专利名称：二咖啡酰奎尼酸衍生物及类似物在治疗冠状病毒感染有关疾病中的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及二咖啡酰奎尼酸衍生物及类似物在治疗冠状病毒感染有关疾病中的新用途，新的二咖啡酰奎尼酸衍生物及类似物、含二咖啡酰奎宁酸或新的二咖啡酰奎尼酸衍生物及类似物的药物组合物。
背景技术：
自2002年11月我国广东发现非典型肺炎以来，至2003年5月5日，世界上已有30个国家和地区，6583人发病，461人死亡。至2003年5月6日，我国有4409人发病，214人死亡。2003年2月由WHO将这种肺炎定义为重症急性呼吸综合症(severe acuterespiratory syndrome，SARS)。美国CDC、加拿大、香港、德国和我国军事医学科学院的科学家分别用Vero E6和恒河猴胎细胞从不同器官和标本中分离出了冠状病毒样颗粒，说明该病毒与SARS的关系。由于越南河内WHO办公室的医生和流行病专家Urbani博士在2月28日检查河内不明原因肺炎患者时受到感染而病逝，因此，Ksiazek等建议将此病毒命名为UrbaniSARS相关冠状病毒(Urbani SARS related coronavirus)。已知病毒唑(利巴韦林)和更昔洛韦等核苷类药物对冠状病毒有抑制作用，但目前还没有特效抗冠状病毒药物。
发明内容
本发明的目的是提供一类新的抗冠状病毒药物，其具有优良的疗效且毒副作用很低。
本发明人经广泛深入地研究，出人意料地发现二咖啡酰奎尼酸衍生物及类似物对冠状病毒有显著的抑制作用。本发明其于上述发现得以完成。
本发明第一个目的涉及式1(若存在对映体时，包括两对映体)的二咖啡酰奎宁酸衍生物及类似物在制备用于治疗冠状病毒感染有关疾病的药物中的用途， 式1其中Q1为一价键，或CH2、CHOH、CH2CH2、CH2CHOH、CHOHCH2、CHCOOH、CH2CH2CHOH、CHOHCH2CH2、CH2CHOHCH2、CH2CHOHCHOH、CHOHCHOHCH2；Q2和Q3可分别为H或合在一起表示CH2CH2、CH2CHOH、CHOHCH2、CH2CH2CHOH、CHOHCH2CH2、CH2CHOHCH2、CH2CHOHCHOH、CHOHCHOHCH2、CH2COH(COOH)CH2、CH2CH2COH(COOH)CH2、CH2COH(COOH)CH2CH2，从而形成环状结构。
X1为O、NH、CH2或CHCOOH
X2为O、NH、CH2或CHCOOH；Y1、Y2、Y3和Y4各为一价键、O或NH；当Y1、Y2、Y3和Y4各为一价键时，R1、R2、R3、R4为CH2COOH、CH2CH2COOH、CH2H2CH2COOH等；当Y1、Y2、Y3和Y4各为O或NH时，R1、R2、R3、R4为H、CH3、CH3CO、CH3CH2CO、CH3CH2CH2CO等；Y5、Y6、Y7、Y8、Y9、Y10为H、Cl、Br或I；Z1和Z2为H，COOH、COOM，其中M表示H、C1-6烷基、苄基或碱金属及碱土金属(如Li、Na、K、Mg、Ca、Ba)等；本发明的再一目的涉及的含式1化合物的药物组合物，该药物组合物对冠状病毒有显著的抑制作用。根据本发明，该药物组合物中可加有各种药用赋形剂、添加剂及载体。
根据本发明，本发明的式1化合物或含式1化合物的药物组合物可用于治疗与冠状病毒有关的各种疾病，尤其是非典型肺炎(重症急性呼吸综合症，SARS)。
根据本发明，本发明的药物组合物可按本领域已知方法配成肠道或非肠道给药的制剂，如片剂、胶囊、颗粒剂、注射剂、喷雾剂、滴鼻剂等。
根据本发明，本发明的式1化合物，主要来自菊科、忍冬科等多种植物，如旋覆花、金银花、吊子银花Lonicera similis Hemsl.、葵花子、茵陈、菊花Chrysanthemum morifolium、洒神菊Baccharis gaudichaudiana DC.、茼蒿Chrysanthemum coronarium L.、狭叶紫锥花Echinaceaangustifolia roots、菜蓟、灯盏花、紫菀Asterscaber Thunb.、蜂胶、山莴苣Lactuca indica、冬青属植物Ilex brevicuspis、冬青属Ilex paraguariensis、苦丁茶Iilex cornutaLindle、yacon(Smallanthus sonchifolius).、咖啡豆、甘薯叶Ipomoea batatas L.、甘薯Bixa orellana、Ipomoeabatatas.、栀子、林荫千里光、土豆、Artichoke(Cynara scolymus L.)、Arnica montana、Isertiapittieri、Artemisia vulgaris.、Eleutherococcus senticosus、Eleutherococcus senticosus、Phagnalonrupestre、Cydonia oblonga Miller(pulp and peel).、常春藤属Hedera helix.、Canthiumschimperianum.、鱼眼草属Dichrocephala bicolor、Guettarda acreana、秘鲁植物Tessariaintegrifolia and Mikania cordifolia、Pluchea symphytifolia、Quercus stenophylla Makino、Euphorbia resinifera Berg、Artemisia caruifolia、genus Leontodon、leaves of Corchorus olitoriusL.、Tesaria intergrifolia、Mikania cardifolia等。或通过全合成或半合成方法制备。
根据本发明，本发明优选的抗冠状病毒化合物为二咖啡酰奎尼酸。
根据本发明，本发明最优选的抗冠状病毒化合物为1，5-二-O-咖啡酰奎尼酸。
根据本发明，二咖啡酰奎尼酸可从上述植物中通过以下提取路线制备植物(旋覆花、金银花等)→乙醇提取→乙酸乙酯萃取→柱层析分离。
根据本发明，二咖啡酰奎尼酸可通过3，4-二羟基被保护的咖啡酰氯与羟其被选择性保护的奎尼酸进行酯化反应制备。
下面将通过二咖啡酰奎尼酸的抗冠状病毒作用来进一步阐述本发明。
在RDa细胞培养内，采用病毒CPE法，观察不同浓度的二咖啡酰奎宁酸对冠状病毒的抑制效果，试验结果表明二咖啡酰奎宁酸具有抑制冠状病毒的作用。1 试验材料1.1验证药物二咖啡酰奎宁酸(DCQA)。1.2阳性对照药物注射用更昔洛韦 批号020802 由湖北科益药业股份有限公司提供。1.3细胞肿瘤横纹肌传代细胞(RDa)由CDC病毒所提供。1.4病毒冠状病毒9号分离株(SARS病人咽拭子9号标本)由301医院提供。1.5CO2培养箱NUAIR US AUTO FLOW提供。1.6XSZ-D2)由重庆光学仪器厂生产2 试验方法2.1预备试验2.1.1二咖啡酰奎宁酸对RDa细胞的毒性测定RDa细胞以40万/ml浓度接种96孔培养板，37℃、5％CO2培养24小时，加入验证药物，验证药物二咖啡酰奎宁酸倍比稀释为2000ug/ml～3.9ug/ml，阳性对照药物更昔洛韦倍比稀释为2000ug/ml～3.9ug/ml，每浓度接种3孔，每孔100μl，同时设正常细胞对照，37℃5％CO2孵箱培养6天，每天在倒置显微镜下观察细胞形态变化(CPE)，以25％以下形态变化为“+”，26％～50％形态变化为“++”，51％～75％形态变化为“+++”，76％～100％形态变化为“++++”，用Reed-Muench法，计算药物半数中毒浓度(TD50)和最大无毒浓度(TD0)。2.1.2在RDa细胞培养内对冠状病毒9号的分离和毒力测定冠状病毒9号的分离(SARS病人咽拭子分离)RDa细胞以每毫升40万浓度接种试管，37℃5％CO2培养24小时，弃掉培养液，每管加入SARS病人咽拭子标本9号，33℃转鼓培养5小时后，加入维持液1ml，同时设正常细胞对照，33℃转鼓培养5～7天。细胞形态出现CPE变化后，采用PCR的方法检测冠状病毒，9号标本PCR检测为阳性，确定为冠状病毒分离株。经免疫荧光测定双份SARS病人血清，IgM阳性，IgG4倍升高，确定为冠状病毒。采用病毒CPE法测定其效价。病毒CPE法RDa细胞以每毫升40万浓度接种96孔培养板，37℃5％CO2培养24小时，加入病毒液，病毒稀释10-1～10-8，8个浓度，每浓度3孔，每孔100μl，设正常细胞对照，37℃5％CO2培养5～7天，每24小时在倒置显微镜下观察记录细胞形态变化(CPE)以25％以下变化为“+”，26％～50％变化为“++”，51％～75％为“+++”，76％～100％变化为“++++”，用Reed-Muench法，计算病毒半数感染浓度TCID50。2.2正式试验二咖啡酰奎宁酸在RDa细胞培养内对冠状病毒9号的抑制作用观察不同浓度的二咖啡酰奎宁酸在RDa细胞培养内对冠状病毒9号的抑制作用，试验采用病毒细胞(CPE)法，计算药物的半数有效浓度(IC50)和最小有效浓度(MIC)及治疗指数TI，判断药效。
RDa细胞以40万/ml浓度接种96孔培养板，37℃5％CO2孵箱培养24小时，细胞培养至单层，弃掉培养液，加入10TCID50的冠状病毒液，同时设正常细胞对照和病毒对照，置37℃ 5％CO2吸附2.5小时后，弃掉病毒液，加入不同浓度的二咖啡酰奎宁酸药液，药物选用对细胞的最大无毒浓度(TD0)2倍稀释10个浓度即1000μg/ml～1.45μg/ml，阳性对照药物更昔洛韦为2倍稀释10个浓度即2000μg/ml～1.45μg/ml，将稀释的药物分别加入细胞孔内，每浓度3孔，同时设正常细胞对照和病毒对照，置37℃5％CO2培养箱培养5～7天，逐日在倒置显微镜下观察病毒CPE，以病毒对照出现+++-++++时结束试验，用Reed-Muench法，计算药物的半数有效浓度(IC50)和最小有效浓度(MIC)及治疗指数(TI)判断药效，试验重复三次。3 试验结果3.1预备试验结果二咖啡酰奎宁酸对RDa细胞的毒性作用二咖啡酰奎宁酸和阳性对照药物注射用更昔洛韦在RDa细胞培养内，采用细胞形态变化(CPE)法。计算药物最大无毒浓度(TD0)和半数中毒浓度(TD50)，以下试验结果为三次试验结果的均值。
二咖啡酰奎宁酸对RDa细胞的毒性试验结果二咖啡酰奎宁酸最大无毒浓度(TD0)为1000±0μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为2000±0μg/ml阳性对照药物注射用更昔洛韦最大无毒浓度(TD0)为＞2000±0μg/ml，半数中毒浓度(TD50)为＞2000±0μg/ml。3.2在RDa细胞培养内对冠状病毒9号毒力测定结果(TCID50)冠状病毒9号半数感染量(TCID50)为10-5正式试验结果二咖啡酰奎宁酸在RDa细胞培养内对冠状病毒9号的抑制作用(以下试验数据为三次试验结果的均值)二咖啡酰奎宁酸CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为31.25±0μg/ml，最小有效浓度(MIC)为62.5±0μg/ml，治疗指数(TI)为16。
阳性对照药物注射用更昔洛韦CPE法，药物半数有效浓度(IC50)为15.6±0μg/ml，最小有效浓度(MIC)为31.25±0μg/ml，治疗指数(TI)为＞64。
权利要求
1.下式(若存在对映体时，包括两对映体)的二咖啡酰奎宁酸衍生物及类似物在制备用于治疗冠状病毒感染有关疾病的药物中的用途， 式1其中Q1为一价键，或CH2、CHOH、CH2CH2、CH2CHOH、CHOHCH2、CHCOOH、CH2CH2CHOH、CHOHCH2CH2、CH2CHOHCH2、CH2CHOHCHOH、CHOHCHOHCH2；Q2和Q3可分别为H或合在一起表示CH2CH2、CH2CHOH、CHOHCH2、CH2CH2CHOH、CHOHCH2CH2、CH2CHOHCH2、CH2CHOHCHOH、CHOHCHOHCH2、CH2COH(COOH)CH2、CH2CH2COH(COOH)CH2、CH2COH(COOH)CH2CH2，从而形成环状结构。X1为O、NH、CH2或CHCOOH；X2为O、NH、CH2或CHCOOH；Y1、Y2、Y3和Y4各为一价键、O或NH；当Y1、Y2、Y3和Y4各为一价键时，R1、R2、R3、R4为CH2COOH、CH2CH2COOH、CH2H2CH2COOH等；当Y1、Y2、Y3和Y4各为O或NH时，R1、R2、R3、R4为H、CH3、CH3CO、CH3CH2CO、CH3CH2CH2CO等；Y5、Y6、Y7、Y8、Y9、Y10为H、Cl、Br或I；Z1和Z2为H，COOH、COOM，其中M表示H、C1-6烷基、苄基或碱金属及碱士金属(如Li、Na、K、Mg、Ca、Ba)等；
2.一种用于治疗冠状病毒感染有关疾病的药物组合物，其包括作为活性成份的权利要求1二咖啡酰奎尼酸衍生物和类似物，及药用赋形剂或载体。
3.根据权利要求1的用途，其中二咖啡酰奎宁酸衍生物及类似物为二咖啡酰奎尼酸。权利要求1式1中，当Q1为CH2，Q2、Q3合在一起为CH2CHOHCHOH或CHOHCHOHCH2，Z1或Z2为COOH时；或当Q1为CH2CHOH或CHOHCH2，Q2、Q3合在一起为CH2CHOH或CHOHCH2，Z1或Z2为COOH时；或当Q1为CHOH，Q2、Q3合在一起为CH2COH(COOH)CH2，Z1和Z2为H时；或当Q1为一价键，Q2、Q3合在一起为CH2CH2COH(COOH)CH2或CH2COH(COOH)CH2CH2，Z1和Z2为H时，为二咖啡酰奎尼酸衍生物。当X1和X2为O，Y1、Y2、Y3和Y4各为O，R1、R2、R3、R4和Y5、Y6、Y7、Y8、Y9、Y10为H时，分别为1，3-二-O-咖啡酰奎尼酸、1，4-二-O-咖啡酰奎尼酸、1，5-二-O-咖啡酰奎尼酸、3，4-二-O-咖啡酰奎尼酸、3，5-二-O-咖啡酰奎尼酸、4，5-二-O-咖啡酰奎尼酸，它们的乙酰化衍生物及其相应的盐。它们在制备用于治疗冠状病毒感染有关疾病的药物中的用途，
4.根据权利要求1的用途，其中二咖啡酰奎宁酸衍生物为1，5-二-O-咖啡酰奎尼酸。
5.权利要求3、4的二咖啡酰奎尼酸在治疗冠状病毒有关疾病中的用途。
6.权利要求2的药物组合物，其中所述药物组合物可被配成片剂，胶囊，注射液或剂型。
全文摘要
本发明涉及二咖啡酰奎尼酸、二咖啡酰奎尼酸衍生物及类似物在治疗冠状病毒有关疾病上的新用途，新的二咖啡酰奎尼酸衍生物及类似物、含二咖啡酰奎宁酸或新的二咖啡酰奎尼酸衍生物及类似物的药物组合物。
文档编号A61K31/21GK1449751SQ03128729
公开日2003年10月22日 申请日期2003年5月7日 优先权日2003年5月7日
发明者董俊兴, 张慧娟, 屠爱萍 申请人:中国人民解放军军事医学科学院放射医学研究所