一种抗衰老肽组合物及其制备方法与流程

本发明涉及营养用品，具体涉及一种抗衰老肽组合物及其制备方法。

背景技术：

1、皮肤由表皮、真皮、皮下组织组成。表皮没有血管，细胞的能量和营养必须由真皮微循环提供。真皮层是皮肤的生命源泉，是一层致密、坚韧且有弹性的组织，主要由纤维成分(胶原蛋白纤维、弹力纤维和网状纤维)、糖蛋白、氨基葡萄糖和玻尿酸等组成。玻尿酸是一种透明的胶状物质，吸水能力可达500-1000倍，是公认的最佳保湿产品。年轻的皮肤，玻尿酸含量高，皮肤光滑、弹性、水嫩、膨胀饱满；皮肤老化时，真皮层变薄，减少了真皮层与表皮层之间物质交换的界面，细胞的正常代谢和有丝分裂作用受到阻碍，皮肤萎缩产生皱纹，因此抗衰老要从补充真皮层营养物质(如胶原蛋白和玻尿酸等)开始。胶原蛋白可以弥补基底膜功能，帮助表皮层与真皮层的结合，能够将水分、养分保送至真皮层。因此，如果能够补充人体皮肤中的胶原蛋白，将能够有效地对抗皮肤衰老的问题。

2、目前市场上的抗衰老产品众多，特别是肽类化妆品，因活性肽具有抗氧化、抗衰老、清除自由基等多种生理功能，已广泛应用于化妆品等领域。但目前多种肽类在一起使用时容易造成皮肤细胞损伤，难以起到较好的效果。

3、中国专利申请cn104706543a的发明公开了一种源自天然的对人体安全性高且效果好的具有抗衰老功能的植物多肽组合物，包含玉米多肽、荞麦多肽、燕麦多肽、葡萄籽多肽、螺旋藻多肽。该植物多肽组合物有较好的清除超氧自由基和羟自由基能力，具有增强成纤细胞增生能力，有延缓皮肤衰老效果，同时具有补水、锁水、减缓油脂分泌作用，且对皮肤无刺激。

4、中国专利申请cn1909895a公开的抗衰老组合物，提供的组合物在推迟或预防人类和动物由于衰老而出现的能量减少、外观改变等的变化方面是有效的，并且即使长期摄取也是高度安全的。

5、但是，上述抗衰老组合物的效果还需要进一步改进。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提出一种抗衰老肽组合物及其制备方法，具有很好的抗氧化、抗炎、抗菌、抗衰老、美白、嫩肤、减少皱纹的效果，能够提供肌肤养分、促进皮肤细胞新生，平滑肤质，均匀肤色，使皮肤细腻红润，增加皮肤弹性，具有广阔的应用前景。

2、本发明的技术方案是这样实现的：

3、本发明提供一种抗衰老肽组合物的制备方法，将玉米、燕麦、藜麦脱淀粉后酶解制得谷物蛋白；将枸杞、红枣酶解，制得中药蛋白；将螺旋藻和葛仙米藻反复冻融后，提取水溶蛋白、碱溶蛋白、酸溶蛋白和醇溶蛋白，混合制得藻蛋白；将谷物蛋白、中药蛋白和藻蛋白混合加入葡萄糖、锌盐，接种枯草芽孢杆菌和富硒酵母菌发酵，产物经过多级过滤，得到硒-锌-肽组合物，与胶原蛋白三肽、肌肽、血肽、维生素e和维生素c混合包埋，制得抗衰老肽组合物。

4、作为本发明的进一步改进，包括以下步骤：

5、s1.谷物的脱淀粉处理：将玉米、燕麦、藜麦洗净，干燥，粉碎，加入水中，加入淀粉酶酶解，过滤，收集固体，得到脱淀粉谷物；

6、s2.谷物蛋白的制备：将步骤s1制得的脱淀粉谷物加入水中，加入第一蛋白酶酶解，过滤，收集上清液，加入乙醇沉淀，过滤，滤液冷冻干燥，制得谷物蛋白；

7、s3.中药蛋白的制备：将枸杞、红枣洗净，干燥，粉碎，加入水中，加入第二蛋白酶酶解，过滤，收集上清液，加入乙醇沉淀，过滤，滤液冷冻干燥，制得中药蛋白；

8、s4.藻的反复冻融：将螺旋藻和葛仙米藻干粉加入水中，置于-20至-25℃冷冻，室温溶解，重复操作2-3次，最后一次加入第三蛋白酶酶解，过滤，滤液冷冻干燥，得到藻水溶蛋白，固体留用；

9、s5.藻蛋白的制备：将步骤s4中的固体加入乙醇水溶液中，第一温度加热提取，过滤，滤液回收乙醇，冷冻干燥，得到藻醇溶蛋白，固体加入稀酸中，第二温度加热搅拌提取，过滤，得到滤液1；将得到的固体加入稀碱液中，第三温度加热搅拌提取，过滤，得到滤液2，将滤液1和滤液2混合，滤液透析除去小分子，透析液冷冻干燥，得到藻碱溶蛋白和藻酸溶蛋白，将藻水溶蛋白、藻醇溶蛋白、藻酸溶蛋白和藻碱溶蛋白混合均匀，制得藻蛋白；

10、s6.发酵菌的活化：将枯草芽孢杆菌和富硒酵母菌接种至高氏培养基中，活化培养，得到菌种种子液；

11、s7.发酵：将步骤s2制得的谷物蛋白、步骤s3制得的中药蛋白、步骤s5制得的藻蛋白混合加入水中，加入葡萄糖、可溶性锌盐，混合均匀，灭菌，接种步骤s6制得的枯草芽孢杆菌和富硒酵母菌菌种种子液，发酵培养，得到发酵产物；

12、s8.过滤：将步骤s7中的发酵产物依次用0.80、0.45、0.22μm的微孔滤膜过滤，得到的滤液经过陶瓷膜过滤，得到的滤液冷冻干燥，得到硒-锌-肽组合物；

13、s9.添加组合物的制备：将胶原蛋白三肽、肌肽、血肽、维生素e和维生素c混合均匀，制得添加剂组合物；

14、s10.包埋：将步骤s8制得的硒-锌-肽组合物和步骤s9制得的添加剂组合物混合加入水中，加入海藻酸钠和乳化剂，混合均匀，加入鱼油中，快速膜乳化，滴加氯化钙溶液，常温固化，离心，固体冷冻干燥，制得抗衰老肽组合物。

15、作为本发明的进一步改进，步骤s1中所述玉米、燕麦、藜麦的质量比为3-5:1-2:5-7，所述淀粉酶为ɑ-淀粉酶和β-淀粉酶的混合物，质量比为7-10:3，所述淀粉酶的添加量为体系总质量的2-3wt％，所述酶解的温度为45-50℃，时间为2-3h；步骤s2中所述脱淀粉谷物、第一蛋白酶的质量比我20-30:1-2，所述第一蛋白酶为碱性蛋白酶和胰蛋白酶的混合物，质量比为5-7:5，所述酶解的温度为40-45℃，时间为1-2h，所述加入乙醇至体系乙醇含量为70-80wt％，沉淀3-5h。

16、作为本发明的进一步改进，步骤s3中所述枸杞、红枣的质量比为5-7:3-5，所述第二蛋白酶为木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶的混合物，质量比为3-5:3，所述第二蛋白酶的添加量为体系总质量的2-3wt％，所述酶解的温度为40-45℃，时间为2-4h，所述加入乙醇至体系乙醇含量为70-80wt％，沉淀3-5h；步骤s4中所述螺旋藻和葛仙米藻干粉的质量比为5-7:3-5，所述第三蛋白酶为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物，质量比为3-5:7，所述第三蛋白酶的添加量为体系总质量的3-4wt％，所述酶解的酶解温度为35-45℃，时间为2-3h。

17、作为本发明的进一步改进，步骤s5中所述乙醇水溶液的浓度为40-50wt％，所述第一温度加热提取的温度为40-50℃，时间为1-2h，所述稀酸为0.5-1wt％的稀盐酸或稀硫酸，所述第二温度加热搅拌提取的温度为35-40℃，时间为1-2h，所述稀碱液为0.5-1wt％的naoh或koh溶液，所述第三温度加热搅拌提取的温度为35-40℃，时间为1-2h；步骤s6中所述活化培养的温度为38-42℃，时间为18-24h，所述菌种种子液的含菌量为108-109cfu/ml。

18、作为本发明的进一步改进，步骤s7中所述谷物蛋白、中药蛋白、藻蛋白、葡萄糖、可溶性锌盐的质量比为10-12:3-5:7-15:7-12:2-3，所述可溶性锌盐选自氯化锌、硫酸锌、硝酸锌、乙酸锌、葡萄糖酸锌中的至少一种，所述枯草芽孢杆菌和富硒酵母菌菌种种子液的接种量为1-2％和2-3％，所述发酵培养的条件为38-42℃，50-70r/min，发酵培养36-48h；步骤s8中所述陶瓷膜的孔径为7k-10kd。

19、作为本发明的进一步改进，步骤s9中所述胶原蛋白三肽、肌肽、血肽、维生素e和维生素c的质量比为5-7:3-5:1-2:0.5-1:0.3-0.5；步骤s10中所述硒-锌-肽组合物、添加剂组合物、海藻酸钠、乳化剂的质量比为10-12:5-7:17-25:1-2，所述快速膜的膜孔径为3-5μm，所述氯化钙溶液的浓度为3-5wt％，所述常温固化的时间为30-40min，所述乳化剂选自吐温-20、吐温-40、吐温-60、吐温-80中的至少一种。

20、作为本发明的进一步改进，具体包括以下步骤：

21、s1.谷物的脱淀粉处理：将3-5重量份玉米、1-2重量份燕麦、5-7重量份藜麦洗净，干燥，粉碎，加入100重量份水中，加入淀粉酶，所述淀粉酶的添加量为体系总质量的2-3wt％，45-50℃酶解2-3h，过滤，收集固体，得到脱淀粉谷物；

22、所述淀粉酶为ɑ-淀粉酶和β-淀粉酶的混合物，质量比为7-10:3；

23、s2.谷物蛋白的制备：将20-30重量份步骤s1制得的脱淀粉谷物加入100重量份水中，加入1-2重量份第一蛋白酶，40-45℃酶解1-2h，过滤，收集上清液，加入乙醇至体系乙醇含量为70-80wt％，沉淀3-5h，过滤，滤液冷冻干燥，制得谷物蛋白；

24、所述第一蛋白酶为碱性蛋白酶和胰蛋白酶的混合物，质量比为5-7:5；

25、s3.中药蛋白的制备：将5-7重量份枸杞、3-5重量份红枣洗净，干燥，粉碎，加入100重量份水中，加入第二蛋白酶，所述第二蛋白酶的添加量为体系总质量的2-3wt％，40-45℃酶解2-4h，过滤，收集上清液，加入乙醇至体系乙醇含量为70-80wt％，沉淀3-5h，过滤，滤液冷冻干燥，制得中药蛋白；

26、所述第二蛋白酶为木瓜蛋白酶和无花果蛋白酶的混合物，质量比为3-5:3；

27、s4.藻的反复冻融：将5-7重量份螺旋藻和3-5重量份葛仙米藻干粉加入水中，置于-20至-25℃冷冻2h，室温融解，重复操作2-3次，最后一次融解后加入第三蛋白酶，所述第三蛋白酶的添加量为体系总质量的3-4wt％，35-45℃酶解2-3h，过滤，滤液冷冻干燥，得到藻水溶蛋白，固体留用；

28、所述第三蛋白酶为胰蛋白酶和木瓜蛋白酶的混合物，质量比为3-5:7；

29、s5.藻蛋白的制备：将步骤s4中的固体加入40-50wt％的乙醇水溶液中，40-50℃加热提取1-2h，过滤，滤液回收乙醇，冷冻干燥，得到藻醇溶蛋白，固体加入0.5-1wt％的稀盐酸或稀硫酸中，35-40℃加热搅拌提取1-2h，过滤，得到滤液1；将得到的固体加入0.5-1wt％的naoh或koh溶液中，35-40℃加热搅拌提取1-2h，过滤，得到滤液2，将滤液1和滤液2混合，滤液透析除去小分子，透析液冷冻干燥，得到藻碱溶蛋白和藻酸溶蛋白，将藻水溶蛋白、藻醇溶蛋白、藻酸溶蛋白和藻碱溶蛋白混合均匀，制得藻蛋白；

30、s6.发酵菌的活化：将枯草芽孢杆菌和富硒酵母菌接种至高氏培养基中，38-42℃活化培养18-24h，得到含菌量为108-109cfu/ml的菌种种子液；

31、s7.发酵：将10-12重量份步骤s2制得的谷物蛋白、3-5重量份步骤s3制得的中药蛋白、7-15重量份步骤s5制得的藻蛋白混合加入200重量份水中，加入7-12重量份葡萄糖、2-3重量份可溶性锌盐，混合均匀，灭菌，接种步骤s6制得的枯草芽孢杆菌和富硒酵母菌菌种种子液，所述枯草芽孢杆菌和富硒酵母菌菌种种子液的接种量为1-2％和2-3％，38-42℃，50-70r/min，发酵培养36-48h，得到发酵产物；

32、s8.过滤：将步骤s7中的发酵产物依次用0.80、0.45、0.22μm的微孔滤膜过滤，得到的滤液经过孔径为7k-10kd的陶瓷膜过滤，得到的滤液冷冻干燥，得到硒-锌-肽组合物；

33、s9.添加组合物的制备：将5-7重量份胶原蛋白三肽、3-5重量份肌肽、1-2重量份血肽、0.5-1重量份维生素e和0.3-0.5重量份维生素c混合均匀，制得添加剂组合物；

34、s10.包埋：将10-12重量份步骤s8制得的硒-锌-肽组合物和5-7重量份步骤s9制得的添加剂组合物混合加入200重量份水中，加入17-25重量份海藻酸钠和1-2重量份乳化剂，混合均匀，加入500重量份鱼油中，快速膜乳化，所述膜的孔径为3-5μm，滴加20重量份3-5wt％氯化钙溶液，常温固化30-40min，离心，固体冷冻干燥，制得抗衰老肽组合物。

35、本发明进一步保护一种上述的制备方法制得的抗氧化肽组合物。

36、本发明进一步保护一种上述的抗氧化肽组合物在制备抗衰老护肤品中的应用。

37、本发明具有如下有益效果：本发明抗衰老肽含有丰富的谷物活性肽、中药活性肽、藻活性肽等，这些活性肽是介于氨基酸与蛋白质之间的分子聚合物，至少由两个氨基酸组成，大至由数百个氨基酸通过肽键连接而成，其易于被人体吸收，有调节激素和酶的作用，可以改善和提高人体皮肤对水分、矿物质运输和吸收，有很好的抗菌和病毒，抗氧化，清除自由基，抗衰老等作用，可以螯合重金属离子、促进dna合成、加速组织细胞再生等。

38、本发明中谷物蛋白肽具有延缓衰老作用。玉米中蛋白质丰富，氨基酸分布合理，经过去除淀粉酶解后得到的小分子玉米肽富含抗氧化剂，可以中和自由基及其他有害的氧化物质，减轻氧化应激引起的细胞损伤，从而延缓衰老过程，能够减轻炎症反应，抑制炎症因子的释放，从而降低炎症对组织和细胞的伤害，刺激皮肤细胞增生，并促进胶原蛋白的合成，从而改善皮肤的弹性和紧致度；燕麦肽富含抗氧化物质，能够中和自由基，减少氧化损伤，有助于延缓衰老过程，增强皮肤屏障功能，减少水分流失，保持皮肤的滋润度和弹性，从而减少细纹和皱纹的形成，改善皮肤质地和延缓衰老。藜麦中的氨基酸和多肽可能有助于促进胶原蛋白的合成，胶原蛋白是皮肤结构的重要组成部分，能够提升皮肤弹性和紧致度。因此，几种组合的谷物蛋白肽具有协同抗衰老的效果。

39、中药组分中，枸杞、红枣也是一种药食同源的原料，经过胰蛋白酶和木瓜蛋白酶酶解后，对于大部分固定蛋白能够酶解成小分子肽，通过木瓜蛋白酶的酶切作用后，产生大量含巯基的蛋白肽，进一步提高了蛋白肽的抗衰老、抗氧化效果。

40、其中，枸杞蛋白肽富含多种抗氧化物质，可以中和自由基，并减少氧化应激引起的细胞损伤，从而延缓衰老过程，增强机体的免疫功能，提高免疫细胞的活性和抗病能力，有助于促进胶原蛋白的合成，胶原蛋白是皮肤中重要的结构蛋白，对保持皮肤的弹性和紧致度起着重要作用。红枣蛋白肽能够能够高人体免疫力，延缓衰老。另外，枸杞肽中富含谷胱甘肽，谷胱甘肽是一种含琉基的三肽，在机体的生化防御体系中起着重要的作用，而且具有多方面的生理功能，是体内的自由基清除剂，可与许多自由基(烷自由基、过氧自由基、半酪自由基)作用，也能清除脂类过氧化物，抑制黑色素生成酶的活性，防止皮肤老化及色素沉着，改善皮肤抗氧化能力并使皮肤产生光泽。由此，中药蛋白肽的添加和制备能明显提高皮肤抗衰老、改善皱纹、美白、增加弹性的作用，具有协同增效的作用。

41、螺旋藻和葛仙米藻是富含蛋白质的淡水藻，其蛋白质含量大于40％，且其中富含活性藻胆蛋白包括藻红蛋白、藻蓝蛋白、别藻蓝蛋白等，这些活性藻胆蛋白为藻特有的蛋白，水溶性佳，具有极好的抗氧化、抗衰老、抗紫外线、抗炎等活性，可以形成一层保护性的薄膜，防止水分蒸发，从而提供持久的保湿效果，使皮肤保持滋润，促进胶原蛋白和弹力蛋白的生成，有助于提升皮肤的紧致度和弹性，减少细纹和皱纹的出现，具有一定的抗炎和舒缓作用，可以减轻皮肤刺激和炎症，促进皮肤的修复和再生。同时，这些藻还可以通过醇溶、碱溶、酸溶的方法提取出醇溶蛋白、碱溶蛋白、酸溶蛋白，大大提高了藻蛋白的提取率，这些藻经过酶解后，提取得到的活性蛋白均为小分子活性肽，经过复合，具有很强的抗氧化能力，能除去生物体内自由基，还原过氧化氢和过氧化脂质，保护生物体膜，防止肌肉萎缩变硬，保持皮肤水分和弹性，对延缓机体衰老有重要作用。

42、本发明将制得的谷物蛋白、中药蛋白和藻蛋白进一步经过发酵后，使得经过酶解得到的这些蛋白的分子量进一步减小，活性小分子活性肽，进一步提高了机体对这些肽的吸收能力，同时，枯草芽孢杆菌在发酵过程中能够产生多种生物活性物质包括抗菌物质、酶、氨基酸、多肽等，有抗菌、消炎、促进皮肤弹性等作用；富硒酵母菌在发酵小分子肽的同时，还能够使得产生的小分子蛋白肽与硒形成硒-肽复合物，硒-肽复合物可以在抗氧化方面起调节作用，保护生物膜的完整性，将生物体内的氢过氧化物或脂过氧化物转变为有机醇类，阻止自由基攻击细胞膜，保护机体组织中不饱和脂肪酸等脂类物质不被破坏，同时促进形成含硒的过氧化物酶，在维护机体内环境稳定起到了重要的作用，防止生物体过度氧化，促进机体对部分维生素的吸收，起到抗氧化、抗衰老的作用。

43、本发明发酵过程还添加了可溶性锌盐，使得产生的小分子蛋白肽还能形成锌-肽复合物，锌元素是一种比较有效的抗氧化剂，这种物质能够有助于分解人体内的自由基，锌-肽复合物是一个抗氧化物，可以保护细胞膜免受氧自由基的破坏，延长细胞寿命，锌可提高机体酶的活性，增强机体清除自由基的能力，参与细胞代谢过程，具有推迟、延缓细胞衰老的功效。性激素的分泌减少是衰老的原因之一，锌可促进机体分泌性激素，维持性器官功能，从而延缓衰老。

44、本发明经过多级过滤，除去大分子杂质，同时，7k-10kd陶瓷膜截留，获得小分子的蛋白肽，这种蛋白肽能够提供肌肤养分、促进皮肤细胞新生，对消除皮肤皱纹、延缓肌肤衰老具有重要作用，平滑肤质，均匀肤色，使皮肤细腻红润；加快美容整形手术后皮肤创面的修复速度，平皱保湿，增加皮肤弹性，减少现有的面部皱纹，而且可以有效防止新皱纹的产生，抑制神经传导素乙酰胆碱的释放，从而减少肌肉收缩，减少表情纹和动态纹的产生。

45、本发明还添加了添加剂组合物，其中，肌肽有类似过氧化物酶的活性，具有很好的抗氧化性能，还可以抑制金属离子催化的脱氧核糖降解，能引起脱氧核糖的降解，具有能清除羟基自由基的效果，同时，肌肽能够与铜离子形成无催化活性的复合物，通过抑制铜离子，从而抑制了羟基自由基的形成。肌肽不仅可以抑制金属离子、血红蛋白催化的脂质氧化，而且还可以抑制光激活的核黄素催化的脂质氧化以及脂肪氧合酶催化的脂质氧化。另外肌肽作为供氢体，使肌红蛋白上的血红素铁保持二价，从而抑制了高铁肌红蛋白的形成，阻止了脂质氧化，抑制肌红蛋白氧化，所以肌肽能更好地稳定皮肤的颜色，使得皮肤看起来红润有光泽。

46、在抗衰老方面，硒能够与维生素e具有协同作用，硒通过维持胰腺功能来保障胆汁酸盐微粒的形成，以促进脂溶性维生素e的吸收，硒还有助于维生素e在血浆中储留，以节省维生素e的用量。维生素e可维持硒的活性型，抑制硒排泄，预防质膜自身氧化，抑制过氧化氢的形成，减少硒的用量。

47、血肽为畜生血提取得到的蛋白肽，可以起到延缓衰老的作用，该产品含有着丰富的微量元素，使用之后可以让皮肤变得有弹性，而且它里面的维生素b12对皮肤有再生功能，所以可以起到美容养颜的效果，坚持使用，还有抗衰老的作用。

48、胶原蛋白三肽可以修复断裂老化的弹力纤维网，出弹性恢复，柔韧充盈，也可以消除体内自由基，具有抗氧化作用，减缓皮肤衰老。

49、维生素c是一种很好的抗氧化物质，通过提高皮肤抗氧化功能而减少羟基自由基等氧化因素对皮肤的过氧老化，从而起到抗衰老的作用。

50、本发明制得的抗衰老肽组合物具有很好的抗氧化、抗炎、抗菌、抗衰老、美白、嫩肤、减少皱纹的效果，能够提供肌肤养分、促进皮肤细胞新生，平滑肤质，均匀肤色，使皮肤细腻红润，增加皮肤弹性，具有广阔的应用前景。