2枯草芽孢杆菌13S4液体菌种的制备
[0055]将枯草芽孢杆菌13S4用营养肉汤液体培养基在34-35°C培养18-24h，得到的培养 物即为枯草芽孢杆菌13S4液体菌种，该枯草芽孢杆菌13S4液体菌种中枯草芽孢杆菌13S4的 含量为 7X108cfu/mL。
[0056] 1.1.3酿酒酵母2.1190液体菌种的制备
[0057]将酿酒酵母2.1190用麦芽汁液体培养基在31-33°(：培养18-2411，得到的培养物即 为酿酒酵母2.1190液体菌种，该酿酒酵母2.1190的液体菌种中酿酒酵母2.1190的含量为8 X108cfu/mL〇
[0058] 1.1.4酵母菌SC4液体菌种的制备
[0059]将酵母菌SC4用麦芽汁液体培养基在31-33°C培养18-24h，得到的培养物即为酵母 菌SC4液体菌种，该酵母菌SC4的液体菌种中酵母菌SC4的含量为8X108cfu/mL。
[0060] 1.2菌剂的制备
[00611 1.2.1枯草芽孢杆菌1.0892与酿酒酵母2.1190复合菌剂的制备
[0062] 将1.1.1中的枯草芽孢杆菌1.0892液体菌种和1.1.3中的酿酒酵母2.1190液体菌 种均用无菌水稀释后混合，得到枯草芽孢杆菌1.0892和酿酒酵母2.1190的菌落形成单位 (cfu)数目比为1:2的枯草芽孢杆菌1.0892与酿酒酵母2.1190复合菌剂，枯草芽孢杆菌 1.0892与酿酒酵母2.1190复合菌剂的活性成分含量为每毫升枯草芽孢杆菌1.0892与酿酒 酵母2.1190复合菌剂中枯草芽孢杆菌1.0892和酿酒酵母2.1190这两株菌株的含量之和，为 6·3 X108cfu/mL〇
[0063] 1.2.2枯草芽孢杆菌13S4与酵母菌SC4复合菌剂的制备
[0064] 将1.1.2中的枯草芽孢杆菌13S4液体菌种和1.1.4中的酵母菌SC4液体菌种均用无 菌水稀释后混合，得到枯草芽孢杆菌13S4和酵母菌SC4的菌落形成单位(cfu)数目比为1:2 的枯草芽孢杆菌13S4与酵母菌SC4复合菌剂，枯草芽孢杆菌13S4与酵母菌SC4复合菌剂的活 性成分含量为每毫升枯草芽孢杆菌13S4与酵母菌SC4复合菌剂中枯草芽孢杆菌13S4和酵母 菌SC4这两株菌株的含量之和，为6.3 X 108cfu/mL。
[0065] 3、制备奶牛发酵精饲料
[0066]将步骤1.2.1制备的枯草芽孢杆菌1.0892与酿酒酵母2.1190复合菌剂加入2%固 体发酵培养基中，枯草芽孢杆菌1.0892与酿酒酵母2.1190复合菌剂和2%固体发酵培养基 的配比满足10mL枯草芽孢杆菌1.0892与酿酒酵母2.1190复合菌剂：100g奶牛精饲料。在35 °C发酵48h，得到名称为枯草芽孢杆菌1.0892与酿酒酵母2.1190复合菌剂奶牛发酵精饲料 的奶牛发酵精饲料。
[0067]将步骤1.2.2制备的枯草芽孢杆菌13S4与酵母菌SC4复合菌剂加入2%固体发酵培 养基中，枯草芽孢杆菌13S4与酵母菌SC4复合菌剂和2%固体发酵培养基的配比满足10mL枯 草芽孢杆菌13S4与酵母菌SC4复合菌剂：100g奶牛精饲料。在35°C发酵48h，得到名称为枯草 芽孢杆菌13S4与酵母菌SC4复合菌剂奶牛发酵精饲料的奶牛发酵精饲料。
[0068]以上述奶牛精饲料作为对照，测定枯草芽孢杆菌1.0892与酿酒酵母2.1190复合菌 剂奶牛发酵精饲料和枯草芽孢杆菌13S4与酵母菌SC4复合菌剂奶牛发酵精饲料的真蛋白含 量、可溶性蛋白质含量、可溶性多糖含量、淀粉酶活性、蛋白酶活性和纤维素酶活性。实验重 复三次，结果表明，枯草芽孢杆菌1.0892与酿酒酵母2.1190复合菌剂奶牛发酵精饲料和枯 草芽孢杆菌13S4与酵母菌SC4复合菌剂奶牛发酵精饲料的真蛋白含量、可溶性蛋白质含量、 可溶性多糖含量、淀粉酶活性、蛋白酶活性和纤维素酶活性均显著高于未经发酵的上述奶 牛精饲料，枯草芽孢杆菌1.0892与酿酒酵母2.1190复合菌剂奶牛发酵精饲料的真蛋白含 量、可溶性蛋白质含量、可溶性多糖含量、淀粉酶活性、蛋白酶活性和纤维素酶活性分别是 枯草芽孢杆菌13S4与酵母菌SC4复合菌剂奶牛发酵精饲料的1.2倍、1.9倍、2.2倍、1.4倍、 1.8倍和1.3倍(表1)。
[0069]表1、奶牛发酵精饲料中活性物质的含量
[0070]
[0071] 实施例2、奶牛发酵精饲料的奶牛饲喂试验1
[0072] 试验选取健康的荷斯坦泌乳奶牛150头，平均泌乳天数218天，分为试验组和对照 组，试验组和对照组各75头，试验期120天，试验组和对照组除饲喂的精饲料不同外，其它饲 养条件完全相同。对照组每头奶牛每天饲喂l〇kg上述奶牛精饲料，试验组每头奶牛每天饲 喂9kg上述奶牛精饲料和lkg实施例1的枯草芽孢杆菌1.0892与酿酒酵母2.1190复合菌剂奶 牛发酵精饲料。试验前10天和试验120天期间，观察记录各组奶牛采食情况、行为表现、精神 状态、疾病发生和治疗情况以及奶牛的粪便(形状、排泄量、气味等)情况，进行粪便筛试验。 产奶量和体细胞数统计结果见表2,由试验结果可知，试验组奶牛的产奶量较对照组提高了 3.34kg/d，较试验前提高了 3.96kg/d，而对照组仅提高了 0.94kg/d;试验组体细胞数较试验 前明显降低，降低了 18.75 X 104个/mL，下降率达45.3 %，而对照组体细胞数上升了 2.82 X 104个/mL。同时，奶牛粪便成型较好，氨味及其它气味减轻;拉稀情况有所改善;粪便变的光 滑细腻(图1)。
[0073] 表2、奶牛发酵精饲料对奶牛产奶量和体细胞数的影响结果
[0074]
[0075] 实施例3、奶牛发酵精饲料的奶牛饲喂试验2
[0076] 试验选取健康的荷斯坦泌乳奶牛400头，平均泌乳天数183天，试验组和对照组各 200头奶牛，试验期30天，试验组和对照组除饲喂的精饲料不同外，其它饲养条件完全相同。 对照组每头奶牛每天饲喂l〇kg上述奶牛精饲料，试验组每头奶牛每天饲喂9kg上述奶牛精 饲料和lkg实施例1的枯草芽孢杆菌1.0892与酿酒酵母2.1190复合菌剂奶牛发酵精饲料。试 验前10天和试验30天期间，观察记录两组奶牛采食情况、行为表现、精神状态、疾病发生和 治疗情况以及奶牛的粪便(形状、排泄量、气味等)情况，进行粪便筛试验。产奶量和体细胞 数统计结果见表3，由试验结果可知，试验组奶牛的产奶量较试验前提高了 1.67kg/d，而对 照组变化不显著；试验组体细胞数较试验前明显降低，降低了8.11 X 104个/mL，下降率达 17.70%，而对照组体细胞数仅下降0.14 X 104个/mL。同时，奶牛粪便成型较好，氨味及其它 气味减轻;拉稀情况有所改善;粪便变的光滑细腻。
[0077] 表3、奶牛发酵精饲料对奶牛产奶量和体细胞数的影响结果
[0078]
【主权项】
1. 一种奶牛发酵精饲料的制备方法，包括用复合菌剂发酵奶牛精饲料得到发酵产物， 该发酵产物即为所述奶牛发酵精饲料;所述复合菌剂的活性成分由枯草芽孢杆菌和酿酒酵 母组成。2. 根据权利要求1所述的方法，其特征在于：所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌 (Bacillus subtilis)CGMCCl .0892,所述酿酒酵母为酿酒酵母（Saccharomyces cerevisiae)CGMCC2.1190〇3. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述复合菌剂中所述枯草芽孢杆菌和 所述酿酒酵母的菌落形成单位比为1: (1-4)或（1-4): 1。4. 根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于:所述用复合菌剂发酵奶牛精饲料添加 腐植酸钠。5. 由权利要求1-4中任一所述的制备方法制备的奶牛发酵精饲料。6. 根据权利要求5所述的奶牛发酵精饲料，其特征在于:所述奶牛发酵精饲料具有1)-6)中的至少一种特性： 1) 所述奶牛发酵精伺料的真蛋白质含量尚于所述奶牛精伺料的真蛋白质含量； 2) 所述奶牛发酵精饲料的可溶性糖含量高于所述奶牛精饲料的可溶性糖含量； 3) 所述奶牛发酵精饲料的可溶性蛋白质含量高于所述奶牛精饲料的可溶性蛋白质含 量； 4) 所述奶牛发酵精饲料的淀粉酶酶活性高于所述奶牛精饲料的淀粉酶酶活性； 5) 所述奶牛发酵精饲料的蛋白酶酶活性高于所述奶牛精饲料的蛋白酶酶活性； 6) 所述奶牛发酵精饲料的纤维素酶酶活性高于所述奶牛精饲料的纤维素酶酶活性。7. 权利要求5或6所述的奶牛发酵精饲料的下述至少一种用途： A1)权利要求5或6所述的奶牛发酵精饲料在增加奶牛产奶量中的应用； A2)权利要求5或6所述的奶牛发酵精饲料在降低牛乳中体细胞数中的应用； A3)权利要求5或6所述的奶牛发酵精饲料在改善奶牛胃肠道功能中的应用。8. 用于制备奶牛发酵精饲料的菌剂，为权利要求1-3中任一所述的复合菌剂。9. 权利要求8所述的用于制备奶牛发酵精饲料的菌剂在制备奶牛发酵精饲料中的应 用。
【专利摘要】本发明公开了一种高活性奶牛发酵精饲料的制备方法及其专用复合菌剂。本发明的奶牛发酵精饲料的制备方法，包括用复合菌剂发酵奶牛精饲料得到发酵产物，该发酵产物即为所述奶牛发酵精饲料；所述复合菌剂的活性成分由枯草芽孢杆菌和酿酒酵母组成。采用本发明的用于制备奶牛发酵精饲料的菌剂发酵奶牛精饲料获得的奶牛发酵精饲料，显著增加了真蛋白质含量、可溶性糖含量、可溶性蛋白质含量、淀粉酶酶活性、蛋白酶酶活性和纤维素酶酶活性，在调控瘤胃微生态区系平衡和改善饲料养分利用等方面有突出的作用，能够使奶牛的产奶量提高3.34kg/d，降低牛乳中体细胞数，减少了粪便中的臭味，缓解养殖环境污染，为奶牛养殖业的可持续发展提供保障。
【IPC分类】C12N1/20, C12N1/16, A23K20/137, A23K50/10, A23K10/12, C12R1/125, C12R1/865
【公开号】CN105614085
【申请号】CN201610018120
【发明人】史俊祥, 安晓萍, 齐景伟, 刘娜, 刘向敏, 罗旭光, 乌兰
【申请人】内蒙古农业大学
【公开日】2016年6月1日
【申请日】2016年1月12日