作为抗炎药的氨基吡咯化合物的制作方法

专利名称：作为抗炎药的氨基吡咯化合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及氨基吡咯化合物及其制备方法和用途。
TNF和IL-1业已在许多慢性炎症和自身免疫性疾病相关的病理过程中成为核心参与者。IL-1涉及介导或恶化疾病，如类风湿性关节炎((参见，Arend，W.P.Arthritis & Rheumatism 38(2)151-160，(1995))、骨关节炎、骨吸收、中毒性休克综合症、结核病、动脉粥样硬化、糖尿病、何杰金氏病(参见，Benharroch，D.等.Euro.Cytokine Network 7(1)51-57)和阿尔茨海默病。已经发现过度或失调的TNF生产参与介导或恶化疾病，如类风湿性关节炎((参见，Maini，R.N.等APMIS.105(4)257-263，(1997)；Feldmann，M.，J.of the Royal College of Physicians of London30(6)560-570，(1996)；Lorenz，H.M.等J.of Immunology 156(4)1646-1653，(1996))、骨关节炎、脊椎炎、脓毒症、脓毒性休克((参见，Abraham，E.等JAMA.277(19)1531-1538，(1997)、成人呼吸窘迫综合征、哮喘((参见，Shah，A.等.Clin.& Exp.Allergy 1038-1044，(1995)和Lassalle，P.等Clin.& Exp.Immunol.94(1)105-110，(1993))、骨吸收病、热病((参见，Cooper，A.L.等Am.J.of Physiology 267(6 Pt.2)1431-1436))、脑脊髓炎、脱髓鞘作用((参见，Klindert，W.E.等J.of Neuroimmunol.72(2)163-168，(1997))和牙周疾病。
IL-1和TNF受体拮抗剂的临床试验显示，阻断这些细胞因子通过其受体发出信号的能力可以在人体中明显改善炎性疾病。所以，这些炎症细胞因子的调控被认为是一种最有效的阻断慢性炎症并具有阳性治疗效果的策略。p38 MAP激酶也表现出在TNF和IL-1的翻译控制中起重要作用，而且参与这些分子的生物化学信号((参见，Lee，J.C.等.Nature.372(6508)739-46，(1994))。结合p38 MAP的化合物可以有效抑制骨吸收、炎症以及其他免疫和基于炎症的病变。p38 MAP激酶的特征及其在TNF和IL-1的生物合成中的核心作用使这种激酶在由这些细胞因子所介导疾病的治疗中引人注目。
所以，人们希望提供p38 MAP激酶抑制剂，并且因而得到一种对抗促炎细胞因子如TNF和IL-1介导的疾病的方法。
因此，一方面本发明提供(i)下式的氨基吡咯化合物 其前药、单独异构体、异构体的混合物、或药用盐，及其制备或应用方法，其中Ar1和Ar2中的每一个独立地为任选取代的芳基；和R1和R2中的每一个独立地为氢，烷基或氮保护基团。
本发明更具体地提供(ii) (i)的化合物，其中R1和R2为氢；(iii) (i)或(ii)的化合物，其中Ar2为卤化物取代的苯基；(iv) (i)至(iii)之一的化合物，其中Ar2为4-氟苯基；(v) (i)至(iv)之一的化合物，其中Ar1选自苯基，烷氧基取代的苯基，羟基取代的苯基和杂烷氧基取代的苯基；(vi) (i)至(v)之一的化合物，其中Ar1为杂烷氧基取代的苯基；(vii) (i)至(vi)之一的化合物，其中Ar1选自苯基，3-甲氧基苯基，3-羟基苯基，和3-(2，3-二羟基丙氧基)苯基。
另一方面，本发明提供了一种制备下式的氨基吡咯化合物的方法
所述方法包括，使下式的氰基化合物 与式Ar2-NH2的芳胺化合物，在足以产生式I的氨基吡咯化合物的条件下接触，形成氨基吡咯环体系，其中Ar1和Ar2中的每一个如上述(i)或(iii)至(vii)项下所定义。
另一方面，本发明提供了一种含有治疗有效量的上述定义的化合物和赋形剂的组合物。
再一方面，本发明提供了一种抑制细胞中p38 MAP激酶的方法，包括给含有p38 MAP激酶的细胞施用式I的化合物。
又一方面，本发明提供了一种治疗哺乳动物由施用p38 MAP激酶抑制剂可治疗的疾病的方法，包括给哺乳动物施用治疗有效量的式I化合物。
再另一方面，本发明提供了一种治疗哺乳动物由施用p38 MAP激酶抑制剂可治疗的疾病的方法，具体包括给哺乳动物施用治疗有效量的一种或多种上述化合物，其中所述疾病是炎性疾病，更具体地，所述疾病是关节炎。
另一方面，本发明提供了一种或多种上述化合物在制备治疗哺乳动物由施用p38 MAP激酶抑制剂可治疗的疾病的药物中的用途，具体来说，其中所述疾病是炎性疾病，更具体地，所述疾病是关节炎。
除非另有说明，说明书和权利要求书中使用的下列术语具有下面给出的含义“烷基”是指1-6个碳原子的直链饱和单价烃基部分或3-6个碳原子的支链饱和单价烃基，例如甲基、乙基、丙基、2-丙基、戊基等。
″烷氧基″是指基团-OR，其中R是定义如上的烷基，例如甲氧基、乙氧基、丙氧基、2-丙氧基等。
″酰基″是指基团-C(O)R，其中R是氢、烷基、卤代烷基、或杂烷基，例如乙酰基、三氟乙酰基等。
″芳基″是指6-10个环原子的单价单环或双环芳香烃基，例如苯基、1-萘基、2-萘基等。
″卤化物″是指氟化物、氯化物、溴化物或碘化物。
″卤代烷基″是指被一个或多个相同或不同的卤素原子取代的烷基，例如-CH2Cl、-CF3、-CH2CF3、-CH2CCl3等。
″杂烷基″是指带有一或多个，优选1、2或3个选自-NRaRb、-ORc的取代基的定义如上的烷基部分，其中Ra、Rb和Rc彼此独立地为氢、烷基、或相应的保护基团。典型实例包括但不限于羟甲基、3-羟丙基、1，2-二羟基乙基、2-甲氧基乙基、2-氨基乙基、2-二甲基氨基乙基等。
″杂烷氧基″是指基团-OR，其中R是定义如上的杂烷基，例如2-羟基乙氧基、3-羟基丙氧基、2，3-二羟基丙氧基、2，3-二羟基-1-甲基丙氧基、2-氨基乙氧基等。
″任选取代的芳基″是指定义如上的芳环，其被一或多个，优选1或2个选自下列的取代基任选取代烷基、烷氧基、杂烷基、卤化物、氰基、酰基、-NRR′(其中R和R′独立地选自氢、烷基或酰基)、-NHCOR(其中R是烷基)、-NRS(O)nR′(其中R是氢或烷基，n是0至2的整数，R′是氢、烷基或杂烷基)、-NRS(O)nNR′R″(其中R是氢或烷基，n是0至2的整数，R′和R″独立地是氢、烷基或杂烷基)、-S(O)nR(其中n是0至2的整数，R是氢、烷基或杂烷基)、-S(O)nNRR′(其中n是0至2的整数，R和R′独立地是氢、烷基或杂烷基)、-COOR、-(亚烷基)COOR(其中R是氢或烷基)、-CONR′R″或-(亚烷基)CONR′R″(其中R′和R″独立地是氢或烷基)。
″任选取代的苯基″是指苯基，其被一或多个，优选1或2个选自下列的取代基任选地独立取代烷基、烷氧基、杂烷基、卤化物、氰基、酰基、-NRR′(其中R和R′独立地选自氢、烷基或酰基)、-NHCOR(其中R是烷基)、-NRS(O)nR′(其中R是氢或烷基，n是0至2的整数，R′是氢、烷基或杂烷基)、-NRS(O)nNR′R″(其中R是氢或烷基，n是0至2的整数，R′和R″独立地是氢、烷基或杂烷基)、-S(O)nR(其中n是0至2的整数，R是氢、烷基或杂烷基)、-S(O)nNRR′(其中n是0至2的整数，R和R′独立地是氢、烷基或杂烷基)、-COOR、-(亚烷基)COOR(其中R是氢或烷基)、-CONR′R″或-(亚烷基)CONR′R″(其中R′和R″独立地是氢或烷基)。
″任选″或″任选地″是指随后描述的事件或环境可以存在但不必定存在，而且这种描述包括该事件或环境存在的情况以及其中该事件或环境不存在的情况。譬如，″任选被烷基一取代或二取代的芳基″是指该烷基可以存在但不一定存在，而且这种描述包括芳基被烷基一取代或二取代的情形以及其中该杂环基没有被烷基取代的情形。
″药用赋形剂″是指可以用于制备药物组合物的赋形剂，其通常是安全、无毒，且既无生物学活性也无其他不良作用，包括兽医以及人类药用可接受的赋形剂。说明书和权利要求书中使用的″药用赋形剂″包括一种或一种以上的所述赋形剂。
″前药″是指任何当将此类前药施用给哺乳动物对象时可以在其体内释放出式(I)的活性母体药物的化合物。式(I)化合物的前药是通过修饰式(I)化合物中存在的官能团来制得，制备所采用的方式应使该修饰可以体内裂解释放出母体化合物。前药包括式(I)的化合物，其中式(I)化合物中的羟基、氨基或巯基分别与任何可以在体内裂解再生出游离羟基、氨基或巯基的基团结合。前药的实例包括但不限于式(I)化合物中羟基官能团的酯(例如，醋酸酯、甲酸酯或苯甲酸酯衍生物)、氨基甲酸酯(例如N，N-二甲基氨基羰基)，等等。
疾病的″治疗″或″疗法″包括(1)预防疾病，也就是使疾病的临床症状不会在哺乳动物中发展，所述的哺乳动物可能与该疾病接触或易患有该疾病但不曾经历或显现出该疾病的症状，(2)抑制疾病，也就是阻止或减轻该疾病或其临床症状的发展，或(3)缓解疾病，也就是引起疾病或其临床症状的退化。
在化学反应中，术语“处理”、“接触”和“反应”在本发明中可替换使用，指在产生指示和/或所需产物的适当条件下加入或混合两种或多种试剂。应当理解，产生指示和/或所需产物的反应不一定必然从起始加入的两种试剂混合即可直接得到，也就是说混合中可能产生一种或多种中间体，其最终形成指示和/或所需产物。
″治疗有效量″是指当施用给哺乳动物治疗疾病时，足以治疗该疾病的化合物的量。″治疗有效量″应根据化合物、疾病及其严重性、被治疗哺乳动物的年龄、体重等来改变。
本发明的一方面提供 其前药、单独异构体、异构体混合物或药用盐，及其制备或应用方法，其中，Ar1，Ar2，R1和R2如上文所定义。
R1和R2优选为氢。
Ar2优选为任选取代的苯基，更优选卤化物取代的苯基，最优选4-卤代苯基，具体是4-氟苯基。
Ar1优选选自苯基，烷氧基取代的苯基，羟基取代的苯基和杂烷氧基取代的苯基。Ar1更优选选自苯基，3-甲氧基苯基，3-羟基苯基，和3-(2，3-二羟基丙氧基)苯基。
在本发明的一个实施方案中，R1和R2为氢，Ar2为任选取代的苯基。
在另一实施方案中，R1和R2为氢，Ar2为卤化物取代的苯基，优选4-氟苯基。
在另一个实施方案中，R1和R2为氢，Ar2为4-氟苯基，Ar1选自苯基，烷氧基取代的苯基，羟基取代的苯基和杂烷氧基取代的苯基。Ar1优选为杂烷氧基取代的苯基。Ar1更优选为3-(2，3-二羟基丙氧基)苯基。
在另一个实施方案中，R1和R2为氢，Ar2为4-氟苯基，Ar1为苯基，3-甲氧基苯基，3-羟基苯基，或3-(2，3-二羟基丙氧基)苯基。
在另一个实施方案中，R1和R2为氢，Ar1为任选取代的苯基。优选地，Ar1为苯基，烷氧基取代的苯基，羟基取代的苯基或杂烷氧基取代的苯基。优选地Ar1为杂烷氧基取代的苯基。更优选地，Ar1为3-(2，3-二羟基丙氧基)苯基。在该实施方案中，Ar2优选为卤化物取代的苯基，优选4-氟苯基。
上述优选组的组合也形成其他优选实施方案。因此，例如，优选的取代基R1和R2也是具有优选取代基Ar1和/或Ar2的化合物的优选取代基。
本发明的化合物可以以非溶剂化形式存在，也可以以溶剂化形式存在，包括水合物形式。通常，溶剂化形式，包括水合物形式，等同于非溶剂化形式，包括在本发明的范围内。并且，如上所述，本发明还包括这些化合物的所有药用盐，以及这些化合物的前药形式，和所有立体异构体，包括纯手性形式或消旋混合物或其他混合物形式。
式I的化合物能够进一步形成药用酸加成盐。所有这些形式都在本式I化合物的药用酸加成盐包括与无机酸，例如盐酸、硝酸、磷酸、硫酸、氢溴酸、氢碘酸、亚磷酸等形成的盐，以及与有机酸，例如脂肪族一元和二元羧酸，苯基取代的链烷酸，羟基链烷酸、链烷二羧酸、芳香酸、脂肪族和芳香族磺酸等形成的盐。因此这些盐包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、辛酸盐、异丁酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、延胡索酸盐、马来酸盐、扁桃酸盐、苯甲酸盐、氯代苯甲酸盐、甲级苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、邻苯二甲酸盐、苯磺酸盐、甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、马来酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐等等。还包括氨基酸的盐如精氨酸盐等和葡糖酸盐、半乳糖醛酸盐(例如参见Berge等，″药用盐(Pharmaceutical Salts)″J.of Pharmaceutical Science，1977，66，1-19)。
碱性化合物的酸加成盐的制备可以通过常规方法将游离碱形式与足量的所需酸接触以制备盐。通过应用常规方法将盐形式与碱接触，并且分离游离碱，可以重新获得游离碱的形式。这些游离碱形式在某些物理性质如在极性溶剂中的溶解性方面有些不同于它们各自的盐形式，然而在别的方面这些盐对于本发明的目的等同于它们各自的游离碱。
可以与金属离子或胺如碱和碱土金属离子或有机胺形成药用碱加成盐。用作阳离子的金属离子的例子包括钠、钾、镁、钙等等。适合的胺的实例为N，N′-二苄基乙二胺，氯普鲁卡因，胆碱，二乙醇胺，乙二胺，N-甲基葡糖胺和普鲁卡因(例如参见Berge等，″药用盐(Pharmaceutical Salts)″J.of Pharmaceutical Science，1977，66，1-19)。
酸性化合物的碱加成盐的制备可以通过常规方法将游离酸形式与足量的所需碱接触以制备盐。通过应用常规方法将盐形式与酸接触，并且分离游离酸，可以重新获得游离酸的形式。这些游离酸形式在某些物理性质如在极性溶剂中的溶解性方面有些不同于它们各自的盐形式，然而在别的方面这些盐对于本发明的目的等同于它们各自的游离酸。
本发明的举例化合物如下表1所示表1.式I的举例化合物 本发明的化合物可以通过下述方法制备。在制备这些化合物中使用的原料和试剂可以从供应商，例如Aldrich Chemical Co.，(Milwaukee，Wisconsin，USA)，Bachem(Torrance，California，USA)，Emka-Chemie，或Sigma(St.Louis，Missouri，USA)，或者通过所属领域技术人员已知的方法按照参考文献中规定的过程制备，例如Fieser和Fieser所著的《Reagents for Organic Synthesis》1-17卷(John Wiley和Sons，1991)；Rodd的《Chemistry of Carbon Compounds》1-5卷和增补(ElsevierScience Publishers，1989)；《Organic Reactions》1-40卷(John Wiley和Sons，1991)，March的《Advanced Organic Chemistry》(John Wiley和Sons，第4版)，和Larock的《Comprehensive Organic Transformations》(VCHPublishers Inc.，1989)。这些反应路线仅仅举例说明一些可以合成本发明化合物的方法，并且所属领域技术人员参考本文内容可以完成和提出对这些反应路线的多种改进。
反应的起始原料和中间体可以被分离，并且如果需要可以利用常规技术纯化，包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、色谱等。可以用常规方式测定这些物质的特征，包括物理常数和光谱数据。
在一个实施方案中，Ar2为4-氟苯基。
在另一个实施方案中，Ar2为4-氟苯基，Ar1为烷氧基取代的苯基。
在另一个实施方案中，Ar2为4-氟苯基和Ar1为烷氧基取代的苯基，该方法进一步包括在足以产生其中Ar1为羟基取代的苯基的式I的氨基吡咯化合物的条件下，使式I的氨基吡咯化合物与Lewis酸接触，从而将烷氧基取代基转化为羟基取代基。
在另一个实施方案中，该方法进一步包括烷基化Ar1的羟基，即在足以产生其中Ar1为杂烷氧基取代的苯基的式I的氨基吡咯化合物的条件下，使Ar1为羟基取代的苯基的式I的氨基吡咯化合物与包括离去基团的杂烷基化合物接触。
在另一个实施方案中，通过下述方法制备式II的氰基化合物，使下式的芳酰基乙腈衍生物
与下式的3-卤代乙酰基吡啶 在碱的存在下，在足以产生所述式II的氰基化合物的条件下接触，其中，Ar1为任选取代的芳基；X为离去基团。
制备式I化合物的一个特别方法包括，使下式的氰基化合物 与式Ar2-NH2的芳胺化合物，在足以产生式I的氨基吡咯化合物的条件下接触，从而形成氨基吡咯环体系，其中Ar1和Ar2如上文所定义。氨基吡咯环形成反应是一个典型的酸催化的环化反应。优选地，所述酸是一种pH约为2或更低的强酸。适当的酸催化剂包括无机酸，例如硫酸、磷酸、HCl、HBr、HI，以及Lewis酸例如A1Cl3、BBr3、BCl3等。应当理解，当提供质子源时，Lewis酸也能够产生催化环化反应的无机质子酸。
环化反应通常在例如乙醇、异丙醇等极性溶剂中进行。环化反应的温度根据多种因素而改变，包括使用的特定酸催化剂、反应溶剂、原料的反应性等。通常，环化反应温度为至少约80℃。实践中，环化反应在反应溶剂的回流条件下进行。
环化反应时间也根据多种因素改变，例如包括反应温度在内的上述因素。然而通常，环化反应时间至少约为回流条件下8小时。通常，环化反应时间为约6小时至约16小时。
式II的氰基化合物可以容易地通过下述方法制备，使下式的芳酰基乙腈衍生物 与下式的3-卤代乙酰基吡啶 在碱存在下，在足以产生式II的氰基化合物的条件下接触，其中Ar1如上文所定义，X为离去基团，例如卤化物，优选溴化物或氯化物。取代反应的适当碱通常为非亲核碱。优选该碱强度足以使式III的芳酰基乙腈衍生物脱质子化。适当的碱包括金属氢化物、金属叔丁氧化物等。因为通常使用强碱，所以碱和式III的芳酰基乙腈衍生物之间最初的脱质子反应是一个放热反应。因此，反应温度通常保持在约0℃或更低的温度下。典型的反应溶剂是对质子惰性的溶剂，例如四氢呋喃，和二乙醚。
制备式I化合物的方法可以进一步包括对芳基Ar1或Ar2的修饰。例如，当芳基Ar1含有取代基时，本发明的方法可以包括取代或修饰芳基上的取代基。这特别适用于Ar1被一或多个氨基、羰基、羟基和烷氧基取代的情形。当Ar1被烷氧基取代，可以使式I的化合物与Lewis酸接触而将烷氧基转化为羟基。适当的Lewis酸包括《有机合成中的保护基团(Protective Groups in Organic Synthesis)》第3版，T.W.Greene和P.G.M.Wuts，John Wiley & Sons，New York，1999中所述的那些，该参考文献用于参考而全文并入本发明。
然后，游离羟基可以用所需的取代基取代(例如烷基化)。例如，使羟基与含有离去基团的杂烷基化合物接触，可以产生其中Ar1为杂烷氧基取代的苯基的式I的氨基吡咯化合物。
本发明的化合物具有广泛的药学活性。例如，本发明人已发现本发明的化合物是p38 MAP激酶抑制剂。因此，该化合物可用于治疗炎性疾病，特别是关节炎。
因此，本发明的化合物用于治疗p38 MAP激酶介导的疾病，包括类风湿性关节炎、骨关节炎、脊椎炎、骨吸收病、脓毒病、脓毒性休克、中毒性休克综合征、内毒素性休克、结核病、动脉粥样硬化、糖尿病、成人呼吸窘迫综合征、慢性肺部炎性疾病、热病、牙周疾病、溃疡性结肠炎、pyresis、阿尔茨海默病和帕金森氏病。
通过实施例4所述的体外试验证实了本发明化合物抑制p38 MAP激酶的能力。通过实施例5和6分别详细描述的体外和体内试验，证实了本发明化合物抑制TNF-α的释放的能力。利用实施例7中所述的大鼠中佐剂诱发的关节炎试验确定了本发明的化合物的抗炎活性。
通常，本发明的化合物以治疗有效量通过任何适合类似用途的药物给药的可接受方式施用。本发明的化合物的实际用量，即活性成分的用量将取决于多种因素，例如被治疗疾病的严重性、对象的年龄和相对健康状况、所用化合物的效价、给药的途径和形式以及其他因素。
本发明化合物的治疗有效量可以是约0.1-50mg/kg接受者体重/天，优选约1-30mg/kg/天。因此，为了对70kg的人给药，剂量范围首选约70mg至2.1g/天。
通常，本发明的化合物作为药物组合物通过任何一种下列途径给药口服，系统性(如经皮、鼻内或利用栓剂)或胃肠外(例如肌肉内、静脉内或皮下)给药。优选的给药方式是利用常规每天剂量方案口服给药，其可以根据病痛的程度加以调整。组合物可以采取片剂、丸剂、胶囊、半固体、粉末、缓释制剂、溶液、混悬液、酏剂、气溶胶或任何适当的组合物的形式。
剂型的选择取决于不同的因素，例如给药的方式(例如，对于口服给药，优选制剂为片剂、丸剂或胶囊的形式)和药物的生物利用度。目前，基于通过增加表面积(即减小粒度)可以提高生物利用度的原理，已经开发出药物制剂，尤其是生物利用度低的药物。譬如，U.S.专利4,107,288描述了颗粒大小在10-1,000nm范围内的药物制剂，其中活性物质负载在大分子的交联基质上。U.S.专利号5,145,684描述了药物制剂的制备，其中的药物在表面改性剂的存在下被粉碎成纳米颗粒(平均粒度400nm)并且分散在液体介质中，得到具有非常高的生物利用度的药物制剂。
所述的组合物一般含有与至少一种药学可接受赋形剂组合的式(I)的化合物。可接受的赋形剂是无毒，协助给药并对式(I)的化合物的治疗效益没有不良影响。此类赋形剂可以是任何所属领域技术人员常用的固体、液体、半固体，或这在气溶胶组合物的情况中是气体赋形剂。
固体药物赋形剂包括淀粉、纤维素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钠、甘油单硬脂酸酯、氯化钠、干燥脱脂乳等。液体和半固体赋形剂可以选自甘油、丙二醇、水、乙醇和多种油，包括那些石油、动物、植物或合成来源的油，例如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。优选的液体载体，特别是对于可注射溶液来说，包括水、盐水、含水葡萄糖和二醇类化合物。
压缩气体可以用来分散本发明的化合物成为气溶胶形式。适合这种目的的惰性气体为氮气、二氧化碳等。
其他适用的药物赋形剂及其制剂公开在Remington′s PharmaceuticalSciences，E.W.Martin编辑(Mack Publishing Company，18版，1990)中。
化合物在制剂中的含量可以在所属领域可利用的全部范围内变化。通常，以重量百分比(wt％)基，制剂应基于该制剂总重量的约0.01-99.99wt％，余量为一种或多种适当的药用赋形剂。更加可取地，所述的化合物是以约1-80wt％的水平存在。实施例3中描述了含有式(I)化合物的代表性药物制剂。
实施例实施例1该实施例举例说明了制备[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1h-吡咯-3-基]-苯甲酮的方法。
步骤a2-苯甲酰基-4-氧-4-吡啶-3-基-丁腈的制备 向在冰水浴中冷却的3.0g(21mmol)苯甲酰乙腈在50mL THF中加入0.84g(21mmol)氢化钠(60％油分散)。1h后，加入2.8g(10mmol)3-溴乙酰吡啶氢溴酸盐。3h后，将反应混合物倒入盐水，用乙酸乙酯萃取，通过硫酸钠干燥，减压下浓缩，快速色谱纯化(梯度洗脱40-80％乙酸乙酯/己烷)，得到2.6g(93％)2-苯甲酰基-4-氧-4-吡啶-3-基-丁腈(MH+＝265)。
步骤b[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1h-吡咯-3-基]-苯甲酮的制备 向2.6g(9.8mmol)2-苯甲酰基-4-氧-4-吡啶-3-基-丁腈和0.93mL(9.8mmol)4-氟苯胺在30mL乙醇中的溶液中加入6滴浓HCl，将混合液加热回流。16h后，将反应冷却至室温，过滤分离黄色固体。将固体从甲醇/乙酸乙酯中重结晶，得到1.5g(42％)[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-lh-吡咯-3-基]-苯甲酮(mp＝231.4-231.8)。用HCl/乙醚处理该游离碱的乙酸乙酯溶液，得到[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1h-吡咯-3-基]-苯甲酮的盐酸盐(mp 218-222)。
实施例2该实施例举例说明了制备[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1h-吡咯-3-基]-3-{[2(s)，3-二羟基丙氧基]苯基}-甲酮的方法。
步骤a2-(3-甲氧基苯甲酰基)-4-氧-4-吡啶-3-基-丁腈的制备 向在冰水浴中冷却的1.3g(7.5mmol)3-甲氧基苯甲酰乙腈在30mLTHF中，加入0.3g(7.5mmol)氢化钠(60％油分散)。1h后，加入1.0g(3.6mmol)3-溴乙酰吡啶氢溴酸盐。3h后，将反应混合液倒入盐水，用乙酸乙酯萃取，通过硫酸钠干燥，减压下浓缩，快速色谱纯化(梯度洗脱40-100％乙酸乙酯/己烷)，得到0.95g(43％)2-(3-甲氧基苯甲酰基)-4-氧-4-吡啶-3-基-丁腈(MH+＝295)。
步骤b[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1h-吡咯-3-基]-3-(甲氧基苯基)甲酮的制备
将3.0g(10.2mmol)2-(3-甲氧基苯甲酰基)-4-氧-4-吡啶-3-基丁腈，0.97mL(10.2mmol)4-氟苯胺和6滴浓HCI在30mL乙醇中的混合液加热回流。16h后，将反应混合液冷却到室温，减压下浓缩，用碳酸氢钠水溶液稀释，用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤萃取液，通过硫酸钠干燥，减压下浓缩，快速色谱纯化(梯度洗脱20-40％乙酸乙酯/己烷)，得到1.0g(25％)[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1h-吡咯-3-基]-3-(甲氧基苯基)甲酮(MH+＝388)。
步骤c[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1h-吡咯-3-基]-3-(羟基苯基)甲酮的制备 向冷却于冰水浴中的1.0g(2.6mmol)[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1h-吡咯-3-基]-3-甲氧基苯基)甲酮在25mL二氯甲烷中的溶液中，加入15.5mL(155mmol)三溴化硼(1.0M，在二氯甲烷中)。将反应液加热至室温。16h后，将反应重新冷却于冰水浴，逐滴加入水。用浓氢氧化铵将反应混合物的pH值调节至10，然后用二氯甲烷萃取。用盐水洗涤有机萃取液，通过硫酸钠干燥，减压下浓缩，并通过快速色谱纯化(梯度洗脱40-80％乙酸乙酯/己烷)，得到0.6g(62％)[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1h-吡咯-3-基]-3-(羟基苯基)甲酮(mp＝240.3-242.5)。
步骤d[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1h-吡咯-3-基]-3-(2，2-二甲基-[1，3]二氧戊环-4(s)-基甲氧基)-苯基]-甲酮的制备 将0.6g(1.6mmol)[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1H-吡咯-3-基]-3-(羟基苯基)甲酮，1.06g(3.7mmol)L-α，β-异亚丙基甘油-γ-甲苯磺酸酯和1.2g(8.7mmol)碳酸钾在10mL DMF中的混合液加热到80℃。16h后，将反应混合液冷却到室温，倒入盐水，用乙酸乙酯萃取。萃取液通过硫酸钠干燥，减压下浓缩，快速色谱纯化(梯度洗脱15-50％乙酸乙酯/己烷)，得到0.7g(90％)(2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1H-吡咯-3-基]-[3-(2，2-二甲基-[1，3]二氧戊环-4(S)-基-甲氧基)-苯基]-甲酮。
步骤e2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1h-吡咯-3-基]-3-{[2(s)，3-二羟基丙氧基]苯基}-甲酮的制备 将0.7g(1.44mmol)[2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1H-吡咯-3-基]-[3-(2，2-二甲基-[1，3]二氧戊环-4(S)-基甲氧基)-苯基]-甲酮和0.35g p-甲苯磺酸在20mL甲醇和5mL水的混合液加热到50℃。18h后，将反应混合液冷却到室温，减压浓缩溶剂。将残留物在碳酸氢钠水溶液和乙酸乙酯中分配。用盐水洗涤有机萃取物，通过硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。产物经快速色谱纯化(梯度洗脱100％乙酸乙酯-10％甲醇/乙酸乙酯/0.4％氢氧化铵)。用HCl/乙醚处理乙酸乙酯溶液，从而将纯化的产物转化为HCl盐。过滤分离该盐，干燥得到0.4g(56％)2-氨基-1-(4-氟苯基)-5-吡啶-3-基-1H-吡咯-3-基]-3-{[2(S)，3-二羟基丙氧基]苯基}-甲酮(MH+＝448)。
实施例3下面是含有式(I)化合物的代表性药物制剂。
片剂将下列成分均匀混合且压缩为单一刻痕片。
成分 片，mg本发明的化合物 400玉米淀粉 50交联羧甲基纤维素钠 25乳糖 120硬脂酸镁 5胶囊制剂将下列成分均匀混合且装在硬壳明胶胶囊中。
成分 胶囊，mg本发明的化合物 200乳糖，喷干 148硬脂酸镁 2混悬液制剂把下列成分混合形成口服给药的混悬液成分 含量本发明的化合物 1.0g富马酸 0.5g氯化钠 2.0g
对羟基苯甲酸甲酯 0.15g对羟基苯甲酸丙酯 0.05g粒状蔗糖 25.5g山梨糖醇(70％溶液) 12.85gVeegum(胶体镁铝硅酸)K(Vanderbilt Co.)1.0g矫味剂 0.035ml着色剂 0.5mg蒸馏水 适量至100ml可注射制剂混合下列成分形成可注射制剂。
成分 含量本发明的化合物 0.2g乙酸钠缓冲液，0.4M 2.0mlHCl(1N)或NaOH(1N)适量至适当pH水(蒸馏，灭菌) 适量至20ml除了水之外，将上述全部成分混合且在60-70℃下加热同时搅拌。在60℃下加入足够量的水，同时剧烈搅拌使成分乳化。随后加入适量水达到100g。
栓剂制备总重量为2.5g的栓剂，其制备通过将本发明的化合物与WitepsolH-15(饱和植物脂肪酸的甘油三酯；Riches-Nelson，Inc.，NewYork)，并且具有下面的组成本发明的化合物 500mgWitepsolH-15 余量实施例4抑制p-38(MAP)激酶的体外试验利用Ahn，N.G.等J.Biol.Chem.Vol.266(7)，4220-4227，(1991)所述方法的较小改进，通过测量在p-38髓磷脂碱性蛋白(MBP)的激酶作用下从γ-33P-ATP转移γ-ATP，可以测定本发明的化合物的p-38 MAP激酶抑制活性。
重组p38 MAP激酶的磷酰化形式在E.Coli中用SEK-1和MEKK表达，并且随后利用Nickel柱通过亲和色谱纯化。
磷酰化p38 MAP激酶稀释在激酶缓冲液(20mM 3-(N-吗啉基)丙烷磺酸pH7.2，25mMβ-甘油磷酸酯，5mM乙二醇-双(β-氨基乙基醚)-N，N，N′，N′-四乙酸，1mM钒酸钠，1mM二硫苏糖醇，40mM氯化镁)中。加入溶于DMSO中的试验化合物或仅仅加入DMSO(对照)并且令样本在30℃下温育10分钟。通过加入含有MBP和γ-33ATP的物质混合物引发激酶反应。此后在30℃下继续温育20分钟，加入0.75％磷酸中止该反应。利用磷纤维素膜(Millipore，Bedford，MA)从残余γ-33ATP分离出磷酰化MBP，并且利用闪烁计数器定量测定(Packard，Meriden，CT)。
本发明的化合物在本试验中具有活性。本发明的一些化合物的p-38抑制活性(表示为IC50，抑制50％被试验p-38酶时的浓度)是
实施例5存THP1细胞中对LPS诱导的TNF-α产生的抑制作用体外试验利用Blifeld，C.等Transplantation，Vol.51(2)，498-503，(1991)所述的方法的小改进测定本发明的化合物抑制TNF-α释放的能力。
(a)TNF生物合成的诱导使THP-1细胞悬浮在培养基[RPMI(Gibco-BR1，Gailthersburg，MD)含有15％胎牛血清，0.02mM 2-巯基乙醇]，达到2.5×106细胞/ml的浓度，随后铺板在96孔平板中(各孔中含0.2ml等份试样)。将试验化合物溶于DMSO，此后用培养基稀释，使DMSO的终浓度为5％。向各孔中加入20μl等份的试验溶液或只含有DMSO的培养基。细胞在37℃下温育30分钟。向孔中加入LPS(Sigma，St.Louis，MO)达到终浓度为0.5μg/ml，并且令细胞继续温育2小时。培养期结束后，收集培养上清液，利用下面所述的ELISA试验测定TNF-α存在的量。
(b)ELISA试验通过特异性捕捉ELISA检测、利用Reimund，J.M.等GUT.Vol.39(5)，684-689(1996)所述的两种抗TNF-α抗体(2TNF-H22和2TNF-H34)测定TNF-α存在的量。
聚苯乙烯96孔平板用50μl/孔的存在于PBS(10ug/ml)中的抗体2TNF H22涂层，并且在4℃的加湿室内温育过夜。平板用PBS洗涤，进而用存在于PBS中的5％脱脂干燥乳室温下封阻1小时，且用存在于PBS中的0.1％BSA(牛血清白蛋白)洗涤。
TNF标准品是由人重组TNF-α(R & D Systems，Minneapolis，MN)的储备溶液制备。标准品在该试验中的浓度在开始时为10ng/ml，随后进行6次半对数连续稀释。
25μl等份的上述培养上清液或TNF标准品或仅仅是培养基(对照)与25μl等份的生物素化单克隆抗体2TNF-H34(2μg/ml，存在于含0.1％BSA的PBS中)混合，此后加入到各孔中。室温下温育样本2小时同时轻轻振摇，随后用含0.1％BSA的PBS洗涤3次。向各孔中加入50μl的过氧化酶-链霉抗生物素(Zymed，S.San Francisco，CA)溶液，其中在PBS中含有0.416μg/ml的过氧化物酶-链霉抗生物素和0.1％BSA。室温下样本继续温育1小时，随后用含0.1％BSA的PBS洗涤4次。向各孔中加入50μl的O-苯二胺溶液(1μg/ml O-苯二胺和0.03％过氧化氢，存在于0.2M柠檬酸盐缓冲液pH4.5中)，并且室温下将样本在避光条件下温育30分钟。分别读取样本和参照物在450nm和650nm下的光密度。利用在450nm下的光密度与所用浓度的相关图形测定TNF-α的水平。
IC50值被定义为试验化合物在450nm的吸光度最大值降低至半数时相对应的浓度。本发明的化合物在本试验中具有活性。
实施例6大鼠中LPS-诱导的TNF-α产生的抑制作用体内试验利用Zanetti，G.；Heumann，D.等″在小鼠中静脉内或腹膜内革兰氏阴性菌刺激后细胞因子生产(Cytokine production after intravenous orperitoneal Gram-negative bacterial challenge in mice)″J.Immunol.，148，1890，(1992)和Sekut，L.，Menius，J.A.等″高水平的全身或局部肿瘤坏死因子在炎症的不同动物模型中的重要性的评估(Evaluation of thesignificance of elevated levels of systemic and localized tumor necrosisfactor in different animal models of inflammation)″J.Lab.Clin.Med.，124，813，(1994)所述方法的微小改进测定本发明的化合物体内抑制TNF-α释放的能力。
体重110-140g的雌性Sprague-Dawley大鼠(ChaRles River，Hollister，CA)适应环境1周。包括8只小鼠的组口服施用试验化合物或者只施用载体(对照组)，其中的试验化合物溶于含0.9％氯化钠、0.5％羧甲基纤维素钠、0.4％吐温80、0.9％苄醇(CMC载体)的水载体中。30分钟后，给小鼠腹膜内注射50g/kg的LPS(Sigma，St.Louis，MO)。1.5小时后，通过吸入CO2处死小鼠并通过心穿刺术采集血液。在15,600×g下离心5分钟使血液沉降，把血清转移到干净的试管中且在-20℃下冷冻，直至通过ELISA试验按照制造商的方案测定TNF-α(BiosourceInternational，Camarillo，CA)。
实施例7大鼠中的佐剂关节炎试验体内实验利用大鼠中佐剂诱发的关节炎测定本发明的化合物的抗炎活性。简单地说，体重120-155g的雌性Sprague Dawley大鼠(ChaRles River，Hollister，CA)在使用之前在室内适应1周环境。在第1天，在尾部的1/4近端部位给动物真皮内注射0.1ml的矿物油(Sigma，St.Louis，MO)混悬液，该混悬液经过热灭菌并含有浓度为1mg/0.1ml的干燥乳酪分支杆菌(Difco，Bacto.，Des.，Lot 115979JA/EXP9/99)。
第7天时，施用存在于CMC载体中的试验化合物直至第18天。在第18天时，在给予化合物之后，称量动物的体重。获得临床评分，用量评估水肿在4个爪子和尾部中的强度。对各个爪子的评分指定为0-4并对尾部指定为0-3，使最大评分为19。当在小关节(指骨内、掌指骨间、跖趾间)或大关节(腕/腕骨，踝/跗骨)中没有炎症迹象(肿胀和红色)时，该多关节动物可以被评分为0。当观察到轻微炎症时该动物被评为1，中等水肿是2，严重水肿是3，并且当存在非常严重的水肿时评分为4。当观察到尾部没有水肿或坏死组织迹象时尾部评分为0，当接种注射位点和邻近周围组织表现出轻度水肿时评分为1，当约1/4的尾部或者发炎或者表现出坏死组织时评分为2，当在1/4的尾部表现出严重的坏死或水肿时评分为3。根据临床评分，在远端胫骨、与跗关节紧邻处横切下后爪。分别称量左和右后爪的重量且记录。
权利要求
1.下式的化合物 其前药、单独异构体、异构体的混合物、或药用盐，其中Ar1和Ar2中的每一个独立地为任选取代的芳基；和R1和R2中的每一个独立地为氢，烷基或氮保护基团。
2.权利要求1的化合物，其中R1和R2为氢。
3.权利要求1或2的化合物，其中Ar2为卤化物取代的苯基。
4.权利要求1至3之一的化合物，其中Ar2为4-氟苯基。
5.权利要求1至4之一的化合物，其中Ar1选自苯基、烷氧基取代的苯基、羟基取代的苯基和杂烷氧基取代的苯基。
6.权利要求1至5之一的化合物，其中Ar1为杂烷氧基取代的苯基。
7.权利要求1至6之一的化合物，其中Ar1选自苯基、3-甲氧基苯基、3-羟基苯基、和3-(2，3-二羟基丙氧基)苯基。
8.一种药物组合物，其中含有治疗有效量的一种或多种权利要求1-7中任何一项的化合物以及赋形剂。
9.一种制备下式的氨基吡咯化合物的方法 所述方法包括，使下式的氰基化合物 与式Ar2-NH2的芳胺化合物，在足以产生式I的氨基吡咯化合物的条件下接触，形成氨基吡咯环体系，其中Ar1和Ar2中的每一个如权利要求1或3-7任意一项所定义。
10.按照权利要求9的方法制备的权利要求1或3-7任意一项的化合物。
11.权利要求1-7任意一项的化合物，其作为治疗活性物质，尤其用于治疗哺乳动物由施用p38 MAP激酶抑制剂可治疗的疾病，具体来说，其中所述疾病是炎性疾病，更具体地，所述疾病是关节炎。
12.一种治疗哺乳动物由施用p38 MAP激酶抑制剂可治疗的疾病的方法，包括对该所述哺乳动物施用治疗有效量的权利要求1-7中任意一项的化合物，具体来说，其中所述疾病是炎性疾病，更具体地，所述疾病是关节炎。
13.权利要求1-7任意一项的化合物在制备治疗哺乳动物由施用p38MAP激酶抑制剂可治疗的疾病的药物中的用途，具体来说，其中所述疾病是炎性疾病，更具体地，所述疾病是关节炎。
14.此前所描述的本发明。
全文摘要
本发明提供了一种式I的氨基吡咯化合物，其前药、单独异构体、异构体的混合物、或其药用盐，以及这些化合物的制备方法和它们在治疗疾病，尤其是炎性疾病中的用途。
文档编号A61P43/00GK1547578SQ02816631
公开日2004年11月17日 申请日期2002年8月26日 优先权日2001年8月30日
发明者D·M·戈尔德施泰因, D·M·罗特施泰因, D M 戈尔德施泰因, 罗特施泰因 申请人:霍夫曼-拉罗奇有限公司