专利名称：注射用双黄连在制备用于治疗严重急性呼吸道综合症的药物中的应用的制作方法
专利说明注射用双黄连在制备用于治疗严重急性呼吸道综合症 的药物中的应用 本发明涉及注射用双黄连的药物新用途，具体涉及注射用双黄连在制备用于治疗严重急性呼吸道综合症(急性传染性非典型肺炎即SARS)的药物中的应用，属于中药领域。SARS是指流行的一种呼吸道传染病，传染途径主要通过短距离飞沫传播、接触病人呼吸道分泌物及密切接触传播。人群普遍易感，医护人员是本病的高危人群。临床主要表现为肺炎，典型症状为发高烧(＞38℃)、干咳、呼吸急促或呼吸困难。世界卫生组织于2003年3月15日取名为严重急性呼吸道综合症，2003年4月16日正式宣布SARS的致病原为一种新的冠状病毒，命名为SARS病毒。冠状病毒，是一种ssRNA(+)病毒，在电镜下，病毒颗粒呈不规则形，直径约为60～220nm，有包膜，其表面有梅花形的膜粒，状如皇冠，故称为冠状病毒(coronavirus)。颗粒中心在负染电镜下呈不定形态，核壳体呈疏松状态。包膜上有两种糖蛋白S蛋白刺突糖蛋白，是主要的抗原，与受体结合，使细胞融合。M蛋白跨膜，参与包膜形成。在一些亚类中，还有第三种糖蛋白，HE——红细胞凝集素酯酶。基因组RNA与碱性磷酸蛋白N结合。SARS病毒为正链的单链RNA病毒，复制不经过DNA中间体，使用标准密码子。
人冠状病毒分别属于OC43和229E两个抗原型，它是引起人类上呼吸道感染的病原，常引起成人的普通感冒。儿童的冠状病毒感染并不常见。
注射用双黄连是由金银花、连翘、黄芩三味中药组成，经过提取、浓缩、醇沉、水沉等方法的处理后，又经过喷雾干燥或冷冻干燥而制成的中药粉针剂。注射用双黄连是《中国药典》2000年版收载的药物，具有成熟稳定的工艺和质量标准。注射用双黄连的主要用途是用于外感风热，邪在肺卫，热毒内盛，证见发热，微恶风寒或不恶寒，咳嗽气促，咳痰色黄，咽红肿痛；急性上呼吸道感染、急性支气管炎、急性扁桃体炎、轻型肺炎见上述证侯者。但到目前为止尚未见有关注射用双黄连对由冠状病毒引起的严重急性呼吸道综合症(急性传染性非典型肺炎即SARS)具有治疗作用的报道。针对严重急性呼吸道综合症(SARS)，目前尚无特效治疗药物，而且，其严重的传染性，广泛的流行性，发病的急速性，较高的死亡率，给人类健康带来了极大的威胁，给社会安定带来了极大震动，所以，寻找一种能够预防和治疗严重急性呼吸道综合症(SARS)的特效药物成为当务之急。本发明人经过反复认真筛选和研究，通过科学试验，终于找到了有较好疗效的治疗严重急性呼吸道综合症(SARS)的注射用双黄连，从而完成了本发明。
本发明的目的就是提供一种注射用双黄连的新的药物用途，即注射用双黄连在制备用于治疗严重急性呼吸道综合症(急性传染性非典型肺炎即SARS)的药物中的应用。
注射用双黄连的临床应用非常广泛，其抗菌、抗病毒的作用十分明显。尤其是在抗病毒方面，对于流行性感冒病毒、柯萨奇病毒B3，A16、呼吸道合胞病毒、腺病毒III型、单纯疱疹病毒I及II型、新型肠道病毒71型的抑制作用十分明显。对脊髓灰质炎病毒III型、埃可病毒6型、麻疹病毒、水泡性口炎病毒也有抑制作用，另外，注射用双黄连对细菌也有广泛的抑制作用，对金黄色葡萄球菌、肺炎双球菌、链球菌、伤寒杆菌、甲型副伤寒杆菌、宋内氏痢疾杆菌、福氏痢疾杆菌、志贺氏痢疾杆菌、大肠杆菌、绿脓杆菌、变形杆菌等均有一定的抑制作用，所以临床上经常用于流行性感冒、肺炎、支气管炎、心肌炎、流行性腮腺炎等病的治疗。
注射用双黄连体外抗冠状病毒的药效学试验，在HELA细胞培养内，采用病毒CPE法，观察不同浓度的注射用双黄连药物对冠状病毒的抑制效果，试验结果表明注射用双黄连药物具有抗冠状病毒的作用。注射用双黄连药物体外抗冠状病毒的药效学试验试验材料试验药物注射用双黄连(批准文号国药准字Z10960058)，批号0303009，600mg/支，由哈药集团中药二厂提供。
阳性对照药物注射用更昔洛韦批号020802，由湖北科益药业股份有限公司提供。
细胞人宫颈癌传代细胞(HELA)由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒资源中心提供。
病毒冠状病毒9号(SARS病人咽拭子分离株9号)由中国疾病预防控制中心病毒病预防控制所病毒资源中心提供。
CO2培养箱由NUAIR US AUTO FLOW提供。试验方法预备试验1、注射用双黄连对HELA细胞的毒性测定HELA细胞以40万/ml浓度接种96孔培养板，37℃、5％CO2培养24小时，加入验证药物，验证药物注射用双黄连倍比稀释为6000μg/ml-11.7μg/ml，阳性对照药物更昔洛韦倍比稀释为6000μg/ml-11.7μg/ml，每浓度接种3孔，每孔100μl，同时设正常细胞对照，37℃、5％CO2培养6天，每天在倒置显微镜下观察细胞形态变化(CPE)，以25％以下形态变化为“+”，26％-50％形态变化为“++”，51％-75％形态变化为“+++”，76％-100％形态变化为“++++”，用Reed-Muench法，计算药物半数中毒浓度(TD50)和最大无毒浓度(TD0)。2、在HELA细胞培养内对冠状病毒9号的毒力测定病毒CPE法HELA细胞以40万/ml浓度接种96孔培养板，37℃、5％CO2培养24小时，加入病毒液，病毒稀释10-1-10-8，8个浓度，每浓度3孔，每孔100μl，同时设正常细胞对照，37℃、5％CO2培养5-7天，每天在倒置显微镜下观察细胞形态变化(CPE)，以25％以下形态变化为“+”，26％-50％形态变化为“++”，51％-75％形态变化为“+++”，76％-100％形态变化为“++++”，用Reed-Muench法，计算病毒半数感染浓度TCID50。正式试验注射用双黄连在HELA细胞培养内对冠状病毒9号的抑制作用试验目的
观察不同浓度的注射用双黄连在HELA细胞培养内对冠状病毒9号的抑制作用，试验采用病毒细胞(CPE)法，计算药物半数有效浓度(IC50)和最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI)，判断药效。
HELA细胞以40万/ml浓度接种96孔培养板，37℃、5％CO2培养24小时，细胞培养至单层，弃掉培养液，加入100 TCID50的冠状病毒液，同时设正常细胞对照，37℃、5％CO2吸附2小时后，弃掉病毒液，加入不同浓度的注射用双黄连药液，药物选用对细胞的最大无毒浓度(TD0)2倍稀释10个浓度即1500μg/ml-3.9μg/ml，阳性对照药物更昔洛韦为2倍稀释10个浓度即375μg/ml-0.75μg/ml，将稀释的药物分别加入细胞孔内，每浓度3孔，同时设正常细胞对照，37℃、5％CO2培养5-7天，每天在倒置显微镜下观察病毒CPE，用Reed-Muench法，计算药物半数有效浓度(IC50)和最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI)，判断药效。试验结果1.注射用双黄连对HELA细胞的毒性试验结果验证药物注射用双黄连最大无毒浓度(TD0)为750±0μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为1500±0μg/ml。阳性对照药物注射用更昔洛韦最大无毒浓度(TD0)为＞6000±0μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为＞6000±0μg/ml。2.在HELA细胞培养内对冠状病毒9号的毒力测定结果TCID50冠状病毒9号半数感染浓度TCID50为10-6正式试验结果注射用双黄连在HELA细胞培养内对冠状病毒9号的抑制作用验证药物注射用双黄连CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为6.8±0μg/ml，最小有效浓度(MIC)为11.7±0μg/ml，治疗指数(TI)为64。阳性对照药物注射用更昔洛韦CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为11.7±0μg/ml，最小有效浓度(MIC)为23.44±0μg/ml，治疗指数(TI)为256。
由于本发明首次公开了注射用双黄连对严重急性呼吸道综合症(急性传染性非典型肺炎即SARS)的治疗作用，所以，该药物在其包装或说明书等标识上或者在其它任何宣传品上只要注明或提示对严重急性呼吸道综合症或急性传染性非典型肺炎或SARS具有治疗作用，则落入本发明的保护范围内。[讨论]通过以上严格的科学试验，我们得出一个很好的结论，注射用双黄连具有很强的抗冠状病毒的疗效，而冠状病毒正是引起严重急性呼吸道综合症(急性传染性非典型肺炎即SARS)的病原体，因此，注射用双黄连该用途的发现，将会为我国乃至世界各地严重急性呼吸道综合症(急性传染性非典型肺炎即SARS)疫情的控制起到积极作用，为广大患者解除病痛提供治病良药。
权利要求
1.注射用双黄连在制备用于治疗严重急性呼吸道综合症的药物中的应用。
全文摘要
本发明公开了一种注射用双黄连药物新用途，即注射用双黄连对由冠状病毒引起的严重急性呼吸道综合症(急性传染性非典型肺炎即SARS)具有明确的治疗效果，可用于该病的治疗。
文档编号A61P31/00GK1448179SQ0312872
公开日2003年10月15日 申请日期2003年5月6日 优先权日2003年5月6日
发明者贾继明, 李大平, 彭可让, 王英新, 段淑敏, 赵新生, 温瑞福, 黄晶晶 申请人:哈药集团中药二厂