虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物-β-胡萝卜素乳液的制备方法与流程

本发明涉及一种乳液的制备方法，更具体地说，涉及虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物-β-胡萝卜素乳液的制备方法。

背景技术：

脂溶性营养物质是指一类能够溶解在脂肪中，进而被人体摄入、消化、吸收的物质。常见的脂溶性营养物质包括鱼油、藻油、磷脂、脂溶性维生素等。为了提高脂溶性营养物质在人体内的生物利用率，常见的方法是利用水包油乳液体系对其进行包埋。

将脂溶性营养物质作为芯材进行传递时，可以保护其不被降解，常用蛋白作为乳化剂，在油水界面上通过降低界面张力以及增大空间位阻起到稳定作用；而蛋白酶解物具有的抗氧化能力能够抑制脂质氧化，同样能够起到稳定乳液的作用。目前多见以植物蛋白及其酶解物作为乳化剂，研究其构建的乳液系统的稳定性，对于水产酶解物构筑的乳液系统，多见鱼类来源，如沙丁鱼，小斑猫鱼等。以贝类蛋白酶解物作为乳化剂构筑乳液系统的研究还鲜有报道。

虾夷扇贝(patinopectenyessoensis)属滤食性冷水双壳贝，我国主要养殖地区为辽宁省和山东省的部分海区。虾夷扇贝具有个体大、产量高、贝柱肥美等特点。虾夷扇贝生殖腺作为可食用部位，其蛋白质含量高达60％以上，是开发活性肽的良好来源。扇贝加工副产物中含有丰富的蛋白质、多糖、糖胺聚糖及不饱和脂肪酸等生物活性成分，在本课题组前期研究中，已先后得到了具有抗氧化活性的扇贝生殖腺、裙边、内脏团等外源酶酶解物。而贝类作为我国最大的海水养殖品种，对其丰富的蛋白质资源进行系统研究十分必要。

β-胡萝卜素是自然界中分布最广也是目前学者研究最多的类胡萝卜素，在食品工业和食品科学研究中非常重要。β-胡萝卜素具有多种生物学功能，其分子中有两个β-紫罗酮环，具有100％的维生素a前体活性。此外，其潜在的猝灭单线态氧和使自由基失活的活性在预防特定的癌症、心血管疾病、黄斑退化症、白内障和提高免疫反应中也发挥了较大作用。因此，β-胡萝卜素是一种对人体健康非常重要的生物活性物质。

β-胡萝卜素通常会在光、热、酶、金属离子、与金属结合的蛋白质和微生物的作用下加速降解，引起一系列的氧化反应，导致生物活性降低，颜色退化，产生不良风味和潜在的有毒物质，生物利用率下降等。因此，利用水包油乳液传递β-胡萝卜素是一种成本较低，且可以提高其水溶性、稳定性及生物利用率的方法，在食品工业具有较好的应用前景。

技术实现要素：

本发明针对贝类来源蛋白乳液体系，提供一种稳定的虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物-β-胡萝卜素乳液。

为了达到上述目的，本发明提供了一种虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物-β-胡萝卜素乳液的制备方法，包括以下步骤：

s1)用胰蛋白酶对虾夷扇贝雄性生殖腺进行酶解，得到肽溶液，冻干备用；

s2)将β-胡萝卜素50～55℃加热10～20min，使其溶解于玉米油中，配制成油相待用；

s3)将步骤s1所得肽溶液与叠氮化钠储备液以及tween20混合，配制成水相待用；

s4)将所述油相与所述水相混合，分散；

s5)均质后获得最终乳液。

优选方式下，具体步骤为：

s1)用胰蛋白酶对虾夷扇贝雄性生殖腺进行酶解，得到水解度为1％的肽溶液，冻干备用；

s2)将β-胡萝卜素50～55℃加热10～20min，使其溶解于玉米油中，配制成油相待用；

s3)将步骤s1所得浓度为10～30mg/ml的肽溶液与0.01～0.02wt％的叠氮化钠储备液以及0.5～1wt％的tween20混合，配制成水相待用；

s4)将油相与水相按1:9的比例混合，10000-15000r/min高速分散2-3min；

s5)10000-12000psi高压均质5-7次。

本发明涉及一种稳定的虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物-β-胡萝卜素乳液的制备方法，包括步骤(1)用胰蛋白酶对虾夷扇贝雄性生殖腺进行酶解，得到水解度为1％的酶解物，冻干备用。(2)将β-胡萝卜素通过加热溶解于玉米油中，配制成油相待用；(3)将一定浓度的肽溶液与叠氮化钠储备液以及tween20混合，配制成水相待用；(4)将油相与水相按一定比例混合，高速分散；(5)高压均质后得到稳定的虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物-β-胡萝卜素乳液。本发明利用虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物作为乳化剂，包埋β-胡萝卜素得到一种稳定且具有一定营养价值的虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物-β-胡萝卜素乳液。

本发明采用贝类来源的蛋白水解物作为乳化剂，在提升乳液体系稳定性的同时也提高了产品的营养价值；将β-胡萝卜素作为包埋材料，能够提高其在人体内的消化吸收利用率，使产品具有较高的营养价值。制备方法简单易行，制作出的乳液具有较好的稳定性。

附图说明

图1是分别以水解度为1％、浓度为10mg/ml的肽溶液和水解度为1％，浓度为30mg/ml的肽溶液制备本发明产物乳液在4℃存放1天的粒径分布图。

图2是分别以水解度为1％、浓度为10mg/ml的肽溶液和水解度为1％，浓度为30mg/ml的肽溶液制备本发明产物乳液在4℃存放4天的粒径分布图。

图3是分别以水解度为1％、浓度为10mg/ml的肽溶液和水解度为1％，浓度为30mg/ml的肽溶液制备本发明产物乳液在4℃存放7天的粒径分布图。

图4是分别以水解度为1％、浓度为10mg/ml的肽溶液和水解度为1％，浓度为30mg/ml的肽溶液制备本发明产物乳液在常温存放1天的粒径分布图。

图5是分别以水解度为1％、浓度为10mg/ml的肽溶液和水解度为1％，浓度为30mg/ml的肽溶液制备本发明产物乳液在常温存放4天的粒径分布图。

图6是分别以水解度为1％、浓度为10mg/ml的肽溶液和水解度为1％，浓度为30mg/ml的肽溶液制备本发明产物乳液在常温存放7天的粒径分布图。

图7是分别以浓度10mg/ml、30mg/ml的肽溶液制备本发明产物乳液在4℃存放1天、4天及7天的平均粒径。

图8是分别以浓度10mg/ml、30mg/ml的肽溶液制备本发明产物乳液在常温存放1天、4天及7天的平均粒径。

图9是分别以浓度10mg/ml、30mg/ml的肽溶液制备本发明产物乳液在4℃存放1天、4天及7天的zeta电位图。

图10是分别以浓度10mg/ml、30mg/ml的肽溶液制备本发明产物乳液在常温存放1天、4天及7天的zeta电位图。

图11是分别以浓度10mg/ml、30mg/ml的肽溶液制备所得的乳液在4℃存放1天的照片图。

图12是分别以浓度10mg/ml、30mg/ml的肽溶液制备所得的乳液在4℃存放4天的照片图。

图13是分别以浓度10mg/ml、30mg/ml的肽溶液制备所得的乳液在4℃存放7天的照片图。

具体实施方式

本发明提供一种虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物-β-胡萝卜素乳液的制备方法，取虾夷扇贝雄性生殖腺和β-胡萝卜素，制备步骤如下：

s1:用胰蛋白酶对虾夷扇贝雄性生殖腺进行酶解，得到水解度为1％的酶解物，冻干备用；

s2:在50-55℃中，将β-胡萝卜素加热10-20min，使其溶解于玉米油，配制成油相待用；

s3:将浓度为10～30mg/ml的酶解物肽溶液与叠氮化钠储备液(0.01-0.02wt％)以及tween20(0.5-1wt％)混合，配制成水相待用；

s4:将油相与水相按1:9的比例混合，混合后在10000-15000r/min下高速分散2-3min；

s5:在10000-12000psi高压下均质5-7次。

实施例1

一种虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物-β-胡萝卜素乳液的制备方法，有虾夷扇贝雄性生殖腺和β-胡萝卜素，其制备步骤如下：

s1:用胰蛋白酶对虾夷扇贝雄性生殖腺进行酶解，得到水解度为1％的酶解物，冻干备用。

s2:将β-胡萝卜素(0.1wt％)在50℃环境下加热20min，使其溶解于玉米油中，配制成油相待用；

s3:将浓度为10mg/ml的肽溶液与叠氮化钠储备液(0.01wt％)以及tween20(0.5wt％)混合，配制成水相待用；

s4:将油相与水相按1:9的比例混合，10000r/min高速分散3min；

s5:在10000psi高压下均质7次。得到稳定的虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物-β-胡萝卜素乳液。

实施例2

s1:用胰蛋白酶对虾夷扇贝雄性生殖腺进行酶解，得到水解度为1％的酶解物，冻干备用。

s2:将β-胡萝卜素(0.1wt％)55℃加热10min，使其溶解于玉米油中，配制成油相待用；

s3:将浓度为20mg/ml的肽溶液与叠氮化钠储备液(0.01wt％)以及tween20(1wt％)混合，配制成水相待用；

s4:将油相与水相按1:9的比例混合，15000r/min高速分散2min；

s5:在11000psi高压下均质6次。得到稳定的虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物-β-胡萝卜素乳液。

实施例3

s1:用胰蛋白酶对虾夷扇贝雄性生殖腺进行酶解，得到水解度为1％的酶解物，冻干备用。

s2:将β-胡萝卜素52℃加热15min，使其溶解于玉米油中，配制成油相待用；

s3:将浓度为30mg/ml的肽溶液与叠氮化钠储备液(0.02wt％)以及tween20(0.5wt％)混合，配制成水相待用；

s4:将油相与水相按1:9的比例混合，13000r/min高速分散2min；

s5:在12000psi高压下均质5次。得到稳定的虾夷扇贝雄性生殖腺酶解物-β-胡萝卜素乳液。

对实施例产物的粒径和zeta电位测定情况：取适量乳液(4℃和常温存放1天、4天及7天)稀释100倍后，采用激光粒度仪进行平均粒径，粒径分布以及zeta电位的检测。具体分析及理论依据包括：

(1)将浓度为10mg/ml和30mg/ml的肽溶液分别作为乳化剂，制备乳液进行比较分析。

(2)探讨乳液分别在4℃和常温存放1天、4天及7天的粒径以及zeta电位的变化。

(3)乳液平均粒径越小，体系越稳定。

(4)zeta电位绝对值越高，体系越稳定。

本发明附图1～10中，1-1：以水解度为1％，浓度为1％(10mg/ml)的肽溶液为乳化剂制备所得的乳液；1-3：以水解度为1％，浓度为3％(30mg/ml)的肽溶液为乳化剂制备所得的乳液；rt为室温存放；4℃为4℃存放；day1、day4、day7分别为存放1天、4天及7天后的检测结果。

图11～13分别是水解度为1％，浓度为1％的肽溶液为乳化剂制备所得的酶解物-β-胡萝卜素乳液和水解度为1％，浓度为3％的肽溶液为乳化剂制备所得的酶解物-β-胡萝卜素乳液在4℃环境中存放1天、4天、7天的状态。图中左侧对应于图1～10中的1-1，右侧对应于图1～10中的1-3。

通过检测数据对比可知，本发明乳液平均粒径小，zeta电位绝对值高，即本发明具有较高的稳定性。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。