专利名称：细菌生化鉴定卡的制作方法
技术领域：
本发明公开了细菌生化鉴定卡，它包括非肠道革兰氏阴性杆菌生化鉴定卡、肠道革兰氏阴性杆菌生化鉴定卡、肠杆菌科细菌生化鉴定卡、厌氧菌生化鉴定卡、奈瑟氏菌/嗜血杆菌属生化鉴定卡、弯曲杆菌生化鉴定卡、酵母样真菌生化鉴定卡、棒状杆菌生化鉴定卡、微球菌科细菌生化鉴定卡、链球菌科细菌生化鉴定卡、芽胞杆菌生化鉴定卡、乳酸杆菌生化鉴定卡12种。
细菌鉴定是采用细菌生物学性状试验工具检测待检菌株的生物学性状，然后根据待检菌株生物学性状的测定结果，运用鉴定方法，借助鉴定设备或鉴定编码检索工具确定其属、种的过程。在细菌鉴定过程中，检测待检菌株的生物学性状是进行细菌鉴定的前提条件，只有获得待检菌株生物学性状的测定结果，才能运用鉴定方法和借助鉴定设备或鉴定编码检索工具实现细菌属、种的鉴定。检测细菌生物学性状的传统方法是将各种试验用的培养基配制好后，分装于试管内再高压灭菌后备用，或高压灭菌后再分装于试管内备用。这种方法由于在使用前需配制好培养基并以试管为试验用具，因而操作繁琐、使用不方便;由于培养基为液体、琼脂固体或半固体，因而有效期短;由于培养基的用量大，因而消耗多;由于测定一项细菌的生物学性状需使一种试验培养基，且试验器具为试管，因而不适于一次检测细菌的多项生物学性状，工作效率低。为了简化操作、延长有效期短、减少消耗并一次检测细菌的多项生物学性状，国内外学者相继发明了一系列细菌微量快速生化鉴定卡或试验工具来检测细菌的生化性状，而实现细菌的鉴定。在公知的细菌生化鉴定卡如VITEK、ATB、API、Micro-ID、Entertube Ⅱ等中，它们不同程度地改善了细菌生物学性状的测定依赖传统试验方法的落后局面，并具有操作简便、培养基的有效期长、不需自配检测试剂、一次可以检测多项细菌生物学性状、可以进行批量化检测、工作效率高、可以使细菌生物学性状的测定统一化和标准化。但是，由于上述细菌生化鉴定卡在卡的片基中加入培养基的种类多达15～32种，且其中有部分培养基即试验项目中对被鉴定类群的细菌没有鉴定价值，因而消耗多、浪费大;由于培养基种类的选择与组合不合理，因而对被鉴定类群的细菌的可鉴定率较低，或用上述生化鉴定卡测得的细菌生化数据对细菌鉴定的可利用率较低。
本发明的目的是提供细菌生化鉴定卡，它包括非肠道革兰氏阴性杆菌生化鉴定卡、肠道革兰氏阴性杆菌生化鉴定卡、肠杆菌科细菌生化鉴定卡、厌氧菌生化鉴定卡、奈瑟氏菌/嗜血杆菌属生化鉴定卡、弯曲杆菌生化鉴定卡、酵母样真菌生化鉴定卡、棒状杆菌生化鉴定卡、微球菌科细菌生化鉴定卡、链球菌科细菌生化鉴定卡、芽胞杆菌生化鉴定卡、乳酸杆菌生化鉴定卡12种。
本发明的目的是这样实现的首先根据已知被鉴定细菌类群的生化性状，用优选法选择出鉴定该类群细菌的最佳鉴定性状;然后根据选择出的细菌最佳鉴定性状，决定细菌生化性状测定培养基的种类，并配制出相映的试验培养基;最后将配制好的各种培养基加入到细菌生化鉴定卡片基的孔中，每孔加入一种培养基，并经干燥处理，包装后即为细菌生化鉴定卡。加入细菌生化鉴定卡片基孔中的培养基种类，视被鉴定细菌类群的不同分为下述12种(1)非肠道革兰氏阴性杆菌生化鉴定卡是2-酮基-葡萄糖酸盐(2KG)、3-羟基-苯甲酸盐(3HB)、3-羟基丁酸盐(OBU)、枸橼酸盐(CIT)、L-脯氨酸(LPR)、组氨酸(HIS)、N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)、糖原(GLY)、麦芽糖(MAL)、蔗糖(SUC)、D-密二糖(MEL)、L-岩藻糖(FUC)、D-葡萄糖(GLU)、肌醇(INO)、甘露醇(MAN)15个同化试验培养基，用于同时测定非肠道革兰氏阴性杆菌鉴定单元的15种生化性状;
(2)肠道革兰氏阴性杆菌生化鉴定卡是赖氨酸脱羧酶(LDC)、乌氨酸脱羧酶(ODC)、精氨酸双水解酶(ADH)、吲哚产生(IND)、尿素酶(URE)、枸橼酸盐利用(CIT)、葡萄糖氧化(GLO)、甘露醇发酵(MAN)、蔗糖发酵(SUC)、鼠李糖发酵(RHA)、苦杏仁苷发酵(AMY)、山梨醇发酵(SOR)12种试验培养基，用于同时测定肠道革兰氏阴性杆菌鉴定单元的12项生化性状;
(3)肠杆菌科细菌生化鉴定卡是赖氨酸脱羧酶(LDC)、乌氨酸脱羧酶(ODC)、丙二酸盐利用(MAU)、尿素酶(URE)、纤维二糖发酵(CEL)、山梨醇发酵(SOR)、阿拉伯糖发酵(LAR)、侧金盏花醇发酵(ADO)、蔗糖发酵(SUC)、卫矛醇发酵(DUL)、α-甲基-葡萄糖苷发酵(AMG)、甘露醇发酵(MAN)12种试验培养基，用于同时测定肠杆菌科细菌鉴定单元的12项生化性状;
(4)厌氧菌生化鉴定卡是α-葡萄糖苷酶(AGL)、α-半乳糖苷酶(AGA)、α-阿拉伯糖苷酶(AAR)、β-葡萄糖苷酶(BGL)、β-半乳糖苷酶(BGA)、β-葡萄糖醛酸苷酶(BGU)、亮氨酸芳胺酶(LAA)、脯氨酸芳胺酶(PRA)、硷性磷酸酶(ALP)、吲哚产生(IND)、甘露糖发酵(MAS)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄酶(NAG)12种试验培养基，用于同时测定厌氧菌鉴定单元的12项生化性状;
(5)奈瑟氏菌/嗜血杆菌属生化鉴定卡是葡萄糖发酵(GLU)、麦芽糖发酵(MLT)、β-葡萄糖苷酶(BGL)、苯基磷酸盐(OPS)、甘氨酸芳胺酶(GLY)、r-谷氨酰芳胺酶(GGT)、脯氨酸芳胺酶(PRO)、树脂天青还原(RES)8种试验培养基，用于同时测定奈瑟氏菌/嗜血杆菌属鉴定单元的8项生化性状;
(6)弯曲杆菌生化鉴定卡是硝酸盐还原(NIT)、尿素酶(URE)、丁二酸盐同化(SUT)、醋酸盐同化(ACE)、马尿酸盐水解(HIP)、硫化氢产生(HYS)、r-谷氨酰基转移酶(GGT)、硷性磷酸酶(ALP)8种试验培养基，用于同时测定弯曲杆菌鉴定单元的8项生化性状;
(7)酵母样真菌生化鉴定卡是2-酮基-葡萄糖(2KG)、放线菌酮(ACT)、赤藓醇(ERY)、甘露醇(MAN)、肌醇(INO)、N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)、L-阿拉伯糖(LAR)、半乳糖(GAL)、棉子糖(RAF)、纤维二糖(CEL)、乳糖(LAC)、麦芽糖(MAL)、密二糖(MEL)、海藻糖(TRE)、七叶苷(ESC)15种同化试验培养基，用于同时测定酵母样真菌鉴定单元的15项生化性状;
(8)棒状杆菌生化鉴定卡是硝酸盐还原(NIT)、尿素酶(URE)、七叶苷水解(ESC)、麦芽糖发酵(MAL)、蔗糖发酵(SUC)、核糖发酵(RIB)、乳糖发酵(LAC)、α-葡萄糖苷酶(AGL)、β-半乳糖苷酶(BGA)9种试验培养基，用于同时测定棒状杆菌鉴定单元的9项生化性状;
(9)微球菌科细菌生化鉴定卡是尿素酶(URE)、硝酸盐还原(NIT)、3-羟基丁酮产生(V-P)、精氨酸双水解酶(ADH)、乌氨酸脱羧酶(ODC)、硷性磷酸酶(ALP)、β-半乳糖苷酶(BGA)、β-葡萄糖醛酸苷酶(BGU)、葡萄糖发酵(GLF)、蔗糖发酵(SUC)、甘露醇发酵(MAN)、海藻糖发酵(TRE)12种试验培养基，用于同时测定微球菌科细菌鉴定单元的12项生化性状;
(10)链球菌科细菌生化鉴定卡是3-羟基丁酮产生(V-P)、马尿酸盐水解(HIP)、精氨酸双水解酶(ADH)、α-亮氨酸芳胺酶(LAA)、β-葡萄糖醛酸酶(BGU)、β-半乳糖苷酶(BGA)、核糖发酵(RIB)、棉子糖发酵(RAF)、山梨醇发酵(SOR)、阿拉伯糖发酵(LAR)、海藻糖发酵(TRE)、乳糖发酵(LAC)12种试验培养基，用于同时测定链球菌科细菌鉴定单元的12项生化性状;
(11)芽胞杆菌生化鉴定卡是精氨酸双水解酶(ADH)、尿素酶(URE)、枸橼酸盐利用(CIT)、β-葡萄糖苷酶(BGL)、淀粉水解(AMD)、L-阿拉伯糖发酵(LAR)、核糖发酵(RIB)、山梨醇发酵(SOR)、D-塔格糖发酵(DTA)、N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)、果糖发酵(FRU)、甘露糖发酵(MAS)、半乳糖发酵(GAL)、龙胆二糖发酵(GEN)、α-甲基-D-甘露糖(MDM)15种试验培养基，用于同时测定芽胞杆菌鉴定单元的15项生化性状;
(12)乳酸杆菌生化鉴定卡是对苯二酚葡萄苷发酵(ARB)、核糖发酵(RIB)、N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)、D-木糖发酵(DXY)、海藻糖发酵(TRE)、山梨醇发酵(SOR)、蔗糖发酵(SUC)、乳糖发酵(LAC)、纤维二糖发酵(CEL)、密二糖发酵(MEL)、L-阿拉伯糖发酵(LAR)、鼠李糖发酵(RHA)、D-塔格糖发酵(DTA)、葡萄糖酸盐利用(GNT)、淀粉水解(AMD)15种试验培养基，用于同时测定乳酸杆菌鉴定单元的15项生化性状。
使用本生化鉴定卡检测细菌的生化性状，可用于对临床上常见的12大类群致病菌、条件致病菌、机会致病菌总计668个细菌鉴定单元进行鉴定。每一种细菌生化鉴定卡对各类群细菌的鉴定单元数为(1)非肠道革兰氏阴性杆菌生化鉴定卡鉴定单元104个;
(2)肠道革兰氏阴性杆菌生化鉴定卡鉴定单元108个;
(3)肠杆菌科细菌生化鉴定卡鉴定单元97个;
(4)厌氧菌生化鉴定卡鉴定单元80个;
(5)奈瑟氏菌/嗜血杆菌生化鉴定卡鉴定单元30个;
(6)弯曲杆菌生化鉴定卡鉴定单元18个;
(7)酵母样真菌生化鉴定卡鉴定单元80个;
(8)棒状杆菌生化鉴定卡鉴定单元33个;
(9)微球菌科细菌生化鉴定卡鉴定单元35个;
(10)链球菌科细菌生化鉴定卡鉴定单元47个;
(11)芽胞杆菌生化鉴定卡鉴定单元24个;
(12)乳酸杆菌生化鉴定鉴定单元29个。
本发明由于将细菌生化性状测定用的多种试验培养基加入一次性使用的卡片材料中而制成细菌生化鉴定卡，因而检验人员在检测待检菌株生物学性状时不需自配各种试验培养基，操作简单，使用方便，培养基的有效期长，一次可以检测细菌的多项生物学性状，可以进行批量化检测，工作效率高，可以使细菌生物学性状的测定统一化和标准化;由于生化鉴定卡在卡的片基中加入的培养基种类为前述8～15种，因而每一种培养基即试验项目对被鉴定类群的细菌都有鉴定价值而无浪费;由于生化鉴定卡中培养基种类的选择与组合合理，因而对被鉴定类群细菌的可鉴定率较高，或用本生化鉴定卡测得的细菌生化数据对细菌鉴定的可利用率较高。
实施例将细菌生化鉴定卡中各种试验培养基配好后，分别加入经吸塑机械吸塑成型的PVC材料卡片的孔中，经干燥处理后即为细菌生化鉴定卡。其中每种细菌生化鉴定卡中之PVC材料卡片的孔数与说明书中叙述的各种细菌生化鉴定卡培养基的种数相同，培养基的种类亦与说明书中的叙述一致。
权利要求
1.细菌生化鉴定卡，其特征在于卡孔中加入的细菌生化试验培养基是下述12组中的一种(1)非肠道革兰氏阴性杆菌生化鉴定卡是2-酮基-葡萄糖酸盐(2KG)、3-羟基-苯甲酸盐(3HB)、3-羟基丁酸盐(OBU)、枸橼酸盐(CIT)、L-脯氨酸(LPR)、组氨酸(HIS)、N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)、糖原(GLY)、麦芽糖(MAL)、蔗糖(SUC)、D-密二糖(MEL)、L-岩藻糖(FUC)、D-葡萄糖(GLU)、肌醇(INO)、甘露醇(MAN)同化试验培养基；(2)肠道革兰氏阴性杆菌生化鉴定卡是赖氨酸脱羧酶(LDC)、乌氨酸脱羧酶(ODC)、精氨酸双水解酶(ADH)、吲哚产生(IND)、尿素酶(URE)、枸橼酸盐利用(CIT)、葡萄糖氧化(GLO)、甘露醇发酵(MAN)、蔗糖发酵(SUC)、鼠李糖发酵(RHA)、苦杏仁苷发酵(AMY)、山梨醇发酵(SOR)试验培养基；(3)肠杆菌科细菌生化鉴定卡是赖氨酸脱羧酶(LDC)、乌氨酸脱羧酶(ODC)、丙二酸盐利用(MAU)、尿素酶(URE)、纤维二糖发酵(CEL)、山梨醇发酵(SOR)、阿拉伯糖发酵(LAR)、侧金盏花醇发酵(ADO)、蔗糖发酵(SUC)、卫矛醇发酵(DUL)、α-甲基-葡萄糖苷发酵(AMG)、甘露醇发酵(MAN)试验培养基；(4)厌氧菌生化鉴定卡是α-葡萄糖苷酶(AGL)、α-半乳糖苷酶(AGA)、α-阿拉伯糖苷酶(AAR)、β-葡萄糖苷酶(BGL)、β-半乳糖苷酶(BGA)、β-葡萄糖醛酸苷酶(BGU)、亮氨酸芳胺酶(LAA)、脯氨酸芳胺酶(PRA)、硷性磷酸酶(ALP)、吲哚产生质(IND)、甘露糖发酵(MAS)、N-乙酰-β-D-氨基葡萄酶(NAG)试验培养基；(5)奈瑟氏菌/嗜血杆菌属生化鉴定卡是葡萄糖发酵(GLU)、麦芽糖发酵(MLT)、β-葡萄糖苷酶(BGL)、苯基磷酸盐(OPS)、甘氨酸芳胺酶(GLY)、γ-谷氨酰芳胺酶(GGT)、脯氨酸芳胺酶(PRO)、树脂天青氧化(RES)试验培养基；(6)弯曲杆菌生化鉴定卡是硝酸盐还原(NIT)、尿素酶(URE)、丁二酸盐同化(SUT)、醋酸盐同化(ACE)、马尿酸盐水解(HIP)、硫化氢产生(HYS)、γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、硷性磷酸酶(ALP)试验培养基；(7)酵母样真菌生化鉴定卡是2-酮基-葡萄糖(2KG)、放线菌酮(ACT)、赤藓醇(ERY)、甘露醇(MAN)、肌醇(INO)、N-乙酰-D-氨基葡萄糖(NAG)、L-阿拉伯糖(LAR)、半乳糖(GAL)、棉子糖(RAF)、纤维二糖(CEL)、乳糖(LAC)、麦芽糖(MAL)、密二糖(MEL)、海藻糖(TRE)、七叶苷(ESC)同化试验培养基；(8)棒状杆菌生化鉴定卡是硝酸盐还原(NIT)、尿素酶(URE)、七叶苷水解(ESC)、麦芽糖发酵(MAL)、蔗糖发酵(SUC)、核糖发酵(RIB)、乳糖发酵(LAC)、α-葡萄糖苷酶(AGL)、β-半乳糖苷酶(BGA)试验培养基；(9)微球菌科细菌生化鉴定卡是尿素酶(URE)、硝酸盐还原(NIT)、3-羟基丁酮产生(V-P)、精氨酸双水解酶(ADH)、乌氨酸脱羧酶(ODC)、硷性磷酸酶(ALP)、β-半乳糖苷酶(BGA)、β-葡萄糖醛酸苷酶(BGU)、葡萄糖发酵(GLF)、蔗糖发酵(SUC)、甘露醇发酵(MAN)、海藻糖发酵(TRE)试验培养基；(10)链球菌科细菌生化鉴定卡是3-羟基丁酮产生(V-P)、马尿酸盐水解(HIP)、精氨酸双水解酶(ADH)、α-亮氨酸芳胺酶(LAA)、β-葡萄糖醛酸酶(BGU)、β-半乳糖苷酶(BGA)、核糖发酵(RIB)、棉子糖发酵(RAF)、山梨醇发酵(SOR)、阿拉伯糖发酵(LAB)、海藻糖发酵(TRE)、乳糖发酵(LAC)试验培养基；(11)芽胞杆菌生化鉴定卡是精氨酸双水解酶(ADH)、尿素酶(URE)、枸橼酸盐利用(CIT)、β-葡萄糖苷酶(BGL)、淀粉水解(AMD)、L-阿拉伯糖发酵(LAR)、核糖发酵(RIB)、山梨醇发酵(SOR)、D-塔格糖发酵(DTA)、N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)、果糖发酵(FRU)、甘露糖发酵(MAS)、半乳糖发酵(GAL)、龙胆二糖发酵(GEN)、α-甲基-D-甘露糖(MDM)试验培养基；(12)乳酸杆菌生化鉴定卡是对苯二酚葡萄苷发酵(ARB)、核糖发酵(RIB)、N-乙酰氨基葡萄糖(NAG)、D-木糖发酵(DXY)、海藻糖发酵(TRE)、山梨醇发酵(SOR)、蔗糖发酵(SUC)、乳糖发酵(LAC)、纤维二糖发酵(CEL)、密二糖发酵(MEL)、L-阿拉伯糖发酵(LAR)、鼠李糖发酵(RHA)、D-塔格糖发酵(DTA)、葡萄糖酸盐利用(GNT)、淀粉水解(AMD)试验培养基。
2.根据权利要求1所述的鉴定卡，其特征在于卡的片基为吸塑成型的PVC材料。
3.根据权利要求1和2所述的鉴定卡，其特征在于卡的片基为一次性使用的卡片。
全文摘要
本发明公开了细菌生化鉴定卡，它包括非肠道革兰氏阴性杆菌、肠道革兰氏阴性杆菌、肠杆菌科细菌、厌氧菌、奈瑟氏菌/嗜血杆菌属、弯曲杆菌、酵母样真菌、棒状杆菌、微球菌科细菌、链球菌科细菌、芽胞杆菌和乳酸杆菌12种生化鉴定卡。利用该卡检测细菌的生化性状，对待鉴细菌的利用率高，其操作简单，使用方便，有效期长，一次可以检测细菌的多项生化性状，可以进行批量化检测和使细菌生物学性状的测定标准化。
文档编号C12Q1/04GK1081717SQ9310693
公开日1994年2月9日 申请日期1993年6月14日 优先权日1993年6月14日
发明者何林, 刘秋鸣, 梁宝铎, 王金良 申请人:何林