，所得发酵产品的抗氧化性能仅为《枇杷皮和芒果皮粗提液抗氧化活性研究》报道中的30%左右，说明常规的发酵技术对枇杷皮的利用率十分低。因此，如何改进发酵技术，使得枇杷皮的利用率得以提高，并缩短发酵周期以节省制备成本，成为本领域亟待解决的问题。另外，枇杷皮的抗氧化性能与其它水果（如香蕉、西瓜）相比较低，如何提高枇杷皮发酵物的抗氧化性能也是本领域的研究方向。技术实现要素：针对现有技术的缺点，本发明的目的之一在于提供一种以枇杷皮为原料的复合酵素的制备方法，该制备方法包括如下步骤：（1）按重量份计，准备如下原料：枇杷皮10-12份，大蒜皮1-3份，砂糖0.5-1份；（2）将枇杷皮和大蒜皮进行粉碎，过200目筛，加入20-25份水；（3）向步骤（2）所得物接入活化了的Saccaromycescerevisiae，接种量为3-5%，进行发酵，发酵温度为16-18℃，pH为3-4，发酵时间为12-15天；（4）调整发酵温度为20-22℃，pH为5-5.5，发酵时间为4-6天，取发酵液，即得所述复合酵素。如本发明的一个对比实施例所示，当采取常规的发酵技术仅对枇杷皮进行发酵时，发酵周期长达55天以上，而且所得发酵产物的抗氧化性能很差，对卵黄脂蛋白不饱和脂肪酸过氧体系的抗氧化活性（AOA）不超过12%。本发明所述的发酵周期意为超过某一发酵时间后，再长的发酵时间不会增加发酵产物的产生。而当采取本发明的两级发酵技术后，发明人发现不仅发酵周期大幅缩短，而且所得产物的AOA很高，最高可达62.7%。可能的原因在于，枇杷皮在发酵初期时，进程较慢，在中期时，受低温控制的抑制物的产生较多，而将发酵温度适当调高后，抑制物的生产较少，促进了发酵过程的平稳进行。其中的相关抑制物目前仍在分离鉴定当中。蒜皮的加入可以将AOA从50%左右提升至60%左右。这与大蒜皮本身也具有一定的抗氧化性能有关。然而，值得指出的是，大蒜皮的加入，促进了发酵周期的进一步缩短，可缩短发酵时间约8天左右。由于大蒜皮对发酵时间缩短的贡献不是主要的，可能的解释在于大蒜皮的加入进一步抑制了上述抑制物的产生。这一点需要发明人后续将所述抑制物分离鉴定出来后，再行设置相关实验予以验证。优选的，步骤（1）中，按重量份计，准备如下原料：枇杷皮11份，大蒜皮2份，砂糖0.8份。优选的，步骤（3）中，接种量为4%。优选的，步骤（3）中，发酵时间为13天。优选的，步骤（4）中，发酵时间为4天。本发明的另一目的在于提供由上述方法制备得到复合酵素。本发明的有益效果：本发明大幅度缩短了枇杷皮的发酵周期，并获得了具有优秀的抗氧化性能的复合酵素；本发明中的大蒜皮对发酵周期的缩短有进一步的促进左右，且能所得酵素的抗氧化性能。具体实施方式下面通过实施例对本发明进行具体描述，有必要在此指出的是以下实施例只是用于对本发明进行进一步的说明，不能理解为对本发明保护范围的限制，该领域的技术熟练人员根据上述
发明内容所做出的一些非本质的改进和调整，仍属于本发明的保护范围。实施例1（1）按重量份计，准备如下原料：枇杷皮10份，大蒜皮1份，砂糖0.5份；（2）将枇杷皮和大蒜皮进行粉碎，过200目筛，加入20份水；（3）向步骤（2）所得物接入活化了的Saccaromycescerevisiae，接种量为3%，进行发酵，发酵温度为16-18℃，pH为3-4，发酵时间为12天；（4）调整发酵温度为20-22℃，pH为5-5.5，发酵时间为5天，取发酵液，即得所述复合酵素。实施例2（1）按重量份计，准备如下原料：枇杷皮12份，大蒜皮3份，砂糖1份；（2）将枇杷皮和大蒜皮进行粉碎，过200目筛，加入25份水；（3）向步骤（2）所得物接入活化了的Saccaromycescerevisiae，接种量为5%，进行发酵，发酵温度为16-18℃，pH为3-4，发酵时间为12-15天；（4）调整发酵温度为20-22℃，pH为5-5.5，发酵时间为6天，取发酵液，即得所述复合酵素。实施例3（1）按重量份计，准备如下原料：枇杷皮11份，大蒜皮2份，砂糖0.8份；（2）将枇杷皮和大蒜皮进行粉碎，过200目筛，加入22份水；（3）向步骤（2）所得物接入活化了的Saccaromycescerevisiae，接种量为4%，进行发酵，发酵温度为16-18℃，pH为3-4，发酵时间为13天；（4）调整发酵温度为20-22℃，pH为5-5.5，发酵时间为4天，取发酵液，即得所述复合酵素。对比实施例1将枇杷皮粉碎后，过200筛，加入适量水和砂糖，接种Saccaromycescerevisiae，于16-18℃发酵。在常见报道范围，无论如何调节水和砂糖的添加量以及发酵pH，发酵周期均在55天以上。所得发酵产物的AOA均不超过12%。对比实施例2除不添加大蒜皮之外，其余与实施例3一致。第二级发酵的时间比实施例3多8天。实验例对实施例1-3和对比实施例2所得物进行对卵黄脂蛋白不饱和脂肪酸过氧体系的抗氧化活性测试，结果如表1所示。表1实施例1实施例2实施例3对比实施例2AOA（%）61.961.562.751.2当前第1页1 2 3