一种黄花菜保健茶及其制备方法与检测方法与流程

本发明涉及保健食品的技术领域，具体涉及一种预防酒精性脂肪肝的黄花菜保健茶及制备方法。

背景技术：

黄花菜(hemerocallisfulva)又名金针菜，俗名金针花，为百合科多年生草本植物，黄花菜鲜甜味美，荤素兼优，在中国医学3000多年的食疗历史中，黄花菜被列为常用食疗食品之一。中医认为黄花菜具有平肝养血、消肿利尿、抗菌消炎、止血、镇痛、通乳、健胃和安神的功能，能治疗肝炎、黄疽、大便下血、感冒、痢疾、尿路感染、头晕、耳鸣、心悸、腰痛、水肿、缺乳、关节肿痛等多种病症。

酒精性脂肪肝病(alcoholfattyliverdisease，afld)是指由于大量饮酒所导致的肝细胞内脂质蓄积量超过肝湿重的5％，或者在组织学上每单位面积有1/3以上的肝细胞发生脂肪变性，即表现为肝脏细胞内的脂肪沉积，若进一步发展，则会造成酒精性肝炎、酒精性肝纤维化和酒精性肝硬化，这些都属于酒精性肝病，在严重酗酒的条件下可诱发肝细胞坏死，甚至肝功能衰竭。近年来酒精性肝病在中国的发病率有上升趋势，仅次于肝炎病毒，酒精已成为导致肝脏损伤的第二大因素，但目前对于afld尚未有十分突出的治疗方法。并且相对于药物治疗，保健茶品的预防更有其特别的优势，例如毒副作用小，服用方便，预防在先，而且作为茶饮，饮用者的心理排斥性小。

在现有技术中，申请号为2014102074300，发明名称为一种石斛解酒护肝茶及其制备方法的中国发明专利公开了一种石斛解酒护肝茶及其制备方法，其由以下重量份的原料制成：石斛20～30、白茶80～100、赶黄草16～22、相思藤10～15、枸杞叶6～12、叶下珠3～6、柚子皮4～8、葛根6～9、奶蓟草1～3、紫花苦菜2～5、洋甘菊1.5～2.5、菱角叶1～2、栀子花2～3、香蜂草0.5～1.5、留兰香1～2、水适量。本发明石斛茶具有清热解毒、解酒醒酒、退黄化湿、护肝保肝的功效，能够加速乙醇代谢，降低血液中乙醇浓度，并能对肝脏具有保护作用，能减低降低对肝脏的损害，长期饮用有助于饮酒引起酒精性脂肪肝、酒精性肝炎、酒精性肝纤维化以及酒精性肝硬化，无副作用。申请号为2012100426503，发明名称为一种红雪茶降脂保肝活性部位的提取物及其应用的中国发明专利公开了属于天然药物制备技术领域的一种红雪茶降脂保肝活性部位的提取物及其在制备防治非酒精性脂肪肝的药物中的应用。该提取物以红雪茶干燥粗粉为原料，经过水提取，醇沉淀，胰蛋白酶和木瓜蛋白酶水解，透析，干燥等步骤制成。

现有技术中对酒精性脂肪肝具有一定功效的保健茶，一般是由多种原料制成，成本高，且效果一般。而由一种原料制成的产品，多数是以药物形式存在，用来治疗酒精性脂肪肝，这种方式的缺点在上面的论述中也提到了，如毒副作用较大，最为关键的是患者的心理依从性很差。所以，当前急需一种制备原料少，效果显著，且安全性高的保健茶。本发明提供的保健茶就可以解决当前的这个问题。

申请人甘肃绿源农林科技有限公司成立于2005年6月，位于甘肃省庆阳市镇原县上肖南街10号，注册资本1160万元。是一家专注于农产品研究、开发、生产及销售和农林产品新技术应用、推广，电子商务、进出口贸易为主的农产品精深加工企业。公司建有当代较先进的活性炭生产装置和脱苦杏仁四条生产线，年购处理杏核8700多吨，生产各种活性炭3265吨，脱苦杏仁2000吨，主要产品有南梁牌脱苦杏仁、黑麦仁，果壳黄金碳、空气净化炭等3大类20多个品种，其中“南梁”牌脱苦杏仁、黄花菜、紫苏已获得中国绿色食品发展中心“绿色食品证书”。2009年被评为“庆阳市农业产业化重点龙头企业”；2013年被评为“甘肃省农业产业化重点龙头企业”；2014年被国家林业局认定为“首批国家级林业产业化重点龙头企业”，并荣获中国企业调查信用评价中心“aaa级信用企业”荣誉称号。申请人经过多年研究，得到了本发明黄花菜保健茶的技术方案。

技术实现要素：

基于背景技术存在的技术问题，本发明提出了一种预防酒精性脂肪肝的黄花菜保健茶及制备方法。

本发明的目的是提供一种预防酒精性脂肪肝症的保健茶。

本发明的另一目的是提供该保健茶的制备方法。

本发明还有一个目的是提供该保健茶的检测方法。

本发明还提供了该保健茶组合物的保健用途。

上述发明目的是通过如下方式实现的：

一种预防酒精性脂肪肝的黄花菜保健茶，该保健茶是由黄花菜提取物制成。

所述的预防酒精性脂肪肝的黄花菜保健茶，该保健茶的制备方法为：

s1：取黄花菜，置烘箱内35～40℃烘干4～6h后，取干燥后的黄花菜，采用气流粉碎机进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为3000～3400kpa，分级频率为70～90hz，粉碎时间为45～55min，得黄花菜超微粉t1；

s2：取s1步骤所得的黄花菜超微粉t1，加入10～14倍量的水，进行水蒸气蒸馏提取8～12h，提取得到挥发油t2，备用；水蒸气蒸馏后的水提液t3，保留，备用；水蒸气蒸馏后的残渣t4保留，备用；

s3：取s2步骤所得的残渣t4，加入加入6～8倍量的水，加热回流提取1～3次，每次3～5h，得到的提取液与s2步骤所得的水提液t3合并，浓缩，得到浸膏t5；水提取后的残渣t6保留，备用；

s4：取s3步骤得到的残渣t6，以6～10倍量70～80％乙醇回流提取1～3次，每次提取时间2～4h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏t7；

s5：将s3步骤得到的浸膏t5、s4步骤得到的浸膏t7混合均匀，加入s2步骤得到的挥发油t2，加入0.05～0.15％重量份的l-丙氨酸，混匀，冷冻干燥，粉碎，得到保健茶粉。

该保健茶优选的的制备方法为：

s1：取黄花菜，置烘箱内37℃烘干5h后，取干燥后的黄花菜，采用气流粉碎机进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为3200kpa，分级频率为80hz，粉碎时间为50min，得黄花菜超微粉t1；

s2：取s1步骤所得的黄花菜超微粉t1，加入12倍量的水，进行水蒸气蒸馏提取10h，提取得到挥发油t2，备用；水蒸气蒸馏后的水提液t3，保留，备用；水蒸气蒸馏后的残渣t4保留，备用；

s3：取s2步骤所得的残渣t4，加入加入7倍量的水，加热回流提取2次，每次4h，得到的提取液与s2步骤所得的水提液t3合并，浓缩，得到浸膏t5；水提取后的残渣t6保留，备用；

s4：取s3步骤得到的残渣t6，以8倍量75％乙醇回流提取2次，每次提取时间3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏t7；

s5：将s3步骤得到的浸膏t5、s4步骤得到的浸膏t7混合均匀，加入s2步骤得到的挥发油t2，加入0.1％重量份的l-丙氨酸，混匀，冷冻干燥，粉碎，得到保健茶粉。

一种预防酒精性脂肪肝的黄花菜保健茶的检测方法，该保健茶是由黄花菜提取物制成，该保健茶采用如下方法制备：

s1：取黄花菜，置烘箱内37℃烘干5h后，取干燥后的黄花菜，采用气流粉碎机进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为3200kpa，分级频率为80hz，粉碎时间为50min，得黄花菜超微粉t1；

s2：取s1步骤所得的黄花菜超微粉t1，加入12倍量的水，进行水蒸气蒸馏提取10h，提取得到挥发油t2，备用；水蒸气蒸馏后的水提液t3，保留，备用；水蒸气蒸馏后的残渣t4保留，备用；

s3：取s2步骤所得的残渣t4，加入加入7倍量的水，加热回流提取2次，每次4h，得到的提取液与s2步骤所得的水提液t3合并，浓缩，得到浸膏t5；水提取后的残渣t6保留，备用；

s4：取s3步骤得到的残渣t6，以8倍量75％乙醇回流提取2次，每次提取时间3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏t7；

s5：将s3步骤得到的浸膏t5、s4步骤得到的浸膏t7混合均匀，加入s2步骤得到的挥发油t2，加入0.1％重量份的l-丙氨酸，混匀，冷冻干燥，粉碎，得到保健茶粉；

采用反相高效液相色谱法测定美决明子素、甲基大黄酸的含量，步骤如下：

(1)色谱条件：色谱柱：c18，流动相：体积比为15：80：5的甲醇-0.04mol/l磷酸二氢钾-0.1％三氟乙酸的混溶液，柱温为40～50℃，检测波长为280～290nm，流速为1.0～2.0ml·min^-1；

(2)对照品溶液制备：精密称取美决明子素对照品8.00～12.00mg、甲基大黄酸对照品5.00～7.00mg，置100ml量瓶中，加0.1％三氟乙酸水溶液溶解定容，精密量取4～6ml，置25ml量瓶中，用0.1％三氟乙酸水溶液稀释至刻度摇匀，即得对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取样品0.4～0.6g，置100ml量瓶中，加0.1％三氟乙酸水溶液溶解，超声25～35min，冷却后用0.1％三氟乙酸水溶液定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

(4)精密吸取对照品溶液和供试品溶液各5～20μl，注入高效液相色谱仪，进行测定。

所述的预防酒精性脂肪肝的黄花菜保健茶的检测方法，该保健茶是由黄花菜提取物制成，该保健茶采用如下方法制备：

s1：取黄花菜，置烘箱内37℃烘干5h后，取干燥后的黄花菜，采用气流粉碎机进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为3200kpa，分级频率为80hz，粉碎时间为50min，得黄花菜超微粉t1；

s2：取s1步骤所得的黄花菜超微粉t1，加入12倍量的水，进行水蒸气蒸馏提取10h，提取得到挥发油t2，备用；水蒸气蒸馏后的水提液t3，保留，备用；水蒸气蒸馏后的残渣t4保留，备用；

s3：取s2步骤所得的残渣t4，加入加入7倍量的水，加热回流提取2次，每次4h，得到的提取液与s2步骤所得的水提液t3合并，浓缩，得到浸膏t5；水提取后的残渣t6保留，备用；

s4：取s3步骤得到的残渣t6，以8倍量75％乙醇回流提取2次，每次提取时间3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏t7；

s5：将s3步骤得到的浸膏t5、s4步骤得到的浸膏t7混合均匀，加入s2步骤得到的挥发油t2，加入0.1％重量份的l-丙氨酸，混匀，冷冻干燥，粉碎，得到保健茶粉；

采用反相高效液相色谱法测定美决明子素、甲基大黄酸的含量，优选的步骤如下：

(1)色谱条件：色谱柱：c18，流动相：体积比为15：80：5的甲醇-0.04mol/l磷酸二氢钾-0.1％三氟乙酸的混溶液，柱温为45℃，检测波长为286nm，流速为1.5ml·min^-1；

(2)对照品溶液制备：精密称取美决明子素对照品10.00mg、甲基大黄酸对照品6.00mg，置100ml量瓶中，加0.1％三氟乙酸水溶液溶解定容，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用0.1％三氟乙酸水溶液稀释至刻度摇匀，即得对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取样品0.5g，置100ml量瓶中，加0.1％三氟乙酸水溶液溶解，超声30min，冷却后用0.1％三氟乙酸水溶液定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

(4)精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，进行测定。

一种预防酒精性脂肪肝的黄花菜保健茶的检测方法，该保健茶是由黄花菜提取物制成，该保健茶采用如下方法制备：

s1：取黄花菜，置烘箱内37℃烘干5h后，取干燥后的黄花菜，采用气流粉碎机进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为3200kpa，分级频率为80hz，粉碎时间为50min，得黄花菜超微粉t1；

s2：取s1步骤所得的黄花菜超微粉t1，加入12倍量的水，进行水蒸气蒸馏提取10h，提取得到挥发油t2，备用；水蒸气蒸馏后的水提液t3，保留，备用；水蒸气蒸馏后的残渣t4保留，备用；

s3：取s2步骤所得的残渣t4，加入加入7倍量的水，加热回流提取2次，每次4h，得到的提取液与s2步骤所得的水提液t3合并，浓缩，得到浸膏t5；水提取后的残渣t6保留，备用；

s4：取s3步骤得到的残渣t6，以8倍量75％乙醇回流提取2次，每次提取时间3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏t7；

s5：将s3步骤得到的浸膏t5、s4步骤得到的浸膏t7混合均匀，加入s2步骤得到的挥发油t2，加入0.1％重量份的l-丙氨酸，混匀，冷冻干燥，粉碎，得到保健茶粉；

采用气相色谱法测定5-羟甲基糠醛含量，步骤如下：

(1)色谱条件与系统适用性：色谱柱：hp-5柱，以交联5％苯基甲基聚硅氧烷为固定相；进样口温度：210～230℃；检测器温度：210～230℃；分流比：14～16：2；程序升温：初始65～75℃，以4～6℃·min^-1的速度，上升至135～145℃；载气为氮气，流量10～15ml·min^-1，流速为1.0～3.0ml·min^-1；进样量5～20μl；

(2)供试品溶液的制备：取保健茶1.00～3.00g，精密称定，置于100ml具塞锥形瓶，加入30～50ml正已烷超声15～25min，滤过，滤液至50ml量瓶中，加正已烷定容，即得供试品溶液；

(3)对照品溶液的制备：取5-羟甲基糠醛对照品，精密称定，加正已烷，制成浓度为0.50～1.50mg·ml^-1的5-羟甲基糠醛的对照品溶液；

(4)测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液各5～15μl，注入气相色谱仪，进行测定。

所述的预防酒精性脂肪肝的黄花菜保健茶的检测方法，该保健茶是由黄花菜提取物制成，该保健茶采用如下方法制备：

s1：取黄花菜，置烘箱内37℃烘干5h后，取干燥后的黄花菜，采用气流粉碎机进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为3200kpa，分级频率为80hz，粉碎时间为50min，得黄花菜超微粉t1；

s2：取s1步骤所得的黄花菜超微粉t1，加入12倍量的水，进行水蒸气蒸馏提取10h，提取得到挥发油t2，备用；水蒸气蒸馏后的水提液t3，保留，备用；水蒸气蒸馏后的残渣t4保留，备用；

s3：取s2步骤所得的残渣t4，加入加入7倍量的水，加热回流提取2次，每次4h，得到的提取液与s2步骤所得的水提液t3合并，浓缩，得到浸膏t5；水提取后的残渣t6保留，备用；

s4：取s3步骤得到的残渣t6，以8倍量75％乙醇回流提取2次，每次提取时间3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏t7；

s5：将s3步骤得到的浸膏t5、s4步骤得到的浸膏t7混合均匀，加入s2步骤得到的挥发油t2，加入0.1％重量份的l-丙氨酸，混匀，冷冻干燥，粉碎，得到保健茶粉；

采用气相色谱法测定5-羟甲基糠醛含量，优选的步骤如下：

(1)色谱条件与系统适用性：色谱柱：hp-5柱，以交联5％苯基甲基聚硅氧烷为固定相；进样口温度：220℃；检测器温度：220℃；分流比：15：2；程序升温：初始70℃，以5℃·min^-1的速度，上升至140℃；载气为氮气，流量12ml·min^-1，流速为2.0ml·min^-1；进样量10μl；

(2)供试品溶液的制备：取保健茶2.00g，精密称定，置于100ml具塞锥形瓶，加入40ml正已烷超声20min，滤过，滤液至50ml量瓶中，加正已烷定容，即得供试品溶液；

(3)对照品溶液的制备：取5-羟甲基糠醛对照品，精密称定，加正已烷，制成浓度为1.00mg·ml^-1的5-羟甲基糠醛的对照品溶液；

(4)测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10μl，注入气相色谱仪，进行测定。

一种由黄花菜制成的保健茶在制备预防酒精性脂肪肝的黄花菜保健茶中的应用，该保健茶是由黄花菜提取物制成；该保健茶采用如下方法制备：

s1：取黄花菜，置烘箱内37℃烘干5h后，取干燥后的黄花菜，采用气流粉碎机进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为3200kpa，分级频率为80hz，粉碎时间为50min，得黄花菜超微粉t1；

s2：取s1步骤所得的黄花菜超微粉t1，加入12倍量的水，进行水蒸气蒸馏提取10h，提取得到挥发油t2，备用；水蒸气蒸馏后的水提液t3，保留，备用；水蒸气蒸馏后的残渣t4保留，备用；

s3：取s2步骤所得的残渣t4，加入加入7倍量的水，加热回流提取2次，每次4h，得到的提取液与s2步骤所得的水提液t3合并，浓缩，得到浸膏t5；水提取后的残渣t6保留，备用；

s4：取s3步骤得到的残渣t6，以8倍量75％乙醇回流提取2次，每次提取时间3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏t7；

s5：将s3步骤得到的浸膏t5、s4步骤得到的浸膏t7混合均匀，加入s2步骤得到的挥发油t2，加入0.1％重量份的l-丙氨酸，混匀，冷冻干燥，粉碎，得到保健茶粉；

采用反相高效液相色谱法测定美决明子素、甲基大黄酸的含量，步骤如下：

(1)色谱条件：色谱柱：c18，流动相：体积比为15：80：5的甲醇-0.04mol/l磷酸二氢钾-0.1％三氟乙酸的混溶液，柱温为45℃，检测波长为286nm，流速为1.5ml·min^-1；

(2)对照品溶液制备：精密称取美决明子素对照品10.00mg、甲基大黄酸对照品6.00mg，置100ml量瓶中，加0.1％三氟乙酸水溶液溶解定容，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用0.1％三氟乙酸水溶液稀释至刻度摇匀，即得对照品溶液；

(3)供试品溶液的制备：精密称取样品0.5g，置100ml量瓶中，加0.1％三氟乙酸水溶液溶解，超声30min，冷却后用0.1％三氟乙酸水溶液定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液；

(4)精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，进行测定；

和/或，采用气相色谱法测定5-羟甲基糠醛含量，步骤如下：

(1)色谱条件与系统适用性：色谱柱：hp-5柱，以交联5％苯基甲基聚硅氧烷为固定相；进样口温度：220℃；检测器温度：220℃；分流比：15：2；程序升温：初始70℃，以5℃·min^-1的速度，上升至140℃；载气为氮气，流量12ml·min^-1，流速为2.0ml·min^-1；进样量10μl；

(2)供试品溶液的制备：取保健茶2.00g，精密称定，置于100ml具塞锥形瓶，加入40ml正已烷超声20min，滤过，滤液至50ml量瓶中，加正已烷定容，即得供试品溶液；

(3)对照品溶液的制备：取5-羟甲基糠醛对照品，精密称定，加正已烷，制成浓度为1.00mg·ml^-1的5-羟甲基糠醛的对照品溶液；

(4)测定：精密吸取供试品溶液、对照品溶液各10μl，注入气相色谱仪，进行测定。

通过如下的实验研究来具体阐述和分析本发明的技术方案和技术效果：

实验一：对小鼠酒精性脂肪肝的预防作用的保健茶筛选实验研究

1材料和方法

1.1实验动物

清洁级spf级小鼠70只，体重20～22g，由甘肃中医药大学医学实验中心提供，动物合格证号：scxk(甘)2011-0001-0001011；实验设施合格证号：syxk(甘)2011-0001-0000314；饲养于甘肃中医药大学医学实验中心，动物饲养于标准条件下，12h明暗交替，(22±2)℃，自由摄食饮水。动物在上述环境中适应性饲养1周后开始实验。

1.2实验试剂

白酒：红星牌55度二锅头白酒，北京红星股份有限公司生产，生产许可证qs110015010349，规格：500ml/瓶；

受试保健茶la：处方：黄花菜1000g；

制备方法：取干燥的黄花菜，加入7倍量的水，加热回流提取2次，每次4h，提取液合并，浓缩，冷冻干燥，粉碎，得到受试保健茶la。

受试保健茶lb：处方：黄花菜1000g；

制备方法：取干燥的黄花菜，加入8倍量75％乙醇回流提取2次，每次提取时间3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏，冷冻干燥，粉碎，得到受试保健茶lb。

受试保健茶lc：处方：黄花菜1000g；

制备方法：s1：取黄花菜，置烘箱内37℃烘干5h后，取干燥后的黄花菜，采用气流粉碎机进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为3200kpa，分级频率为80hz，粉碎时间为50min，得黄花菜超微粉t1；

s2：取s1步骤所得的黄花菜超微粉t1，加入12倍量的水，进行水蒸气蒸馏提取10h，提取得到挥发油t2，备用；水蒸气蒸馏后的水提液t3，保留，备用；水蒸气蒸馏后的残渣t4保留，备用；

s3：取s2步骤所得的残渣t4，加入加入7倍量的水，加热回流提取2次，每次4h，得到的提取液与s2步骤所得的水提液t3合并，浓缩，得到浸膏t5；水提取后的残渣t6保留，备用；

s4：取s3步骤得到的残渣t6，以8倍量75％乙醇回流提取2次，每次提取时间3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏t7；

s5：将s3步骤得到的浸膏t5、s4步骤得到的浸膏t7混合均匀，加入s2步骤得到的挥发油t2，混匀，冷冻干燥，粉碎，得到受试保健茶lc。

受试保健茶ld：处方：黄花菜1000g；

制备方法：取黄花菜，置烘箱内37℃烘干5h后，取干燥后的黄花菜，采用气流粉碎机进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为3200kpa，分级频率为80hz，粉碎时间为50min，得黄花菜超微粉，加入8倍量35％乙醇回流提取2次，每次提取时间3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏，冷冻干燥，粉碎，得到受试保健茶ld。

1.3实验分组与灌胃剂量

将小鼠随机分为以下6组，分别为：空白对照组、模型对照组、受试保健茶la组、受试保健茶lb组、受试保健茶lc组、受试保健茶ld组，每组10只；

受试保健茶la组灌胃受试保健茶la，剂量为6.5g/10ml/kg；受试保健茶lb组灌胃受试保健茶lb，剂量为6.5g/10ml/kg；受试保健茶lc组灌胃受试保健茶lc，剂量为6.5g/10ml/kg；受试保健茶ld组灌胃受试保健茶ld，剂量为6.5g/10ml/kg；空白对照组和模型对照组均灌服同等剂量(10ml/kg)的生理盐水。除空白对照组外，其他组灌服白酒，剂量为10ml/kg，连续灌服6周。

1.4检测指标及方法

在采血前，对小鼠禁食12h，然后经小鼠眶后静脉丛采血，血液离心20min，分离血清，检测各组小鼠的丙氨酸转氨酶(alt)、天冬氨酸转移酶(ast)和甘油三酯(tg)。

摘取各组小鼠的肝脏组织，称重，并计算肝指数。

肝指数＝肝质量(g)/体质量(g)×100％；

采集所有小鼠同一部位的肝组织和一段结肠组织，用4％的甲醛固定，he染色后，分析各组小鼠肝脏和结肠组织的病理学检测结果。

1.5统计学方法

利用spss12.0软件的方差分析方法对各组小鼠的检测指标进行统计学分析。

2结果

2.1各组小鼠体重增长量、肝指数及生化指标的分析

通过对各组小鼠体重增长量、肝指数和生化指标的对比分析显示：与空白对照组相比，模型组小鼠的体重增长量显著降低(p＜0.05)，肝指数显著增加(p＜0.05)，血清alt、ast和tg也显著增高(p＜0.05)；而与模型对照组相比，hljdt各剂量组小鼠的体重增长量均显著增加(p＜0.05)，肝指数明显降低(p＜0.05)，血清alt、ast和tg含量明显降低(p＜0.05)，其中hljdt对alt和tg含量的影响呈现出剂量依赖性(表1)。

表1各组小鼠肝指数和生化指标分析

注：与空白对照组相比^*p＜0.05；与模型对照组相比^△p＜0.05。

2.2肝脏病理学分析

(1)空白对照组小鼠的肝小叶结构清晰，肝索排列规则，未见炎症细胞浸润；见说明书附图1。

(2)模型对照组小鼠肝小叶界限模糊，有成堆的脂肪滴，有大量炎性浸润的肝细胞；见说明书附图2。

(3)受试保健茶la组小鼠肝小叶界限模糊，有聚集的脂肪滴，有较多炎性浸润的肝细胞；见说明书附图3。

(4)受试保健茶lb组小鼠肝小叶界限模糊，有聚集的脂肪滴，有较多炎性浸润的肝细胞；见说明书附图4。

(5)受试保健茶lc组小鼠的脂肪变和肝细胞肿胀程度均比模型对照组明显减轻，各剂量组小鼠肝细胞均观察不到成堆的脂肪滴出现，肝小叶及汇管区未见炎性细胞浸润；见说明书附图5。

(6)受试保健茶ld组小鼠肝小叶界限模糊，有聚集的脂肪滴，有较多炎性浸润的肝细胞；见说明书附图6。

3结论

实验研究结果显示：受试保健茶lc组结果与模型对照组相比，小鼠肝指数显著降低(p＜0.05)，血清alt、ast和tg含量均显著降低(p＜0.05)，说明受试保健茶lc能够显著降低血清转氨酶的浓度，具有较强的修复酒精性肝脏损伤的效应；同时受试保健茶lc组能够显著降低血清tg的含量，肝脏病理学结果显示，受试保健茶lc对酒精性肝损伤均具有显著地改善修复作用。

实验二：反相高效液相色谱法测定本发明保健茶中美决明子素、甲基大黄酸的含量

1仪器、试剂与材料

1.1仪器

dionex高效液相色谱仪，配备p680高效液相泵，asi-100自动进样器，uvd170u紫外检测器，chromeleon工作站。

1.2试剂与材料

美决明子素对照品(陕西标普医药科技有限公司提供，批号170123-201603)，甲基大黄酸对照品(陕西标普医药科技有限公司提供，批号170205-201605)。

本发明保健茶(样品)：处方：黄花菜1000g；

制备方法：s1：取黄花菜，置烘箱内37℃烘干5h后，取干燥后的黄花菜，采用气流粉碎机进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为3200kpa，分级频率为80hz，粉碎时间为50min，得黄花菜超微粉t1；

s2：取s1步骤所得的黄花菜超微粉t1，加入12倍量的水，进行水蒸气蒸馏提取10h，提取得到挥发油t2，备用；水蒸气蒸馏后的水提液t3，保留，备用；水蒸气蒸馏后的残渣t4保留，备用；

s3：取s2步骤所得的残渣t4，加入加入7倍量的水，加热回流提取2次，每次4h，得到的提取液与s2步骤所得的水提液t3合并，浓缩，得到浸膏t5；水提取后的残渣t6保留，备用；

s4：取s3步骤得到的残渣t6，以8倍量75％乙醇回流提取2次，每次提取时间3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏t7；

s5：将s3步骤得到的浸膏t5、s4步骤得到的浸膏t7混合均匀，加入s2步骤得到的挥发油t2，混匀，冷冻干燥，粉碎，得到本发明保健茶(样品)。

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱：c18，规格：4.6mm×200mm，5μm，流动相：体积比为15：80：5的甲醇-0.04mol/l磷酸二氢钾-0.1％三氟乙酸的混溶液，柱温为45℃，检测波长为286nm，流速为1.5ml·min^-1。

2.2溶液制备

2.2.1对照品溶液制备

精密称取美决明子素对照品10.00mg和甲基大黄酸对照品6.00mg，置100ml量瓶中，加0.1％三氟乙酸水溶液溶解定容，精密量取5ml，置25ml量瓶中，用0.1％三氟乙酸水溶液稀释至刻度摇匀，即得对照品溶液。

2.2.2供试品溶液的制备

精密称取样品0.5g，置100ml量瓶中，加0.1％三氟乙酸水溶液溶解，超声30min，冷却后用0.1％三氟乙酸水溶液定容至刻度，摇匀，0.45μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

2.3标准曲线

吸取对照品溶液2μl、4μl、8μl、16μl、32μl、64μl，注入高效液相色谱仪，以进样量(x)为横坐标，色谱峰面积(y)为纵坐标，的如下回归方程：

美决明子素：y＝3.1587x－5.2685，r＝0.9998；

甲基大黄酸：y＝2.1652x－6.2542，r＝0.9999。

表明美决明子素进样量在0.02015～0.5635μg范围内线性关系良好，甲基大黄酸进样量在0.01525～0.4585μg范围内线性关系良好。

取对照品溶液和供试品溶液10μl注入高效液相色谱仪，高效液相色谱图见说明书附图7和附图8。

2.4精密度试验

取供试品溶液，重复进样5次，美决明子素的峰面积rsd为1.22％，甲基大黄酸的峰面积rsd为0.95％，表明精密度良好。

2.5稳定性试验

取供试品溶液，在配制后1h、2h、4h、8h、16h进样，测定美决明子素和甲基大黄酸含量，美决明子素的rsd为1.15％，甲基大黄酸的rsd为1.28％，表明16h内，供试品溶液稳定性良好。

2.6重现性试验

精密称取同一批次样品5份，按照本发明提供的方法制备供试品溶液，按照本发明提供的色谱条件测定美决明子素和甲基大黄酸的含量，美决明子素rsd为2.11％，甲基大黄酸rsd为1.85％，表明重现性良好。

2.7加样回收试验

精密称定本发明保健茶粉末，分别加入美决明子素和甲基大黄酸对照品适量，按本发明提供的方法操作，测定，平均回收率分别为100.67％和100.01％，rsd分别为1.71％和2.03％(n＝6)，结果见表2和表3。

表2美决明子素加样回收试验结果(n＝6)

表3甲基大黄酸加样回收试验结果(n＝6)

2.8样品含量

测定分别称取不同批号的本发明保健茶，精密称定，按照本发明提供的方法制备供试品溶液，照本发明提供的色谱条件测定，结果见表4。

表4三批样品中美决明子素、甲基大黄酸的含量(n＝3)

3结论

结果表明该hplc方法简单，易于操作，可以作为本发明保健茶中美决明子素、甲基大黄酸的定量检测方法。

实验三：气相色谱法测定本发明保健茶中5-羟甲基糠醛含量的研究

1仪器与试药

气相色谱仪；氢火焰离子化检测器(fid)；hpinnowax(30m×0.25mm，0.25μm)弹性石英毛细管色谱柱。

5-羟甲基糠醛对照品，由北京百奥莱博科技有限公司提供，批号：0625-201603。

本发明保健茶(样品)：处方：黄花菜1000g；

制备方法：s1：取黄花菜，置烘箱内37℃烘干5h后，取干燥后的黄花菜，采用气流粉碎机进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为3200kpa，分级频率为80hz，粉碎时间为50min，得黄花菜超微粉t1；

s2：取s1步骤所得的黄花菜超微粉t1，加入12倍量的水，进行水蒸气蒸馏提取10h，提取得到挥发油t2，备用；水蒸气蒸馏后的水提液t3，保留，备用；水蒸气蒸馏后的残渣t4保留，备用；

s3：取s2步骤所得的残渣t4，加入加入7倍量的水，加热回流提取2次，每次4h，得到的提取液与s2步骤所得的水提液t3合并，浓缩，得到浸膏t5；水提取后的残渣t6保留，备用；

s4：取s3步骤得到的残渣t6，以8倍量75％乙醇回流提取2次，每次提取时间3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏t7；

s5：将s3步骤得到的浸膏t5、s4步骤得到的浸膏t7混合均匀，加入s2步骤得到的挥发油t2，混匀，冷冻干燥，粉碎，得到本发明保健茶(样品)。

乙腈，色谱纯，重蒸水，自制，其他试剂均为分析纯。

2实验方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性

色谱柱：hp-5柱，型号：30m×0.32mm×0.25μm，以交联5％苯基甲基聚硅氧烷为固定相；进样口温度：220℃；检测器温度：220℃；分流比：15：2；程序升温：初始70℃，以5℃·min^-1的速度，上升至140℃；载气为氮气，流量12ml·min^-1，流速为2.0ml·min^-1；进样量10μl；此条件下，5-羟甲基糠醛能与其他组分达到基线分离，与相邻的色谱峰分离度大于1.8；理论板数按5-羟甲基糠醛峰计算应不低于15000；结果见说明书附图9、附图10。

2.2供试品溶液的制备

取保健茶2.00g，精密称定，置于100ml具塞锥形瓶，加入40ml正已烷超声20min，滤过，滤液至50ml量瓶中，加正已烷定容，即得供试品溶液。

2.3对照品溶液的制备

取5-羟甲基糠醛对照品，精密称定，加正已烷，制成浓度为1.00mg·ml^-1的5-羟甲基糠醛的对照品溶液。

2.4线性关系考察

分别精密吸取一定量质量浓度为1.00mg·ml^-1的5-羟甲基糠醛对照品贮备液，加正已烷稀释成一系列质量浓度的对照品溶液。分别吸取上述的对照品溶液各10μl，按本发明提供的色谱条件进行测定。

以峰面积积分值为纵坐标(y)，5-羟甲基糠醛对照品质量为横坐标(x，μg)，绘制标准曲线，结果如下：

y＝856.245x－6.238，r＝0.9998，在0.0528～5.368μg内线性关系良好。

2.5精密度试验

精密吸取质量浓度为0.5mg·ml^-1的对照品溶液重复进样5次，测得5-羟甲基糠醛的峰面积rsd为0.85％。

2.6稳定性试验

取保健茶2.00g，精密称定，照本发明提供的方法处理，分别于0，2，4，8，16，32h测定供试品溶液中5-羟甲基糠醛的峰面积。结果表明，在32h内供试品溶液基本稳定，rsd为1.05％。

2.7重复性实验

取保健茶，平行取样6次，精密称定，照本发明提供的方法处理，在本发明提供的色谱条件下进行测定，结果5-羟甲基糠醛含量的rsd为1.03％。

2.8加样回收率实验

分别精密称取5-羟甲基糠醛对照品适量，加入保健茶中，按本发明提供的制备，在本发明提供的色谱条件进行测定，计算回收率。结果见表5。

表55-羟甲基糠醛加样回收率实验结果

2.9含量测定

分别取4批本发明保健茶，按“2.1.2”项下方法制备供试品溶液，在给定的色谱条件下进行测定，以外标法计算5-羟甲基糠醛(c10h20o)的含量，结果见表6。

表6样品中5-羟甲基糠醛的含量测定结果

3结论

本实验用气相色谱建立了本发明保健茶中挥发性成分5-羟甲基糠醛的含量测定方法，可以有效检测本发明保健茶中的重要活性成分。本发明的检测方法精密度高，重复性好，稳定性好，可以用于本品的质量检测。

说明书附图：

图1为空白对照组小鼠肝组织病理学检查结果(200×)。

图2为模型对照组小鼠肝组织病理学检查结果(200×)。

图3为受试保健茶la组小鼠肝组织病理学检查结果(200×)。

图4为受试保健茶lb组小鼠肝组织病理学检查结果(200×)。

图5为受试保健茶lc组小鼠肝组织病理学检查结果(200×)。

图6为受试保健茶ld组小鼠肝组织病理学检查结果(200×)。

图7为对照品溶液hplc色谱图，其中：1号峰为美决明子素色谱峰，2号峰为甲基大黄酸色谱峰。

图8为供试品溶液hplc色谱图，其中：1号峰为美决明子素色谱峰，2号峰为甲基大黄酸色谱峰。

图9为对照品气相色谱图，其中1号峰为5-羟甲基糠醛色谱峰。

图10为供试品气相色谱图，其中1号峰为5-羟甲基糠醛色谱峰。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步解说。

实施例1：

处方：黄花菜1000g；

制备方法：s1：取黄花菜，置烘箱内37℃烘干5h后，取干燥后的黄花菜，采用气流粉碎机进行超微粉碎，气流粉碎机的气流压力为3200kpa，分级频率为80hz，粉碎时间为50min，得黄花菜超微粉t1；

s2：取s1步骤所得的黄花菜超微粉t1，加入12倍量的水，进行水蒸气蒸馏提取10h，提取得到挥发油t2，备用；水蒸气蒸馏后的水提液t3，保留，备用；水蒸气蒸馏后的残渣t4保留，备用；

s3：取s2步骤所得的残渣t4，加入加入7倍量的水，加热回流提取2次，每次4h，得到的提取液与s2步骤所得的水提液t3合并，浓缩，得到浸膏t5；水提取后的残渣t6保留，备用；

s4：取s3步骤得到的残渣t6，以8倍量75％乙醇回流提取2次，每次提取时间3h，合并提取液，回收乙醇，浓缩，得到浸膏t7；

s5：将s3步骤得到的浸膏t5、s4步骤得到的浸膏t7混合均匀，加入s2步骤得到的挥发油t2，混匀，冷冻干燥，粉碎，得到本发明保健茶。

保健功能：养肝护肝。

适宜人群：早期轻度酒精性脂肪肝的人群。

食用方法及食用量：每日2次，每次5g，用温开水冲泡，慢饮。

以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。