调节细胞增生的新化合物的制作方法

专利名称：调节细胞增生的新化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及可用于治疗各种细胞增生性疾病如恶性肿瘤的新化合物。
背景技术：
大量生长因子可以调节细胞的增殖和分化。有害细胞的产生是由于包括生长因子或其信号通道成分不规则表达逐步发展的结果。由受体、胞质激酶和核激酶所激发的并且由磷酸酯酶所调节的酪氨酸磷酸化是这些过程的中心。蛋白质酪氨酸激酶的突变、超活化、易位和过量表达都是与肿瘤发生有关的。除了增加增殖速率和无限增殖细胞外，酪氨酸激酶的过量表达会造成形态上的转化并引起贴壁不依赖，它对迁移能力和转移的可能性诱发起促进作用。
一些具有基于ATP或磷酸酪氨酸相似结构的化合物已显示出是有效的激酶抑制剂。这些基于磷酸酪氨酸的化合物已被证实是更为特异性的酪氨酸激酶抑制剂。由于这些化合物抑制酪氨酸磷酸化作用的能力，所以它们可以改变细胞对生长因子或其他由酪氨酸激酶活性所驱动的其他过程的反应，这些过程包括由于酪氨酸激酶过量表达、突变或易位造成的不规则生长。对在增殖信号通道或在调节细胞骨架结构的通道中起主要作用的酪氨酸激酶的抑制足以将癌细胞从增殖循环中转换到程序性细胞死亡或细胞凋亡。由编程性细胞死亡引起的死亡经常可以在用酪氨酸激酶抑制剂有效治疗中观察到。
对特定酪氨酸激酶的选择性抑制提供了一种具有高度特异性的和对正常生长细胞和组织毒性最小的靶向癌细胞生长的方法。这样，酪氨酸激酶的特异性抑制剂在临床抗癌治疗中具有巨大潜力。现在已经鉴别出许多起酪氨酸激酶抑制剂作用的小分子。例如一些苯基丙烯腈化合物已被公开作有效抑制细胞增殖的酪氨酸激酶抑制剂(例如参见US5,891,917，US5,217,999，US5,773,476，US5,935,993，US5,656,655，US5,677,329和US5,789,427)。
对酪氨酸激酶的抑制提供了一种抑制细胞增殖的机理。本领域普通技术人员会想到其他抑制机理也可以包括其中。
本领域存在一种鉴别可抑制细胞增殖的化合物的需求。

发明内容
现在已经鉴别出可抑制异常细胞增殖如癌细胞生长的许多新化合物。这些化合物不抑制正常细胞的生长。
所以，本发明包括通式I的化合物及其盐、溶剂化物和水合物 其中R1和R2独立地选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素；R3选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、卤素和CH2-S-(CH2)nAr；R4选自C(X)R5、SO3Ar、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、P(O)(OH)2、P(O)(OC1-6烷基)2和C(NH2)＝C(CN)2；X选自于O、S、NH和N-C1-6烷基；R5选自NH2、OH、NH(CH2)pAr、NH(CH2)pOH、(CH2)pOC1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NHNH2、NHC(O)NH2、NHC(O)C1-6烷氧基、N-吗啉基和N-吡咯烷基；并且Ar是用1-4个取代基取代的或没有被取代的芳基或杂芳基，其中取代基独立地选自OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素；
n是0到4；并且p是1-4。
本发明还包括通式II的化合物及其盐、溶剂化盐和水合物 其中R1和R2独立地选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素；R3选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、卤素和CH2-S-(CH2)nAr；Ar是用1-4个取代基取代的或没有被取代的芳基或杂芳基，其中1-4个取代基独立地选自OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1- 6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素；R6是选自于由Ar、OH和OC1-6烷基组成的组中；X选自于O和S；n是0到4；并且p是1-4。
本发明还提供了通式III的化合物及其盐、溶剂化物和水合物 其中
R1和R2独立地选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素；R3选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、卤素和CH2-S-(CH2)nAr；Ar是用1-4个取代基取代的或没有被取代的芳基或杂芳基，其中1-4个取代基独立地选自OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1- 6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素；R7选自OH、NH2和O-C1-6烷基；X选自于O和S；并且n是0到4。
按照本发明的另外方面，提供了一种含有本发明化合物和药学上可接受的载体或稀释剂的药物组合物。
按照本发明的又一方面，提供了一种调节细胞增殖优选抑制细胞增殖的方法，它包括给予需要治疗的细胞或动物有效量的本发明化合物。本发明还包括了本发明化合物调节细胞增殖优选抑制细胞增殖的用途。本发明也包括本发明化合物制备可调节细胞增殖优选抑制细胞增殖的药物方面的用途。
在本发明优选的实施方案中提供了一种抑制癌细胞增殖的方法，它包括给予需要治疗的细胞或动物有效量的本发明化合物。所治疗的癌细胞可以是任易类型的癌细胞包括白血病、淋巴瘤、骨髓瘤、转移瘤、肉瘤或任何其他恶性转化或任何其他恶性肿瘤。本发明还包括了本发明化合物调节癌细胞增殖优选抑制癌细胞增殖的用途。本发明也包括本发明化合物用于制备可调节癌细胞增殖优选抑制癌细胞增殖的药物的用途。
在另一方面，本发明提供了一种通过给予有效量的本发明化合物调节细胞中酪氨酸激酶活性的方法。在又一方面，本发明提供了一种通过给予有效量的本发明化合物抑制细胞中酪氨酸激酶活性的方法。本发明还提供了本发明化合物调节，优选抑制酪氨酸激酶活性的用途。本发明也提供了本发明化合物制备可调节酪氨酸激酶活性优选抑制酪氨酸激酶活性的药物的用途。可以想到本发明化合物对细胞生长的抑制可以通过其他机理起作用。
本发明的其他特征和优点将从下列详细的说明逐渐清楚。尽管如此，可以理解在显示本发明优选的实施方案时只以详细说明的方式给出详尽的说明和具体实施例，因为各种在本发明本质和范围内的变化和改进对本领域普通技术人员来说都可以从详尽的说明书中得出。


现在用相关的附图来描述本发明，这些附图中图1是一幅显示CR4在作用于培养基中正常骨髓分化的条形图。
图2是一幅显示低剂量的CR4在培养基中杀伤费城阳性急性淋巴母细胞白血病的条形图。
图3是一幅显示低剂量的CR4在培养基中杀伤费城阳性Z119急性淋巴母细胞白血病细胞的条形图。
图4是一幅显示低剂量的CR4在培养基中杀伤AML-3急性骨髓白血病细胞的条形图。
图5是一幅显示低剂量的CR4在培养基中杀伤Ly-MN淋巴瘤细胞的条形图。
图6是一幅显示CR4在培养基中杀伤初始幼期骨髓单核细胞白血病细胞的条形图。
图7是一幅显示低剂量的CR4在培养基中杀伤OCI-LY2淋巴瘤细胞的条形图。
图8是一幅显示CR17和CR21在培养基中杀伤费城阳性ALL细胞的条形图。
图9是一幅显示CR17和CR21在培养基中杀伤费城阳性ALL细胞的条形图。
图10是一幅显示CR24在培养基中杀伤费城阳性AIL细胞的条形图。
图11是一幅显示CR19在培养基中杀伤费城阳性ALL细胞的条形图。
图12是一幅显示CR19在培养基中作用于正常骨髓分化的条形图。
图13是一幅显示CR24、CR17和CR21作用于正常骨髓分化的条形图。
图14是一幅显示CR4体外清除正常骨髓作用的条形图。
图15是一幅显示CR4体外清除Z119急性淋巴母细胞白血病作用的条形图。
图16是一幅显示CR4体外清除OCI-Ly2淋巴瘤细胞作用的条形图。
图17是一幅显示CR4体外清除OCI-AML-3急性骨髓白血病细胞作用的条形图。
图18是一幅显示CR4体外清除Ramos B细胞Burkitt淋巴瘤细胞作用的条形图。
图19是一幅显示低剂量的CR4在培养基中杀伤HuNS1多发性骨髓瘤细胞的条形图。
图20A和B是显示在NOD-SCID小鼠体内治疗费城阳性急性淋巴母细胞白血病后的细胞染色图。
图21是一幅显示CR11体外清除正常骨髓作用的条形图。
图22是一幅显示CR11体外清除费城阳性急性淋巴母细胞白血病作用的条形图。
图23是一幅显示用Bcr-Abl抗体免疫沉淀的Philadelphi(Ph+)ALL系Z119和Z181(5×106个细胞/点)的放射自显影图。
图24是一幅显示用Jak2抗体免疫沉淀的费城(Ph+)ALL系Z119(5×106个细胞/点)的放射自显影图。
优选实施方案的详细描述1.定义本文所用的术语“C1-6-烷基”除非另有说明是指含有1到6个碳原子的直链和/或支链烷基，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基等。
本文所用的术语“C1-6-烷氧基”除非另有说明是指含有1到6个碳原子的直链和/或支链烷氧基，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基等。
本文所用的术语“C1-4-烷基”除非另有说明是指含有1到4个碳原子的直链和/或支链烷基，包括甲基、乙基、丙基、异丙基、叔丁基等。
本文所用的术语“C1-4-烷氧基”除非另有说明是指含有1到4个碳原子的直链和/或支链烷氧基，包括甲氧基、乙氧基、丙氧基、异丙氧基、叔丁氧基等。
本文所用的术语“Ar”是指没有被取代的或被取代的芳基和/或杂芳基，当杂芳基时，可以包括至多两个杂原子，其中取代基独立地选自于OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素，包括没有被取代的或被取代的苯基、呋喃基、噻吩基、吲哚基、萘基、喹啉基等。
本文所用的术语“卤素”是指卤原子，包括氯、氟、溴、碘等。
术语“药学上可接受的盐”是指适合于或适应于治疗患者的酸加成盐或碱加成盐。
本文所用的术语“本发明的化合物”包括本文所定义的通式I、II或III的任何一种化合物(包括它们所有的盐、溶剂化物或水合物)以及本文所命名为CR1、CR2、CR3、CR4、CR5、CR6、CR7、CR8、CR9、CR11、CR12、CR13、CR14、CR15、CR16、CR17、CR18、CR19、CR20、CR21、CR24、CR27、CR28和CR29的特殊化合物(包括它们所有的盐、溶剂化物或水合物)。
本文所用的术语“药学上可接受的酸加成盐”是指通式I、II和/或III所表示的任何碱性化合物或其中间体的无毒性的有机酸或无机酸的盐。可形成适当盐的说明性的无机酸包括氢氯酸、氢溴酸、硫酸和磷酸，以及金属盐如磷酸氢二钠和硫酸氢钾。可形成适当盐的有机酸的例子包括单-、双-和三羧酸如羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、戊二酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、抗坏血酸、马来酸、苯甲酸、苯乙酸、肉桂酸和水杨酸，以及磺酸类如对甲苯磺酸和甲磺酸。或者可以形成单或双酸盐，并且这类盐可以或者氢化、溶剂化或几乎是酸酐形式存在。一般，通式I、II和/或III的化合物的酸加成盐更易溶于水和各种亲水性有机溶剂，证实通常比其游离碱的形式有更高的熔点。选择适当的盐对本领域技术人员是公知的。例如在分离通式I、II和/或III的化合物用于实验室使用或随后转化成药学上可接受的酸加成盐时可以使用其他非药学上可接受的盐如草酸盐。
本文所用的术语“药学上可接受的碱加成盐”是指用通式I、II和/或III表示的任何酸性化合物或其中间体的任何无毒性有机或无机碱的加成盐。可形成适当盐的无机碱的例子包括氢氧化锂、氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化镁或氢氧化钯。可形成适当盐的有机碱的例子包括脂族有机胺、脂环族有机胺或芳香族有机胺如甲基胺、三甲基胺和甲基吡啶或氨。适当盐的选择对本领域普通技术人员来说是公知的。
本文所用的术语“溶剂化物”是指通式I、II和/或III的化合物或者它们的药学上可接受的盐，其中适当溶剂的分子可以掺杂在晶体晶格中。适当溶剂在给予剂量上是生理上可耐受的。适当溶剂的例子包括乙醇、水等。当水是溶剂时，分子称作为“水合物”。
本文所用的术语“有效量”或“足够量”的试剂是指足以起到有益或理想结果包括临床结果的用量，并且“有效量”本身取决于所用的内容物。例如，在内容是给予可抑制癌细胞增殖的药剂时，药剂的有效量是足以达到癌细胞增值相对于没有给予药剂所达到的反应更低的用量。
正如本文所用的并且正如本领域所熟知的，“治疗”是一种获得有益的或理想的效果(包括临床效果)的方法。有益的或理想的效果包括但不限于缓解或改善一种或多种症状或病情、减轻病情、稳定(即没有恶化)病情、预防疾病的传播、延迟或减缓疾病的进展、改善或缓和病情以及缓解(不论部分还是全部)，不论可检测的还是无法检测的。“治疗”也可以指相对于没有治疗所预期的存活来说延长生命。
“缓和”疾病或失调是指相对于没有治疗来说失调或疾病状况的程度和/或不希望的临床症状被减少和/或发展的时间被延缓或延长。
本文所用的术语“调节”包括抑制或减弱功能或活性(如细胞增殖)以及提高功能或活性。
“抑制”或“减弱”功能或活性，例如癌细胞增殖是指相对于其他相同条件除了所研究的条件或参数外或者相对于其他条件降低了功能或活性。
本文所用的术语“动物”包括人在内的动物王国的所有成员。
本文所用的术语“细胞”包括多种细胞。对细胞给予化合物包括体内、活体外和体外治疗。
本文所用的术语“癌细胞”包括所有形式的恶性肿瘤或肿瘤疾病。
II.本发明的化合物制备可用于调节细胞增殖的新化合物。该化合物可用于治疗细胞增殖性疾病如恶性肿瘤。
所以，本发明提供了通式I化合物及其盐、溶剂化物或水合物
其中R1和R2独立地选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素；R3选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、卤素和CH2-S-(CH2)nAr；R4选自C(X)R5、SO3Ar、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、P(O)(OH)2、P(O)(OC1-6烷基)2和C(NH2)＝C(CN)2；X选自于O、S、NH和N-C1-6烷基；R5选自NH2、OH、NH(CH2)pAr、NH(CH2)pOH、(CH2)pOC1-6烷基、C1- 6烷基、C1-6烷氧基、NHNH2、NHC(O)NH2、NHC(O)C1-6烷氧基、N-吗啉基和N-吡咯烷基；并且Ar是用1-4个取代基取代的或没有被取代的芳基或杂芳基，其中取代基独立地选自OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素；n是0到4；并且m是1到4；并且p是1-4。
在本发明的实施方案中，通式I的化合物是其中R1和R2独立地选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素。在优选的实施方案中，R1和R2独立地选自H、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、SH、S-C1-4烷基、O-Si(C1-4烷基)(C1-4烷基)(C1-4烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素。在更优选的实施方案中，R1和R2独立地选自H、OH、OCH3、O-Si(CH3)2(tBu)、S-Me、SH和NO2。在本发明最优选的实施方案中，R1和R2都是OH或OCH3或R1是OCH3而R2是OH。
在本发明的又一个实施方案中，通式I的化合物包括其中R3选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1- 6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、卤素和CH2-S-(CH2)nAr(其中n是1-4)。在优选的实施方案中，R3选自H、OH、C1-4烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、N(C1-4烷基)(C1- 4烷基)、SH、S-C1-4烷基、NO2和卤素。在更优选的实施方案中，R3选自H、OH、OCH3、SH、SMe、NO2和卤素。在最优选的实施方案中，R3选自H、OH、和OCH3。
本发明的实施方案包括通式I的化合物，其中R4选自C(X)R5、SO3Ar、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、P(O)(OH)2、P(O)(OC1-6烷基)2和C(NH2)＝C(CN)2(其中m是1-4)。在优选的实施方案中，R4选自C(X)R5和C(NH2)＝C(CN)2。更优选的R4是C(X)R5。当R4是C(X)R5时，本发明的实施方案包括化合物其中X选自于O、S、NH和N-C1-6烷基而R5选自NH2、OH、NH(CH2)pAr、NH(CH2)pOH、(CH2)pOC1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NHNH2、NHC(O)NH2、NHC(O)C1-6烷氧基、N-吗啉基和N-吡咯烷基(其中p是1-4)。在优选的实施方案中，X是O或S而R5选自NH2、OH、NH(CH2)pAr、(CH2)pOH和C1-4烷氧基(其中p是1-3)。最优选的是通式I的化合物其中X是O而R5选自NH2、OH、NH(CH2)pAr、NH(CH2)pOH和OCH3(其中p是1-2)。
本发明包括通式I的化合物其中术语“Ar”是指没有被取代的或被取代的芳基和/或杂芳基，当是杂芳基时，它包括至多两个杂原子，其中任选的取代基独立地选自于下组基团OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素，并且包括没有被取代的或被取代的苯基、呋喃基、噻吩基、吲哚基、萘基、喹啉基等。在本发明的实施方案中，Ar是没有被取代的苯基或被1-4个任选自下列基团的取代基取代的苯基OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素。在优选的实施方案中，Ar是没有被取代的苯基或被1-2个任选自下列基团的取代基取代的苯基OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、N(C1-4烷基)(C1-4烷基)、SH、S-C1-4烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素。在更优选的实施方案中，Ar是没有被取代的苯基或被1-2个任选自下列基团的取代基取代的苯基OH、OCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SH、SCH3、CF3、OCF3和卤素。在最优选的实施方案中，Ar选自于苯基和3，4-二羟基苯基。
本发明还包括通式II的化合物及其盐、溶剂化物和水合物 其中R1和R2独立地选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素；R3选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、卤素和CH2-S-(CH2)nAr；Ar是用1-4个取代基取代的或没有被取代的芳基或杂芳基，其中1-4个取代基独立地选自OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1- 6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素；R6是选自于由Ar、OH和OC1-6烷基组成的组中；X选自于O和S；n是0到4；并且p是1-4。
在本发明的实施方案中，通式II的化合物是其中R1和R2独立地选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素。在优选的实施方案中，R1和R2独立地选自H、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、SH、S-C1-4烷基、O-Si(C1-4烷基)(C1-4烷基)(C1-4烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素。在更优选的实施方案中，R1和R2独立地选自H、OH、OCH3、O-Si(CH3)2(tBu)、S-Me、SH和NO2。在本发明最优选的实施方案中，R1和R2都是OH或OCH3或者R1是OCH3而R2是OH。
在本发明的又一个实施方案中，通式II的化合物包括那些其中R3选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、卤素和CH2-S-(CH2)nAr(其中n是0-4)。在优选的实施方案中，R3选自H、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、N(C1-4烷基)(C1-4烷基)、SH、S-C1-4烷基、NO2和卤素。在更优选的实施方案中，R3选自H、OH、OCH3、SH、SMe、NO2和卤素。在最优选的实施方案中，R3选自H、OH、和OCH3。
本发明还包括通式II的化合物其中术语“Ar”是指没有被取代的或被取代的芳基和/或杂芳基，当是杂芳基时，它包括至多两个杂原子，其中任选的取代基独立地选自于下组基团OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素，并且包括没有被取代的或被取代的苯基、呋喃基、噻吩基、吲哚基、萘基、喹啉基等。在本发明的实施方案中，Ar是没有被取代的苯基或被1-4个任选自下列基团的取代基取代的苯基OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素。在优选的实施方案中，Ar是没有被取代的苯基或被1-2个任选自下列基团的取代基取代的苯基OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、N(C1-4烷基)(C1-4烷基)、SH、S-C1-4烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素。在更优选的实施方案中，Ar是没有被取代的苯基或被1-2个任选自下列基团的取代基取代的苯基OH、OCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SH、SCH3、CF3、OCF3和卤素。在最优选的实施方案中，Ar选自于苯基和3，4-二羟基苯基。
通式II的化合物包括那些其中R6选自于Ar、OH和OC1-6烷基而p是1-4。在优选的实施方案中，R6选自于Ar和OH而p是1-2。最优选的是，当R6是Ar时，p是1，当R6是OH时，p是2。当R6是Ar时，Ar是指没有被取代的或被取代的芳基和/或杂芳基，当是杂芳基时，它包括至多两个杂原子，其中任选的取代基独立地选自于下组基团OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素，并且包括没有被取代的或被取代的苯基、呋喃基、噻吩基、吲哚基、萘基、喹啉基等。在本发明的实施方案中，Ar是没有被取代的苯基或被1-4个任选自下列基团的取代基取代的苯基OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素。在优选的实施方案中，Ar是没有被取代的苯基或被1-2个任选自下列基团的取代基取代的苯基OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、N(C1-4烷基)(C1-4烷基)、SH、S-C1-4烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素。在更优选的实施方案中，Ar是没有被取代的苯基或被1-2个任选自下列基团的取代基取代的苯基OH、OCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SH、SCH3、CF3、OCF3和卤素。在最优选的实施方案中，Ar选自于苯基和3，4-二羟基苯基。
通式II的化合物包括那些其中X选自于O和S。在优选的实施方案中，X是O。
本发明也提供了通式III的化合物及其盐、溶剂化物和水合物
其中R1和R2独立地选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素；R3选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、卤素和CH2-S-(CH2)nAr；Ar是用1-4个取代基取代的或没有被取代的芳基或杂芳基，其中取代基独立地选自OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素；R7是选自于由OH、NH2和OC1-6烷基组成的组中；X选自于O和S；并且n是0-4。
在本发明的实施方案中，通式III的化合物是那些其中R1和R2独立地选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素。在优选的实施方案中，R1和R2独立地选自H、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、SH、S-C1-4烷基、O-Si(C1-4烷基)(C1-4烷基)(C1-4烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素。在更优选实施方案中，R1和R2独立地选自H、OH、OCH3、O-Si(CH3)2(tBu)、S-Me、SH和NO2。在本发明最优选的实施方案中，R1和R2都是OH或OCH3或者R1是OCH3而R2是OH。
在本发明又一个实施方案中，通式III的化合物包括那些其中R3选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、卤素和CH2-S-(CH2)nAr(其中n是0-4)。在优选的实施方案中，R3选自H、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、N(C1-4烷基)(C1-4烷基)、SH、S-C1-4烷基、NO2和卤素。在更优选的实施方案中，R3选自H、OH、OCH3、SH、SMe、NO2和卤素。在最优选的实施方案中，R3选自H、OH和OCH3。
本发明还包括通式III的化合物其中术语“Ar”是指没有被取代的或被取代的芳基和/或杂芳基，当是杂芳基时，它包括至多两个杂原子，其中任选的取代基独立地选自于下组基团OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素，并且包括没有被取代的或被取代的苯基、呋喃基、噻吩基、吲哚基、萘基、喹啉基等。在本发明的实施方案中，Ar是没有被取代的苯基或被1-4个任选自下列基团的取代基取代的苯基OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素。在优选的实施方案中，Ar是没有被取代的苯基或被1-2个任选自下列基团的取代基取代的苯基OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、N(C1- 4烷基)(C1-4烷基)、SH、S-C1-4烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素。在更优选的实施方案中，Ar是没有被取代的苯基或被1-2个任选自下列基团的取代基取代的苯基OH、OCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SH、SCH3、CF3、OCF3和卤素。在最优选的实施方案中，Ar选自于苯基和3，4-二羟基苯基。
通式III的化合物又包括那些其中R7选自于OH、NH2和OC1-6烷基。在优选的实施方案中，R7选自于OH和NH2。
通式III的化合物还包括那些其中X选自于O和S。在优选的实施方案中，X是O。
在本发明具体的实施方案中，本发明化合物包括(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR1)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(CR2)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR3)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR4)；
(E，E)-2-(苯乙酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(CR5)；(E，E)-2-(苯乙酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR8)；(E，E)-2-(苯丙酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR9)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR11)；(E，E)-2-硫代乙酰氨基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR12)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR13)；(E，E)-2-羧基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR14)；(E，E)-2-羰基甲氧基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR15)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-[3，4-双(叔丁基二甲基硅氧烷基苯乙烯基)]丙烯腈(CR16)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR17)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-双(正丁基二甲基硅氧烷基苯乙烯基))丙烯腈(CR18)；(E，E)-2-(3，4二羟基苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR19)；(E，E)-2-(3，4二羟基苯甲酰氨基)-3-[3，4-双(正丁基二甲基硅氧烷基苯乙烯基)]丙烯腈(CR20)；(E，E)-2-(3，4二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)]丙烯腈(CR21)；(E，E)-2-(β-乙醇酰氨基)-3-(3，5二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR24)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(4-硝基苯乙烯基)丙烯腈(CR27)；
(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(4-硝基苯乙烯基)丙烯腈(CR28)和(E，E)-2-(1-氨基-2，2-二氰基乙烯基)-3-(4-硝基苯乙烯基)丙烯腈(CR29)。
在本发明优选的实施方案中，本发明化合物包括(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR1)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(CR2)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR3)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR4)；(E，E)-2-(苯乙酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(CR5)；(E，E)-2-(苯丙酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR9)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR11)；(E，E)-2-硫代乙酰氨基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR12)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR13)；(E，E)-2-羧基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR14)；(E，E)-2-羰基甲氧基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR15)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR17)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR19)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)]丙烯腈(CR21)；和(E，E)-2-(β-乙醇酰氨基)-3-(3，5二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR24)。
在本发明更优选的实施方案中，本发明的化合物包括(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR4)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR11)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR17)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR19)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR21)；和(E，E)-2-(β-乙醇酰氨基)-3-(3，5二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR24)。
本发明在其范围内包括本发明化合物的药物前体。一般来说，这类药物前体将是本发明化合物的功能性衍生物，它们在体内容易转化成理论上衍生的化合物。选择和制备适当药物前体的常规步骤被描述于例如由H.Bundaard，Elsevier1985年编写的“药物前体的设计。”本发明的一些化合物可以至少有一个不对称中心。当本发明化合物有一个不对称中心时，可以存在对映异构体。当本发明化合物具有两个或多个不对称中心时，它们还可以存在非对映异构体。可以理解为所有这些异构体及其任意比例的混合物都包括在本发明的范围内。
本发明包括放射性标记形式的本发明化合物，例如，本发明化合物通过在其结构中搀入3H或14C或放射活性卤素如125I来标记。
例如本发明化合物可以衍生于被激活的肉桂基化合物和被激活的氰基-取代的亚甲基化合物。所以，本领域普通技术人员可以希望提供基于肉桂基部分的本发明化合物的通用名。但是，基于所形成的酰基腈部分的通常术语例如苯乙烯基酰基腈应当是更合适的。
III.本发明化合物的制备方法按照本发明的另一方面，本发明化合物能够通过类似于本领域所建立的那些工艺方法来制备。所以，本发明的化合物可以通过流程式1所显示的反应顺序来制备流程式1 可用于实施本发明的通式I、II和/或III的化合物能够通过α，β-不饱和醛类如肉桂醛或其各种芳基-取代的类似物(IV)与具有活性α-亚甲基(V)的化合物稠合来制备。在综述中描述了使用价在同一碳原子上的二价基丙二醛(ylidenemallononitrile)作为α-亚甲基成分的相似Knoevenagel稠合(F.Freeman.Chem.Rev.1980，V.80，P.329-350)。例如，可以在极性溶剂如乙醇中在有催化量的弱碱如β-丙氨酸存在下进行这些稠合。反应温度在20到100℃的范围内，取决于所用稠合物质的稳定性。
通式IV和/或V化合物可以在商业上获得如肉桂醛及其3，5-二甲氧基-4-羟基衍生物。使用直接步骤制备通式IV和/或V的其他化合物。例如，可以从相应商业上获得的芳基取代的肉桂酸制备各种R1，R2，R3-羟基取代的肉桂醛。流程式2给出了一个从3，4-二羟基肉桂酸(VI)制备保护了的3，4-二羟基肉桂醛(IVa)的例子。在反应顺序结束时，用本领域普通技术人员所熟知的标准方法除去保护基团。
流程式2
例如通过将硝基还原成氨基的已知方法并进一步转化成二烷基氨基或者通过将羟基转化成卤基的已知方法可以将R1、R2、R3取代基从一个功能基转化成另外一个功能基。
可以获得含有反应性亚甲基(Va)的α-氰基酰胺，例如在A.Gazit等J.Med.Chem.，1991，V.34，P.1896-1907中所描述的。例如，在没有溶剂的情况下将氰基醋酸甲酯(VII)和适当商业上可得到的胺(VIII)加热到100℃12-15小时，接着直接将该混合物真空蒸馏(例如使用Kugelrohr仪器)得到所需的产物(流程式3)。
流程式3 在某些情况下，必须改良上述所列的化学式，例如通过使用保护性基团来防止由反应性基团如所连接的作为取代基的反应基团所引起的副反应。这可以使用常用的保护基团例如在“有机化学的保护基团”McOmie，J.F.W.编辑，P1enum出版社，1973和在Greene，T.W.和Wuts，P.G.M.，“有机合成中的保护基团”，John Wiley&Sons，1991来实现。
可以使用标准技术实现所需化合物盐的形成。例如，在适当溶剂中用酸或碱处理中性化合物并通过过滤、提取或任何其他适当方法分离所形成的盐。
本发明化合物溶剂化物的形成可以随着化合物和溶剂化物的不同而不同。一般来说，溶剂化物的形成是将化合物溶于适当的溶剂中并通过冷却或使用抗溶剂来分离该溶剂化物。该溶剂化物通常在室温条件下干燥。
本发明化合物的前体药物可以是与可获得的羟基、氨基或羧基形成的常用酯。例如，当通式I、II和/或III的化合物中的R1、R2或R3是OH时，可以在碱存在下使用激活的酸将其酰化，并任选在惰性溶剂(例如吡啶中的酸性氯化物)。已经用作前体药物的一些常用的酯是苯酯、脂肪(C8-C24)酯、酰氧基甲基酯、氨基甲酸酯和氨基酸酯。
可以使用本领域中公知的标准方法制备本发明放射标记的化合物。例如，可以使用标准方法将氘搀入本发明的化合物中，例如用氘气和催化剂将适当的前体药物氢化成本发明化合物。另外一种方法，在适当溶剂如二甲基甲酰胺中，有氯胺-T存在时，使用标准碘化条件如[125I]碘化钠可以从相应的三烷基锡(适当的是三甲基锡)制备含有放射活性的碘代的本发明化合物。在惰性溶剂如二噁烷中，有升高的温度，适当的是50-100℃并有四(三苯基膦)钯(O)存在时，可以使用标准钯催化的甲锡烷基化条件从相应非放射活性的卤素适当的碘制备成三烷基锡化合物。
IV.用途正如前面所提到的，本发明人已经制备了通式I、II和III的新化合物。所以，本发明包括本发明化合物的全部用途，包括它们在调节细胞增殖的治疗方法和组合物的用途，它们用于诊断测定的用途和它们用作研究工具的用途。
一方面，本发明提供了一种包括对需要这种治疗的细胞或动物给予有效量的本发明化合物的调节细胞增殖的方法。优选本发明提供了一种包括对需要治疗的细胞或动物给予有效量的本发明化合物来抑制细胞增殖的方法。具体来说，本发明的方法是用于抑制异常的而不是正常细胞的增殖。异常细胞包括任何类型的可引起疾病或病情或涉及疾病或病情的细胞病情并且其中理想的是调节或抑制异常细胞增殖来治疗疾病或病情。异常细胞的例子包括恶性肿瘤或癌细胞以及在炎性病情中过度增殖的细胞。
现已测定出本发明的一些化合物对杀伤癌细胞非常有效并通常不杀伤正常细胞。这些特性使得本发明化合物成为非常有用的抗癌剂。所以，在一个实施方案中，本发明提供了一种包括对需要治疗的细胞或动物给予有效量的本发明化合物来抑制癌细胞增殖的方法。
可用本发明化合物治疗的癌细胞是任意类型的恶性肿瘤，它包括但不限于血细胞生成的恶性病，包括白血病、淋巴瘤和骨髓瘤以及其他类型的恶性肿瘤包括肉瘤、癌、黑瘤、腺瘤、神经系统的恶性肿瘤和泌尿生殖恶性肿瘤。白血病的例子包括急性淋巴母细胞白血病(ALL)、急性髓细胞白血病(AML)、慢性髓细胞白血病(CML)、慢性淋巴细胞白血病(CLL)和幼期骨髓单核细胞白血病(JMML)。可用本发明化合物治疗的ALL的类型包括能够表达bcr-abl融合蛋白的细胞如费城阳性ALL细胞、以及费城阴性ALL细胞。淋巴瘤的例子包括B-细胞Burkitt淋巴瘤、何杰金淋巴瘤、非-何杰金淋巴瘤、包括Ki-1阳性间变性巨细胞淋巴瘤、T细胞淋巴瘤和rare淋巴瘤如组织淋巴瘤。骨髓瘤的例子包括多发性骨髓瘤。
在具体实施方案中，本发明提供了一种给予有效量的选自于下组的化合物来抑制癌细胞增殖的方法(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR1)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(CR2)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR3)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR4)；(E，E)-2-(苯乙酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(CR5)；(E，E)-2-(苯乙酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR8)；(E，E)-2-(苯丙酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR9)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR11)；(E，E)-2-硫代乙酰氨基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR12)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR13)；(E，E)-2-羧基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR14)；(E，E)-2-羰基甲氧基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR15)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-[3，4-双(叔丁基二甲基硅氧烷基苯乙烯基)]丙烯腈(CR16)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR17)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-双(正丁基二甲基硅氧烷基苯乙烯基))丙烯腈(CR18)；(E，E)-2-(3，4二羟基苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR19)；(E，E)-2-(3，4二羟基苯甲酰氨基)-3-[3，4-双(正丁基二甲基硅氧烷基苯乙烯基)]丙烯腈(CR20)；(E，E)-2-(3，4二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)]丙烯腈(CR21)；(E，E)-2-(β-乙醇酰氨基)-3-(3，5二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR24)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(4-硝基苯乙烯基)丙烯腈(CR27)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(4-硝基苯乙烯基)丙烯腈(CR28)和(E，E)-2-(1-氨基-2，2-二氰基乙烯基)-3-(4-硝基苯乙烯基)丙烯腈(CR29)。
在优选的实施方案中，本发明提供了一种给予有效量的选自下列的化合物来抑制癌细胞增殖的方法(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR4)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR11)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR17)；(E，E)-2-(3，4二羟基苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR19)；(E，E)-2-(3，4二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR21)；和(E，E)-2-(β-乙醇酰氨基)-3-(3，5二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR24)。
本领域普通技术人员能够推定本发明的哪一个本发明化合物具有治疗用途，例如抑制任何类型的恶性肿瘤或细胞增殖疾病。在本文所述的实施例35-56的细胞增殖测定法中可以检测化合物抑制细胞生长的功效。所以，本发明的方法、用途和组合物只包括具有所需功效的那些化合物。
可以检测本发明化合物在体外和体内抑制癌细胞，特别是造血细胞恶性生长的能力。已经发现所测试的好几个化合物能够在培养基中以亚-微-摩尔剂量消除癌细胞的生长。具体来说，发现CR4、CR11和CR19对各种细胞类型如急性淋巴母细胞白血病、费城阳性白血病和急性淋巴母细胞白血病非常有效。低纳摩尔剂量的CR4和CR19都对癌细胞有较高毒性，同时不影响正常细胞的生长和分化。长期暴露于低浓度的化合物可以达到这些效果。所以，一方面，本发明提供了一种对需要这种治疗的细胞或动物给予有效量的本发明化合物优选CR4、CR11或CR19来抑制造血癌细胞增殖的方法。
使用鼠模型已经测定出化合物CR4在体内能够有效杀伤人的费城阳性急性淋巴母细胞白血病细胞。CR4能够有效减少肿瘤负载和ALL细胞浸润器官。消除癌细胞生长所需剂量不会导致动物可测定的非特异性损伤。
也测定出了本发明化合物如CR4和CR11是有效的活体外清除剂。活体外给药可以从恶性肿瘤患者除去骨髓细胞并用本发明化合物活体外清除。这样清除将会杀伤肿瘤细胞同时保持正常骨髓的完整。清除后，将这些细胞洗涤并再导入患者。
在活体外清除测定过程中，短期(1-24小时)内将这些细胞暴露于相对高剂量的化合物(50μM-100μM)，从而消除了癌细胞的生长，同时相对不影响在相同时间暴露于相同剂量的正常细胞。诱发编程性细胞死亡会影响癌细胞的死亡。所以，在本发明的又一方面，提供了一种用本发明化合物优选CR4和CR11活体外处理恶性肿瘤患者的骨髓来杀伤恶性肿瘤细胞，然再将处理过(或清除)骨髓再导入给患者的方法。
除了恶性肿瘤，本发明的化合物可用于治疗其他涉及畸变的或异常的细胞增殖的疾病。可用本发明治疗的其他细胞增殖疾病包括炎症疾病、变态反应、自身免疫疾病、移植排斥的牛皮癣、再狭窄、关节硬化和其他任何需要抑制、预防或阻遏细胞生长的疾病。使用本领域普通技术人员所公知的测定法和技术可以测试本发明化合物在特殊细胞增殖疾病的功效。例如，下列参考文献提供了各种疾病的测定法。风湿性关节炎C.S.Kasyapa等“咯利普兰(rolipram)对IL-15-刺激的THF-α生成的调节”，Journal of Immunology(1999)163卷第8236页。变态反应T.Adachi等“一种新Lyn-结合肽抑制剂阻断嗜酸性细胞分化”。Journal of Immunology(1999)163卷第939页。牛皮癣R.Uchert的“IL-15对角蛋白细胞编程性细胞死亡的抑制牛皮癣pathegenosis的新参数”Journal ofImmunology(2000)165卷第224页(在U上有一个umlatt)。牛皮癣A.H.Enk的“T-细胞受体模拟肽及其在T-细胞调节疾病中的有效应用”，International Archives of Allergy andImmunology(2000)第123卷第275页。
本发明化合物是酪氨酸激酶调节剂并且可用于调节酪氨酸激酶的活性，包括抑制酪氨酸激酶的活性来治疗各种疾病如上述所提到的所有增殖疾病。所以，本发明提供了一种对需要治疗的细胞或动物给予有效量的本发明化合物来调节酪氨酸激酶活性的方法。在另一方面，本发明提供了一种对需要治疗的细胞或动物给予有效量的本发明化合物来抑制酪氨酸激酶活性的方法。
当本发明化合物可以通过抑制酪氨酸激酶活性起作用时，本领域普通技术人员将会想到本发明化合物可能的其他作用模式或机理。
本发明化合物优选配制成对人给药的适合体内给药的生物相容形式的药物组合物。所以，在又一方面，本发明提供了含有与适当稀释剂或载体混合的本发明化合物的药物组合物。
用已知制备可对患者给药的药学上可接受的组合物的方法可以制备含有本发明化合物的组合物，即有效量的活性物质与含有药学上可接受的载体的混合物组合。适当的载体例如在Remington药物科学(Remington药物科学，Mack出版公司，Easton，Pa.，美国1985)中进行了描述。在此基础上，该组合物包括但不限于与一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂相关并且包含在具有适当pH和与生理液体等渗的缓冲溶液中的物质的溶液。
本发明化合物可以使用游离碱的形式、盐、溶剂化物和水合物的形式。所有形式都在本发明的范围内。可以形成酸加成盐并提供更方便的使用形式；实践上，使用盐形式本质上相当于使用碱形式。可用来制备酸加成盐的酸最好包括那些当与游离碱结合时，能够形成药学上可接受的盐，即是那些药物剂量盐中的阴离子是对动物器官没有毒性的，从而游离碱固有的有益特性没有被起因于阴离子的副作用所破坏。尽管优选碱性化合物的药学上可接受的盐，但是所有酸加成盐都可以用作游离碱的来源，甚至特殊盐本身只需要作为中间产物，例如当只是为了纯化和鉴别而形成的盐，或者当它作为离子交换步骤制备药学上可接受的盐的中间体。
在本发明范围内的药学上可接受的盐包括那些来自下列酸的盐无机酸如盐酸、硫酸、磷酸和氨基磺酸；和有机酸如醋酸、柠檬酸、乳酸、酒石酸、丙二酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己基磺酸、奎宁酸等。
按照本发明的方法，所述的化合物或盐或溶剂化物可以根据所选的给药途径以各种形式给予患者，这一点对本领普通技术人员是清楚的。本发明组合物可以经口或胃肠外给药。胃肠外给药包括静脉内、腹膜内、皮下、肌肉内、经皮、经鼻、肺内、鞘内、直肠内和局部给药方式。胃肠外给药可以在选定时间内连续输液。
本发明化合物或其盐、溶剂化物可以口服给药，例如与惰性稀释剂或与可吸收的可食carder，或者它可以被包裹在硬或软的壳明胶胶囊中，或者它可以被压制成片，或者它可以被直接搀入饮食的食品中。对口服给药来说，本发明化合物可以与赋型剂混合并以可食片、颊用片、锭剂、胶囊、酏剂、悬浮液、糖浆、糯米纸囊剂等使用。
本发明化合物也可以胃肠外或腹膜内给药。本发明化合物作为游离碱或其药学上可接受的盐或溶剂化物的溶液制备是在水中与表面活性剂如羟丙基纤维素适当混合。也可以在甘油、液体聚乙二醇、DMSO及其含有或不含酒精的混合物或油中制备分散液。在常规的储藏和使用条件下，这些制剂包括防止微生物生长的防腐剂。本领域普通技术人员应当知道怎样制备适当的制剂。例如在Remington药物科学(1990-第18版)和在1999年公开的美国药典国家配方(USP24NF19)中描述了选择和制备适当制剂的常用步骤和成分。
适合于注射使用的药物形式包括无菌水溶液或分散液和用于临时配制无菌注射溶液或悬浮液的无菌粉末。在各种情况中，它们都必须是无菌的并且容易注射存在的内容物必须是流体。
本发明化合物可以对动物单独给药或与药学上可接受的上述载体组合给药，这些载体的比例由化合物的溶解性和化学性、所选择的给药途径和标准制药实际来决定。
本发明化合物和/或组合物的剂量能够根据许多因素的不同而变化，这些因素包括化合物的药物动力学特性、给药方式、受体的年龄、健康和体重、症状的性质和程度、治疗频率和共同治疗的类型，如果需要的话，化合物在所治疗动物中的廓清率。本领域普通技术人员能够根据上述因素决定适当的剂量。本发明化合物可以根据临床反应最初以可调节成所需的剂量来给药。例如，本发明化合物给药范围在大约1纳摩尔到大约100毫摩尔，优选50纳摩尔到50毫摩尔。对活体外短期例如30分钟到1小时或更长时间治疗细胞来说，可以使用比体内疗法更高剂量的化合物；例如可以使用50μM或更高的浓度。
本发明也包括了本发明化合物或组合物抑制细胞增殖优选癌细胞增殖的用途。本发明还包括本发明化合物或组合物制备可抑制细胞增殖优选癌细胞增殖的药物的用途。
本发明化合物能够单独使用或者与其他可调节酪氨酸激酶活性的药剂组合或者与其他治疗细胞增殖疾病的类型(它可以或不可以调节酪氨酸激酶活性)组合使用。本领域中已知的可抑制酪氨酸激酶活性的药剂包括，但不限于，反义核酸和靶向编码受体酪氨酸激酶的核酸的核酶、可调节酪氨酸激酶活性的抗体和其他小分子酪氨酸激酶抑制剂如在US5,891,917、US5,217,999、US5,773,476、US5,935,993、US5,656,655、US5,677,329和US5,789,427中所述的那些。同时用于治疗不同类型恶性肿瘤的治疗细胞增殖疾病的其他类型的疗法有许多例子。通常的疗法是基于恶性肿瘤类型并不能特异性靶向酪氨酸激酶活性。在本发明的具体方面，本发明化合物可以与其他疗法和治疗白血病的治疗剂结合使用。
除了上述治疗用途，本发明化合物也可以用于诊断测定、筛选测定和作为研究工具。
在诊断测定中，本发明化合物可用于鉴别或测定细胞增殖疾病。在这种实施方案中，本发明化合物可以被放射标记(如本文前面所述)并与大量细胞接触。细胞上放射标记的出现表明细胞增殖疾病。在具体实施方案中，本发明放射标记的化合物可用于测定表达bcr-abl融合蛋白的细胞的存在。
在筛选测定中，本发明化合物可用于鉴定调节细胞增殖或酪氨酸激酶活性的其他化合物。作为研究工具，本发明化合物可用于受体结合测定法和研究酪氨酸激酶的定位测定。在这种测定法中，该化合物也可以放射标记。
下列非限定型实施例是详细说明本发明的。
实施例实施例1-34的材料和方法H NMR色谱是在500MHz用四甲基硅烷(TMS，Me4Si)作内标(δ＝0)在Varian Unity Plus色谱仪上获得的。电子喷射质谱是在样本直接导入到离子源的API III加三倍四极质谱(美国)上记录的。薄层色谱层析是用0.25mm厚的UV-254铝-裱背的TCL板(kieselgel 60 F254，默克，德国)上进行的。实施例13的化合物的HPLC分离是在Waters 600色谱分析仪(美国)Nova-Pak C183.9×300mm柱(Waters，美国)上进行的。真空蒸馏是用Kugelrohr仪器(Aldrich，美国)在蒸馏炉上所标温度进行的。3，5-二甲氧基-4-羟基肉桂醛、4-硝基肉桂醛/3，4-二甲氧基肉桂酸、3，4-二羟基肉桂酸、3，4-二甲氧基苯甲胺、苯甲胺、苯乙胺、苯丙胺、氰基醋酸甲酯、2-氰基硫代乙酰胺、2-氰基乙酰胺、氰基醋酸、β-乙醇胺、2-氨基-1-亚丙基-1，1，3-三羰基腈是从Aldrich(美国)购买的并可回收使用。试剂是来自Aldrich(美国)。溶剂是从Caledon(加拿大)购买的。
实施例1N-(氰基乙酰基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(A1) 向3，4-二甲氧基苯甲胺(2.7ml，18mmol)中加入氰基醋酸甲酯(1.6ml，18mmol)。将该反应加热到100℃14小时。冷却得到暗棕色固体，从乙醇中重结晶得到2.90g产物(69％得率)。
该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)3.62(s，2H，CH2CN)，3.78(s，6H，(OMe)2)，4.34(br.s.，2H，NHCH2Ph)，6.84(dd，1H，J1.95和8.1Hz，H6)，6.88(d，1H，J8.1Hz，H5)，6.93(d，1H，J1.95 Hz，H2)，7.80(br.s.，1H，NH).MS，m/e(相对强度，％)235(19)[M+H]+，252(100)[M+NH4]+，257(33)[M+Na]+.
实施例2N-(氰基乙酰基)-3，4-二羟基苯甲酰胺(A2) 在氩气下-78℃向N-(氰基乙酰基)-3，4-二甲氧基苯甲酰胺(实施例1，0.2g，0.85mmol)的20ml的CH2Cl2中加入三溴化硼(0.24ml，2.56mmol)的2.5ml的CH2Cl2。2小时后，将反应升到室温并搅拌过夜。将该反应冷却到0℃，加入10ml的1N HCl，该溶液用3×50ml的乙酸乙酯萃取，冲洗有机相到中性pH，用MgSO4干燥至干。残余物通过硅胶色谱层析法(CHCl3-MeOH，20∶1)纯化得到黄色固体(0.07g，40％得率)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)2.83(s，(OH)2)，3.60(s，2H，CH2CN)，4.25(br.s.，2H，NHCH2Ph)，6.63(dd，1H，J1.95和8.1Hz，H6)，6.75(d，1H，J8.1Hz，H5)，6.79(d，1H，J1.95Hz，H2)，7.71(br.s.，1H，NH).MS，m/e(相对强度，％)207(38)[M+H]+，224(100)[M+NH4]+，229(2.6)[M+Na]+.
实施例3(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR11)； 向3，5-二甲氧基-4-羟基肉桂醛(0.042g，0.2mmol)和N-(氰基乙酰基)-3，4-二羟基苯甲酰胺(实施例2，0.042g，0.2mmol)的10ml乙醇中加入3mg的β-丙氨酸并将该反应回流6小时。加水并将固体从5ml乙醇重结晶两次得到0.06g(75％)的红色固体。该产物得到下列分析数据
NMR(CD3COCD3，δ，ppm)2.81(s，(OH)3)，3.89(s，6H，(OMe)2)，4.39(br.s.，2H，NHCH2Ph)，6.68(dd，1H，J1.95和8.1Hz，Hz，H6’)，6.76(d，1H，J8.1Hz，H5’)，6.86(d，1H，J1.95 Hz，H2’)，7.07(br.s，2H，H2+6)，7.16(dd，1H，J11.7和15.1Hz，PhCCHCCN烯族)，7.37(d，1H，J 15.1Hz，PhCH烯族)，7.70(br.s.，1H，NH)，7.98(dd，1H，J0.75和11.7Hz，CHCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)397(100)[M+H]+，414(14)[M+NH4]+.
实施例4N-(氰基乙酰基)苯甲酰胺(A3) 按照实施例1中所述将氰基醋酸甲酯(1.3ml，14mmol)加入到苯甲胺(1.5ml，14mmol)来制备该化合物。直接从该反应混合物(Kugelrohr仪器(Aldrich)，0.1mmHg，炉温180-190℃)真空蒸馏该化合物得到淡白色固体(2.34g，95％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)3.39(s，2H，CNCH2)，4.46(d，2H，J5.4 Hz，NHCH2Ph)，6.40(br.s.，1H，NH)，7.24-7.36(m，5H，Ph).MS，m/e(相对强度，％)175(64)[M+H]+，192[M+NH4]+.
实施例53，4-二甲氧基肉桂醇(A6) 向0.42g(2.0mmol)的3，4-二甲氧基肉桂酸的50ml MeOH溶液中加入SOCl2(50μl)并在60℃将该混合物搅拌5小时。去干甲醇并在20℃无水THF(50ml)中用1M的氢化二异丁基铝(8.0mmol)THF溶液还原所得到的3，4-二甲氧基肉桂酸甲酯1小时。加水，混合物用EtOAc萃取，用MgSO4干燥并真空蒸馏(Kugelrohr仪器(Aldrich)，0.1mm Hg，炉温185-190℃)得到淡白色固体，得率0.36g(92％)，熔点70-71℃。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)3.77，3.82(2×s，2×3H，OMe+OMe)，4.19(d，2H，J5.0Hz，CH2OH)，6.25(dt，1H，J5.0和15.5Hz，PhCCH烯族)，6.51(d，1H，J 15.5 Hz，PhCH烯族)，6.89(m，2H，H5+6)，7.05(br.s.，1H，H2).MS，m/e(相对强度，％)177(100)[M-OH]+，195(4)[M+H]+，212(59)[M+NH4]+，217(26)[M+Na]+.
实施例63，4-二甲氧基肉桂醛(A7) 向重铬酸吡啶鎓(3.88g，10.3mmol)和4g研细的新鲜激活的分子筛3_的20ml的CH2Cl2混合物中加入3，4-二甲氧基肉桂醇的10ml的CH2Cl2(实施例5，1.00g，5.1mmol)。将该反应搅拌2小时，加入0.5ml的甲醇，残余物通过硅胶并用300ml的醋酸乙酯冲洗。蒸发后，用硅胶色谱层析法(己烷-EtOAc，5∶1)纯化该化合物得到结晶油(0.62g，63％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)3.90(2×s，2×3H，OCH3+OCH3)，6.70(dd，1H，J7.6和16.0Hz，PhC＝CH烯族)，7.05(d，1H，J 8.3 Hz，H5)，7.28(dd，1H，J1.4和8.3Hz，H6)，7.37(d，1H，J 1.4 Hz，H2)，7.60(d，1H，J 16.0 Hz，PhCH烯族)，9.65(d，1H，J7.6Hz，CHO).MS，m/e(相对强度，％)193(100)[M+H]+，210(26)[M+NH4]+.
实施例7(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(CR2)
按照实施例3所述将3，4-二甲氧基肉桂醛(实施例6，0.04g，0.2mmol)加入N-(氰基乙酰基)苯甲酰胺(实施例4，0.036g，0.2mmol)来制备该化合物。回流1小时和从乙醇重结晶后得到黄色固体(0.045g，62％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)3.90(s，2×3H，OMe+OMe)，4.57(d，2H，J＜2Hz，NHCH2Ph)，7.08(br.s.，1H，H2)，7.17(dd，1H，J11.5和15.2Hz，PhCCHCCN烯族)，7.23-7.42(m，8H，芳香族+H5+H6+PhCH烯族)，7.90(br.t，1H，NH)，8.05(dd，1H，J0.55和11.5Hz，CHCN烯族)。
实施例8(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR4)-方法A 将三溴化硼(0.033ml，0.34mmol)加入(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(实施例7，0.04g，0.11mmol)。残余物通过硅胶色谱层析法(CHCl3-MeOH，10∶1)纯化得到橘黄色固体(0.02g，55％得率)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)2.86(br.s.，2H，(OH)2)，4.55(m，2H，NHCH2Ph)，6.90-7.42(m，10H，Ph+Ph’+烯族)，7.87(br.s.，1H，NH)，8.02(dd，1H，J＜0.5和11.4Hz，CHCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)295(61)[M+H-CN]+， 321(100)[M+H]+，338(30)[M+NH4]+.
实施例93，4-双(叔丁基二甲基硅氧基)肉桂酸(A8)
向3.6g(20mmol)的3，4-二羟基肉桂酸的300ml MeOH溶液中加入SOCl2(100μl)并在60℃将该混合物搅拌5小时。将甲醇挥干并在50℃用10.2g(68mmol)的t-BuMe2SiCl和9.2g(136mmol)咪唑的100ml的DMF处理所得到的甲酯0.5小时。将混合物用水稀释并用己烷萃取。己烷挥干。残余物真空蒸馏(Kugelrohr仪器(Aldrich)，0.1mm Hg，炉温200-210℃)并在-20℃从己烷结晶得到白色固体，得率7.5g(89％)，熔点57-58℃。该产物得到下列分析数据MS，m/e(相对强度，％)423(100)[M+H]+，440(98)[M+NH4]+。
实施例103，4-双(叔丁基甲基硅氧基)肉桂醇(A9) 按照实施例5所述在20℃无水THF(25ml)中用1M的氢化二异丁基铝(4.0mmol)THF溶液处理3，4-二羟基肉桂酸双(BDMS)醚甲酯(实施例9，0.42g，1.0mmol)1小时。真空蒸馏(Kugelrohr仪器(Aldrich)，0.1mmHg，炉温185-200℃)后，得到白色粘稠油，得率0.33g(85％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)0.23，0.24(2×s，2×6H，Me2Si+Me2Si)，1.00，1.02(2×s，2×9H，t-BuSi+t-BuSi)，4.19(d，2H，J 4.9 Hz，CH2OH)，6.22(dt，1H，J4.9和16.0Hz，PhCCH烯族)，6.49(d，1H，J 16.0 Hz，PhCH烯族)，6.85(d，1H，J 8.2 Hz，H5)，6.92(dd，1H，J2.1和8.2Hz，H6)，6.97(d，1H，J 2.1 Hz，H2).MS，m/e(相对强度，％)377(100)[M-OH]+，395(2)[M+H]+，412(15)[M+NH4]+.
实施例113，4-双(叔丁基二甲基硅氧基)肉桂醛(A10) 按照实施例6所述将3，4-双(叔丁基二甲基硅氧基)肉桂醇(实施例10，0.2g，0.5mmol)的5ml的CH2Cl2溶液加入重铬酸吡啶鎓(0.38g，1mmol)和1g分子筛3_的20ml的CH2Cl2混合物来制备该化合物。残余物通过硅胶并用300ml的EtOAc-己烷1∶1冲洗。蒸发后化合物用硅胶色谱层析法(EtOAc-己烷，5∶1)纯化得到油状物(0.15g，76％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)0.26和0.28(2×s，2×6H，Me2Si+Me2Si)，1.01 and 1.02(2×s，2×9H，t-BuSi+t-BuSi)，6.60(dd，1H，J7.7和15.9Hz，PhCCH烯族)，7.01(dd，1H，J＜0.5和8.9Hz，H6)，7.27(m，2H，H2+5)，7.60(d，1H，J 15.9 Hz，PhCH烯族)，9.65(d，1H，J 7.7 Hz，CHO).MS，m/e(相对强度，％)367(3)[M+H-CN]+，393(100)[M+H]+，410(10)[M+NH4]+.
实施例12(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-[3，4-双(叔丁基二甲基硅氧烷基苯乙烯基)]丙烯腈(CR18) 按照实施例3将3，4-双(叔丁基二甲基硅氧基)肉桂醛(实施例11，0.100g，0.26mmol)加入N-(氰基乙酰基)苯甲酰胺(实施例4，0.044g，0.26mmol)来制备该化合物。回流2.5小时后，用硅胶色谱层析法(己烷-EtOAc，15∶1)纯化得到黄色固体(0.090g，64％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)0.24和0.25(2×s，2×6H，Me2Si+Me2Si)，1.01 and 1.02(2×s，2×9H，t-BuSi+t-BuSi)，4.55(br.s.，2H，NHCH2Ph)，7.00(d，1H，J 8.5 Hz，H4)，7.12(dd，1H，J11.7和15.6Hz，PhCCHCCN烯族)，7.24-7.43(m，8H，芳香族和烯族质子)，7.93(br.s.，1H，NH)，8.02(dd，1H，J＜0.5和11.7Hz，CHCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)523(30)[M+H-CN]+，540(24)[M+NH4-CN]+，549(89)[M+H]+，566(100)[M+NH4]+.
实施例13(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)]丙烯腈(CR4)-方法B 在20℃用60μl 1M的氟化四正丁基胺在2ml干THF中的THF溶液处理(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-[3，4-双(正丁基二甲基硅氧烷基苯乙烯基)]丙烯腈(实施例12，0.028g，0.052mmol)0.5小时。蒸发后，将该化合物溶于5ml的氯仿-甲醇，20∶1，通过硅胶并用氯仿-甲醇，20∶1冲洗。残余物用HPLC色谱层析法(MeCN-HO，60∶40，在340nmUV测定)纯化得到橘黄色固体(0.010g，62％)。分析数据与实施例8中所述制备的化合物相同。
实施例14(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR19) 按照实施例3所述，将肉桂醛(0.018ml，0.14mmol)加入N-(氰基乙酰基)-3，4-二羟基苯甲酰胺(实施例2，0.03g，0.14mmol)来制备该化合物。回流2小时和从乙醇重结晶后，得到黄色固体(0.027g，59％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)2.82(br.s.，2H，(OH)2)，4.39(br.s.，2H，NHCH2Ph)，6.70(dd，1H，J1.9和8.2Hz，H6’)，6.76(d，1H，J 8.2 Hz，H5’)，6.87(d，1H，J 1.9 Hz，H2’)，7.30(dd，1H，J11.3和15.7Hz，PhCCHCCN烯族)，7.47和7.73(2×m，6H，arc芳香族质子和PhCH烯族)，7.82(br.s.，1H，NH)，8.04(dd，1H，J＜0.5 and 11.3Hz，CHCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)321(100)[M+H]+，338(65)[M+NH4]+.
实施例15(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-[3，4-双(叔丁基二甲基硅氧基苯乙烯基)]丙烯腈(CR20) 按照实施例3所述，将3，4-双(叔丁基二甲基硅氧基)肉桂醛(实施例11，0.015g，0.038mmol)加入N-(氰基乙酰基)-3，4-二羟基苯甲酰胺(实施例2，0.0079g，0.038mmol)来制备该化合物。回流2小时并从乙醇重结晶后，得到黄色固体(0.014g，64％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)0.22和0.24(2×s，2×6H，Me2Si+Me2Si)，1.01和1.03(2×s，2×9H，t-BuSi+t-BuSi)，2.72(br.s.，2H，(OH)2)，4.41(br.s.，2H，NHCH2Ph)，6.68-7.42(m，8H，芳香族和烯族质子)，7.75(br.s.，1H，NH)，8.00(dd，1H，J＜0.5和12.0Hz，CHCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)555(5)[M+H-CN]+，572(8)[M+NH4-CN]+，581(46)[M+H]+，598(100)[M+NH4]+.
实施例16(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR21)
按照实施例13所述，在20℃，在1.5ml的干THF中，用60μl的1M的四正丁基氟化铵的THF溶液处理(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-[3，4-双(叔丁基二甲基硅氧基苯乙烯基)]丙烯腈(实施例15，0.026g，0.044mmol)0.5小时。纯化后，得到黄色固体(0.006g，43％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)4.38(s，1H，NHCH2Ph)，6.67-7.22(m，6H，Ph+Ph’)，7.05(dd，1H，J11.8和15.5Hz，PhC＝CH烯族)，7.34(d，1H，J15.5Hz，PhCH烯族)，7.70(br.s，1H，NH)，8.00(d，1H，J 11.8 Hz，CH＝CCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)186(86)[(HO)2C6H3CH＝CHCH＝CCN]+，202(28)，242(100)[M+H-C6H3(OH)2]+，353(13)[M+H]+，370(6)[M+NH4]+.
实施例17(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR1) 按照实施例3所述，将肉桂醛(0.048ml，0.38mmol)加入N-(氰基乙酰基)苯甲酰胺(实施例4，0.066g，0.38mmol)来制备该化合物。回流1小时并从乙醇中重结晶后得到白色固体(0.074g，68％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)4.55(s，1H，NHCH2Ph)，7.24-7.51(m，11H，Ph+Ph’+PhCCHCCN烯族)，7.72(br.d，1H，J 6.5 Hz，CHCN烯族)，7.98(br.s.，1H，NH)，8.05(d，1H，J 11.7 Hz，PhCH烯族).MS，m/e(相对强度，％)289(100)[M+H]+，306(92)[M+NH4]+.
实施例18(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR3) 按照实施例3所述，将3，5-二甲氧基-4-羟基肉桂醛(0.10g，0.48mmol)加入N-(氰基乙酰基)苯甲酰胺(实施例4，0.084g，0.48mmol)来制备该化合物。回流3小时并从乙醇中重结晶后得到黄色固体(0.10g，57％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)3.90(s，6H，(OMe)2)，4.55(m，2H，NHCH2Ph)，7.08(br.s，2H，H2+6)，7.17(dd，1H，J11.5和15.2Hz，PhCCHCCN烯族)，7.22-7.41(m，6H，Ph’+PhCH烯族)，7.90(br.s.，1H，NH)，8.01(dd，1H，J0.55和11.7Hz，CHCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)275(14)[M+H-CN-MeOH-MeOH]+，307(9)[M+H-CN-MeOH]+，339(4)[M+H-CN]+，365(100)[M+H]+，382(16)[M+NH4]+.
实施例19N-(氰基乙酰基)苯基丙酰胺(A5) 按照实施例1所述，将氰基醋酸甲酯(0.98ml，11.1mmol)加入到苯丙胺(1.58ml，11.1mmol)来制备该化合物。直接从反应混合物中真空蒸馏(Kugelrohr仪器(Aldrich)，0.1mm Hg，炉温195-200℃)该化合物得到淡白色固体(2.18g，97％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)1.88(q，2H，J 7.3 Hz，PhCCH2)，2.66(t，2H，J7.3Hz，PhCH2)，3.28(s，2H，CNCH2)，3.33(dt，2H，J7.3和6.6Hz，PhCCCH2)，6.02(br.s.，1H，NH)，7.15-7.30(m，5H，Ph).MS，m/e(相对强度，％)203(88)[M+H]+，220(100)[M+NH4]+.
实施例20N-(氰基乙酰基)苯基乙酰胺(A4) 按照实施例1所述，将氰基醋酸甲酯(1.1ml，12.4mmol)加入到苯乙胺(1.55ml，12.4mmol)来制备该化合物。直接从反应混合物中真空蒸馏(Kugelrohr仪器(Aldrich)，0.1mm Hg，炉温190-195℃)该化合物得到淡白色固体(2.14g，91％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)2.80(t，2H，J 7.6 Hz，PhCH2)，3.46(br.t，2H，J7.6Hz，PhCCH2)，3.54(s，2H，CNCH2)，7.20-7.31(m，5H，Ph)，7.51(br.s.，1H，NH).MS，m/e(相对强度，％)189(100)[M+H]+，206(99)[M+NH4]+.
实施例21(E，E)-2-(苯乙酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(CR5) 按照实施例3所述，将3，4-二甲氧基肉桂醛(实施例6，0.1g，0.52mmol)加入到N-(氰基乙酰基)苯乙胺(实施例20，0.1g，0.52mmol)来制备该化合物。回流1小时并从乙醇中重结晶后获得黄色固体(0.12g，63％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)2.91(t，2H，J 7.5 Hz，Ph’CH)，3.59(br.t，2H，J7.5Hz，Ph’CCH)，3.88，3.89(2×s，2×3H，OCH3+OCH3)，7.04(d，1H，J 8.6 Hz，H5)，7.16(dd，1H，J11.8和15.0Hz，PhC＝CH烯族)，7.20-7.42(m，9H，芳香族+烯族)，7.97(d，1H，J 11.8 Hz，CH＝CCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)363(100)[M+H]+，380(34)[M+NH4]+.
实施例22(E，E)-2-(苯乙酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR8) 按照实施例3所述，将3，5-二甲氧基-4-羟基肉桂醛(0.1g，0.48mmol)加入到N-(氰基乙酰基)苯乙胺(实施例20，0.091g，0.48mmol)来制备该化合物。残余物用硅胶色谱层析法(CHCl3-己烷，1∶1)纯化得到黄色固体(0.15g，83％得率)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)2.95(t，2H，J 7.6 Hz，CH2Ph’)，3.62(m，2H，CH2CPh’)，3.94(s，6H，(OMe)2)，7.11(s，2H，H2+6)，7.19(dd，1H，J11.7和15.3Hz，PhCCHCCN烯族)，7.23-7.36(m，5H，Ph’)，7.41(d，1H，J 15.3 Hz，PhCH烯族)，7.45(br.s.，1H，NH)，7.99(d，1H，J 11.7 Hz，CHCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)379(100)[M+H]+，396(7)[M+NH4]+.
实施例23(E，E)-2-(苯丙酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR9) 按照实施例3所述，将3，5-二甲氧基-4羟基肉桂醛(0.10g，0.48mmol)加入到N-(氰基乙酰基)苯丙胺(实施例19，0.097g，0.48mmol)来制备该化合物。回流3小时后，残余物用硅胶色谱层析法(CHCl3-己烷，1∶1)纯化得到棕色固体(0.17g，90％得率)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)2.09(q，2H，J 7.5 Hz，NHCCH2CPh’)，2.85(t，2H，J 7.5 Hz，CH2Ph’)，3.57(m，2H，CH2CPh’)，4.06(s，6H，(OMe)2)，7.24(s，2H，H2+6)，7.32(dd，1H，J11.7和15.3 Hz，PhCCHCCN烯族)，7.33-7.46(m，5H，Ph’)，7.53(d，1H，J 15.3 Hz，PhCH烯族)，7.58(br.s.，1H，NH)，8.11(d，1H，J 11.7 Hz，CHCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)331(40)，348(30)，359(34)，376(32)，393(100)[M+H]+，410(24)[M+NH4]+.
实施例24(E，E)-2-硫代乙酰氨基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR12) 按照实施例3所述，将3，5-二甲氧基-4-羟基肉桂醛(0.15g，0.72mmol)加入到2-氰基硫代乙酰胺(0.073g，0.72mmol)来制备该化合物。回流1小时后，残余物在TLC-板上用己烷-乙酸乙酯，1∶1纯化得到红色固体(0.10g，52％得率)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)2.85(br.s.，OH+NH2)，3.91(s，6H，(OMe)2)，7.11(s，2H，H2+6)，7.20(dd，1H，J11.6和15.1Hz，PhCCHCCN烯族)，7.46(d，1H，J 15.1 Hz，PhCH烯族)，8.22(dd，1H，J0.73和11.6Hz，CHCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)289(100)，291(60)[M+H]+，312(8)[M+Na]+.
实施例25(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR13) 按照实施例3所述，将3，5-二甲氧基-4-羟基肉桂醛(0.1g，0.48mmol)加入到2-氰基乙酰胺(0.04g，0.48mmol)来制备该化合物。回流3小时并从乙醇重结晶后，得到橘黄色固体(0.083g，63％得率)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)2.82-2.88(br.s.，OH+NH2)，3.90(s，6H，(OMe)2)，7.08(s，2H，H2+6)，7.16(dd，1H，J11.6和15.1Hz，PhCCHCCN烯族)，7.38(d，1H，J 15.1 Hz，PhCH烯族)，7.96(dd，1H，J0.73和11.6Hz，CHCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)275(100)[M+H]+，292(28)[M+NH4]+.
实施例26(E，E)-2-羧基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR14) 按照实施例3所述，将3，5-二甲氧基-4-羟基肉桂醛(0.1 5g，0.72mmol)加入到氰基乙酸(0.061g，0.72mmol)来制备该化合物。回流1小时并从乙醇重结晶后，得到黄色固体(0.15g，75％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)3.00(br.s.，OH)，3.91(s，6H，(OMe)2)，7.12(s，2H，H2+6)，7.21(dd，1H，J11.6和15.1Hz，PhCCHCCN烯族)，7.50(d，1H，J 15.1 Hz，PhCH烯族)，8.04(dd，1H，J0.73和11.6Hz，CHCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)276(66)[M+H]+，293(100)[M+NH4]+.
实施例27(E，E)-2-羰基甲氧基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR15) 按照实施例3所述，将3，5-二甲氧基-4-羟基肉桂醛(0.15g，0.72mmol)加入到氰基乙酸甲酯(0.064ml，0.72mmol)来制备该化合物。回流1小时并从乙醇重结晶后，得到橘黄色固体(0.2g，90％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)2.84(br.s.，OH)，3.84(s，3H，COOMe)，3.91(s，6H，(OMe)2)，7.12(s，2H，H2+6)，7.21(dd，1H，J11.6和15.1Hz，PhCCHCCN烯族)，7.53(d，1H，J 15.1 Hz，PhCH烯族)，8.05(dd，1H，J0.73 and 11.6Hz，CHCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)290(100)[M+H]+，307(99)[M+NH4]+.
实施例28(E，E)-2-乙酰氨基-3-[3，4-双(叔丁基二甲基硅氧基苯乙烯基)]丙烯腈(CR16) 按照实施例3所述，将3，4-双(叔丁基二甲基硅氧基)肉桂醛(实施例11，0.15g，0.38mmol)加入到2-氰基乙酰胺(0.032g，0.38mmol)来制备该化合物。回流0.5小时后，通过硅胶色谱层析法(己烷-EtOAc，5∶1)纯化得到结晶油(0.10g，57％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)0.22 和0.24(2×s，2×6H，Me2Si+Me2Si)，1.01和1.03(2×s，2×9H，t-BuSi+t-BuSi)，7.01，7.23-7.29(m，3H，芳香族)，7.11(dd，1H，J11.9和15.3Hz，PhC＝CH烯族)，7.40(d，1H，J15.3 Hz，PhCH烯族)，7.98(d，1H，J 11.9 Hz，CH＝CCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)459(100)[M+H]+，476(89)[M+NH4]+实施例29(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR17) 按照实施例13所述，在20℃，在苯中，用过量的1M的四正丁基氟化铵的THF溶液处理(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，4-双(叔丁基二甲基硅氧基苯乙烯基)]丙烯腈(实施例28，0.1g，0.22mmol)0.5小时。纯化后，得到黄色固体(0.04g，85％)。该产物得到下列分析数据MS，m/e(相对强度，％)231(83)[M+H]+，248(100)[M+NH4]+.
实施例30N-(氰基乙酰基)β-乙醇酰胺(A11) 向β-乙醇胺(1.37ml，22.6mmol)中加入氰基乙酸甲酯(2.0ml，22.6mmol)。将该反应物在100℃加热30小时。冷却得到棕色固体，从乙醇中重结晶得到2.10g产物(71％)。该产物得到下列分析数据MS，m/e(相对强度，％)129(30)[M+H]+，146(100)[M+NH4]+.
实施例31(E，E)-2-(β-乙醇酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR24) 向3，5-二甲氧基-4-羟基肉桂醛(0.018g，0.086mmol)中加入N-(氰基乙酰基)β-乙醇酰胺(实施例30，0.010g，0.086mmol)。回流2小时并在硅胶上用CHCl3-MeOH，5∶1纯化得到黄色固体(0.024g，87％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)3.47，3.67(2×m，4H，NHCH2+CH2OH)，3.90(s，6H，OCH3+OCH3)，7.07(br.s，2H，H2+6)，7.16(dd，1H，J11.7和15.2Hz，PhC＝CH烯族)，7.31(br.s，1H，NH)，7.38(d，1H，J 15.2 Hz，PhCH烯族)，7.97(d，1H，J 11.7 Hz，CH＝CCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)319(70)[M+H]+，341(100)[M+Na]+.
实施例32(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(4-硝基苯乙烯基)丙烯腈(CR27) 按照实施例3所述，将4-硝基肉桂醛(0.022g，0.12mmol)加入到N-(氰基乙酰基)苯甲酰胺(实施例4，0.022g，0.12mmol)来制备该化合物。回流1小时后，产物用硅胶色谱层析法(CHCl3-MeOH，5∶1)纯化得到黄色固体(0.033g，81％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)4.56(br.s，2H，NHCH2)，7.24-7.38(m，6H，Ph’+NH)，7.47(dd，1H，J11.1和15.2 Hz，PhC＝CH烯族)，7.62(d，1H，J 15.2Hz，PhCH烯族)，8.02，8.32(2×br.d，4H，J8.8和8.3Hz，Ph)，8.08(d，1H，J 11.1 Hz，CH＝CCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)334(100)[M+H]+，351(16)[M+NH4]+，356(28)[M+Na]+.
实施例33(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(4-硝基苯乙烯基)丙烯腈(CR28) 按照实施例3所述，将4-硝基肉桂醛(0.009g，0.05mmol)加入到N-(氰基乙酰基)3，4-二羟基苯甲酰胺(实施例2，0.010g，0.05mmol)来制备该化合物。回流2小时并从乙醇中重结晶后，得到黄色固体(0.007g，39％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)2.81，2.83(2×br.s，2H，OH+OH)，4.39(br.s，2H，NHCH2)，6.69(br.d，1H，J＜0.5和7.6Hz，H6’)，6.76(d，1H，J 7.6 Hz，H5’)，6.86(br.d，1H，J＜0.5Hz，H2’)，7.47(dd，1H，J11.7和15.2Hz，PhC＝CH烯族)，7.61(d，1H，J 15.2 Hz，PhC烯族)，7.91(br.s，1H，NH)，8.02，8.31(2×br.d，4H，J8.2和8.8Hz，Ph)，8.06(d，1H，J 11.7 Hz，CH＝CCN烯族).MS，m/e(相对强度，％)331(21)[M-OH-OH]+，348(47)[M-OH]+，366(100)[M+H]+，383(97)[M+NH4]+.
实施例34(E，E)-2-(1-氨基-2，2-二氰基乙烯基)-3-(4-硝基苯乙烯基)丙烯腈(CR29) 按照实施例3所述，将4-硝基肉桂醛(0.051g，0.29mmol)加入到2-氨基-1-丙烯基-1，1，3-三腈(0.038g，0.29mmol)来制备该化合物。回流4小时并从乙醇中重结晶后，得到黄色固体(0.08g，51％)。该产物得到下列分析数据NMR(CD3COCD3，δ，ppm)7.54(dd，1H，J11.1和15.8Hz，PhC＝CH烯族)，7.67(d，1H，J 15.8 Hz，PhCH烯族)，7.99(d，1H，J 11.1 Hz，CH＝CCN烯族)，8.08，8.32(2×br.d，4H，J8.8和8.8Hz，Ph).MS，m/e(相对强度，％)309(100)[M+NH4]+，314(67)[M+Na]+.
实施例35在培养物中CR4对正常骨髓分化的作用按照Fausser和Messner(1978，Blood，52(6)143-8)和Messner和Fausser(1980，Blut，41(5)327-33)并作一些改动进行CFU-GEMM测定。简而言之，将肝素处理过的骨髓细胞在Percoll(1.077gm/ml)(Pharmacia Fine Chemical，Piscataway NJ)上铺层并在4℃以400g离心分离10分钟以除去中性白细胞和RBCs。将2×105个细胞/ml的分级分离的BM细胞在补加30％FCS(CanseraRexdale，ON.)或正常人血浆、含有G-CSF(10ng/ml，Amgen)、IL-3(40U/ml，Immunex)、MGF(50ng/ml，Immunex)、红细胞生成素(2u/ml，Epprex)或TPO(10ng/ml，Amgen)、5×10-5M β-2-巯基乙醇和特定浓度的CR4的细胞因子混合液的含有0.9％(vol/vol)甲基纤维素的IMDM(OCI，Toronto)中培养。将1ml体积的培养混合物平铺在35mm培养皿上并在37℃、5％CO2湿润环境中温育。在14天评价所有培养基物BFU-E集落(定义为500个以上血红蛋白化细胞或3个或更多个红细胞类亚集落的聚集体)数、CFU-GM集落(定义为粒性白细胞或单核细胞-巨噬细胞或二者)数、CFU-Meg集落(包括4个或更多巨核细胞)数和CFU-GEMM集落(含有所有各种细胞的混合群体)数。
图1所示的结果表明在至多5μM的剂量下CR4对正常骨髓的毒性可忽略不计。在10μM剂量下CR4开始产生一些BFU-E集落形成的抑制作用，但同时显著刺激了CFU-GM集落数。
实施例36在培养物中低剂量的CR4对费城阳性急性淋巴母细胞白血病的杀伤在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的Ph+ALL细胞平铺在35mm的在含特定浓度的CR4的0.9％(vol/vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)中有αMEM(Gibco)加10％FCS(Cansera Rexdale，ON.)的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养物放在37℃、5％CO2的湿润环境中。在12天或更早时用倒置显微镜计算由20个以上的细胞组成的集落数。
图2中所示结果表明在低纳摩尔剂量(35-100)下CR4对Ph ALL细胞增殖和存活有显著抑制作用。在相同浓度下CR4对正常细胞没有影响。
实施例37在培养物中低剂量的CR4对费城阳性Z119急性淋巴母细胞白血病细胞的杀伤在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的Z119细胞以1×104个细胞/ml的密度平铺在35mm的在含特定浓度的CR4的0.9％(vol/vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)中有IMDM(OCI，Toronto)加20％FCS(Cansera Rexdale，ON.)培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养物放在37℃、5％CO2的湿润环境中。在7天或更早时用倒置显微镜计算由20个以上的细胞组成的集落数。
图3中所示结果表明在低纳摩尔剂量下CR4对Z119 ALL细胞增殖和存活有显著抑制作用。在相同浓度下CR4对正常细胞没有影响。
实施例38在培养物中低剂量的CR4对AML-3急性髓白血病细胞的杀伤在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的0CI-AML-3细胞以3.3×103个细胞/ml的密度平铺在35mm含αMEM加20％FCS(Cansera Rexdale，ON.)、0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)和特定浓度的CR4的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养基在37℃、5％CO2的湿润环境中温育。在5-6天用倒置显微镜对含20以上的细胞的集落计数。
图4中所示结果表明在低纳摩尔剂量(300-600nM)CR4对AML-3细胞增殖和存活有显著抑制作用。在相同浓度CR4对正常细胞没有影响。
实施例39在培养基中低剂量的CR4对Ly-MN淋巴瘤细胞的杀伤在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的Ly-MN细胞平铺在35mm的含IMDM(OCI，Toronto)加20％人cord血浆、0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)和特定浓度的CR4的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养基放在37℃、5％CO2的湿润环境中。在5天或更早时用倒置显微镜对20个以上细胞组成的集落计数。
图5中所示结果表明在低纳摩尔剂量CR4对细胞增殖和存活有显著抑制作用并且在2.5μM有抑制作用。在相同浓度CR4对正常细胞没有影响。
实施例40在培养基中CR4对原发性幼期骨髓(PrimaryJuvenile Myelo)-单核细胞白血病细胞的杀伤将肝素处理过的来自JMML患者的骨髓细胞在Percoll(1.077gm/ml)(Pharmacia Fine Chemical，Piscataway NJ)上铺层并在4℃以400g离心分离10分钟以除去中性白细胞和RBCs。将细胞进一步分级分离并在Miltenyi MS柱(Miltenyi Biotec GmbH，德国)纯化获得CD34+细胞的早期先祖群体。将分离的BM CD34+细胞以1×104个细胞/ml的密度在补加30％FCS(Cansera Rexdale，ON.)和特定浓度的CR4的含0.9％(vol/vol)甲基纤维素的IMDM(OCI，Toronto)中培养。将1ml体积的培养混合物平铺在35mm培养皿上并在37℃、5％CO2湿润环境中温育。在12天或更早时用倒置显微镜对由20以上的细胞组成的集落计数。
图6所示的结果表明CR4具有中等程度的杀伤原始JMML细胞的能力，在5μM浓度时达到80-90％抑制率。
实施例41在培养基中低剂量的CR4对OCI-LY2淋巴瘤细胞的杀伤在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的OCI-LY2细胞平铺在35mm的含IMDM(OCI，Toronto)加20％人脊髓血浆、0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)和特定浓度的CR4的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养基放在37℃、5％CO2的湿润环境中。在5天或更早时用倒置显微镜对20以上个细胞组成的集落计数。
图7中所示结果表明在低毫摩尔剂量CR4对细胞增殖和存活有显著抑制作用(在2.5μM，90％)。在相同浓度CR4对正常细胞没有影响。
实施例42在培养基中CR17和CR21对费城阳性ALL细胞的杀伤在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的ALL细胞平铺在35mm的含αMEM(Gibco)加20％FCS(Cansera Rexdale，ON.)、0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)和特定浓度的C化合物的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养基在37℃、5％CO2的湿润环境中温育。在12天用倒置显微镜对含20以上的细胞的集落计数。
图8中所示结果表明在1-2.5μM剂量CR17对细胞生长有显著抑制作用。在5μM浓度CR21对细胞生长没有影响。
实施例43在培养基中CR17和CR21对费城阳性ALL细胞的杀伤在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的ALL细胞平铺在35mm的含αMEM(Gibco)加20％FCS(Cansera Rexdale，ON.)、0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)和特定浓度的化合物的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养基在37℃、5％CO2的湿润环境中温育。在12天用倒置显微镜对含20以上的细胞的集落计数。
图9中所示结果表明在1-2.5μM剂量CR17和CR21都对细胞生长有显著抑制作用。
实施例44在培养基中CR24对费城阳性ALL细胞的杀伤在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的ALL细胞平铺在35mm的含αMEM(Gibco)加20％FCS(Cansera Rexdale，ON.)、0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)和特定浓度的CR24的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养基在37℃、5％CO2的湿润环境中温育。在9天用倒置显微镜对含20以上的细胞的集落计数。
图10中所示结果表明在0.5μM的低浓度时CR24可有效抗Ph+ALL细胞，这证实了在2.5和5μM之间实际上完全抑制了细胞生长。
实施例45在培养基中CR19对费城阳性ALL细胞的杀伤在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的ALL细胞平铺在35mm的含αMEM(Gibco)加20％FCS(Cansera Rexdale，ON.)、0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)和特定浓度的CR19的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养基在37℃、5％CO2的湿润环境中温育。在9天用倒置显微镜对含20以上的细胞的集落计数。
图11中所示结果表明在250和500nM之间的纳摩尔浓度之间CR19可高效抗Ph+ALL细胞。
实施例46在培养基中CR19对正常骨髓分化的作用按照Fauser和Messner(1978，Blood，52(6)1243-8)和Messner和Fausser(1980，Blut，41(5)327-33)并作一些改动进行CFU-GEMM测定。简而言之，将肝素处理过的骨髓细胞在Percoll(1.077gm/ml)(Pharmacia Fine Chemical，Piscataway NJ)上铺层并在4℃以400g离心分离10分钟以除去中性白细胞和RBCs。将2×105个细胞/ml的分级分离的细胞在补加30％FCS(CanseraRexdale，ON.)或正常人血浆、含有G-CSF(10ng/ml，Amgen)、IL-3(40U/ml，Immunex)、MGF(50ng/ml，Immunex)、红细胞生成素(2u/ml，Epprex)或TPO(10ng/ml，Amgen)、5×10-5M β-2-巯基乙醇和特定浓度的CR19的细胞因子混合物的含有0.9％(vol/vol)甲基纤维素的IMDM(OCI，Toronto)中培养。将1ml体积的培养混合物平铺在35mm培养皿上并在37℃、5％CO2湿润环境中温育。在14天评价所有培养基中BFU-E集落(定义为500个以上血红蛋白化细胞或3个或更多个红细胞类亚集落聚集体)数和CFU-C集落(定义为粒性白细胞或单核-巨噬细胞或二者)数。
图12所示的结果表明在2.5μM CR19对BFU-E集落发展的显著抑制，尽管在该浓度它也促进了CFU-C集落的形成。在5μM显示出刺激作用并且BFU-E集落实际上不存在。
实施例47CR24、CR17和CR21对正常骨髓分化的作用按照Fauser和Messner(1978，Blood，52(6)1243-8)和Messner和Fausser(1980，Blut，41(5)327-33)并作一些改动(British Journal of Haematology，1992，80，第40-48页)进行CFU-GEMM测定。简而言之，将肝素处理过的骨髓细胞在Percoll(1.077gm/ml)(Pharmacia Fine Chemical，Piscataway NJ)上铺层并在4℃以400g离心分离10分钟以除去中性白细胞和RBCs。将2×105个细胞/ml的分级分离的BM细胞在补加30％FCS(CanseraRexdale，ON.)或正常人血浆、含有G-CSF(10ng/ml，Amgen)、IL-3(40U/ml，Immunex)、MGF(50ng/ml，Immunex)、红细胞生成素(2u/ml，Epprex)或TPO(10ng/ml，Amgen)、5×10-5M β-2-巯基乙醇和特定浓度的CR19的细胞因子混合液的含有0.9％(vol/vol)甲基纤维素的IMDM(OCI，Toronto)中培养。将1ml体积的培养混合物平铺在35mm培养皿上并在37℃、5％CO2湿润环境中温育。在14天评价所有培养基中BFU-E集落(定义为500个以上血红蛋白化细胞或3个或更多个红细胞类亚集落聚集体)数和CFU-C集落(定义为粒性白细胞或单核-巨噬细胞或二者)数。
图13所示的结果表明在10或20μM的浓度CR24对骨髓集落的形成有最小抑制，而CR17和CR21都能在较高的20μM剂量抑制CFU-E集落的形成。
实施例48用CR4体内清除正常骨髓将肝素处理过的骨髓细胞在Percoll(1.077gm/ml)(PharmaciaFine Chemical，Piscataway NJ)上铺层并在4℃以400g离心分离10分钟以除去中性白细胞和RBCs。
为了清除步骤，将细胞以1×106/ml再悬浮于含或不含50μMCR4的完全培养基。在37℃、5％CO2将细胞与CR4温育2.5小时。在结束时将细胞用培养基充分冲洗以除去CR4，然后以2×105个细胞/ml在含补加30％FCS(Cansera Rexdale，ON.)或正常人血浆、含有G-CSF(10ng/ml，Amgen)、IL-3(40U/ml，Immunex)、MGF(50ng/ml，Immunex)、红细胞生成素(2u/ml，Epprex)或TPO(10ng/ml，Amgen)、5×10-5M β-2-巯基乙醇和特定浓度的CR19的细胞因子混合液的含有0.9％(vol/vol)甲基纤维素的IMDM(OCI，Toronto)中培养。将1ml体积的培养混合物平铺在35mm培养皿上并在37℃、5％CO2湿润环境中温育。在14天评价所有培养基中BFU-E集落(定义为500个以上血红蛋白化细胞或3个或更多个红细胞类亚集落聚集体)数、CFU-C集落(定义为粒性白细胞或单核-巨噬细胞或二者)数和CFU-GEMM集落(含所有细胞的混合群体)数。
图14所示的结果表明暴露于50μM CR4 2.5小时不会导致对集落形成的显著抑制。而BFU-E集落出现轻微的下降，CFU-C集落数实际上显著增加。
实施例49用CR4体外清除Z119急性淋巴母细胞白血病为了清除测定，将细胞再悬浮于含或不含CR4的完全培养基并在37℃、5％CO2将细胞与CR4温育0-5小时。然后将细胞用培养基充分冲洗以除去CR4，再悬浮并在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的细胞平铺在35mm含αMEM(Gibco)加20％FCS(CanseraRexdale，ON.)、0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)和特定浓度的CR19的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养基放在37℃、5％CO2的湿润环境中。在9天或更早时用倒置显微镜对含20个以上的细胞的集落计数。
图15中所示结果表明在所检查的浓度CR4显示出快速杀伤Z119细胞。50μM时，在只暴露2.5小时时CR4显示出完全抑制，而在相同时期用25μM的CR4能够达到85％的杀伤。将细胞暴露于25μM的CR45小时导致随后细胞生长的完全脱离。
实施例50用CR4体外清除OCI-Ly2淋巴瘤细胞为了清除测定，将细胞再悬浮于含或不含CR4的完全培养基并在37℃、5％CO2将细胞与CR4温育0-5小时。然后将细胞用培养基充分冲洗以除去CR4，再悬浮并在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的细胞以5×103个细胞/ml平铺在35mm的含IMDM(OCI，Toronto)加20％人cord血浆的0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养基放在37℃、5％CO2的湿润环境中。在5天或更早时用倒置显微镜对含20个以上的细胞的集落计数。
图16中所示结果表明在25-50μM只暴露5小时时CR4显示出显著杀伤(90％)OCI-Ly2细胞。同时在所实验的更低的12.5μM剂量也能够达到显著抑制。
实施例51用CR4体外清除OCI-AML-3急性骨髓白血病细胞为了清除测定，将细胞再悬浮于含或不含CR4的完全培养基并在37℃、5％CO2将细胞与CR4温育0-5小时。然后将细胞用培养基充分冲洗以除去CR4，再悬浮并在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的细胞以5×103个细胞/ml平铺在35mm的含αMEM(Gibco)加10％FCS(Cansera Rexdale，ON.)的0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养基放在37℃、5％CO2的湿润环境中。在5天或更早时用倒置显微镜对含20个以上的细胞的集落计数。
图17中所示结果表明在50μM只暴露2.5-5小时时CR4显示出显著杀伤OCI-AML-3细胞。同时在所实验的更低的25μM剂量也能够达到显著抑制。
实施例52用CR4体外清除Romas B细胞Burkitt淋巴瘤细胞为了清除测定，将细胞再悬浮于含或不含CR4的完全培养基并在37℃、5％CO2将细胞与CR4温育0-5小时。然后将细胞用培养基充分冲洗以除去CR4，再悬浮并在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的细胞平铺在35mm的含RPMI1640(Gibco)加10％FCS(Cansera Rexdale，ON.)的0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养基放在37℃、5％CO2的湿润环境中。在12天或更早时用倒置显微镜对含20个以上的细胞的集落计数。
图18中所示结果表明在50μM暴露5小时后CR4显示出显著杀伤(70％)Ramos细胞。
实施例53用CR4杀伤HuNS1多发性骨髓瘤在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的HUNS1细胞以1×104个细胞/ml平铺在35mm的含αMEM加20％ FCS(CanseraRexdale，Ont.)、0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)和特定浓度的CR4的培养皿(Nunc，Gibco)上。将细胞培养基在37℃、5％CO2的湿润环境中温育。在5-6天用倒置显微镜对含20个以上的细胞的集落计数。
图19中所示结果表明在高纳摩尔到低毫摩尔之间的剂量(在2.5μM＞90％)CR4显著抑制了细胞增殖和存活。在相同浓度下CR4对正常细胞没有影响。
实施例54对NOD-SCID小鼠的费城阳性急性淋巴母细胞白血病的体内治疗照射(350拉德)NOD-SCID小鼠并注射5×106费城阳性Z119急性淋巴母细胞白血病细胞。24小时后，皮下植入Alzet微型渗透泵(Alza公司，Paolo Alto，CA)，该泵含20mM的CR4的50％DMSO/基质溶液或只有50％DMSO/基质。使用Alzet2001泵，保持总体积200μl并在7-10天内每小时1μl。7天后替换该泵。各小鼠接受每日剂量0.154mg的CR4。
14(图20A)和21(图20B)天后，杀死小鼠并从前后肢抽取骨髓。制备单一细胞悬浮液，溶解红细胞并用PE标记的同型、抗人CD19和抗人HLA-DR抗体给样本染色以测定Z119细胞的存在。这些抗体都不能与鼠性细胞交叉反应。
在第14天，也对骨髓细胞培养基进行操作以评估Z119细胞的存在。将5×104BM细胞在补加有30％由FCS(Cansera Rexdale，ON.)和正常人血浆组成的1∶1混合物的含0.9％(vol/vol)甲基纤维素的IMDM(OCI，Toronto)中培养。不加细胞因子。在这些条件下没有鼠源细胞的生长。将1ml体积的培养基混合物平铺在35mm培养皿上并在37℃、5％CO2的湿润环境中温育。在9天评价所有培养基的ALL集落数。
图20A和20B中所示的结果表明在第14和21天杀死时，在所有用CR4治疗的小鼠中可以观察到相对于DMSO治疗对照小鼠骨髓的ALL浸润显著下降。
在对照小鼠中，可以观察到脾、肝和肾的大量浸润，以及ALL细胞在外周血液中的存在。除了ALL细胞浸润到骨髓下降90％外，用CR4治疗降低了器官和血液的ALL浸润到可测定水平之下。
这样，CR4在50nM到5μM浓度范围抗各种癌细胞包括急性淋巴母细胞白血病、费城阳性ALL、急性骨髓白血病、骨髓瘤和B-谱系淋巴瘤是高度有效的。同时，当在CR4存在下温育正常细胞直到达到10-20μM或更大浓度时可以看到最小毒性。CR4特别对抗bcr-abl转化的费城阳性细胞具有活性，在40nM的低浓度时达到＞90％的去除率。CR4在高剂量(25-50μM)体外清除费城阳性ALL、AML和淋巴瘤测定时也是高效的，在2.5到5小时的暴露时间引起＞90％的生长抑制。在相同的剂量和时间不影响正常骨髓生长和分化。CR4对癌细胞显示出高水平毒性和最小非特异性细胞毒性损伤的结合。
CR4在整个动物模型中也是高效(实施例54)。该化合物显示了好的滞留特性，静脉注射30分钟后在血液中还是可以测定到的。在人PH+ALL的鼠模型中，CR4在两周期间引起ALL浸润到ALL细胞90％以上的下降，将ALL细胞浸润到肝脏、肾脏、脾脏和外周血液中的百分率下降到可测定的水平。相反，只用载体治疗的对照小鼠显示出所有这些器官的巨大浸润。没有观察到非特异性毒性的迹象。
实施例55用CR11体外清除正常骨髓将肝素处理过的骨髓细胞在Percoll(1.077gm/ml)(PharmaciaFine Chemical，Piscataway NJ)上铺层并在4℃以400g离心分离10分钟以除去中性白细胞和RBCs。
为了清除步骤，将细胞以1×106/ml再悬浮于含或不含50μMCR11的完全培养基。在37℃、5％CO2将细胞与tryrphostin温育7小时。在结束时将细胞用培养基充分冲洗以除去CR11，然后以2×105个细胞/ml在含补加30％FCS(Cansera Rexdale，ON.)或正常人血浆、含有G-CSF(10ng/ml，Amgen)、IL-3(40U/ml，Immunex)、MGF(50ng/ml，Immunex)、红细胞生成素(2u/ml，Epprex)或TPO(10ng/ml，Amgen)、5×10-5M β-2-巯基乙醇的细胞因子混合液的含有0.9％(vol/vol)甲基纤维素的IMDM(OCI，Toronto)中培养。将1ml体积的培养混合物平铺在35mm培养皿上并在37℃、5％CO2湿润环境中温育。在14天评价所有培养基中BFU-E集落(定义为500个以上血红蛋白化细胞或3个或更多个红细胞类亚集落聚集体)数、CFU-C集落(定义为粒性白细胞或单核-巨噬细胞或二者)数和CFU-GEMM集落(含所有细胞的混合群体)数。
图21所示的结果表明暴露于50μM CR11 7小时不会导致对集落形成的任何显著抑制。BFU-E、CFU-GEMM和CFU-C集落都是正常的。
实施例56用CR11体外清除费城阳性急性淋巴母细胞白血病为了清除测定，将细胞再悬浮于含或不含CR11的完全培养基并在37℃、5％CO2将细胞与CR4温育0-7小时。然后将细胞用培养基充分冲洗以除去CR11，再悬浮并在没有外源性生长因子存在下，将1ml体积的细胞平铺在35mm含αMEM(Gibco)加20％ FCS(CanseraRexdale，ON.)、0.9％(vol/.vol)甲基纤维素(Fluka，瑞士)的培养皿(Nunc，Gibco)上。将培养基放在37℃、5％CO2的湿润环境中。在9天或更早时用倒置显微镜对含20个以上的细胞的集落计数。
图22中所示结果表明在50μM暴露7小时后CR22显示出完全杀伤PH+ALL细胞。
实施例57溶解费城(PH+)ALL系Z119和Z181(5×106个细胞/点)并用Bcr-Abl抗体免疫沉淀用溶胞缓冲液洗两次并用激酶测定缓冲液洗一次沉淀物，再悬浮于含不同浓度的CR4的相同缓冲液中。加入10μCi33PγATP后，在室温将该沉淀物与药物一起温育10分钟。加入SDS-PAGE还原样本缓冲液后20分钟终止反应并在8-16％SDS-PAGE凝胶上分离。将产物转移到硝基纤维素膜上并用放射自显影法显影。
图23所示的结果表明在Z199和Z181 ALL细胞系中1到10μM浓度的CR4化合物有效阻断了Bcr-Abi激酶活性。
实施例58将费城(PH+)ALL系Z119(5×106个细胞/点)与不同浓度的CR4预温育5小时并用Jak2抗体免疫沉淀将细胞溶解在溶胞缓冲液中并用Jak2抗体免疫沉淀。加入10μCi33PγATP后，用溶胞缓冲液洗两次并用激酶测定缓冲液洗一次沉淀物。加入SDS-PAGE还原样本缓冲液后20分钟终止反应并在8-16％SDS-PAGE凝胶上分离。将产物转移到硝基纤维素膜上并用放射自显影法显影。
图24所示的结果表明在6μM浓度显著地抑制了Jak2激酶活性并且在较高浓度还可以阻断。
当参考目前被认为是优选实施例描述本发明时，应当清楚本发明并不是限定于所公开的实施例中。相反，本发明目的是覆盖包括在本发明所附权利要求的构思和范围的各种改良和等同方案。
本文参考了所有公开出版物、专利和专利申请的全部加以引用，就如同参考了每个单独公开出版物、专利或专利申请的全文具体地和分别地加以引用。
权利要求
1.通式I的化合物及其盐、溶剂化物或水合物 其中R1和R2独立地选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素；R3选自H、OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、O-Si(C1-6烷基)(C1-6烷基)(C1-6烷基)、NO2、卤素和CH2-S-(CH2)nAr；R4选自C(X)R5、SO3Ar、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、P(O)(OH)2、P(O)(OC1-6烷基)2和C(NH2)＝C(CN)2；X选自于O、S、NH和N-C1-6烷基；R5选自NH2、OH、NH(CH2)pAr、NH(CH2)pOH、(CH2)pOC1-6烷基、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NHNH2、NHC(O)NH2、NHC(O)C1-6烷氧基、N-吗啉基和N-吡咯烷基；并且Ar是用1-4个取代基取代的或没有被取代的芳基或杂芳基，其中取代基独立地选自OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素；n是0到4；并且p是1-4。
2.按照权利要求1的化合物，其中R1和R2独立地选自H、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、SH、S-C1-4烷基、O-Si(C1-4烷基)(C1-4烷基)(C1-4烷基)、NO2、CF3、OCF3和卤素。
3.按照权利要求2的化合物，其中R1和R2独立地选自H、OH、OCH3、O-Si(CH3)2(tBu)、S-Me、SH和NO2。
4.按照权利要求3的化合物，其中R1和R2都是OH或者R1和R2都是OCH3。
5.按照权利要求4的化合物，其中R1是OCH3并且R2是OH。
6.按照权利要求1的化合物，其中R3选自H、OH、C1-4烷基、C1-4烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、N(C1-4烷基)(C1-4烷基)、SH、S-C1-4烷基、NO2和卤素。
7.按照权利要求6的化合物，其中R3选自H、OH、OCH3、SH、SMe、NO2和卤素。
8.按照权利要求7的化合物，其中R3选自H、OH和OCH3。
9.按照权利要求1的化合物，其中R4选自于C(X)R5和C(NH2)＝C(CN)2。
10.按照权利要求9的化合物，其中R4是C(X)R5。
11.按照权利要求10的化合物，其中X选自于O和S。
12.按照权利要求10的化合物，其中R5选自NH2、OH、NH(CH2)pAr、NH(CH2)pOH和C1-4烷氧基。
13.按照权利要求12的化合物，其中p是1-3。
14.按照权利要求13的化合物，其中R5选自NH2、OH、NH(CH2)pAr、NH(CH2)pOH和OCH3。
15.按照权利要求14的化合物，其中p是1-2。
16.按照权利要求1的化合物，其中Ar是未取代的苯基或用1-4个取代基取代的苯基，其中的取代基任选于下组OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素。
17.按照权利要求14的化合物，其中Ar是未取代的苯基或用1-4个取代基取代的苯基，其中的取代基任选于下组OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-6烷基、N(C1-6烷基)(C1-6烷基)、SH、S-C1-6烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素。
18.按照权利要求16和17中的任何一个的化合物，其中Ar是未取代的苯基或用1-2个取代基取代的苯基，其中的取代基任选于下组OH、C1-6烷基、C1-6烷氧基、NH2、NH-C1-4烷基、N(C1-4烷基)(C1-4烷基)、SH、S-C1-4烷基、NO2、CF3、OCF3和卤素。
19.按照权利要求18的化合物，其中Ar是未取代的苯基或用1-2个取代基取代的苯基，其中的取代基任选于下组OH、OCH3、NH2、NHCH3、N(CH3)2、SH、S-CH3、CF3、OCF3和卤素。
20.按照权利要求19的化合物，其中Ar选自于苯基和3，4-二羟基苯基。
21.按照权利要求1的化合物，选自(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR1)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(CR2)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR3)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR4)；(E，E)-2-(苯基乙酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(CR5)；(E，E)-2-(苯基乙酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR8)；(E，E)-2-(苯基丙酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR9)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR11)；(E，E)-2-硫代乙酰氨基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR12)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR13)；(E，E)-2-羧基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR14)；(E，E)-2-羰基甲氧基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR15)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-[3，4-双(正丁基二甲基硅氧烷基苯乙烯基)]丙烯腈(CR16)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR17)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-[3，4-双(叔丁基二甲基硅氧烷基苯乙烯基)]丙烯腈(CR18)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR19)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-[3，4-双(正丁基二甲基硅氧烷基苯乙烯基)]丙烯腈(CR20)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)]丙烯腈(CR21)；(E，E)-2-(β-乙醇酰氨基)-3-(3，5二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR24)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(4-硝基苯乙烯基)丙烯腈(CR27)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(4-硝基苯乙烯基)丙烯腈(CR28)和(E，E)-2-(1-氨基-2，2-二氰基乙烯基)-3-(4-硝基苯乙烯基)丙烯腈(CR29)。
22.按照权利要求21的化合物，选自(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR1)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(CR2)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR3)；(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR4)；(E，E)-2-(苯基乙酰氨基)-3-(3，4-二甲氧基苯乙烯基)丙烯腈(CR5)；(E，E)-2-(苯基丙酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR9)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR11)；(E，E)-2-硫代乙酰氨基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR12)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR13)；(E，E)-2-羧基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR14)；(E，E)-2-羰基甲氧基-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR15)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR17)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR19)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)]丙烯腈(CR21)；和(E，E)-2-(β-乙醇酰氨基)-3-(3，5二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR24)。
23.按照权利要求22的化合物，选自(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR4)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR11)；(E，E)-2-乙酰氨基-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR17)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR19)；(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR21)；和(E，E)-2-(β-乙醇酰氨基)-3-(3，5二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR24)。
24.化合物(E，E)-2-(苯甲酰氨基)-3-(3，4-二羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR4)。
25.化合物(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-(3，5-二甲氧基-4-羟基苯乙烯基)丙烯腈(CR11)。
26.化合物(E，E)-2-(3，4-二羟基苯甲酰氨基)-3-苯乙烯基丙烯腈(CR19)。
27.一种组合物，它含有权利要求1到26中的任何一项的化合物并混有药学上可接受的稀释剂或载体。
28.权利要求1到26中任何一项所述的可调节细胞增殖的化合物在制备可调节细胞增殖药物方面的用途。
29.权利要求1到26中任何一项所述的可抑制细胞增殖的化合物在抑制细胞增殖方面的用途。
30.权利要求1到26中任何一项所述的可抑制癌细胞增殖的化合物在抑制癌细胞增殖药物方面的用途。
31.权利要求1到26中任何一项所述的化合物在治疗癌症方面的用途。
32.按照权利要求30或31的用途，其中所述的癌症是造血细胞癌。
33.按照权利要求30或31的用途，其中所述的癌症是白血病、淋巴组织瘤、骨髓瘤或恶性肿瘤。
34.按照权利要求33的用途，其中白血病是急性淋巴母细胞白血病、费城阳性白血病、费城阴性白血病、急性髓细胞白血病、慢性骨髓白血病、慢性淋巴细胞白血病或幼稚型脊髓单核细胞白血病。
35.按照权利要求34的用途，其中所述的白血病是急性淋巴母细胞白血病。
36.一种调节细胞增殖的方法，包括对需要治疗的细胞或动物给予有效量的权利要求1到26任一项所述的可调节细胞增殖的化合物或权利要求27的组合物。
37.一种抑制细胞增殖的方法，包括对需要治疗的细胞或动物给予有效量的权利要求1到26任一项所述的可抑制细胞增殖的化合物或权利要求27的组合物。
38.一种抑制癌细胞增殖的方法，包括对需要治疗的细胞或动物给予有效量的权利要求1到26任一项所述的可抑制癌细胞增殖的化合物或权利要求27的组合物。
39.一种治疗癌症的方法，包括对需要治疗的细胞或动物给予有效量的权利要求1到26任一项所述的可抑制癌细胞增殖的化合物或权利要求27的组合物。
40.按照权利要求38或39的方法，其中所述的癌症是造血细胞癌。
41.按照权利要求38或39的方法，其中所述的癌症是白血病、淋巴组织瘤、骨髓瘤或恶性肿瘤。
42.按照权利要求41的方法，其中所述的白血病是急性淋巴母细胞白血病、攻击性费城阳性白血病、急性髓细胞白血病、慢性骨髓白血病、慢性淋巴细胞白血病或幼稚型脊髓单核细胞白血病。
43.按照权利要求42的方法，其中所述的白血病是急性淋巴母细胞白血病。
全文摘要
本发明公开了一种可用于治疗各种细胞增殖疾病如恶性肿瘤的苯乙烯基丙烯腈的新化合物。该化合物为通式(I)。
文档编号A61K31/66GK1429202SQ01808936
公开日2003年7月9日 申请日期2001年4月12日 优先权日2000年4月13日
发明者C·M·罗夫曼, T·格兰伯格, O·鲁诺瓦, P·德明, N·沙尔夫 申请人:Hsc研究与开发有限合伙公司