°C、150r/min培养16h，制备成枯草芽孢杆菌HL-1种子液备用。将新鲜的虾头绞碎后备用；将花生柏碎后过60目筛备用。将80公斤绞碎的虾头和100公斤粉碎并过60目筛的花生柏混合，并加入300克葡萄糖、200克氯化亚铁、450克磷酸氢二钾和10公斤水一起混匀，获得混匀后的发酵培养基；混匀后的发酵培养基于121°C灭菌30min ;接着往灭菌后冷却的发酵培养基中加入2公斤枯草芽孢杆菌subtil is) HL-1种子液，搅拌并混合均勾；接种后的原料分装在已用75%的酒精表面消毒的发酵浅盘中，浅盘中装料厚度为4厘米，浅盘中物料表面覆盖灭菌处理的湿纱布，再将浅盘置于灭菌的固体发酵房内的搁架上发酵，控制环境温度为30°C，发酵时间为35h ;发酵结束后，将发酵后获得的产品经干燥、粉碎和包装后，即制得了本发明所述的一种利用水产品下脚料制备的抗菌饲料蛋白成品。
[0019]实施例3:将斜面保藏的能产枯草菌素的枯草芽孢杆菌subtil is)HL-1接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中，于37 °C、150r/min培养16h，制备成枯草芽孢杆菌HL-1种子液备用。将扇贝裙边绞碎后备用；将棉籽柏粉碎后过60目筛备用。将120公斤绞碎的扇贝裙边和100公斤粉碎并过60目筛的棉籽柏混合，并加入250克葡萄糖、150克氯化亚铁、400克磷酸氢二钾和5公斤水一起混匀，获得混匀后的发酵培养基；混合后的发酵培养基于121°C灭菌30min ;接着往灭菌后冷却的发酵培养基中加Λ 2公斤枯草芽孢杆菌(feciBiAs subtilis)WL-l种子液，搅拌并混合均勾；接种后的原料分装在已用75%的酒精表面消毒的发酵浅盘中，浅盘中装料厚度为6厘米，浅盘中物料表面覆盖已灭菌处理的湿纱布，再将浅盘置于灭菌的固体发酵房内的搁架上发酵，控制环境温度在28°C，发酵时间为43h ;发酵结束后，将发酵后获得的产品经干燥、粉碎和包装后，即制得了本发明所述的一种利用水产品下脚料制备的抗菌饲料蛋白成品。
[0020]实施例4:将斜面保藏的能产枯草菌素的枯草芽孢杆菌subtil is)HL-1接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中，于37 °C、150r/min培养16h，制备成枯草芽孢杆菌HL-1种子液备用。将鳕鱼下脚料绞碎后备用；将菜柏粉碎后过60目筛备用。将120公斤绞碎后的鳕鱼下脚料和100公斤粉碎并过60目筛的菜柏混合，并加入350克葡萄糖、120克氯化亚铁、300克磷酸氢二钾和5公斤水一起混匀，获得混匀后的发酵培养基；混合后的发酵培养基于121°C灭菌30min ;接着往灭菌后冷却的发酵培养基中加入2公斤枯草芽孢杆菌(SaciTrAz1S subtil is) HL-1种子液，搅拌并混合均勾；接种后的原料分装在已用75%的酒精表面消毒的发酵浅盘中，浅盘中装料厚度为8厘米，浅盘中物料表面覆盖已灭菌处理的湿纱布，再将浅盘置于灭菌的固体发酵房内的搁架上发酵，控制环境温度在28 °C，发酵时间为45h ;发酵结束后，将发酵后获得的产品经干燥、粉碎和包装后，即制得了本发明所述的一种利用水产品下脚料制备的抗菌饲料蛋白成品。
[0021]实施例5:将斜面保藏的能产枯草菌素的枯草芽孢杆菌subtil is)HL-1接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中，于37 °C、150r/min培养16h，制备成枯草芽孢杆菌HL-1种子液备用。将青鳞鱼下脚料绞碎后备用；将花生柏和棉籽柏碎后过60目筛备用。将80公斤绞碎后的青鳞鱼下脚料和100公斤粉碎并过60目筛的复合饲料蛋白(50公斤花生柏+50公斤棉籽柏)混合，并加入400克葡萄糖、150克氯化亚铁、400克磷酸氢二钾和10公斤水一起混匀，获得混匀后的发酵培养基；混合后的发酵培养基于121°C灭菌30min ;接着往灭菌后冷却的发酵培养基中加入I公斤枯草芽孢杆菌{Bacillus种子液，搅拌并混合均勾；接种后的原料分装在已用75%的酒精表面消毒的发酵浅盘中，浅盘中装料厚度为4厘米，浅盘中物料表面覆盖已灭菌处理的湿纱布，再将浅盘置于灭菌的固体发酵房内的搁架上发酵，控制环境温度在29 °C，发酵时间为43h;发酵结束后，将发酵后获得的产品经干燥、粉碎和包装后，即制得了本发明所述的一种利用水产品下脚料制备的抗菌饲料蛋白成品。
【主权项】
1.一种利用水产品下脚料制备抗菌饲料蛋白的方法，其特征在于:该方法包括如下步骤: (1)将斜面保藏的能产枯草菌素的枯草芽孢杆菌HL-1接入到灭菌后冷却的LB液体培养基中，于37 °C、150r/min培养16h，制备成枯草芽孢杆菌HL-1种子液备用； (2)将新鲜的水产品下脚料绞碎后备用，将植物饲料蛋白粉碎后过60目筛备用； (3)将步骤(2)制得的绞碎的水产品下脚料和粉碎后过60目筛的植物饲料蛋白按质量比为0.5~1.5:1的比例混合，并加营养物和水混匀，获得最终水分含量控制在40%?80%范围内的发酵培养基； (4)将步骤(3)获得的混匀的发酵培养基于121°C灭菌30min; (5)将步骤(4)获得的灭菌后的发酵培养基冷却至室温，然后接入步骤(I)所制备的枯草芽孢杆菌HL-1种子液，并混匀； (6)原料的发酵:将步骤(5)获得的加入菌的发酵培养基按照下列方法进行发酵:发酵培养基分装在已消毒的发酵浅盘中，装料厚度为4?8cm，浅盘中发酵培养基表面覆盖已灭菌的湿纱布，再将浅盘置于已灭菌的固体发酵房内的搁架上发酵，控制环境温度在28 0C ~30°C，发酵时间为35h?45h ； (7)成品处理:发酵结束，将发酵后获得的产品经干燥、粉碎和包装后，即制得了一种利用水产品下脚料制备的抗菌饲料蛋白成品。
2.根据权利要求1所述的一种利用水产品下脚料制备抗菌饲料蛋白的方法，其特征在于:所述步骤(I)中所用的枯草芽孢杆菌HL-1在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏编号为CGMCC N0.10379。
3.根据权利要求1所述的一种利用水产品下脚料制备抗菌饲料蛋白的方法，其特征在于:所述步骤(2)中的水产品下脚料为罗非鱼下脚料、虾头、扇贝裙边、鳕鱼下脚料、鱿鱼下脚料、鲤鱼下脚料、青鳞鱼下脚料、青鱼下脚料、鲢鱼下脚料、草鱼下脚料和鲣鱼下脚料中的一种。
4.根据权利要求1所述的一种利用水产品下脚料制备抗菌饲料蛋白的方法，其特征在于:所述步骤(2)中的植物饲料蛋白为豆柏、花生柏、棉籽柏和菜柏中的一种或其中两种以上的混合物。
5.根据权利要求1所述的一种利用水产品下脚料制备抗菌饲料蛋白的方法，其特征在于:所述步骤(3)中的营养物为葡萄糖、氯化亚铁和磷酸氢二钾所组成的混合物。
6.根据权利要求1所述的一种利用水产品下脚料制备抗菌饲料蛋白的方法，其特征在于:所述步骤(3)中的营养物的加入量以添加的营养物的质量占发酵培养基总质量百分比计，分别为:葡萄糖0.01%?5%，氯化亚铁0.01%?5%，磷酸氢二钾0.01%?5%O
7.根据权利要求1所述的一种利用水产品下脚料制备抗菌饲料蛋白的方法，其特征在于:所述步骤(5)中枯草芽孢杆菌HL-1种子液的接种量以接入种子液的质量占发酵培养基总质量百分比计，为0.1%?5%。
【专利摘要】本发明公开了一种利用水产品下脚料制备抗菌饲料蛋白的方法，包括以下主要步骤：将新鲜的水产品下脚料绞碎后备用，将植物饲料蛋白粉碎后过60目筛备用；绞碎后的水产品下脚料和粉碎的植物饲料蛋白混合，并添加营养物和水混匀作为发酵培养基；发酵培养基灭菌冷却后接入能产枯草菌素的枯草芽孢杆菌HL-1进行固态好氧发酵；发酵后的产品经干燥、粉碎和包装后制备成抗菌饲料蛋白成品。本发明方法制备的抗菌饲料蛋白富含枯草菌素、营养小肽和益生菌，它具有良好的促生长与抗病功能。本发明生产的抗菌饲料蛋白不但可以提高蛋白质利用率，而且还能用来配制无抗饲料，具有良好的应用前景和社会意义。CGMCC No．1037920150120
【IPC分类】A23K1-10, A23K1-17
【公开号】CN104719639
【申请号】CN201510092523
【发明人】洪鹏志, 刘唤明, 周春霞, 杨萍, 孙力军, 邓楚津
【申请人】广东海洋大学
【公开日】2015年6月24日
【申请日】2015年3月2日