专利名称：联用单克隆抗体在治疗急性损伤所致局部水肿上的新用途的制作方法
技术领域：
本发明是有关联合应用抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗选择素类分子单克隆抗体(anti-Selectinmonoclonal antibodies)，在治疗急性损伤引起的局部水肿上的新用途，涉及生物制药领域.
背景技术：
单克隆抗体是一类蛋白质分子，在基础研究，临床诊断和治疗，疾病预防有广泛的应用.自80年代末90年代初兴起的噬菌体基因库技术和基因工程重组抗体技术领域的发展，使单克隆抗体技术由基础研究转入实际应用研究和开发。目前美国FDA批准上市的67种生物制品中，治疗和预防用单克隆抗体和基因工程抗体就有9种，待批的有36种。其开发前景已获广泛肯定。蛋白质种内繁多，机体内每一生理，病理过程涉及众多蛋白质，目前单一单克隆抗体的生物制剂已不能满足需要，单克隆抗体联合应用是一个新的发展方向。正如鸡尾酒疗法开创了爱滋病治疗的新纪元一样。急性损伤是一个很常见的健康问题，常见于车祸，运动损伤，烧伤，战伤，又常继发于心肌梗塞，脑血管意外，手术(器官移植，整容及内脏大型手术)等。损伤的病理过程较复杂，在肌体受到伤害的同时，肌体本身的白细胞系统，激肽系统，补体系统，血管内皮系统等被激活，对受伤的组织产生反应，就会有红，肿，热，痛.这种急性局部水肿常常阻碍肌体的恢复，甚至使治疗失败。
机体损伤后白细胞和损伤处血管内皮的交互作用是引起损伤后局部水肿的主要因素.细胞间粘附分子-1和选择素类分子在此过程中起着重要的信号传递作用。
细胞间粘附分子-1是一种糖蛋白，多存在血管内皮细胞上，选择素分子目前已知有白细胞选择素(L-selectin)，内皮选择素(E-selectin)和血小板选择素(P-selectin)亦多表达在白细胞和血管内皮细胞上.在机体受损时，细胞间粘附分-1(ICAM-1)和选择素类分子(Selectins)会在受损而激活的内皮细胞上和白细胞上表达增加，这些分子帮助白细胞集合在损伤部位，附在血管内皮，透过血管壁进入损伤部位，此过程中白细胞对血管内皮细胞产生损害，使内皮细胞间间隙加大，导致渗出增多，引起局部水肿。
目前尚无治疗急性损伤后局部水肿的药物，临床上是等待局部水肿的自然消退，这样常增加了患者的危险，阻碍了恢复，也增加了患者的费用。
发明内容
为了克服目前对急性损伤后局部水肿无药治疗的不足，本专利提供联合应用细胞间粘附分子-1单克隆抗体和抗选择素类分子的单克隆抗体来治疗损伤后局部水肿这一新的用途。
本专利联合应用义为1.抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗内皮选择素单克隆抗体(anti-E-Selectin monoclonal antibody)。
2.抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗白细胞选择素单克隆抗体(anti-L-Selectin monoclonal antibody)。
3.抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗血小板选择素单克隆抗体(anti-P-Selectin monoclonal antibody)。
本发明是利用抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体和抗选择素类分子单克隆抗体可阻断细胞间粘附分子-1和选择素类分子帮助白细胞粘附到血管内皮上的特性，从而阻断白细胞在急性损伤过程中对血管内皮产生损害而导致的渗出增多，进而产生治疗水肿的效果.本发明用特定波长的光(非热效应性光源)照射注射有光敏剂的动物皮肤，在照射部位产生急性组织损伤并引起局部水肿为动物模型，然后立即经静脉或腹腔注射抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗选择素类分子单克隆抗体(anti-Selectin monoclonal antibodies)，用抗白细胞选择素分子单克隆抗体(anti-L-Selectin antibody)为对照抗体，此为目前唯一进入2期临床实验的治疗急性损伤的药物(美国蛋白质设计试验室Protein Design Lab)，在损伤后36小时内，每隔6小时重复注射，并测量光照处水肿面积，记录结果，进行统计分析并制图。
在本发明的动物试验中，联合应用抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体和抗内皮选择素分子单克隆抗体产生良好效果，在光照射后48小时内完全抑制局部水肿的产生，经统计和其他2组有显著性差异，P＜0.01。
在附图中，X轴表示每隔6小时所测量的分组资料，测量时间分别为光照射和注射抗体后6小时，12小时，18小时，24小时，30小时，36小时，Y轴表示水肿面积，结果用平方厘米表示，所有结果经统计学处理，P＜0.01。柱1表示该组小鼠在光照后，接受静脉注射大白鼠Ig G 2a，30微克/小鼠，每6小时注射一次。
柱2表示该组小鼠在光照后，接受静脉注射细胞间粘附分子-1单克隆抗体和内皮选择素分子单克隆抗体各30微克/小鼠，每6小时注射一次。柱2在图中为空白，表示该组小鼠的光照处在测量时水肿面积为0。
柱3表示该组小鼠在光照后，接受静脉注射抗白细胞选择素分子单克隆抗体30微克/小鼠，每6小时注射一次。
所有小鼠的局部水肿在光照射40小时后，面积难以测量，故未制图。
具体实施例方式以下对本发明作详细说明，但不意味着限制本发明的内容。试验基本准备动物试验用昆明小白鼠，17-20克重(同济医科大学动物试验中心)，雌雄各半，试验前一天用电动理发刀剃掉小鼠背部毛发，并使用市售退毛剂去掉残余毛根，然后经尾静脉注入血卟啉衍生物(HematoporphyrinDerivative，HPD，购自Trend Pharma&Tech Ltd.)，剂量5毫克/公斤，24小时后用激光治疗仪ALA 600型(武昌激光设备厂)波长630nm，照射剂量60J/平方厘米.所有试验用小鼠分为3组第1组-该组小鼠在光照后，立即经尾静脉注射大白鼠Ig G2a，30微克/小鼠，每6小时注射一次，作为对照。
第2组-该组小鼠在光照后，立即经尾静脉注射抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体(anti-ICAM-1 monoclonal antibody，购自PharMingen公司)和抗内皮选择素分子单克隆抗体(anti-E-Selectinmonoclonal antibody，购自PharMingen公司)各30微克/小鼠，每6小时注射一次。
第3组 该组小鼠在光照后，立即经尾静脉注射白细胞选择素分子单克隆抗体(anti-L-Selectin monoclonal antibody，购自PharMingen公司)30微克/小鼠，每6小时注射一次。
测量时间分别为光疗和注射抗体后 6小时，12小时，18小时，24小时，30小时，36小时。用游标卡尺测量，纪录测量结果，因水肿面积近似于椭园形，所以测量结果经公式面积＝A/2×B/2×3.14计算，其中A表示测量的长轴，B表示测量的短轴，结果用平方厘米表示，经统计学处理(P＜0.01)后，结果制图如附图。
权利要求
1.本发明是有关联合抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体(anti-ICAM-1 monoclonalantibody)和抗选择素类单克隆抗体(anti-Selectin monoclonal antibodies)在治疗急性损伤所致局部水肿上的应用，此新用途可用于国家一类新药的开发，
2.根据权利要求1所述的本发明的联合应用单克隆抗体为下列组合一.抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗内皮选择素单克隆抗体(anti-E-Selectin monoclonal antibody)二.抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗白细胞选择素单克隆抗体(anti-L-Selectin monoclonal antibody)三.抗细胞间粘附分子-1单克隆抗体(anti-ICAM-1 monoclonal antibody)和抗血小板选择素单克隆抗体(anti-P-Selectin monoclonal antibody)
3.根据权利要求1所述的本发明的应用对象是人或动物。
4.根据权利要求1所述的本发明的每一种单克隆抗体的应用剂量是0.5毫克/每公斤体重-5毫克/每公斤体重。
5.根据权利要求1所述的本发明在治疗急性损伤所致局部水肿上的治疗时，每4-6小时重复注射一次。
6.根据权利要求1所述的本发明的应用途径是经静脉注射或经腹腔注射，或经静脉注射和经腹腔注射结合。
7.根据权利要求1所述的本发明所用单克隆抗体义为可结合细胞间粘附分子-1(ICAM-1)和选择素类分子(Selectins)的单克隆抗体和功能上的类似物，如来自此二抗体的片段，抗体的重组形式，抗体的人源化形式。
8.根据权利要求1所述的本发明所用携带抗体的注射用液为0.9％生理盐水或其它临床静脉注射稀释用液体。
全文摘要
本发明是有关联合抗细胞间粘附分子－1单克隆抗体和抗选择素分子类单克隆抗体用于治疗急性损伤引起的局部水肿的临床上新用途，涉及生物制药领域。联合应用抗细胞间粘附分子－1单克隆抗体和抗选择素分子类单克隆抗体去阻断损伤处血管内皮吸引白细胞的信号传递，抑制此过程中白细胞对血管内皮产生损害所造成的渗出增多而引起的局部水肿，产生良好的临床效果，此新用途为国内外首创。
文档编号A61K39/395GK1473622SQ0213890
公开日2004年2月11日 申请日期2002年8月9日 优先权日2002年8月9日
发明者孙京海 申请人:孙京海