本发明属于生物技术领域，涉及动物发酵饲料的制作，特别涉及一种育肥猪全价微生物发酵饲料制备方法。
背景技术
中国是世界饲料生产大国，其中猪饲料占比为45％。猪饲料的好坏直接影响到猪肉品质，进而影响人体的健康。然而现有饲料饲喂猪有如下缺点：适口性较差，饲料成本较高，猪的生长性能较低等。
技术实现要素：
针对现有技术的缺陷或不足，本发明首先提供了一种育肥猪全价微生物发酵饲料制备用发酵剂。
本发明提供的发酵剂包括发酵乳杆菌、双歧杆菌、丁酸梭菌和嗜热链球菌。
本发明的发酵剂中各组分间用量关系为：1kg发酵剂粉由以下质量百分比的组分制成：发酵乳杆菌63.18％、丁酸梭菌23.70％、双歧杆菌10.56％、嗜热链球菌2.56％。
进一步，本发明提供了一种育肥猪全价微生物发酵饲料制备方法。本发明的制备方法包括：将菌液和基础饲料混合后在密闭环境下发酵制备发酵饲料，所述菌液由本发明的发酵剂和水配制而成；所述基础饲料由玉米、豆粕、麸皮和预混料配制而成。
优选的，所述基础饲料由质量百分比为67％的玉米、21％的豆粕、8％的麸皮和4％的预混料配制而成；所述菌液由每40l水加1kg菌粉的比例配制而成；所述基础饲料和菌液的用量关系为：每吨基础饲料加400l稀释菌液。
进一步，优选的，本发明制备方法中发酵温度30～35℃，经5～7天发酵，获得发酵饲料。
本发明经菌液发酵后，饲料中粗蛋白、粗脂肪、粗灰分等营养物质被分解，钙磷等元素含量也有较大程度改变，从而起到促进动物生长、维持动物机体健康的作用。其中发酵乳杆菌具有促进动物生长和防止腹泻的作用；双歧杆菌具有多种益生功能，包括改善动物的免疫性能、抑制病原菌侵入肠道、缓解机体氧化损伤、改善因肠道菌群失调引起的疾病等，从而促进动物机体的健康。
具体实施方式
本发明所用发酵乳杆菌、丁酸梭菌、双歧杆菌和嗜热链球菌均为市售产品。例如表1所示的产品型号。
本发明所用玉米、豆粕、麸皮和预混料为本领域常规的饲料。其中的预混料为市售产品，例如，大北农基团生产的s414预混料和其他相关企业生产的类似功能产品。
本发明用于育肥猪yh菌全价微生物发酵饲料制备用菌液及饲喂育肥猪的发酵饲料，应及时配制，优选在饲喂前2天进行制作。
以下结合具体实施例，对本发明进行进一步的详细说明。
在以下的实施例中，育肥猪yh菌全价微生物发酵饲料制备用菌液及饲喂育肥猪的发酵饲料需在饲喂前2天进行制作。
(一)妊娠母猪全价微生物发酵饲料的发酵剂
本实施例给出育肥猪全价微生物发酵饲料制备用发酵剂。
1kgyh菌粉包含下列物质：发酵乳杆菌63.18％、丁酸梭菌23.70％、双歧杆菌10.56％、嗜热链球菌2.56％。该实施例所用发酵乳杆菌、双歧杆菌、丁酸梭菌和嗜热链球菌均购自中国普通微生物菌种保藏管理中心(表1)。
表1实施例所用菌种列表
(二)妊娠母猪配合菌全价微生物发酵饲料的制备
本实例给出采用实施例的发酵剂制备的育肥猪全价微生物发酵饲料，制备方法如下：
(1)原料配制粉碎：配置饲料，其中玉米67％、豆粕21％、麸皮8％、预混料4％(大北农基团生产的s414预混料)，将原料进行粉碎，搅拌混合。
(2)菌液配制：将菌粉以每40l水加1kg菌粉比例加入水中搅拌均匀。
(3)在搅拌机配合下，将配制菌液缓慢加入饲料，比例为每吨饲料加400l稀释菌液。混合搅拌要均匀，粉碎团块。
(4)将配制好的饲料装入发酵罐，封口密闭，保证密封完全不透气。
(5)根据季节经5～7天(夏季5天，春秋季6天，冬季7天)发酵，饲料发出略带酸甜的浓郁酒曲香味标志发酵成功。
发酵成功之后即可直接饲喂。如果发酵一周的饲喂用量，每次取用之后均应迅速密封。
为了确定育肥猪全价微生物发酵饲料的饲喂效果，本发明设置了以下方案：
(1)对照组：未发酵的育肥猪全价饲料。本组共24头猪，分为4个重复，每个重复6头(饲料中含有下列物质：玉米67％、豆粕21％、麸皮8％、预混料4％)。
(2)试验组：育肥猪yh菌(本发明的发酵剂)全价微生物发酵饲料。本组共24头猪，分为4个重复，每个重复6头(饲料中含有下列物质：玉米67％、豆粕21％、麸皮8％、预混料4％)。
按饲料配方原料比例，称取玉米、豆粕、麸皮、预混料，置于容器中；将已经配制好的育肥猪yh菌全价微生物发酵饲料菌液添加于容器中，进行密封发酵。发酵时间季节经5～7天(夏季5天，春秋季6天，冬季7天)。即制成育肥猪yh菌全价微生物发酵饲料，备用，进行育肥猪饲喂。
(三)育肥猪的选择及饲养方式
选择体重55kg左右的阉割公猪，试验组与对照组各取24头，共48头，每组4个重复，每个重复6头猪，分圈舍饲养，自由采食与饮水。
(四)猪舍育肥猪的屠宰采样
(1)试验组与对照组各取6头猪进行屠宰，屠宰前24h禁食，于第二天清晨开始屠宰采样。
(2)采集猪的背最长肌，进行相关肉质指标检测。
(五)育肥猪yh菌全价微生物发酵饲料的饲喂效果评定
在育肥猪生长阶段统计其生长性能并且在屠宰后采样检测其相关肉质指标，主要测定指标如下：
1、饲料中各种营养物质检测
(1)饲料中干物质测定的测定
称量饲料样品质量m1，将干样品或半干样品放入105±2℃烘箱，在一个大气压下烘干，直至恒重，称饲料样品质量m2。
w＝(m2/m1)×100％
w--饲料中干物质的质量分数，％
m1--饲料样品质量，g
m2--处理后饲料样品，g
(2)饲料中粗灰分的测定
称量饲料样品质量m1，将饲料样品放入别550℃±5℃的茂福炉中灼烧，至灰白色，称残渣的重量m2。
w＝(m2/m1)×100％
w--饲料中粗灰分的质量分数，％
m1--饲料样品质量，g
m2--处理后饲料样品，g
(3)饲料中粗蛋白的测定
在有催化剂的条件下，用浓硫酸消化样品将有机氮转变成无机铵盐，然后在碱性条件下将铵盐转化为氨，随水蒸气蒸馏出并为过量的标准盐酸液吸收(v)，再以标准标氢氧化钠(vo)滴定至终点，计算出样品中的氮量。
w(cp)＝[(vc-voco)×0.0140×6.25/m]×100％
w(cp)--饲料中粗蛋白的质量分数，％
v--滴定试样时所消耗的标准盐酸溶液的体积，ml
c--滴定试样时所消耗的标准盐酸溶液的浓度，mol/ml
vo--滴定试样时所消耗的标准氢氧化钠溶液的体积，ml
co--滴定试样时所消耗的标准氢氧化钠溶液的浓度，mol/ml
0.0140--氮元素的摩尔质量，kg/mol
m--试样质量，g
(4)饲料中粗脂肪的测定
称量试样质量m。选用低沸点的乙醚或石油醚作溶剂，称量已恒出的提取瓶质量m2，使风干样品在乙醚中反复浸提，脂肪溶于乙醚并收集于盛醚瓶中，称量已恒出的提取瓶和粗脂肪的总质量m1，求出醚浸出物的含量，即粗脂肪的含量。
w(ee)＝[(m1-m2)/m]×100％
w(ee)--饲料中粗脂肪质量分数，％
m1--已恒出的提取瓶和粗脂肪的总质量，g
m2--已恒出的提取瓶质量，g
m--风干试样质量，g
(5)饲料中总磷的测定
将试样中有机物破坏，使磷元素游离出来，在酸性溶液中，用钒钼酸铵处理，生成黄色的络合物，在波长400nm下进行比色测定，结果为总磷量。
(6)饲料中钙的测定
将试样有机物破坏，钙变成溶于水的离子并与盐酸反应生成氯化钙，在溶液中加入草酸铵溶液，使钙成为草酸钙白色沉淀，然后用硫酸溶液溶解草酸钙，再用高锰酸钾标准滴定溶液滴定游离的草酸根离子，根据高锰酸钾标准滴定溶液的用量，可以计算出式样的含钙量。
w(ca)＝[(v-vo)×n×40/2]/(w×v’/v1)×100/1000
v--0.01n高锰酸钾标准溶液滴定所用的体积，ml
vo--测定空白所用0.01n高锰酸钾标准溶液体积，ml
n--高锰酸钾标准溶液的物质的量浓度，mol/ml
w--试样质量，g
v--试样分解液总体积，ml
v’--测定时所吸取试样分解液体积，ml
40/2--钙的克当量，g
(7)饲料中粗纤维测量
用分析天平称量试样m，用硫酸溶液和正辛醇处理，快速加热至沸维持30min。立即抽滤(古氏坍塌内铺孔径6.5μm尼龙布)。残渣用蒸馏水洗至中性，抽干，用200ml、0.313mol/l氢氧化钠(naoh)溶液将残渣完全转入原消煮溶器内，煮沸30min。立即用已于550℃恒重的滤埚铺酸洗石棉0.2～0.3g过滤。先用25ml、0.255mol/l硫酸(1/2h2so4)溶液洗涤一次，再用蒸馏水沉至中性。抽干后用15ml乙醇洗涤一次。抽干后将滤埚放入130℃烘箱内烘干2h取出放入干燥器内冷却30min，称量m1。再移入550℃茂福炉内灼烧1h，取出冷却至130℃左右，放入干燥器内冷却30min，称量m2。
w(cf)＝[(m1-m2)/m]×100％
w(cf)--饲料中粗纤维的质量分数，100％
m1--130℃烘干后的滤埚和试样残留物总质量，g
m2--550℃灼烧后的滤埚和试样残留物总质量，g
m--称取的试样质量，g
2、生长性能
在育肥猪饲喂前后分别称重(育肥猪的初始体重与最终体重)，计算平均日增重；统计育肥猪饲料采食量，计算日采食量、料肉比；统计饲喂时间。
3、肉品质
对试验猪屠宰后进行肉质测定，测定方法参照ny/t821-2004猪肌肉质性能测定技术规范。对肉色、大理石纹、ph、滴水损失、失水率、熟肉率等指标进行现场测定；肌内脂肪含量、肌肉脂肪酸组成、肌纤维直径指标现场采样，带回实验室测定。
具体测定方法如下：
(1)肉色测定
①采样部位：最后胸椎处背最长肌。
②评定条件：用屠宰后1～2h内的新鲜肉样，在室内正常光照下进行目测与评分标准图对比评定。
③评定标准：按肉色评分标准图，釆用5分制对样品评定肉色：1分—灰白色；2分—微红色；3分—鲜红色；4分—深红色；5分—暗红色。评分时如若出现两个等级之间的时候，可评为0.5分。正常肉色一般为3～4分，小于2分则有白肌肉(pse肉)的嫌疑，5分左右的样品则有黑干肉(dfd肉)的可能。
(2)肌肉大理石纹
评定肌肉中脂肪含量和分布情况的指标。
①取样部位：胸腰椎结合处背最长肌。
②评定条件：试验猪屠宰1～2h内，0～4℃冰箱冷藏24h，用美制nppc比色板进行目测评分。
③评分标准：评分采用5分制，两级间允许评0.5分。1分(脂肪痕量)；2分(脂肪微量)；3分(脂肪中量)；4分(脂肪多量)；5分(脂肪过量)。大理石纹3～4分代表肉质好。
(3)肌肉ph
猪宰后肌肉中的肌糖元通过无氧代谢途径酵解生成乳酸，随肌肉中乳酸的积累肌肉的ph下降，ph下降的程度对肉色、系水力、可溶性蛋白浓度、货架期长短都有明显影响，因而是评定肉质的一项重要指标。
①取样部位：最后胸椎处背最长肌。
②仪器：精确到0.01的phs-25型数显酸度计(德国r.matthaus公司ph-star)，度量前ph计必须用ph4和ph7标准液校正。
③操作：放血后45～60min测定胸腰结合处背最长肌ph，作为ph45。于宰后24h取出0～4℃冷却眼肌中段切开，将ph计电极插入切缝量取ph24(phu)。
(4)失水率测定
采用重量加压法，试验猪宰后1～2h内，于第三、四胸椎处取背最长肌，用取样器取半径和厚度均为1cm的小圆薄片。称重(w1，g)后将肉样置于两层纱布间，上、下各垫上18层滤纸，连同滤纸一并放在感应量为0.019的压力器上，压力为35kg，加压5min后取出肉样称重(w2，g)。失水率越小，系水力越高。
失水率w＝[(w1－w2)/w1]×100％。
(5)剪切力测定
采取背最长肌腰段头侧端样品，装入塑料袋中，于4℃冰箱熟化48h后，室温下静置1h。浸入75～80℃水浴，待肉样中心温度达到70℃将肉样取出，冷却到20℃，将肉样核心部分修成1×1×2.5cm3的肉条(肌纤维走向方向与长边方向一致)，用c-lm型肌肉嫩度仪测剪切力。
(6)熟肉率测定
试验猪宰后1～2h内，取腰大肌中段约100g肉样，称重(w1，g)，置于锅屉上蒸30min后悬挂于阴凉处15min，称重(w2，g)。熟肉率(％)﹦(w2/w1)×100％。
(7)肌内脂肪含量测定(索氏提取法)
①取样部位：屠宰后，尽快送往实验室，取第6～7肋骨或第11～12肋骨处背最长肌进行大理石纹评分，然后进行肌内脂肪含量测定。
②前处理：切碎，一部分用于测定肉样绝干水分含量，一部分65℃制成风干样
③仪器：天平，半自动索氏抽提仪(2055soxtecmanualextractionunit)
步骤：称风干肉样3～5g用滤纸包扎并编号。将滤纸包于103～105℃烘箱中烘2h。移入索氏脂肪抽提器的浸提管中加入无水乙醚，设定程序(蒸煮2h)，回收乙醚后103～105℃烘箱中烘10min，干燥器内冷却30min后，称重。
脂肪(％)＝[(w2－w1)/w]×100％
式中，w为风干样重(g)，w1为浸提前脂肪收集瓶重(g)，w2为浸提后脂肪收集瓶(g)。
(8)背最长肌氨基酸含量测定
称肉样3～5g，准确至0.0001g，然后进行脱脂，脱脂干燥后，粉碎。称取样品粉末约0.1g装入安培瓶中，加入10ml的6mol/l盐酸水解，置液氮中冷冻1～2min后封口，放在110±1℃恒温干燥箱中，水解22～24h。冷却，混匀，开管，将所有溶液转移至蒸馏瓶中，并用0.02mol/lhcl冲洗安培瓶1～2次，将蒸馏瓶旋转蒸发，抽真空，水浴锅温度设为65℃，蒸发至干。移取20ml的0.02mol/lhcl于蒸馏瓶，待充分溶解瓶内干物质后移取1ml溶液于25ml容量瓶，用0.02mol/lhcl定容。取1ml过滤后上机分析。吸取0.200ml混合氨基酸标准，用ph2.2的缓冲液稀释到5ml，此标准稀释液浓度为5.00nmol/50μl，作为上机测定用的氨基酸标准，用a300全自动氨基酸自动分析仪以外标法测定试样测定液的氨基酸含量。
4、试验用育肥猪血液生化指标委托陕西省化建公司医院测定。
(六)评定结果
试验用全价基础饲料购买自北京大北农科技集团股份有限公司，利用本发明的育肥猪yh菌全价发酵饲料以及饲喂方法，其发酵及饲喂效果的评定结果如下：
表2育肥猪yh菌全价发酵饲发酵试验日粮及其营养水平对比
表3yh菌全价发酵饲料对育肥猪生长性能的影响
表4yh菌全价发酵饲料对育肥猪血液生化指标的影响
表5yh菌全价发酵饲料对育肥猪常规肉品质的影响
表6yh菌全价发酵饲料对育肥猪肌肉营养成分的影响
表7yh菌全价发酵饲料对育肥猪肌肉氨基酸含量的影响
如表2所示，yh菌全价发酵菌粉发酵试验饲料，与常规饲料就试验日粮及营养水平对比可以看出，经过育肥猪yh菌全价发酵后，原饲料中粗蛋白、粗脂肪、粗灰分等粗营养物质被分解，钙磷等元素含量也有较大程度改变。表明发酵后饲料中营养物质可以分解为小分子物质，从而更有利于动物吸收，起到促进动物生长、维持动物机体健康的作用。
如表3所示，饲喂yh菌全价发酵饲料后，在达到相近屠宰体重时，试验组猪的饲喂周期显著缩短，且平均日增重和平均日采食量高于对照组，料肉比低于对照组。表明yh菌全价发酵饲料能够缩短育肥猪的饲喂周期，降低料肉比，从而能够提高育肥猪的生长性能，节省饲养成本。
如表4所示，饲喂yh菌全价发酵饲料后，检测试验组猪血液的谷丙转氨酶、谷草转氨酶、碱性磷酸酶、钙含量、葡萄糖、甘油三酯和低密度胆固醇低于对照组。血清谷丙转氨酶和谷草转氨酶是肝脏和心脏器官功能反映的重要指标，如果其指标水平过高，说明相应的动物器官可能受到一定损伤。另外，试验组猪的总蛋白、球蛋白、白蛋白和白球比高于对照组，表明yh菌全价发酵饲料有利于育肥猪机体的健康，提高其免疫性能。
如表5所示，饲喂yh菌全价发酵饲料后，试验组猪背最长肌肌肉红度(a*)显著高于对照组，表明yh菌全价发酵饲料能够改善肉色。
如表6所示，饲喂yh菌全价发酵饲料后，试验组猪背最长肌肌肉中的粗蛋白与粗脂肪高于对照组，表明yh菌全价发酵饲料能够提高育肥猪肌肉营养成分的含量，有利于育肥猪肉质的改善。
如表7所示，饲喂yh菌全价发酵饲料后，试验组猪肉鲜味氨基酸(天冬氨酸、谷氨酸、丙氨酸)显著高于对照组，并且必需氨基酸(亮氨酸、异亮氨酸)也高于对照组，且有差异显著的趋势。表明yh菌全价发酵饲料能够提高肌肉鲜味氨基酸与必需氨基酸的含量，从而提高肌肉鲜味，改善猪肉品质。
与现有的育肥猪饲喂技术相比较，本发明将发酵乳杆菌、双歧杆菌、丁酸梭菌和嗜热链球菌按一定比例混合使用，经发酵后饲料饲喂育肥猪可以显著提高发酵后饲料中营养物质分解为小分子物质从而更有利于动物吸收，起到促进动物生长、维持动物机体健康的作用。能够缩短育肥猪的饲喂周期，降低料肉比，从而能够提高育肥猪的生长性能，节省饲养成本；促进育肥猪机体的健康，提高其免疫性能；改善肉色；提高育肥猪肌肉营养成分的含量，有利于育肥猪肉质的改善；提高肌肉鲜味氨基酸与必需氨基酸的含量，从而提高肌肉鲜味，改善猪肉品质。
应当理解的是，对本领域技术人员来说，可根据上述说明对方案内容加以改进和变换，而所有这些改进和变换都应属于本发明所附权利要求的保护范围，但这些改进和变换使得组配方下的效果相对于现有的技术水平是不可预料的。