专利名称：一种丹参提取物及其制剂的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种丹参提取物及其制剂的制备方法，尤指丹参总酚酸或其可接受的盐的提取物及其制剂的制备方法，属于中药现代化领域。
背景技术：
丹参为唇形科鼠尾草属多年生草本植物丹参Salvia miltiorrhiza Bunge的干燥根及根茎。始载于《神农本草经》，列为上品。历代本草均有收载，功能去瘀止痛、活血通经、清心除烦。是中医临床常用药。
丹参的化学成分主要可分为水溶性成分和脂溶性成分两大部分。20世纪早期的研究主要集中在脂溶性成分方面，经过几十年的努力，取得了巨大的成就。获得了以丹参酮、隐丹参酮为代表的一系列化合物。但是，中医的传统用药方法是用其水煎剂，临床应用最广的丹参制剂是其注射剂，即丹参的水溶性部分。提示丹参的有效成分以水溶性成分为主。自20世纪80年代，我国药物研究人员对丹参的水溶性成分进行了研究。分离得到了丹酚酸A，B，C，D，E，F，G，H，I，J，迷迭香酸，紫草酸，异丹酚酸C，迷迭香酸的葡萄糖甙等酚酸类化合物。药理实验结果说明丹参总酚酸具有对心脏、对脑损伤的保护作用，抗血栓、延缓白内障形成的作用，对肝肾的保护作用，抑制爱滋病毒作用，改善血液循环作用，抗氧化损伤作用和增强学习记忆作用等。其中丹参酚酸A和B的活性最强。
由于丹参酚酸类化合物不稳定，在制备和储存过程中易分解变质，而原儿茶醛及丹参素较易分离和合成获得。因此现有的丹参制剂所含成分主要为活性较弱的丹参素和原儿茶醛，而具有很强活性的酚酸类物质则含量极少，这使药理活性大打折扣。
目前，丹参酚酸类化合物的提取方法多为用水提取后，经过树脂柱。1989年，Takashi Tanaka等报道的丹参多酚酸盐的提取方法是丹参用热水提取，减压浓缩后通过以苯乙烯为骨架材料的大孔树脂MCI-CHP-20P，用水洗后，再用50％甲醇洗脱，得到主要含丹酚酸B镁盐的丹参多酚酸盐。其后，Koji Hase等，徐亚明等(中国专利CN 1247855A，2000年公开)，黎莲娘等(中国专利CN 1384090A，2002年12月公开)先后采用同样的方法从丹参中提取得到酚酸类化合物。以上方法，采用大孔树脂作为主要的分离手段，首先难以确定苯乙烯等有机高分子材料的残留以及其对所得酚酸化合物的影响情况，其次，采用该方法所得到的丹参酚酸类化合物的含量较低。专利CN 1384090A公开的制备方法，在水提取液过大孔树脂柱前进行了醇沉处理。这一步骤虽然去除了杂质，但也使得酚酸类化合物有了较大的损失。
发明内容
本发明的目的是提供一种丹参提取物的制备方法，即丹参总酚酸或其可接受的盐的制备方法。
本发明的另一个目的是提供以上述方法得到的丹参提取物，即丹参总酚酸和其可接受的盐。
本发明的再一个目的是提供以丹参提取物即以丹参总酚酸或其可接受的盐为有效成分的制剂。
本发明的最后一个目的是提供丹参提取物的应用。
为实现上述目的，本发明采用以下技术方案一种丹参提取物的制备方法，包括下列步骤1)提取以丹参为原料，用水、低级醇、或含水低级醇提取，过滤，得到提取液；2)浓缩提取液在低温下减压浓缩，蒸去低级醇；3)调pH值浓缩液用无机酸调节至酸性，过滤；4)萃取滤液用极性溶剂或混合极性溶剂处理使其形成水层和有机溶剂层；5)干燥分取有机溶剂层，浓缩，干燥，即得丹参总酚酸。
所述的制备方法还包括步骤6)将得到的丹参总酚酸溶解，以无机碱或有机碱中和，既得丹参总酚酸可接受的盐。
所述提取用的含水低级醇的碳数为C1-C5，例如甲醇、乙醇、丙醇、正丁醇、异丁醇等；浓度为X，0％＜X≤95％，优选30％≤X≤50％。
所述的浓缩液用无机酸调节至酸性是指调节pH值为0-4，优选pH值为2-3。
所述的提取方法选自煎煮、回流、浸渍和渗漉中的一种，优选浸渍或渗漉。
所述的萃取用极性溶剂或混合极性溶剂为醋酸乙酯、正丁醇、丁酮，或这些极性溶剂与甲醇、乙醇或丙酮组成的混合极性溶剂。
由此可见，用本发明方法制备得到丹参总酚酸或其可接受的盐，工艺简单，不需特殊设备，安全，易于操作，成本低廉。本发明通过萃取和调节溶液pH值的方法对提取液进行除杂和精制，与现有技术相比，不仅克服了使用醇沉方法对丹参酚酸造成的损失，也避免了使用树脂法而有可能造成的高分子化合物残留的问题。且所得最终产物丹参总酚酸含量高，杂质少，其总酚酸含量在90％以上，其中丹酚酸B的含量占总酚酸的70％-95％。因此所得丹参总酚酸或其可接受的盐具有较高而可靠的生理活性。所得丹参总酚酸为白色至浅黄色粉末，外观优良，质量稳定、可靠。
一种丹参提取物，该提取物是采用上述方法制备得到的丹参总酚酸或丹参总酚酸盐。
一种丹参提取物的应用，将所述丹参提取物用于制备治疗心脑血管疾病的药物。
一种丹参提取物制剂，该制剂以丹参提取物作为主要活性成分，并加入药剂学可接受的辅料，制成药剂学可接受的剂型。所述辅料选自淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠中的一种或几种。所述的药剂学可接受的剂型为口服剂和注射剂，如片剂、丸剂、胶囊、滴丸、粉针水针或输液。以本发明方法制得的丹参总酚酸粉针剂克服了丹参酚酸类化合物在制备和储存过程中易分解、变质的缺陷，具有良好的稳定性，确保了丹参总酚酸的质量和疗效。
制备所需药物的各种剂型时，可以按照药学领域的常规生产方法制备。如利用本发明方法得到的丹参总酚酸与一种或多种载体混合，然后制成相应的剂型。
本发明的优点是该方法简便、环保、工艺过程简单，不需特殊设备，安全，易于操作和进行质量控制，成本低廉，所得丹参总酚酸或丹参总酚酸盐含量高，性能稳定，适合大规模工业化生产。
下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，并非对本发明的限制。
具体实施例方式
实施例1丹参药材10kg粉碎成粗粉，加水浸泡24小时后渗漉，收集12倍渗漉液，浓缩。加入10％HCL调节pH值至4，过滤。将所得滤液用3倍量醋酸乙酯进行萃取。合并乙酸乙酯层。减压蒸去乙酸乙酯，干燥，得丹参总酚酸314g，其含量在90％以上。
实施例2丹参药材10kg粉碎成粗粉，加50L30％乙醇浸泡24小时，收集浸出液，浓缩。加入15％HCL调节pH值至3，过滤。将所得滤液用4倍量正丁醇进行萃取。合并正丁醇层。减压蒸去乙酸乙酯，干燥，得丹参总酚酸360g，其含量在90％以上。
实施例3丹参药材10kg粉碎成粗粉，加入40L50％乙醇回流提取，浓缩提取液。加入5％硫酸调节pH值至0，过滤。将所得滤液用3倍量乙酸乙酯与乙醇的混合溶液(乙酸乙酯∶乙醇＝10∶1)进行萃取。合并有机溶剂层。减压蒸去有机溶剂，干燥，得丹参总酚酸325g，其含量在90％以上。
实施例4丹参药材10kg粉碎成粗粉，加50L95％乙醇浸泡24小时，收集浸出液，浓缩。加入15％HCL调节pH值至2，过滤。将所得滤液用4倍量乙酸乙酯与丙酮的混合液(乙酸乙酯∶丙酮＝3∶1)进行萃取。合并有机溶剂层。减压蒸去有机溶剂，干燥，得丹参总酚酸264g，其含量在90％以上。
实施例5
丹参药材10kg粉碎成粗粉，加50L70％乙醇回流提取，浓缩提取液。加入10％HCL调节pH值至3，过滤。将所得滤液用3倍量丁酮进行萃取。合并丁酮层。减压蒸去丁酮，干燥，得丹参总酚酸382g，其含量在90％以上。
实施例6丹参药材10kg粉碎成粗粉，加入40L50％乙醇回流提取，浓缩提取液。加入5％硫酸调节pH值至0，过滤。将所得滤液用3倍量丙酮进行萃取。合并丙酮层。减压蒸去丙酮，干燥，得丹参总酚酸325g。将所得丹参总酚酸100g加入乙醇150ml配成浓溶液，加入1‰(w/v)活性炭10g，室温放置30分钟，过滤，过0.45μ微孔滤膜至澄明，滤液在无菌室内用1％氢氧化钠乙醇液调pH至5.5，使沉淀充分析出，静置，过滤，沉淀用乙醇洗涤，减压抽干，105℃真空烘干即得丹参总酚酸钠盐。
实施例7取实施例6中的丹参总酚酸钠盐在干燥、无菌、洁净的环境下无菌分装即得注射用丹参总酚酸钠盐粉针剂。
规格每支500mg。
用量1～2支/次，供静脉或肌注使用。
本发明质量稳定、剂量可控，无污染，便于操作、运输、储藏，适于大规模生产实施例8取实施例1下丹参总酚酸300g，加淀粉400g，微晶纤维素100g，以50％乙醇制粒，压片，供制成10000片。
实施例9丹参总酚酸对血小板聚集的抑制作用实验选取健康家兔，雄性，实验共分5组，即空白对照组(给予生理盐水)；TD(丹参总酚酸)组40、20、10mg/kg。耳缘静脉给药，药后30min取血进行实验。
从家兔颈总动脉取血(用3.8％枸橼酸钠抗凝，全血与抗凝剂为9∶1)，800rpm离心10min，制备富血小板血浆(PRP)，再经3500rpm离心10分钟，制备贫血小板血浆(PPP)。血浆预温(37℃)30min后，用PPP调100％，用PRP调零，加入不同的诱导剂，按比浊法用血小板聚集仪测定血小板聚集百分数。
(1)对ADP诱导的血小板聚集性的影响以ADP为聚集诱导剂，加样体积为3ul，终浓度为0.3uM，结果表明，TD40mg/kg明显抑制ADP诱导的血小板的聚集反应，抑制率为81.5％.
TD对ADP诱导的血小板聚集的影响(X±SD，n＝5)组别 剂量 聚集率(％)抑制率(％)空白对照组2ml/kg 54.0±22.6TD组 40mg/kg10.0±5.4* 81.5TD组 20mg/kg36.4±9.9 32.5TD组 10mg/kg40.0±34.3 25.9丹参组40mg/kg29.3±22.0 45.7与空白对照组比较*p＜0.05结论TD 40mg/kg明显抑制ADP诱导的血小板的聚集反应，抑制率为81.5％(2)对花生四烯酸诱导的血小板聚集性的影响以AA为聚集剂，加样体积为2ul，终浓度为0.2mM结果TD 40、20mg/kg明显抑制花生四烯酸诱导的血小板的聚集反应，抑制率分别为76.7、32.7％。
TD对AA诱导的血小板聚集的影响(X±SD，n＝5)组别 剂量 聚集率(％)抑制率(％)空白对照组2ml/kg 78.4±17.2TD组 40mg/kg20.3±15.6**74.1TD组 20mg/kg56.6±6.8* 27.9TD组 10mg/kg62.6±32.5 20.3丹参组40mg/kg44.0±23.5* 43.9与空白对照组比较*p＜0.05，**p＜0.01(3)对胶原诱导的血小板聚集性的影响以胶原为诱导剂，加样体积为3ul，终浓度为7.5mg/ml。
结果表明，TD 40mg/kg能明显抑制胶原诱导的血小板的聚集反应，抑制率为68.9％。
对胶原诱导的血小板聚集的影响(X±SD，n＝5)组别 剂量 聚集率(％)抑制率(％)空白对照组2ml/kg 68.8±27.0TD组 40mg/kg22.1±11.2* 67.9TD组 20mg/kg53.8+19.4 21.8TD组 10mg/kg68.1±19.2 1.0丹参组40mg/kg50.1±28.1 27.1与空白对照组比较*p＜0.05结论TD 40mg/kg能明显抑制胶原诱导的血小板的聚集反应，抑制率为67.9％实施例10对大鼠血栓形成的影响选用健康成年大鼠，体重在260+50g，雌雄各半。用20％乌拉坦(1.2g/kg，ip)麻醉，仰卧固定，分离右颈总动脉及左颈外静脉，聚乙烯管(内含6cm长的丝线)管腔内充满肝素生理盐水(40u/ml)，一端插入左颈外静脉，另一端插入右颈总动脉，血液由右颈总动脉经管内丝线流向左外颈静脉，试验时血液流经导管时间固定为30分钟，在血液流通15min后静脉给药。血液流通30min后取出血栓后用滤纸吸干，称湿重，将含血栓置于50℃恒温烘箱中烘干至恒重(约24小时)，称量血栓干重。
试验设5组，分别为空白对照组(给予生理盐水)，TD(丹参总酚酸)60、30、15mg/kg 3个剂量组，丹参粉针剂组(60mg/kg)，均采用股静脉给药。
结果表明，静脉给予TD能明显抑制血栓的形成，与对照组相比，TD 60、30、15mg/kg湿重分别下降了38.7％(p＜0.05)、35.5％(p＜0.05)、29.0％(p＞0.05)；干重分另下降了50％(p＜0.01)、50％(p＜0.05)、33.3％(p＞0.05)。
实验结果(见下表)表明，丹参总酚酸可明显抑制不同因素所致血小板聚集，对实验动物血栓的形成具有显著的抑制作用。提示丹参总酚酸以及其制剂在心脑血管疾病治疗中的应用价值。
TD对血栓的形成的影响(X+SD，n＝12)组别 剂量 湿重(mg)干重(mg)空白对照组3ml/kg 31±14 6+3TD组 60mg/kg19±10* 3±2**TD组 30mg/kg20±11* 3±2*TD组 15mg/kg22±10 4±3丹参组60mg/kg22±14 3±2与空白对照组比较**p＜0.01，*p＜0.0权利要求
1.一种丹参提取物的制备方法，包括下列步骤1)提取以丹参为原料，用水、低级醇、或含水低级醇提取，过滤，得到提取液；2)浓缩提取液在低温下减压浓缩，蒸去低级醇；3)调pH值浓缩液用无机酸调节至酸性，过滤；4)萃取滤液用极性溶剂或混合极性溶剂处理使其形成水层和有机溶剂层；5)干燥分取有机溶剂层，浓缩，干燥，即得丹参总酚酸。
2.根据权利要求1所述的丹参提取物的制备方法，其特征在于所述的制备方法还包括步骤6)将得到的丹参总酚酸溶解，以无机碱或有机碱中和，既得丹参总酚酸可接受的盐。
3.根据权利要求1所述的丹参提取物的制备方法，其特征在于所述提取用的含水低级醇的碳数为C1-C5，浓度为X，0％＜X≤95％。
4.根据权利要求3所述的丹参提取物的制备方法，其特征在于所述含水低级醇优选为乙醇，浓度为X，30％≤X≤50％。
5.根据权利要求1所述的丹参提取物的制备方法，其特征在于所述的浓缩液用无机酸调节至酸性是指调节pH值为0-4。
6.根据权利要求5所述的丹参提取物的制备方法，其特征在于所述的pH值为2-3。
7.根据权利要求1所述的丹参提取物的制备方法，其特征在于所述的提取方法选自煎煮、回流、浸渍和渗漉中的一种。
8.根据权利要求7所述的丹参提取物的制备方法，其特征在于所述的提取方法为浸渍或渗漉。
9.根据权利要求1所述的丹参提取物的制备方法，其特征在于所述的萃取用极性溶剂或混合极性溶剂为醋酸乙酯、正丁醇或丁酮，或这些极性溶剂与甲醇、乙醇或丙酮组成的混合极性溶剂。
10.一种丹参提取物，其特征在于该提取物是采用权利要求1或2所述方法制备得到的丹参总酚酸或丹参总酚酸盐。
11.一种丹参提取物制剂，其特征在于该制剂以权利要求10所述的丹参提取物作为主要活性成分，并加入药剂学可接受的辅料，制成药剂学可接受的剂型。
12.根据权利要求11所述的丹参提取物制剂，其特征在于所述辅料选自淀粉、微晶纤维素、蔗糖、糊精、乳糖、糖粉、葡萄糖、氯化钠、维生素C、半胱氨酸、柠檬酸和亚硫酸钠中的一种或几种。
13.根据权利要求11所述的丹参提取物制剂，其特征在于所述的药剂学可接受的剂型为口服剂或注射剂。
14.根据权利要求13所述的丹参提取物制剂，其特征在于所述的口服剂或注射剂为片剂、丸剂、胶囊、滴丸、粉针水针或输液。
15.一种丹参提取物的应用，其特征在于将权利要求10所述丹参提取物用于制备治疗心脑血管疾病的药物。
全文摘要
本发明公开了一种丹参提取物及其制剂的制备方法，尤指丹参总酚酸或其可接受的盐的提取物及其制剂的制备方法，属于中药现代化领域。该方法包括下列步骤1)提取以丹参为原料，用水、低级醇、或含水低级醇提取，过滤，得到提取液；2)浓缩提取液在低温下减压浓缩，蒸去低级醇；3)调pH值浓缩液用无机酸调节至酸性，过滤；4)萃取滤液用极性溶剂或混合极性溶剂处理使其形成水层和有机溶剂层；5)干燥分取有机溶剂层，浓缩，干燥，即得丹参总酚酸。本发明的优点是该方法简便、环保、工艺过程简单，不需特殊设备，安全，易于操作和进行质量控制，成本低廉，所得丹参总酚酸或丹参总酚酸盐含量高，性能稳定，适合大规模工业化生产。
文档编号A61P9/00GK1590383SQ03156388
公开日2005年3月9日 申请日期2003年9月5日 优先权日2003年9月5日
发明者潘勤, 侯文彬, 刘鹏, 汤立达, 于冰, 夏广萍 申请人:天津药物研究院