结合分子的制作方法

专利名称：结合分子的制作方法
在许多疾病的发病过程中，抗体、酶和内分泌、旁分泌或自分泌信使的活性浓度发生变化。这些生物活性结合分子可以是蛋白质类(例子胰岛素、生长因子、细胞因子、分泌激素、抗体、酶等)、脂类(前列腺素和类似的脂肪酸衍生物)、类固醇类(例子糖皮质激素、盐皮质激素)。下文中，术语细胞因子将解释为以原型方式参与结合过程或信号传导过程的生物活性结合分子。细胞因子是具有高度特异性和一定活性的生物信使。它们通过与优选位于靶细胞表面的细胞因子特异性受体结合而产生生物活性。当信使与受体接触时，通常情况下后者会引发细胞内的信号传导级联反应，在细胞内或组织内引起生物效应。举例来说，这些受体所引发的典型效应是使细胞进入细胞周期，随之增加增殖速率，或引发作为一种细胞死亡形式的凋亡。在炎症过程中，在哺乳动物身体的免疫系统和许多局部调节过程中，细胞因子在各生物有机体的稳态平衡中也起到非常重要的作用。对于许多细胞因子，如白介素类细胞因子家族的大多数成员，细胞表面上的受体由因为和细胞因子结合而聚集的不同蛋白质组成。因此，许多细胞因子具有必须同时与两个或多个受体蛋白结合以高效引发效应的特异性结合位点。这说明在细胞因子受体相互作用中，细胞因子分子中各结合区域彼此间精确限定的距离和空间定位对于效应的完全展现都是关键而必要的。另外，对于某些细胞因子来说，这种细胞因子由需要在受体相互作用的过程中结合的不同蛋白质组成(C.Aul，W.Schneider(Eds.)，Biological Activities and Clinical Efficacies，1997，Springer Verlag Berlin)。最近，已经重组制备许多细胞因子以用作药物。例如，已使用这类药物的适应症是严重的、危及生命的肿瘤疾病和免疫缺陷疾病。
但是，重组制剂具有以下缺点1.重组蛋白质，例如细胞因子的制备在“组装(set-up)”过程中需要高消耗。必须以一种复杂的方式保证用于表达的细胞精确生成具有精确“天然”构象的蛋白质。需要许多试验来寻找对于细胞、载体和条件的合适表达系统以适于在溶液中高表达和具有稳定性。通常，“组装”条件不可转移到大规模发酵上。即使发现了最佳的条件，表达系统也往往不稳定，易于出现问题。
2.由于细胞因子要有规律地施用，因此必须保证其在通常于细菌中进行的表达之后纯化，并且其后绝对不受细菌污染，以避免全身性过敏。这必须使用复杂方法，对定价有很大的影响。
3.许多信使，如细胞因子不只具有一个受体结合位点，而是存在有其他的结构域，这些结构域在大多数情况下并不为人所完全认识，并有可能诱导预计信号途径之外的其他信号途径。这也可以解释在某种程度上用这些材料治疗时频繁发生的副作用。
4.重组制备的蛋白质经常具有与天然蛋白质不同的三级结构，因此为人体识别为“异物”。由此所诱导的抗体会中和该细胞因子，导致细胞因子的活性丧失。
5.重组蛋白质经常表现出对于蛋白水解酶，即蛋白降解酶的明显不稳定性。这使得必须频繁以较高浓度施用，其一方面给患者增加压力，另一方面使治疗开销非常大。
和重组制备细胞因子相比较经济的替代方案是有机化学上可行的生物活性蛋白质如细胞因子的全合成模拟物。
例如，这里所采取的一种方法是人工设计已知蛋白质的催化活性中心，虽然这种研究仍处于初期，到目前为止，只能实现肽结构(β片层、螺旋、转角)的稳定化和某些情况下小分子的有目的配位。
另一种方法是计算机辅助设计具有例如肽性质的小而特异的结合分子。这种小而特异的结合分子的序列通常少于100个氨基酸。由于其大小，这种分子不能用于结合需要完全的细胞因子活性的受体亚单位。通常，它们也不能设计成对于大的受体分子上的两个或多个结合位点同时具有高亲和力。
迄今为止，肽可以通过多种常规的方法非常简单地合成，虽然对于每种肽来说必须建立各自的合成方法。通常，重复活化N-端保护的氨基酸、偶联、洗涤、去封闭、活化等操作来固相合成肽，直至得到所需的肽。所述的产物从固相上移出，通过HPLC纯化，然后转移至其他的分析，例如序列鉴定和生物测试。通常，肽越短，合成越简单且越可靠。
一些肽低聚物的研究表明化学合成和低聚肽表现出生物活性，所述的活性通常低于天然蛋白的生物活性，例如，在红细胞生成素的情况下(专利号WO96/40772)，但是通常比单体的效果强。
直到目前，还根据文献中所述的常规方法、使用大多可商业购得的“交联剂”进行了寡聚物的制备。经常地，在体内不存在的这些分子结构是生物学上惰性且不引人注意的，目的是使特殊的化学组分不产生免疫反应。
肽具有极短的体内半衰期，即它们非常快速地被内源性酶所降解和排泄。应用了各种方法在代谢上来稳定肽和蛋白质。一方面，在合成过程中使用不能够被切割的非天然氨基酸，另一方面，蛋白质通过惰性化学基团修饰，以保护它们免受降解。已知的一个例子是PEG内含子(Schering-Plough)，一种用聚乙二醇修饰的干扰素。
根据作为特异性结合分子的肽的规划几何排列，必须使用不同的策略来制备可能的载体结构(support structure)，以开发针对每个特殊问题的各个载体结构。直到本发明，还没有通过建立通用的策略、以合成方式解决该问题的的合适方法，其中特异性结合分子的数目、类型和相互取向是可变的。以前制备合适载体结构所用的方法或者基于二硫桥的形成((a)Nomiz，M.，Utani，A.，Shiraishi，N.，Yamada，Y，Roller，P.，“Synthesis and conformation of the trimeric coiled-coil segment of laminin”；Int J PeptProtein Res(40(1)；1992；72-79)，或者使用以赖氨酸为基础的树枝状聚合物结构((a)Carrithers，M.D.，Lerner，M.R.；Synthesis and characterization of bivalent peptide ligandstargeted to G-protein-coupled receptors”；Chem Bio 3(7)；1996；537-542；(b)Wada，T.，Okada，K.，Nakamori，M.，Mochizuki，E.，Inaki，Y.；“Synthesis and properties ofoligolysine and oligoglutamic acid derivatives containing nucleosides”；Nucleic AcidsSymp Ser 29；1993；79-80；(c)Henkel，W.，Vogl.，Echner，H.，Voelter，W.，Urbanke，C.，Schleuder，D.，Rauterberg，J.，“Synthesis and folding of native collagen III model peptides”；Biochemistry 38(41)；1999；13610-22)，因此这些方法构成了对可能性的限制。
本发明的目的是提供具有高生理活性的结合分子，其没有现有技术中结合分子的上述缺点。
令人惊奇的是，形成本发明基础的目的是通过一种结合分子达到的，所述结合分子由具有至少一个环状分子亚单位和至少两个侧链亚单位的载体结构组成，其中所述的侧链亚单位是由天然和/或非天然D-和/或L-氨基酸合成的多肽链，其中所述的侧链亚单位与载体结构共价结合。
环状分子亚单位优选是由天然或非天然D-和/或L-氨基酸合成的环状多肽、芳香环、芳香环体系、聚内酯、聚内酰胺、苯三酰胺(benzenetriamide)、三羟基苯甲酸、三内酯或三内酰胺。在恰好连接两个侧链的某些优选实施方案中，环状载体结构还可在结构上最小化，并替换为线形对称结构。
形成环状多肽的氨基酸有利地通过肽键相连。如果环状结构通过形成二硫桥形成，则不存在本发明意义上的环状分子亚单位。这种类型的环状肽结构是许多天然存在蛋白质的组成部分。由于其不稳定性，不适于用作本发明意义上载体结构的中心环状分子亚单位。当然，这并不排除本发明的结合分子除载体结构中更稳定的环状分子亚单位外还包含二硫桥。这种额外的二硫键优选位于距离载体结构较远的位点上，其引入将稳定两个或多个侧链之内和/或之间的特定空间构型。
如果环状分子亚单位是环状多肽，在优选的实施方案中，结合分子的所述至少两个侧链亚单位通过环状分子亚单位中的赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、天冬酰胺和/或天冬氨酸等氨基酸的氨基酸侧链部分与环状分子亚单位结合。
环状多肽优选由2～10个氨基酸组成，特别是由2、3、4或6个氨基酸组成。
在一个优选的实施方案中，环状分子亚单位具有下列结构中的一种a)苯三酰胺 b)环六肽
或具有1-3个侧链肽Seq的、序列为DKDKDK的环六肽，c)三内酯 d)三内酰胺
e)三羟基苯甲酸载体结构 f)环二肽环-L-Ala-L-Lys，衍生有Seq，其中Seq或Pep表示侧链亚单位或-OH。根据本发明，所述的分子包括至少两个侧链亚单位，其可以相同或彼此不同。
如果本发明结合分子中的所述至少两个侧链亚单位是多肽链，则它们可以具有相同的氨基酸序列或不同的序列。
侧链亚单位的多肽链优选由5-60个氨基酸组成，优选由10-50个氨基酸组成，具体由12-40个氨基酸组成。这种多肽链的分子量优选不大于10kDa，特别是低于8kDa或低于5kDa。
在全分子合成过程中，环状载体结构或线形连接分子末端的两个或多个侧链的空间位置可以通过在各侧链的两个空间上合适的相邻残基(例如半胱氨酸或高半胱氨酸)之间引入二硫键而固定，这也认为是本发明的一部分。为了这一目的，侧链的氨基酸序列可以加以修饰或优化，以在合适的位置上包含一个或多个合适的包含SH的残基。
本发明的另一个目的是其中侧链亚单位为由天然和非天然核酸单元组成的寡聚或多聚核酸的结合分子。因而，核苷酸可以以天然方式连接或作为肽核酸(PNA)存在。这种侧链亚单位的分子量优选不大于10kDa，特别是低于8kDa，或低于5kDa。例如，本发明的这种结合分子可以用于结合具有多个DNA结合位点的DNA结合蛋白或蛋白质复合物。
在一个优选的实施方案中，侧链亚单位通过间隔分子亚单位(间隔物)与载体结构相连，所述的间隔分子亚单位特别由天然和非天然碳水化合物或核酸组成。
优选的是，侧链亚单位的游离端与合适的保护基团共价结合以防止外肽酶的降解。根据侧链亚单位和载体结构之间的键类型，N-或C-端可以是游离端。优选的保护基团是D-氨基酸，优选是二肽或三肽。另外，通常使用固相合成范围内的保护基团，可以使用单体碳水化合物和多聚碳水化合物。
为了防止外肽酶切割侧链肽，内部的氨基酸也可以与保护基团共价结合。优选的保护基团是碳水化合物，其优选选自葡萄糖、甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺或N-乙酰半乳糖胺或唾液酸。
在优选的实施方案中，可作为本发明结合分子构成部分的非天然氨基酸分子式为NH2(CH2)nCOOH，其中n＝2-8；特别是NH2(CH2)2COOH，NH2(CH2)3COOH或NH2(CH2)4COOH。
本发明能够开发和制备完全合成的、能克服现有技术中上述缺点的生理性结合分子模拟物。本发明设计载体结构，在其骨架上结合分子的取向能够使生物活性结合分子的结合特征得以模拟。本发明的一大优势是本发明结合分子的合成制备简单。和类似蛋白质分子的重组制备相比，有机化学合成可以更廉价地进行，且更好控制。另外，理论上还可以使用非天然的氨基酸，如D-氨基酸或其他合适的单体单元，期望得到更好的相容性或免疫耐受性。
其中，在此所述的本发明从以下方面克服了现有技术的缺点a)它描述了易于制备的环状载体结构，其通常易于制备和得到，并可用于定位特异性结合分子。
b)载体结构的环状结构能够通过改变环大小和侧链亚单位所结合的位点间距离，和任选地通过引入合适的间隔分子来定位特异性结合分子，尤其是任意所需空间定向。本发明的结合分子不同于现有技术中的结合分子，后者仅进行肽与合成分子的随机交联，其中分子组分的限定空间取向是不可能的。
c)通过选择合适的单体单元，环状载体结构可以以一定的序列在固相上合成，特异性结合分子可以作为侧链亚单位结合或合成。在氨基酸作为单体单元的情况下，这使得能够在载体结构上完成以平行或反平行方式取向的肽的固相合成。
d)载体结构可以根据作为侧链亚单位结合的特异性结合分子的数量、类型和长度改变。
e)根据本发明，以平行或反平行方式取向的氨基酸序列可以在固相中的一个合成步骤中与载体结构偶联，任选地一步合成。后者对于产物的产率和纯度以及生产成本来说是有利的。这里，平行取向指所有的侧链亚单位都通过N-或C-末端以相同的方向与载体结构结合。反平行取向指至少一个侧链亚单位结合在载体结构的N-末端，至少一个结合在载体结构的C-末端。
通过使用非天然氨基酸和D-氨基酸，可以增加有计划定位特异性结合分子的灵活性。非天然氨基酸和D-氨基酸或内酯或内酰胺的使用增加抗蛋白水解降解的稳定性。由于载体结构的可变性，可以引入增加稳定性和半衰期的其他官能团。例如，这适用于糖基化、乙酰化、形成二硫桥或技术人员从保护基团化学所公知的其他化学衍生方法。
如果要定位在本发明载体结构上的特异性结合分子是肽，它们能够在载体骨架上以平行和反平行方式取向和合成。
本发明载体结构的优选实施方案是环肽。适当的现有技术中的保护基团策略适用于环肽。因为环肽只能被内肽酶切割，因此其在体内降解较缓慢。另外，根据本发明的方法，可以通过引入非天然氨基酸，如D-氨基酸来合成蛋白水解耐受性增加的环肽。在连接两个功能侧链的情况下，载体结构可以最小化为线形结构。
白介素-2受体特异性结合分子在本发明的一个实施方案中，提供了合成的结合分子，其与白介素-2(IL-2)类似，具有以高亲和力和IL-2特异性受体结合的能力。IL2是用于肿瘤治疗的细胞因子。其是由133个氨基酸组成的蛋白质，分子量为15.4kDa。IL2与特异性受体(IL2R)结合，由此引发IL2特异性细胞内信号。高亲和力的受体是由亚单位a、b和g(还分别指定为p55、p75和p64)组成的受体复合体。刺激由p75和p64组成的受体复合体足以诱导IL2的全部活性。
IL2具有对T淋巴细胞和B淋巴细胞的刺激效应，活化细胞毒性和细胞裂解性NK细胞。因此，其在免疫应答的调节中有着关键的重要性。因而，IL2在对肿瘤和炎症反应的免疫应答中非常重要。对于用IL2防御肿瘤的一个重要机制可能是诱导LAK(“淋巴因子激活的杀伤细胞”)。这些细胞能够破坏肿瘤细胞。
近年来，在使用IL2进行肿瘤治疗方面已经作了各种尝试。至今，上市了一种用于治疗转移性肾细胞癌和转移性骨髓瘤的重组制品(Aldesleukin，Proleukin byChiron)。重组制品具有高的开发、批准和生产成本，导致相应的高市场价格。另外，重组制品高度容易出现问题。只有约30％的受治疗患者对IL2有反应。在人体内极短的半衰期(小于10min)和广泛的毒性妨碍IL2的广泛临床应用，研究中观察到的治疗相关死亡率为4％。
除了恶心、呕吐和眩晕之外，上述IL2治疗还伴随有器官机能失调和神经精神病学效应。毒性如此之高，以至于动物研究中确定为最佳的剂量中只有10％的剂量能够用于人类。因此，这种细胞因子的治疗潜力不能完全发挥。
偶尔，施用与受体相互作用的短IL2结构域足以能够达到至少某些细胞效应(例如免疫刺激效应)。一项研究可以表明具有氨基酸序列1-30 IL2的肽只有在明显较高的浓度下具有相似的效应(Eckenberg，R.，Xu，D.，Moreau，J.，Bossus，M.，Mazie，J.，Tartar，A.，Liu，X.，Alzari，P.，Bertoglio，J.，Thèze，J.(1997)Analysis of humanIL-2/IL-“receptor beta chain interactionsMonoclonal antibody H2-8 and new IL-2Mutants define the critical role of alpha Helix-A of IL-z.Cytokine 9488-498)。这可能是由于该肽仅与受体复合体的β-链结合，仅活化中等亲和的受体复合体。同样的说法也适用于来自于另一IL2区域的其他所述序列(Eckenberg，R.，Rose，T.，Moreau，J.-L.，Weil，R.，Gesbert，F.，Dubois，S.，Tello，D.，Bossus，M.，Gras，H.，Tartar，A.，Bertoglio，J.，Chouaib，S.，Goldberg，M.，Jacques，Y.，alzari，PM.，Thèze，J.(2000)The first“-Helix ofInterleukin(IL)-2 Folds as a Homotetramer，Acts as an Agonist of the IL-2 Receptor βChain，and Induces Lymphokine-activated Killer Cells.J.Exp.Med.3529-39；Berndt，W.，Chang，D.，Smith，K.，Ciardelli，T.(1994)Mutagenic analysis of a receptor contact site aninterleukin 2Preparation of an Interleukin-2 analog with increased potency.Biochemistry336571-6577)。但是，所有这些肽都不是结合在本发明特征性的载体结构上而合成。因此，它们不能通过中等至低亲和的受体亚单位使生理性受体二聚化并排他性地发挥作用。因此其活性弱。此外，这些肽不能通过引入保护基团来防止蛋白水解降解。因此，它们在体内快速降解。
本发明能够提供具有高活性的合成IL2R特异性结合分子，其能够避免与IL-2或IL-2肽片段的制备和使用相关的缺点。
这里，侧链亚单位优选具有下列序列中的至少一种·APTSSSTKKT1QLQLEHX1X2X3X4X5QMILNGINN 或·TIVX6FLNRWIT FX7QSX8ISTLT1，其中X1选自I或L，X2选自I或L，X3选自V、L或M，X4选自E、D或K，X5选自L或F，X6选自E或D，X7选自A、G或C，X8选自A或I，且在T1位置，根据现有技术的保护基团，优选为碳水化合物部分，优选选自葡萄糖、甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺或N-乙酰半乳糖胺，以合适的方式与苏氨酸共价结合，防止蛋白水解降解。根据本发明，也可以使用侧链亚单位具有与上述序列相比至少80％，优选90％或95％序列同源性的结合分子。在这种情况下，序列差异主要是保守性氨基酸交换。
优选的结合分子具有下列结构· APTSSSTKKT1QLQLEHX1X2X3X4X5QMILNGINN -支撑结构-TIVX6FLNRWTT FX7QSX8ISTLT1；·TIVX6FLNRWITFX7QSX8ISTLT1-支撑结构- APTSSSTKKT1QLQLEHX1X2X3X4X5QMILNGINN；·APTSSSTKKT1QLQLEHX1X2X3X4X5QMILNGINN-支撑结构-APTSSSTKKT1QLQLEHX01X02X03X04X05QMILNGINN· 或TIVX6FLNRWIT FX7QSX8ISTLT1-支撑结构- TIVX06FLNRWITFX07QSX08ISTLT1其中氨基酸X01、X02、X03、X04、X05的选择和X1、X2、X3、X4和X5相同。根据本发明，也可以使用侧链亚单位具有与上述序列相比至少80％，优选90％或95％序列同源性的结合分子。在这种情况下，序列差异主要是保守性氨基酸交换。
IL2R特异性结合分子可以克服现有技术中的基本缺点。可以容易而经济地生产结合分子。不存在重组分子的高生产成本和高生理不稳定性。不发生采用肽的情况下所观察到的不充分受体刺激，这是因为本发明的结合分子以功能上协同的方式、以一定的空间排列与受体复合物结合，具有对受体没有亲和力的载体结构。本发明的受体分子还通过有目的的序列优化来提供使活性增加、使副作用最小化的可能性。
上述合成IL2R特异性结合分子适于治疗免疫系统疾病，例如炎症和关节炎进程，或者所有类型和成因的免疫缺陷综合征；与细胞增殖增加相联系的疾病，如癌病(carcinoses)，例如癌、肉瘤、淋巴瘤和白血病；或感染进程。已知白介素2和白介素12联用在肿瘤治疗中具有积极效果。另外，这些药剂还可以和本发明的药物联用，作为引发靶细胞凋亡的优选组合药剂，所述的靶细胞具体是肿瘤细胞。在这种情况下，治疗成功的预期积极效果通过导致局部功效增加的本发明药物所引起的在肿瘤中的局部凋亡和遍在的免疫刺激来实现。这里，特别优选使用TRAIL(TNF相关的凋亡诱导配基)受体特异性结合分子和效应分子。
尽管上述序列和结合分子设计用来最佳作用于人IL2受体，但是可以使整个概念适用于同源序列已知的任意物种的IL2受体。
各人类序列可以用其在动物中的相应部分所置换，以本发明所特有的方式组合，以优化在动物中的效果，从而获得最佳的兽医用途。
下述的排列示出了与人序列同源的猫和狗的序列。这些序列的特征在于能够在猫或狗中结合各自的受体亚单位。本发明包括如上述人类序列所概括的这些侧链的所有常见修饰和组合。在优选的实施方案中，可以通过在序列中引入氨基酸的保守性交换、引入含SH的残基和二硫桥以及其他优化所得分子的空间设计和稳定性的化学修饰方法来修饰这些序列。作为侧链，它们可以组合在根据本发明的载体结构上，以变得能够与受体二聚体结合。
TRAIL受体特异性结合分子TRAIL(TNF相关的凋亡诱导配基)是属于TNF家族的蛋白质，其选择性地在肿瘤细胞中引发程序性细胞死亡(凋亡)。这里合成的、优选基于适当环状载体结构的TRAIL特异性结合分子和效应分子特异地与肿瘤细胞表达的TRAIL受体结合，并引发凋亡。引发凋亡的蛋白质如TNF(肿瘤坏死因子)或Fas和AOP1已经公开有较长的时间。最初，细胞因子TNF被鉴定为在小鼠中具有强杀伤肿瘤效应的蛋白质。但是，由于其强的全身毒性，不能在人体内治疗性应用。同样情况也适用于Fas和APO1。TRAIL于1999年首次得以描述(Walczak，H.et al.，Nature Medicine 5(1999)157-163)。该蛋白质由281个氨基酸组成，是II型膜蛋白，通过切割转化为由氨基酸114-281组成的可溶性分子。随着自发性的三聚体化，其与特异受体结合，从而诱导受体的三聚体化。因此，它引发由caspase所介导的细胞内细胞死亡程序。至今为止，已经报道了TRAIL的四种不同受体TRAIL-R1和TRAIL-R2，二者都参与信号传递；和受体TRAIL R3和TRAIL R4，其不具有所谓的“死亡结构域”，因此不能在结合TRAIL之后引发信号。两种TRAIL自身和上述的受体在大多数人体组织和器官中表达；选择性杀伤肿瘤的效应可能是因为正常细胞具有较多的“诱捕受体”3和4，其通过抑制活性受体的三聚体化而阻止有效的信号引发。
在天然或重组制备的TRAIL的氨基酸序列中，有多个结构域负责与受体结合，从而负责其生物活性，这些结构域称作结构域AA131-163、AA201-205、AA214-220、AA237-240、AA258-283。空间上相邻的这些短的结构域协同负责与TRAIL受体的相互作用。
本发明能够提供以高亲和力与TRAIL受体特异结合的结合分子。在本发明的结合分子中，上文中所述的类似结构域以合适的协同性排列与环状载体结构相偶联，以获得生物效应。
在优选的实施方案中，本发明的TRAILR结合分子以三聚体形式存在。由于和环状分子亚单位共价结合，它们具有高的生物半衰期，由于三聚体化，有可能同时获得最大生物活性和最小副作用。这些肽是其生物活性所必须的最小RAIL结构。这能够实现最高特异性和最小副作用。在优选的实施方案中，三聚体可以以均三价形式制备，或通过环状载体结构制备，或通过苯三酰胺连接体制备。
有利的是，TRAIL肽以糖修饰的形式制备，以使它们具有高的生物半衰期。这能够减小用药频率和用药量，并随之减小对患者的压力。通过有目的的氨基酸交换，所述的肽可以一方面转换成具有更高生物活性的形式，或转化为具有更高生物半衰期的形式，或另一方面转化成拮抗性的形式，即抑制剂形式。
在一个实施方案中，TRAILR特异性结合分子的至少一个侧链亚单位具有下述序列SKNEKALGRKINSWESSRSGHSFLS在具体的实施方案中，具有TRAIL受体亲和力的结合分子具有含下列序列的至少一个侧链亚单位SKNEKALGRKIX1X2X3X4SSRX5GHSFLS，其中X1＝N或L，X2＝S或Q或L或E，X3＝W或L或R或A或Y，X4＝E或N或A或D或H，X5＝S或A。
本发明的另一个目的是侧链亚单位具有与上述序列相比至少80％，优选90％或95％序列同源性的结合分子。这里，序列差异主要是氨基酸交换。
具体的实施方案是具有下列结构的分子


根据本发明，还可使用侧链亚单位具有与上述序列相比至少80％，优选90％或95％序列同源性的结合分子。这里，序列差异主要是保守性氨基酸交换。
抗体和其抗个体基因型(anti-idiotype)与本发明相关的、另一种重要的具有生物活性的物质类型是抗体。抗体是体内产生的，其与通常为人体异源的、称作抗原的物质特异性结合。抗体在对病原体的防御中和对于预防病原体感染来说是重要的。在各种治疗和诊断应用中，使用或开发对计划性适应症具有相关结合能力的抗体。因此，抗体用于在肿瘤中特异性富集细胞生长抑制剂或其他肿瘤损伤剂，或将它们和对照试剂一起加入，用于说明成像过程中身体或发病区域中的特定部分。抗体可以作为天然抗体从人体分离。通常所谓的单克隆抗体是通过免疫、随后将抗体生成细胞和骨髓瘤细胞融合而永生化、通过分离进行单克隆而在实验室啮齿动物中生长的抗体。此外，抗体还可以通过将编码的遗传信息转移到适当的表达系统中的重组技术而进行单克隆，所述的表达系统经常是基于细菌或酵母的表达系统。重组制备的抗体可以从具有免疫球蛋白基因集合的所有物种获得，所述的免疫球蛋白基因集合是充分测序且公知的。本文中，根据上面的说明，可以是天然存在的、单克隆或重组制备的抗体。
抗体是较大的分子，其特异性结合区域通常含有6个高度可变区(基于氨基酸序列)。抗体的结合特征由所谓的CDR(“互补确定区”)限定。但是，在许多情况下，并非所有的6个都协同性地参与结合，单个或多个区域对以临界(critical)方式的结合不是必要的。单克隆抗体和重组制备的抗体都可治疗性或诊断性地用在各种适应证中。但是，抗体的治疗性应用产生了几个缺点。一方面，通过两种方法(单克隆和重组)的抗体制备是复杂且非常昂贵的。另一方面，抗体自身是患者免疫系统与之反应的天然分子。患者自身抗体(抗治疗性抗体)的生成或过敏反应会大大地妨碍这种治疗。为了克服这些问题，必须改变制备治疗性抗体的方法，例如，必须在分子生物学、耗时、复杂的过程中将腔壁的单克隆抗体引入到重组生产中，并同时通过这种方式人源化，即通过引入人源序列而优化治疗用途。
根据现有技术，现在已经有可能从库，如重组肽库中分离抗个体基因型物质。通常，这种方式分离的肽仅以低亲和力与抗体结合，不能或仅有限地竞争性阻碍病原性抗体的形成。
本发明通过提供合成的、模拟治疗性相关抗体结合特征的结合分子来解决上述问题。本发明的载体结构能够克服现有技术中的上述问题，开发和设计各抗体的全合成性模拟物。和类似分子的重组制备相比，有机化学合成可以更经济、更好控制地进行。此外，通常还可以使用期望获得更好相容性、半衰期或免疫耐受性的非天然氨基酸或其他合适的单体单元。
但是，抗体不但在治疗中是重要的，还可以是致病试剂。因此，如果抗体攻击自体同源的组织从而引发所谓的自身免疫病，或者如果它们至少与自身免疫病相关，则这些抗体是致病性的。抗体或免疫球蛋白超家族的其他物质致病作用的另一个变式在于对各物质过敏的患者中过敏性物质的激发。这些疾病也是免疫组分之间的错误反应，其引发是通过各过敏原的结合启动的。在所有这些情况下，有必要使病原性相关抗体与所谓的抗个体基因型物质反应来中和病原性相关抗体。对于抗个体基因型，必须理解的是特异性结合于抗体结合腔的物质就象实际上的抗原。这防止与自体同源性抗原的致病性结合。
本发明的另一个目的是制备结合分子的方法，所述的方法作为固相合成方法进行，其中与固相结合的侧链亚单位的肽通过各个氨基酸而连续地延伸，任选地在最后步骤中与载体结构偶联。
本发明的另一个目的是具有下述序列的肽·APTSSSTKKT1QLQLEHX1X2X3X4X5QMILNGINN，或·TIVX6FLNRWIT FX7QSX8ISTLT1，其中X1选自I或L，X2选自I或L，X3选自V、L或M，X4选自E、D或K，X5选自L或F，X6选自E或D，X7选自A、G或C，X8选自A或I。
本发明的另一个目的是侧链亚单位与上述序列相比具有至少80％，优选90％或95％序列同源性的肽，其不与TRAIL序列片段完全同源。
本发明的另一目的是包含本发明结合分子或肽的药物和诊断试剂。
本发明的结合分子优选用于制备药物或诊断试剂，用于治疗或鉴定人类或哺乳动物的免疫系统疾病，具体是炎症、关节炎进程、免疫缺陷综合征、自身免疫性综合征和免疫缺陷综合征、生育障碍、避孕或抗病毒预防、与细胞增殖增加相关的疾病，具体是肿瘤疾病、癌病、肉瘤、淋巴瘤和白血病；和/或感染进程。
本发明的药物具体以包含合适的添加剂、载体、辅药和/或至少一种附加活性物质的微胶囊、脂质体制剂或长效制剂形式提供。任选地，本发明的药物与常见的合适药用载体联用。例如，合适的载体包括缓冲性的氯化钠溶液、水、乳液如油/水乳液、润湿剂、消毒溶液等。本发明的药物可以以注射液、片剂、油膏、悬液、乳液、栓剂、气雾剂等形式提供，以长效形式(微胶囊、锌盐、脂质体等)施用。肽可以微胶囊化，由于其小尺寸产生具有不同效应时间的长效形式，根据胶囊的各孔径大小而定。长效形式可以局部给药，使最高的浓度保证在所需的区域内(如原癌区)持续长时间。其中，药物的给药方式依赖于活性物质存在的形式；其可以口服或肠道外给药。技术人员公知几种方法。适当的剂量由主治医师来确定，依赖于几个因素，例如患者的年龄、性别、体重、疾病的性质和阶段、用药模式等。
在一个优选的实施方案中，本发明结合分子的使用通过使用所述的分子离体制备人LAK(淋巴因子激活的杀伤细胞)、具体以IL2特异性的方式发生。在这种离体治疗中，细胞取自患者，用活性物质处理，在培养皿中激活，随后重新灌输到患者体内。
在本发明的一个具体实施方案中，白介素12、白介素12受体特异性结合分子和效应分子或重组IL12用作附加的活性物质。
在另一个实施方案中，TRAIL(TNF相关的凋亡诱导配基)、TRAIL受体特异性结合分子和效应分子或重组制备的TRAIL用作附加的活性物质。
在一个具体的实施方案中，病毒生长抑制剂，具体是能够阻滞或阻断病毒颗粒侵入靶细胞的病毒生长抑制剂作为附加的活性物质添加到本发明的药物中，所述的病毒颗粒特别是HIV颗粒，所述的靶细胞特别是T-淋巴细胞。
本发明的另一个目的是结合分子，其中载体结构由1-10个氨基酸的线形肽组成，其中所述的氨基酸选自G、β-D、L-丙氨酸或NH2(CH2)xCOOH(x＝3-8)。
实施例1环肽基础上的肽多聚化原则A反平行二聚体产生环状肽，并将之用作固相合成的起点。首先，固相合成第一条肽链，然后将环肽与之偶联，随后在加载的树脂上逐步合成第二条肽链或与之偶联预先纯化的肽B。
赖氨酸环肽和天冬氨酶在溶液中的偶联将0.2ml NMM和1mmol CDMT加入到溶于10ml二氯甲烷的1mmol天冬氨酸溶液中，在氩气中冷却到0℃，并将该混合物于0℃搅拌2h。然后，加入另外的0.2ml NMM和1摩尔当量的溶于10ml纯DMF中的环肽。该混合物于0℃搅拌2h，于室温下过夜，加入50ml冰水，并每次用100ml乙酸乙酯萃取两次。通过和饱和碳酸氢钠溶液和5％硫酸氢钠溶液一起摇振，萃取合并的有机相。用硫酸钠干燥后，剩余的溶液在旋转蒸发器中浓缩，残留物悬浮于二氯甲烷中，产物为白色固体形式。
批量大小Boc-L-Asp(OBz)162mg 0.5mmol环-L-Ala-L-Lys100mg 0.5mmolCDMT 89mgNMM 0.2ml二氯甲烷 5mlDMF 5ml产率理论0.25g 100％实际0.18g 72％B平行二聚体根据下文所述的方案产生序列为D-K-D-K-D-K的环六肽。通过适当地选择保护基团，该环肽可以通过其中一个天冬氨酸的侧链，任选地通过间隔分子与聚合物载体结合，然后可以在树脂上平行合成三个肽链，或者可将纯化的肽偶联在固相上。
A＝DB＝KX，Y＝间隔分子PG1/PG2＝正交保护基团PG3/PG4＝正交保护基团实施例2根据实施例1B以IL2R特异性结合分子形式的肽A的实施方案所述肽合成如下
合成利用固相合成(每次实验采用100mg Wang树脂(0.4mmol/g))，在合成机(Sophas-3，Zinsser，Analytik)中自动制备具有可变序列的肽。使用具有现有技术中合适的其他保护基团的Fmoc衍生氨基酸(c＝0.5mol/l)作为单体单元。氨基酸单元和偶联试剂(HOBt，c＝0.766g/ml；PyBOP，c＝0.2602g/ml)以溶于DMF的形式提供。各偶联步骤每个进行2×45min，步骤之间用DMF洗涤树脂。通过用DMF中的50％(v/v)哌啶处理20分钟进行Fmoc的切割。从树脂的后续切割在95％三氟乙酸、2.5％水、2.5％二异丙基硅烷混合物的存在下进行20分钟。切割的肽通过加入叔丁基甲基醚沉淀，离心，再次与叔丁基甲基醚合并和离心。然后，将肽冻干，通过反相HPLC纯化，通过LC/MS(Thermoquest LCQDuo)表征。将纯化的肽在细胞培养物中检查其细胞毒性增加效应。
制备并检验具有下述结构的肽序列1APTSSSTKKT QLQLEHLLLK LQMILNGINN序列2APTSSSTKKT QLQLEHFLLD FQMILNGINN序列3APTSSSTKKT QLQLEHFLMK FQMILNGINN细胞毒性试验对于细胞毒性测定来说，作为效应细胞的特异性杀伤肿瘤细胞的NK细胞和作为靶细胞的肿瘤细胞在受试肽存在的条件下孵育。根据常规方案、使用细胞毒性测试试剂盒(Promega，Germany)、在微孔板读取仪中测定乳酸脱氢酶(LDH)的释放，进行细胞毒性测定。使用YT细胞(DSMZ，Germany)作为NK细胞(E)。使用Daudi细胞(DSMZ，Germany)作为靶细胞(T)。YT细胞和Daudi细胞以1∶10的比例接种在微孔板中，在0.3、3、30∶M受试肽的存在下孵育16h。浓度为5nM的人IL-2(Sigma)用作阳性对照。
第二天，向细胞中加入10∶1的裂解缓冲液，将细胞再孵育2h。然后，5∶1试剂转移到第二微孔板中，与50∶1底物缓冲液合并。孵育30min后，用50∶1终止液终止反应，在微孔板读取仪中测定所形成MTT有色复合体的光吸收。
表1说明了浓度为0.3∶M时所述受试肽的细胞毒性诱导效应和人IL-2的诱导效应同样高。
表1细胞毒性试验结果概况
实施例3三羟基苯甲酸载体结构的合成
精确质量＝1065分子式＝C62H55N3O14
分析2，4，6-三羟基苯甲酸170mol 4mol 0.68gFmoc-Ala-OPfp 477.4g/mol 16mmol 7.16gHOBt135.1g/mol 13mmol 1.76gDMF 100ml4mmol三羟基苯甲酸溶解于尽可能少的含水碳酸钠溶液(pH＝9)中，并加入悬浮于130ml丙酮中的16mmol五氟苯酚酯悬液。混合物于室温下搅拌过夜，并于0℃用5％HCl酸化至pH＝1。溶液于旋转蒸发器中浓缩至原体积的一半，通过和2×150ml乙酸乙酯摇振进行萃取。合并的有机相通过和100ml水、5×浓缩硫酸氢钠溶液摇振进行萃取，并用硫酸钠干燥。在旋转蒸发器中除去挥发性的组分后，将残留物悬浮于甲醇中，吸滤，并用冰冷的甲醇再次洗涤。如果产物不沉淀，将其完全旋转蒸发。
实施例3白介素-2免疫体(immunomer)的合成待合成物质的化学式 X ＝D-丙氨酸βAla ＝β-丙氨酸缩略词材料DMF N，N-二甲基甲酰胺(肽合成级)DCM 二氯甲烷(肽合成级)HOBT 1-羟基苯并三唑(无水)DBU 1，8-偶氮二环[5，4，0]十一-7-烯98％PyBOP 六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基膦
DIPEA N-乙基二异丙基胺98+％TIS三异丙基硅烷99％MeOH 甲醇HPLC(等级)TFE2，2，2-三氟乙醇99.8％EDT乙二硫醇通用策略以0.2mmol/g的置换速率在2-氯三苯甲基氯树脂(2-chlorotrityl chloride resin，200-400目)上进行合成。前7个氨基酸作为片段偶联。通过以PyBOP/HOBT/DIPEA偶联添加剂和10倍过量氨基酸的单、双或三偶联，实现下面氨基酸的结合。生长肽链的N-末端保护通过用哌啶/DMF(1/3)双重处理实现。在困难的情况下，用DBU/哌啶/DMF(2/2/96)进行三重处理。所用的偶联和去保护循环的数目如下列方案所示(通过HPLC-MS监测每次延伸获得的不同偶联/去保护信息)。
RES-XXNNIGN-LCMQLDLLLHELQLQTKKTBGGB-TLTSIISQAFTIWRNCSEVITXXHHHHCOUPLING 22221211111111122222222-223333333333333333333333333DEPROTECT 22222222222222322222222-2233333333333333333333333331、2、3＝偶联或去保护循环数X＝D-丙氨酸B＝β-丙氨酸方案1第一肽片段的合成将2mmol第一氨基酸和4mmol DIPEA溶解于10ml无水DCM中。将溶液加到1.0g无水2-氯三苯甲基氯树脂(200-400目)上，混合物在涡旋仪上反应60分钟。在反应结束时，树脂和20ml DCM/MeOH/DIPEA两次反应3分钟，用20ml DCM洗涤两次，并用DMF洗涤两次。然后树脂用20ml哌啶/DMF(1∶3)处理两次3/20分钟，并用20ml DMF洗涤6次。氨基酸2-7的加入通过下列步骤实现5mmol氨基酸、7.5mmol HOBT和10mmol DIPEA溶解于15ml DMF中。5分钟后，加入5mmolPyBOP和10mmol DIPEA，并将该溶液倒在树脂上。在涡旋仪上60分钟后，树脂用20ml DMF洗涤6次，用20ml哌啶/DMF(1∶3)处理两次20/20分钟，并用20ml DMF洗涤6次。在N-末端氨基酸的情况下，树脂不用哌啶/DMF处理。
方案2肽片段的切割结合最后一个氨基酸后，树脂用20ml DMF洗涤6次，用20ml DCM洗涤两次，并使之与50ml TFE/DCM(2/8)反应60分钟。将树脂过滤掉，真空除去溶剂，粗制肽片段不经进一步纯化而使用。
方案3肽片段的再次结合1mmol所述片段和2mmol DIPEA溶解于50ml无水DCM中。将该溶液加到5.0g无水2-氯三苯甲基氯树脂(200-400目)上，混合物在涡旋仪上反应12小时。在反应结束时，将树脂与50ml DCM/MeOH/DIPEA两次反应3分钟，用50ml DCM洗涤两次，并用50ml DMF洗涤两次。
方案4氨基酸8-57的偶联干燥的树脂在50ml哌啶/DMF(1/3)中溶胀30分钟，用30ml哌啶/DMF(1/3)处理20分钟，用30ml DBU/哌啶/DMF(2/2/96)处理20分钟，并用30ml DMF洗涤6次。将10mmol氨基酸、15mmol HOBT和20mmol DIPEA溶解于30ml DMF中。5分钟后，加入10mmolPyBOP和20mmol DIPEA，并将该溶液倒在树脂上。在涡旋仪上60分钟后，将树脂用30ml DMF洗涤两次，偶联重复1次或(在不同的情况下)两次共60分钟。然后将树脂用30ml DMF洗涤6次。该树脂可以直接用于偶联下一个氨基酸，或用30ml DCM洗涤2次后，真空干燥并于-80℃保存。
方案5切割和去保护最后一个氨基酸偶联之后，通过用30ml哌啶/DMF(1/3)处理20分钟、用DBU/哌啶/DMF(2/2/96)处理20分钟，进行双处理将N-末端保护基团去除。树脂用30mlDMF洗涤6次，用30ml DCM洗涤两次，并用50ml TFE/DCM(2/8)处理180分钟。过滤后，真空除去溶剂，通过在惰性气体下用30ml TFA/TIS/EDT/水(94/1/2.5/2.5)处理180分钟除去保护基团。将溶液倒入300ml凉的醚中，将沉淀溶解于甲醇，将肽通过RP-HPLC(Kromasil 100 C4 10μm，250×4.6mm)纯化，收集的级分直接用于去折叠步骤。
方案6去折叠步骤使用存在于洗脱级分中的相同溶剂将各洗脱级分稀释至终体积20ml。室温下，将纯化产物的这种溶液在烧杯中与10ml Ni-NTA Superflow(Qiagen)稍搅动孵育30分钟。将Superflow粒子装入空FPLC柱上，并连接到FPLC仪器上。使用该仪器的层析程序，在10min.梯度中将溶剂交换为水，然后再使用另一个10min.梯度，将溶剂交换成水/三氟乙醇的混合物(1/1)。在24小时期间，往储蓄瓶中通氧气，使用氧气作为瓶中的气体氛围将溶剂氧化，以闭合二硫桥。在氧化过程中，沿着柱通恒定流量1ml/min 24h，同时洗脱物恒定地回流至储蓄瓶中。
在24h过程结束时，对去折叠并通过二硫桥封闭的终产物使用含有150mM咪唑的磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.2)或使用0.1M醋酸盐缓冲液(pH4.5)进行洗脱。
结合分子能够与β/γ白介素2受体异源二聚体结合，将其活化并诱导信号传导。
权利要求
1.一种结合分子，由具有至少一个环状分子亚单位和至少两个侧链亚单位的载体结构组成，其特征在于侧链亚单位是由天然和/或非天然D-和/或L-氨基酸组成的多肽链和/或多聚核苷酸链，并且所述的侧链亚单位与载体结构共价结合。
2.权利要求1的结合分子，其特征在于所述的环状分子亚单位是由天然或非天然D-和/或L-氨基酸合成的环状多肽、芳香环、芳香环体系、聚内酯、聚内酰胺、苯三酰胺、三内酯或三内酰胺。
3.权利要求2的结合分子，其特征在于形成所述环状多肽的氨基酸通过多肽键连接。
4.权利要求2或3的结合分子，其特征在于所述的环状分子亚单位是环状多肽，所述的至少两个侧链亚单位通过环状分子亚单位的赖氨酸、丝氨酸、苏氨酸、谷氨酸、天冬酰胺和/或天冬氨酸等氨基酸的氨基酸侧链部分与环状分子亚单位连接。
5.权利要求2-4中至少一项的结合分子，其特征在于所述的环状多肽由2-10个氨基酸组成，优选由2、3、4或6个氨基酸组成。
6.权利要求1的结合分子，其特征在于其具有下列结构中的一种a)苯三酰胺 b)环六肽 或具有1-3个侧链肽Seq的、序列为DKDKDK的环六肽，c)三内酯 d)三内酰胺 e)三羟基苯甲酸载体结构 f)环二肽环-L-Ala-L-Lys，衍生有Seq，其中Seq或Pep表示侧链亚单位或-OH。
7.权利要求1-6中至少一项的结合分子，其特征在于所述的多肽链具有相同的氨基酸序列。
8.权利要求1-7中至少一项的结合分子，其特征在于所述的多肽链由5-60个氨基酸组成，优选由10-50个氨基酸组成，特别是由12-40个氨基酸组成。
9.权利要求1-8中至少一项的结合分子，其特征在于所述的侧链亚单位通过间隔分子亚单位(间隔物)与所述的载体结构结合，所述的间隔分子亚单位特别由碳水化合物或核酸组成。
10.权利要求1-9中至少一项的结合分子，其特征在于所述的非天然氨基酸的分子式为NH2(CH2)nCOOH，其中n＝2-8；优选是NH2(CH2)2COOH，NH2(CH2)3COOH或NH2(CH2)4COOH。
11.权利要求1-10中至少一项的结合分子，其特征在于和所述载体结构结合的所述侧链亚单位具有下列序列中的至少一种·APTSSSTKKT1QLQLEHX1X2X3X4X5QMILNGINN(SC1)或·TIVX6FLNRWIT FX7QSX8ISTLT1，(SC2)或·TKETQQQLEQLLLDLRLLLNGVNNPE (SC3)或·TKETEQQMEQLLLDLQLLLNGVNNYE (SC4)或·NYDDETATIVEFLNKWITFAQSIFSTLT (SC5)或·EYDDETATITEFLNKWITFAQSIFSTLT (SC6)，其中X1选自I或L，X2选自I或L，X3选自V、L或M，X4选自E、D或K，X5选自L或F，X6选自E或D，X7选自A、G或C，X8选自A或I，在T1位置，根据现有技术的保护基团任选地以合适的方式共价结合苏氨酸，保护基团优选为碳水化合物部分，优选选自葡萄糖、甘露糖、N-乙酰葡萄糖胺或N-乙酰半乳糖胺，以防止蛋白水解降解；任选地通过在游离C-和/或N-末端结合两个D-氨基酸残基来实现抗外肽酶的保护作用；结合在载体结构上之后，所述的序列任选地通过将单一残基置换为具有SH基团的残基进行修饰，以生成多肽侧链之间的二硫桥；结合分子中的所述侧链亚单位具有与上述序列至少80％的同源性；并且上述序列的片段从N-或C-末端缩短最多6个氨基酸。
12.权利要求11的结合分子，具有下述结构SCX-载体结构-SCY其中SCX(侧链X)可以是权利要求11的6个侧链(SC1-6)中的任意一种，SCY(侧链Y)可以是权利要求11的侧链(SC1-6)中的任意一种。
13.权利要求1-11中至少一项的结合分子，其中至少一个侧链亚单位具有下述序列SKNEKALGRKIX1X2X3X4SSRX5GHSFLS，其中X1＝N或L，X2＝S或Q或L或E，X3＝W或L或R或A或Y，X4＝E或N或A或D或H，X5＝S或A，且结合分子中侧链亚单位具有与上述序列至少80％的同源性。
14.权利要求1的结合分子，其特征在于其具有下述结构式中的一种 或 Pep＝SKNEKALGRKINSWESSRSGHSFLSH2N- -COOH或 或 且结合分子中侧链亚单位具有与上述序列至少80％的同源性。
15.一种制备根据权利要求1-14中至少一项的结合分子的方法，其中该方法采用固相合成方法进行，其中所述侧链亚单位的肽与固相结合，由各氨基酸连续延伸，在最后步骤中任选地偶联到载体结构上。
16.具有下述结构的肽·APTSSSTKKT1QLQLEHX1X2X3X4X5QMILNGINN或·TIVX6FLNRWIT FX7QSX8ISTLT1其中X1选自I或L，X2选自I或L，X3选自V、L或M，X4选自E、D或K，X5选自L或F，X6选自E或D，X7选自A、G或C，X8选自A或I，且结合分子中侧链亚单位具有与上述序列至少80％的同源性。
17.一种药物，其含有根据权利要求1-14中任一项的结合分子和/或根据权利要求16的肽。
18.诊断试剂，其含有根据权利要求1-14中任一项的结合分子和/或根据权利要求16的肽。
19.根据权利要求1-14中任一项的结合分子和/或根据权利要求16的肽用于制备药物或诊断试剂的用途，所述的药物或诊断试剂用于治疗或检测人类或哺乳动物的免疫系统疾病，特别是炎症、关节炎进程、免疫缺陷综合征、自身免疫性综合征和免疫缺陷综合征、生育障碍、避孕或抗病毒预防、与细胞增殖增加相关的疾病，特别是肿瘤疾病、癌病、肉瘤、淋巴瘤和白血病；和/或感染进程。
20.根据权利要求17的药物，其为含有适当添加剂、载体、辅药和/或至少一种附加的活性物质的微胶囊、脂质体制剂或长效制剂形式。
21.根据权利要求17的药物，其特征在于白介素12、白介素12受体特异性结合分子和效应分子或重组IL12用作附加的活性物质。
22.根据权利要求17的药物，其特征在于TRAIL(TNF相关的凋亡诱导配基)、TRAIL受体特异性结合分子和效应分子或重组制备的TRAIL用作附加的活性物质。
23.根据权利要求17的药物，其特征在于病毒生长抑制剂，特别是能够阻滞或阻断病毒颗粒侵入靶细胞的病毒生长抑制剂用作附加的活性物质，其中所述的病毒颗粒特别是HIV颗粒，所述的靶细胞特别是T-淋巴细胞。
24.根据权利要求1和12的结合分子，其特征在于恰好两个侧链与所述的载体结构结合，所述的载体结构最小化为2-10个氨基酸构成的线形肽，包含选自G、P、β-丙氨酸或NH2(CH2)xCOOH(x＝3-8)的至少两种不同的氨基酸。
25.权利要求24的结合分子，由下式限定 x＝D-丙氨酸βAla＝β-丙氨酸
全文摘要
本发明涉及结合分子，其由具有至少一个环状分子亚单位和至少两个侧链亚单位的载体结构组成，其中所述的侧链亚单位是由天然和/或非天然D－和/或L－氨基酸组成的多肽链，并且侧链亚单位与载体结构共价结合。
文档编号A61K47/48GK1675243SQ03818547
公开日2005年9月28日 申请日期2003年8月5日 优先权日2002年8月6日
发明者乌多·哈伯尔, 克里斯蒂安·弗罗施, 汉斯－乔治·弗兰克, 安德烈亚什·雷布卡, 雷蒙德·维泽尔 申请人:阿普拉根有限责任公司