一种常温复合微生物发酵剂的制作方法
【专利摘要】本发明公开了一种常温复合微生物发酵剂,该微生物发酵剂由以下数量百分比的微生物菌种按比例制备而成：土地类芽孢杆菌NK3?4 9％?13％、保加利亚乳杆菌8％?12％、肠杆菌YC105C 9％?15％、水稻内生细菌11％?19％、乳酸链球菌10％?21％、黑曲霉菌8％?15％、谷氨酸棒杆菌21％?29％，上述各微生物菌种的数量百分比总和为100％。本发明制备简单，所得的发酵剂，可使原料的营养成分迅速转化，缩短了发酵周期。
【专利说明】
一种常温复合微生物发酵剂
技术领域
[0001]本发明涉及生物制药技术领域，具体涉及一种常温复合微生物发酵剂。
【背景技术】
[0002]我国的秸杆资源十分丰富，年产量可达到5.79亿吨。其中，玉米、小麦、和稻草秸杆三大作物秸杆产量达到了4.39亿吨，占整个秸杆产量的75.88 %。采用科学的方法对秸杆进行加工调剂，广泛用于畜牧业，具有良好的生态效益社会效益和经济效益。而今年来雾霾严重，多和烧稻杆有关系。
[0003]近年来在我国推广的氨化饲料，不仅成本高、能耗高，并且存在与农业争肥、污染环境，有些方法对于牲畜还有毒副作用。而饲料清楚技术的研究与应用已有上百年的历史，目前关键的技术在于微生物优良菌株的选育、复合菌种的有效复配和发酵工艺的优化。
[0004]微生物发酵广泛用于乳业、酒发酵及各类食品发酵中。但这种微生物发酵剂需要温度条件及其他控制条件。由于条件的控制，选用微生物发酵剂比较繁琐，成本比较高，发酵周期比较长。
【发明内容】
[0005]为解决上述问题，本发明提供了一种常温复合微生物发酵剂，制备简单，所得的发酵剂，可使原料的营养成分迅速转化，缩短了发酵周期。
[0006]为实现上述目的，本发明采取的技术方案为:
[0007]—种常温复合微生物发酵剂，由以下数量百分比的微生物菌种按比例制备而成:
[0008]土地类芽孢杆菌NK3-4 9%-13%、保加利亚乳杆菌8%-12%、肠杆菌YC105C 9%-15%、水稻内生细菌11%-19%、乳酸链球菌10%-21%、黑曲霉菌8%-15%、谷氨酸棒杆菌21 %-29%，上述各微生物菌种的数量百分比总和为100%。
[0009]优选地，由以下数量百分比的微生物菌种按比例制备而成:土地类芽孢杆菌NK3-411%、保加利亚乳杆菌10%、肠杆菌丫(:1()50 12%、水稻内生细菌15%、乳酸链球菌15.5%、黑曲霉菌11.5%、谷氨酸棒杆菌25 %。
[0010]上述的一种常温复合微生物发酵剂的制备方法，包括如下步骤:
[0011]S1、将土地类芽孢杆菌NK3-4、保加利亚乳杆菌、肠杆菌YC105C、水稻内生细菌、乳酸链球菌、黑曲霉菌和谷氨酸棒杆菌分别进行菌种活化、斜面培养；
[0012]其中，土地类芽孢杆菌NK3-4的培养基为葡萄糖5克、硫酸镁0.5克、氨基酸螯合钙0.1克、磷酸氢二钠1.5克、葛仙米冻干粉0.5克、玻璃粉1.2克、琼脂粉20克，pH = 7.0-7.5，温度28-30度;
[0013]保加利亚乳杆菌的培养基为酪蛋白胨9.0克、螺旋藻渣9.0克、酵母粉4.0克、葡萄糖5.0克、乙酸钠5.0克、柠檬酸二铵2.0克，吐温-801.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁0.2克，氨基酸螯合锰0.05克，碳酸钙20.0克，琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH=6.8-7.0，温度33-37°C；
[0014]肠杆菌YC105C的培养基为葡萄糖10.0克、蛋白胨8.0克、磷酸二氢钾1.0克、七水硫酸镁0.3克、酵母粉4.0克、醋糟1.0克、甘油0.3克、二水钼酸钠0.5克、五水硫酸铜0.5克、六水氯化钴0.5克；
[0015]水稻内生细菌的培养基采用含有3_5g/L碱木质素并补充1-3%葡萄糖与0.5-1.5 %蛋白胨作为起始碳、氮源的液体培养基；
[0016]乳酸链球菌的培养基为牛肉膏6.0克、麦芽精4.0克、蛋白胨1.0克、葛仙米发酵粉5.0克、蔗糖8.0克、水10001111、琼脂15.0克，？!1=6.3-6.7、温度24-26°(:;
[0017]黑曲霉菌的培养基为牛肉膏9.0克、螺旋藻渣9.0克、葛仙米冻干粉4.0克、蔗糖5.0克、柠檬酸铵2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁0.2克、氨基酸螯合锰0.05克、碳酸钙20.0克、琼脂 15.0克，蒸馏水10001111，？!1=6.3-6.8，温度23-25°(:;
[0018]谷氨酸棒杆菌的培养基为硝酸钠3.0克、磷酸氢二钾1.0克、氨基酸螯合铁0.1克、葡萄糖20.0克、七水硫酸镁0.5克、松针营养液1000ml、琼脂20.0克，pH = 6.5-7.0、温度28°C；
[0019]S2、将步骤SI所得的多种微生物菌种按数量百分比配比:
[0020]土地类芽孢杆菌NK3-4 9%-13%、保加利亚乳杆菌8%-12%、肠杆菌YC105C 9%-15%、水稻内生细菌11%-19%、乳酸链球菌10%-21%、黑曲霉菌8%-15%、谷氨酸棒杆菌21%-29%,混合放入三角瓶中，置于摇床内，在27-29 °C的条件下培养2_3天，控制pH在6.3-7.0，使菌数含量达7-9亿/ml，得常温复合微生物发酵剂。
[0021]优选地，所述松针营养液的制备方法为:
[0022]取生长六年以上的干油松松针用闪式提取器处理，所得提取液先用武火加热，沸腾后用文火加热1-1.5h，中空纤维超滤膜过滤，取滤液，加水补足至初始液体量，加入19-25%香蛹粉后混合即得。
[0023]优选地，所述葛仙米冻干粉通过以下步骤制备所得:
[0024]取干燥的葛仙米置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.8?1.4MPa，爆破处理8?25min ；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.4?1.8MPa，蒸汽爆破处理0.5?
2.5min后，室温浓缩至相对密度1.10?1.20，冷冻干燥，得葛仙米冻干粉。
[0025]本发明具有以下有益效果:
[0026]制备简单，所得的发酵剂，可使原料的营养成分迅速转化，缩短了发酵周期。
【具体实施方式】
[0027]为了使本发明的目的及优点更加清楚明白，以下结合实施例对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0028]以下实施例中，所使用的松针营养液通过以下步骤制备:取生长六年以上的干油松松针用闪式提取器处理，所得提取液先用武火加热，沸腾后用文火加热1-1.5h，中空纤维超滤膜过滤，取滤液，加水补足至初始液体量，加入19-25 %蚕蛹粉后混合即得。
[0029]所使用的葛仙米冻干粉通过以下步骤制备所得:
[0030]取干燥的葛仙米置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.8?1.4MPa，爆破处理8?25min ；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.4?1.8MPa，蒸汽爆破处理0.5?2.5min后，室温浓缩至相对密度1.10?1.20，冷冻干燥，得葛仙米冻干粉。
[0031]实施例1
[0032]S1、将土地类芽孢杆菌NK3-4、保加利亚乳杆菌、肠杆菌YC105C、水稻内生细菌、乳酸链球菌、黑曲霉菌和谷氨酸棒杆菌分别进行菌种活化、斜面培养；
[0033]其中，土地类芽孢杆菌NK3-4的培养基为葡萄糖5克、硫酸镁0.5克、氨基酸螯合钙
0.1克、磷酸氢二钠1.5克、葛仙米冻干粉0.5克、玻璃粉1.2克、琼脂粉20克，pH = 7.0-7.5，温度28-30度;
[0034]保加利亚乳杆菌的培养基为酪蛋白胨9.0克、螺旋藻渣9.0克、酵母粉4.0克、葡萄糖5.0克、乙酸钠5.0克、柠檬酸二铵2.0克，吐温-801.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁0.2克，氨基酸螯合锰0.05克，碳酸钙20.0克，琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH=6.8-7.0，温度33-37°C；
[0035]肠杆菌YC105C的培养基为葡萄糖10.0克、蛋白胨8.0克、磷酸二氢钾1.0克、七水硫酸镁0.3克、酵母粉4.0克、醋糟1.0克、甘油0.3克、二水钼酸钠0.5克、五水硫酸铜0.5克、六水氯化钴0.5克；
[0036]水稻内生细菌的培养基采用含有3_5g/L碱木质素并补充1-3%葡萄糖与0.5-
1.5%蛋白胨作为起始碳、氮源的液体培养基；
[0037]乳酸链球菌的培养基为牛肉膏6.0克、麦芽精4.0克、蛋白胨1.0克、葛仙米发酵粉5.0克、蔗糖8.0克、水10001111、琼脂15.0克，？!1=6.3-6.7、温度24-26°(:;
[0038]黑曲霉菌的培养基为牛肉膏9.0克、螺旋藻渣9.0克、葛仙米冻干粉4.0克、蔗糖5.0克、柠檬酸铵2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁0.2克、氨基酸螯合锰0.05克、碳酸钙20.0克、琼脂 15.0克，蒸馏水10001111，？!1=6.3-6.8，温度23-25°(:;
[0039]谷氨酸棒杆菌的培养基为硝酸钠3.0克、磷酸氢二钾1.0克、氨基酸螯合铁0.1克、葡萄糖20.0克、七水硫酸镁0.5克、松针营养液1000ml、琼脂20.0克，pH = 6.5-7.0、温度28°C；
[0040]S2、将步骤SI所得的多种微生物菌种按数量百分比配比:
[0041 ] 土地类芽孢杆菌NK3-4 9%、保加利亚乳杆菌8%、肠杆菌YC105C 9%、水稻内生细菌11 %、乳酸链球菌10 %、黑曲霉菌8 %、谷氨酸棒杆菌21 %，混合放入三角瓶中，置于摇床内，在27-29°C的条件下培养2-3天，控制pH在6.3-7.0，使菌数含量达7_9亿/ml，得常温复合微生物发酵剂。
[0042]实施例2
[0043]S1、将土地类芽孢杆菌NK3-4、保加利亚乳杆菌、肠杆菌YC105C、水稻内生细菌、乳酸链球菌、黑曲霉菌和谷氨酸棒杆菌分别进行菌种活化、斜面培养；
[0044]其中，土地类芽孢杆菌NK3-4的培养基为葡萄糖5克、硫酸镁0.5克、氨基酸螯合钙
0.1克、磷酸氢二钠1.5克、葛仙米冻干粉0.5克、玻璃粉1.2克、琼脂粉20克，pH = 7.0-7.5，温度28-30度;
[0045]保加利亚乳杆菌的培养基为酪蛋白胨9.0克、螺旋藻渣9.0克、酵母粉4.0克、葡萄糖5.0克、乙酸钠5.0克、柠檬酸二铵2.0克，吐温-801.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁0.2克，氨基酸螯合锰0.05克，碳酸钙20.0克，琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH=6.8-7.0，温度33-37°C；
[0046]肠杆菌YC105C的培养基为葡萄糖10.0克、蛋白胨8.0克、磷酸二氢钾1.0克、七水硫酸镁0.3克、酵母粉4.0克、醋糟1.0克、甘油0.3克、二水钼酸钠0.5克、五水硫酸铜0.5克、六水氯化钴0.5克；
[0047]水稻内生细菌的培养基采用含有3_5g/L碱木质素并补充1-3%葡萄糖与0.5-
1.5%蛋白胨作为起始碳、氮源的液体培养基；
[0048]乳酸链球菌的培养基为牛肉膏6.0克、麦芽精4.0克、蛋白胨1.0克、葛仙米发酵粉5.0克、蔗糖8.0克、水10001111、琼脂15.0克，？!1=6.3-6.7、温度24-26°(:;
[0049]黑曲霉菌的培养基为牛肉膏9.0克、螺旋藻渣9.0克、葛仙米冻干粉4.0克、蔗糖5.0克、柠檬酸铵2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁0.2克、氨基酸螯合锰0.05克、碳酸钙20.0克、琼脂 15.0克，蒸馏水10001111，？!1=6.3-6.8，温度23-25°(:;
[0050]谷氨酸棒杆菌的培养基为硝酸钠3.0克、磷酸氢二钾1.0克、氨基酸螯合铁0.1克、葡萄糖20.0克、七水硫酸镁0.5克、松针营养液1000ml、琼脂20.0克，pH = 6.5-7.0、温度28°C；
[0051 ] S2、将步骤SI所得的多种微生物菌种按数量百分比配比:
[0052]土地类芽孢杆菌NK3-4 11%、保加利亚乳杆菌10%、肠杆菌￥(:1050 12%、水稻内生细菌15%、乳酸链球菌15.5%、黑曲霉菌11.5%、谷氨酸棒杆菌25%，混合放入三角瓶中，置于摇床内，在27-29°C的条件下培养2-3天，控制pH在6.3-7.0，使菌数含量达7_9亿/ml，得常温复合微生物发酵剂。
[0053]实施例3
[0054]S1、将土地类芽孢杆菌NK3-4、保加利亚乳杆菌、肠杆菌YC105C、水稻内生细菌、乳酸链球菌、黑曲霉菌和谷氨酸棒杆菌分别进行菌种活化、斜面培养；
[0055]其中，土地类芽孢杆菌NK3-4的培养基为葡萄糖5克、硫酸镁0.5克、氨基酸螯合钙
0.1克、磷酸氢二钠1.5克、葛仙米冻干粉0.5克、玻璃粉1.2克、琼脂粉20克，pH = 7.0-7.5，温度28-30度;
[0056]保加利亚乳杆菌的培养基为酪蛋白胨9.0克、螺旋藻渣9.0克、酵母粉4.0克、葡萄糖5.0克、乙酸钠5.0克、柠檬酸二铵2.0克，吐温-801.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁0.2克，氨基酸螯合锰0.05克，碳酸钙20.0克，琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH=6.8-7.0，温度33-37°C；
[0057]肠杆菌YC105C的培养基为葡萄糖10.0克、蛋白胨8.0克、磷酸二氢钾1.0克、七水硫酸镁0.3克、酵母粉4.0克、醋糟1.0克、甘油0.3克、二水钼酸钠0.5克、五水硫酸铜0.5克、六水氯化钴0.5克；
[0058]水稻内生细菌的培养基采用含有3_5g/L碱木质素并补充1-3%葡萄糖与0.5-
1.5%蛋白胨作为起始碳、氮源的液体培养基；
[0059]乳酸链球菌的培养基为牛肉膏6.0克、麦芽精4.0克、蛋白胨1.0克、葛仙米发酵粉5.0克、蔗糖8.0克、水10001111、琼脂15.0克，？!1=6.3-6.7、温度24-26°(:;
[0060]黑曲霉菌的培养基为牛肉膏9.0克、螺旋藻渣9.0克、葛仙米冻干粉4.0克、蔗糖5.0克、柠檬酸铵2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁0.2克、氨基酸螯合锰0.05克、碳酸钙20.0克、琼脂 15.0克，蒸馏水10001111，？!1=6.3-6.8，温度23-25°(:;
[0061]谷氨酸棒杆菌的培养基为硝酸钠3.0克、磷酸氢二钾1.0克、氨基酸螯合铁0.1克、葡萄糖20.0克、七水硫酸镁0.5克、松针营养液1000ml、琼脂20.0克，pH = 6.5-7.0、温度28°C；
[0062]S2、将步骤SI所得的多种微生物菌种按数量百分比配比:
[0063]土地类芽孢杆菌NK3-4 13%、保加利亚乳杆菌12%、肠杆菌YC105C 15%、水稻内生细菌19 %、乳酸链球菌21 %、黑曲霉菌15%、谷氨酸棒杆菌29 %，混合放入三角瓶中，置于摇床内，在27-29 0C的条件下培养2-3天，控制pH在6.3-7.0，使菌数含量达7_9亿/ml，得常温复合微生物发酵剂。
[0064]以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以作出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
【主权项】
1.一种常温复合微生物发酵剂，其特征在于，由以下数量百分比的微生物菌种按比例制备而成: 土地类芽孢杆菌NK3-4 9%-13%、保加利亚乳杆菌8%-12%、肠杆菌YC105C 9%-15%、水稻内生细菌11%-19%、乳酸链球菌10%-21%、黑曲霉菌8%-15%、谷氨酸棒杆菌21 %-29%，上述各微生物菌种的数量百分比总和为100%。2.如权利要求1所述的一种常温复合微生物发酵剂，其特征在于，由以下数量百分比的微生物菌种按比例制备而成:土地类芽孢杆菌NK3-4 11%、保加利亚乳杆菌10%、肠杆菌YC105C 12%、水稻内生细菌15%、乳酸链球菌15.5%、黑曲霉菌11.5%、谷氨酸棒杆菌25% ο3.如权利要求1-2任一项所述的一种常温复合微生物发酵剂的制备方法，其特征在于，包括如下步骤: 51、将土地类芽孢杆菌NK3-4、保加利亚乳杆菌、肠杆菌YC105C、水稻内生细菌、乳酸链球菌、黑曲霉菌和谷氨酸棒杆菌分别进行菌种活化、斜面培养； 其中，土地类芽孢杆菌NK3-4的培养基为葡萄糖5克、硫酸镁0.5克、氨基酸螯合钙0.1克、磷酸氢二钠1.5克、葛仙米冻干粉0.5克、玻璃粉1.2克、琼脂粉20克，pH= 7.0-7.5，温度28-30度； 保加利亚乳杆菌的培养基为酪蛋白胨9.0克、螺旋藻渣9.0克、酵母粉4.0克、葡萄糖5.0克、乙酸钠5.0克、柠檬酸二铵2.0克，吐温-80 1.0克，磷酸二氢钾2.0克，硫酸镁0.2克，氨基酸螯合锰0.05克，碳酸钙20.0克，琼脂15.0克，蒸馏水1000ml，PH=6.8-7.0，温度33-37°C ; 肠杆菌YC105C的培养基为葡萄糖10.0克、蛋白胨8.0克、磷酸二氢钾1.0克、七水硫酸镁0.3克、酵母粉4.0克、醋糟1.0克、甘油0.3克、二水钼酸钠0.5克、五水硫酸铜0.5克、六水氯化钴0.5克； 水稻内生细菌的培养基采用含有3-5g/L碱木质素并补充1-3%葡萄糖与0.5-1.5 %蛋白胨作为起始碳、氮源的液体培养基； 乳酸链球菌的培养基为牛肉膏6.0克、麦芽精4.0克、蛋白胨1.0克、葛仙米发酵粉5.0克、蔗糖8.0克、水10001111、琼脂15.0克，？!1=6.3-6.7、温度24-26°(:; 黑曲霉菌的培养基为牛肉膏9.0克、螺旋藻渣9.0克、葛仙米冻干粉4.0克、蔗糖5.0克、柠檬酸铵2.0克、磷酸二氢钾2.0克、硫酸镁0.2克、氨基酸螯合锰0.05克、碳酸钙20.0克、琼脂 15.0克，蒸馏水10001111，？!1=6.3-6.8，温度23-25°(:; 谷氨酸棒杆菌的培养基为硝酸钠3.0克、磷酸氢二钾1.0克、氨基酸螯合铁0.1克、葡萄糖20.0克、七水硫酸镁0.5克、松针营养液100ml、琼脂20.0克，pH=6.5_7.0、温度28°C ； 52、将步骤SI所得的多种微生物菌种按数量百分比配比: 土地类芽孢杆菌NK3-4 9%-13%、保加利亚乳杆菌8%-12%、肠杆菌YC105C 9%-15%、水稻内生细菌11%-19%、乳酸链球菌10%-21%、黑曲霉菌8%-15%、谷氨酸棒杆菌21%-29%,混合放入三角瓶中，置于摇床内，在27-29 °C的条件下培养2_3天，控制pH在6.3-7.0，使菌数含量达7-9亿/ml，得常温复合微生物发酵剂。4.如权利要求3所述的一种常温复合微生物发酵剂的制备方法，其特征在于，所述松针营养液的制备方法为: 取生长六年以上的干油松松针用闪式提取器处理，所得提取液先用武火加热，沸腾后用文火加热1-1.5h，中空纤维超滤膜过滤，取滤液，加水补足至初始液体量，加入19-25 %蚕蛹粉后混合即得。5.如权利要求3所述的一种常温复合微生物发酵剂的制备方法，其特征在于，所述葛仙米冻干粉通过以下步骤制备所得: 取干燥的葛仙米置于汽爆罐内，先通入氮气至汽爆罐内压力为0.8?1.4MPa，爆破处理8?25min ；然后迅速通入蒸汽至汽爆罐内压力为1.4?1.8MPa，蒸汽爆破处理0.5?2.5min后，室温浓缩至相对密度1.10?1.20，冷冻干燥，得葛仙米冻干粉。
【文档编号】C12R1/225GK105861391SQ201610389041
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年6月2日
【发明人】高洁
【申请人】陕西国际商贸学院