专利名称：在i.a.hiv的治疗中用作逆转录酶调节剂的4－(3,5－二氰基苯氧基)吡唑衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及吡唑衍生物，它们在药物中的应用，包含它们的组合物，它们的制备方法以及在该制备过程中所用的中间体。
逆转录酶涉及人类免疫缺陷病毒(HIV)的感染生命周期。已证实能够干扰该酶功能的化合物可用于治疗由HIV以及遗传上相关的逆转录病毒引起的病症，如获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。由于病毒能够变异，对已知的调节剂产生抗药性，人们总是不断需要新的更好的HIV逆转录酶的调节剂，特别是抑制剂。
作为逆转录酶抑制剂的一类N-苯基吡唑类物质在J.Med.Chem.，2000，43，1034中披露。在US专利3,303,200中描述了一类N-(羟乙基)吡唑衍生物具有抗病毒活性。在本申请的申请日尚未公开的国际申请PCT/IB02/01234中概括性的包括了、但未具体公开下述的式(I)化合物。
本发明的化合物可与逆转录酶结合，并且是该酶的调节剂，特别是抑制剂。
根据本发明，提供了式(I)化合物 或其可药用盐、溶剂化物或衍生物。
式(I)化合物的可药用盐包括其酸加成盐及碱盐。
合适的酸加成盐由可形成无毒盐的酸生成，其实例有盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、硫酸盐、硫酸氢盐、硝酸盐、磷酸盐、磷酸氢盐、醋酸盐、延胡索酸盐、双羟萘酸盐、天冬氨酸盐、苯磺酸盐、碳酸盐、碳酸氢盐、樟脑磺酸盐、D和L-乳酸盐、D和L-酒石酸盐、乙磺酸盐、甲磺酸盐、丙二酸盐、乳清酸盐、葡庚糖酸盐、甲基硫酸盐、硬脂酸盐、葡萄糖醛酸盐、2-萘磺酸盐、甲苯磺酸盐、羟苯酰苯酸盐、烟酸盐、羟乙磺酸盐、苹果酸盐、马来酸盐、柠檬酸盐、葡糖酸盐、琥珀酸盐、葡萄糖二酸盐、苯甲酸盐、乙磺酸盐和双羟萘酸盐。
合适的碱盐由可形成无毒盐的碱生成，其实例有钠盐、钾盐、铝盐、钙盐、镁盐、锌盐、胆碱盐、二乙醇胺盐(diolamine)、乙醇胺盐、精氨酸盐、甘氨酸盐、缓血酸胺盐、苄乍生盐(benzathine)、赖氨酸盐、葡甲胺盐和二乙胺盐。
这些适宜的盐参见Berge等人的J.Pharm.Sci.，66，1-19，1977和Bighley等人的Encyclopedia of Pharmaceutical Technology，MarcelDekker Inc，New York，1996，13卷，453-497页。
式(I)化合物的可药用的溶剂化物包括水合物。
式(I)化合物可以在化合物的任意功能团上进行修饰得到其可药用的衍生物。这些衍生物的实例在下述文献中有描述Drugs of Today，第19卷(9)，1983，pp 499-538；Topics in Chemistry，第31章，pp306-316；及″Design of Prodrugs″，H.Bundgaard，Elsevier，1985，第1章(这些文献所公开的内容引入本文作为参考)。这些衍生物包括酯、碳酸酯、半酯、磷酸酯、硝酸酯(nitro ester)、硫酸酯、亚砜、酰胺、磺胺类、氨基甲酸酯、偶氮化合物、磷酰胺、糖苷、醚类、缩醛和缩酮。
本发明包括式(I)化合物及其可药用盐、溶剂化物或衍生物的所有异构体形式，其包括所有的几何异构体、互变异构体和光学异构体，以及它们的混合物(例如外消旋混合物)。
非对映异构体的分离可通过常规的技术完成，例如，将化合物的立体异构体混合物进行分步结晶、色谱分离或高效液相色谱(HPLC)。化合物的单个对映体也可以从相应的光学纯的中间体制备，或者可以通过例如使用适当手性载体的HPLC拆分相应的外消旋体，或通过将相应的外消旋体与适当的光学活性的酸或碱反应形成的非对映异构体盐分步结晶得到。
式(I)化合物和其可药用盐、溶剂化物或衍生物能够以多种不同的形式结晶，这一特征被称为多晶型现象，并且所有的这些多晶形式(多晶型物)都包括在本发明的范围内。多晶型现象通常因温度和/或压力的变化而发生，并能够在结晶过程中产生各种变化。多晶型物能通过各种物理特征加以区分，并且典型的是X-射线衍射图案、溶解行为及化合物的熔点，这些都可以用于区分多晶型物。
式(I)化合物、其可药用盐、溶剂化物及衍生物、异构体及多晶型物在下文中都称为本发明的化合物。
本发明优选的化合物是式(I)化合物及其可药用盐和溶剂化物。
本发明最优选的化合物是式(I)化合物。
本发明的化合物具有优越的性能，包括良好的代谢稳定性，并因而具有良好的药代动力学特性。另外，本发明的化合物在许多其它有用的性能方面比那些现有技术中的物质更为优越，如效能、活性持续时间、药物作用范围、副反应、溶解性、化学稳定性等等。
本发明的化合物可以按本领域已知的制备类似结构的化合物的方法制备。本发明的化合物可以按以下描述的方法制备，或按实施例描述的特定方法制备，或按类似于两种方法的方法制备。本发明还包括一种或多种制备本发明化合物的方法，还包括所有在其中应用的新的中间体。
式(I)化合物可以按以下方案1所述的途径制备
方案1 在方案1中，式(I)化合物可以通过式(II)化合物与式(V)的2-羟基乙基肼或其盐或水合物缩合得到，该反应任选在酸或碱的存在下进行，其中碱优选是叔胺碱如三乙胺，酸优选是乙酸。在一个有代表性的方法中，将式(II)化合物在适当溶剂如乙酸中的溶液用式(V)的肼或其盐或水合物和，如果使用的话，适宜的酸或碱处理，反应温度为室温到溶剂的回流温度。在一个优选的方法中，反应是在室温下进行的。
在该反应中也可以使用式(II)化合物的功能等同物。其包括式(VI)或(VII)的化合物，其中L1和L2分别为适宜的离去基团，优选-N(C1-C6烷基)2，最优选-N(CH3)2。
因此，式(I)化合物可以通过将式(VI)或(VII)的化合物与式(V)的化合物或其盐或水合物缩合得到，该反应任选地在酸或碱的存在下进行，碱优选为叔胺碱如三乙胺，酸优选为乙酸。在一个有代表性的方法中，将式(VI)或(VII)化合物在适当溶剂如乙醇中的溶液用式(V)化合物或其盐或水合物和，如果使用的话，适宜的酸或碱处理，反应温度为室温到溶剂的回流温度。在一个优选的方法中，反应是在加热回流下进行的。
L1为二甲基氨基的式(VI)化合物可以通过式(VIII)化合物与适当取代的甲酰胺缩醛在升高的温度下反应制备。优选的反应温度为100℃。L1为二甲基氨基的式(VII)的化合物可以通过式(IX)化合物在相同的条件下反应得到。
式(VIII)的化合物可以商购获得，或可以通过式(X)化合物与式(XI)化合物反应制得。在一个有代表性的方法中，将式(XI)化合物在适当的溶剂如丙酮中的溶液用适当的碱如碳酸铯和式(X)的化合物进行处理。在优选的方法中，将反应混合物加热至例如回流。任选地，可向其中加入亲核的催化剂如碘化钠或碘化四丁基铵。
式(IX)的化合物可以商购获得，也可以从式(XII)化合物和式(XI)化合物按照从式(X)化合物制备式(VIII)化合物的相同方法制备。
式(II)化合物可以通过式(III)的化合物与式(XI)的化合物反应得到。
在一个有代表性的方法中，将式(III)化合物在适当溶剂如丙酮中的溶液用式(XI)化合物和适当的碱如碳酸钾或碳酸铯处理并加热，优选加热至回流。任选地，可以向其中加入亲核的催化剂如碘化钠或碘化四丁基铵。
式(III)的化合物可以商购获得，或可以通过式(IV)的化合物与氯化试剂反应得到。在一个有代表性的方法中，将冷却的式(IV)化合物在适当溶剂如乙腈中的溶液首先用溴化四丁基铵和三甲基氯硅烷处理，然后用干燥的二甲基亚砜处理。在另一个有代表性的方法中，将式(IV)的化合物用硫酰氯处理，在该反应中任选地存在适当的溶剂如二氯甲烷。
式(I)化合物还可以通过将式(XIII)的吡唑化合物与式(XIV)的烷基化试剂或其保护的衍生物反应得到。
在一个有代表性的方法中，将式(XIII)的吡唑化合物在适当溶剂如乙醇或N，N-二甲基甲酰胺中的溶液用式(XIV)的烷基化试剂如保护的羟乙基溴化物，和碱如乙醇钠或氢化钠处理，加热温度为0℃至溶剂的回流温度。优选的组合是以N，N-二甲基甲酰胺为溶剂，氢化钠为碱，在0℃下，以2-(2-溴乙氧基)四氢-2H-吡喃为烷基化试剂进行反应。
本领域技术人员可以理解，在式(XIII)的吡唑化合物的烷基化反应中，需要或希望对式(XIV)化合物的羟基基团进行保护，在这种情况下，式(I)化合物最终要通过对相应的带有-OP1基团的化合物进行脱保护反应方能制备，其中P1是适当的保护基团。适当保护基团的例子对于普通技术人员来说是显而易见的；例如参见“Protecting groups in Organic Synthesis(第二版)”，Theodora W.Green和Peter G.M.Wuts，1991，John Wiley andSons(特别参见10-118页，关于羟基基团的保护)，该文献引入本文作为参考。带有-OP1基团的化合物可以按前述类似的方法制备，在细节上作必要的改动。
式(IV)和(V)的化合物可商购获得、是文献中已知的或者可容易地通过本领域技术人员熟知的方法制得。
本发明的化合物可以单独给药，但通常都是同适当的药用赋形剂、稀释剂或载体以混合物的形式给药。所述赋形剂、稀释剂或载体根据需要的给药途径以及规范的药学实践进行选择。
例如，本发明的化合物可以以片剂、胶囊、多颗粒、凝胶剂、薄膜片、ovule、酏剂、溶液剂或悬浮剂的形式通过口服、颊内或舌下途径给药，其中可含有矫味剂或着色剂，用于速释给药、延迟释放给药、缓释给药、持续给药、脉冲给药或控释给药。本发明的化合物还可以以快速分散或快速溶解的剂型给药，或以高能分散体的形式给药，或以包衣颗粒的形式给药。本发明化合物的适宜的制剂可以根据需要采用包衣或未包衣的形式。
所述固体药物组合物，例如片剂，可以含有赋形剂，如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙、甘氨酸和淀粉(优选玉米淀粉、土豆淀粉或木薯淀粉)，崩解剂，如淀粉乙醇酸钠、交联羧甲基纤维素钠和特定的复合硅酸盐，以及颗粒粘合剂，如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。另外，还可以包含润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸、甘油二十二烷酸酯和滑石粉。
一般实施例片剂剂型典型地包含0.01-500mg的活性物质，并且片剂填充的重量范围在50-1000mg。一个10mg片剂剂型的实施例如下所述
成份 ％w/w本发明的化合物10.000*乳糖 64.125淀粉 21.375交联羧甲基纤维素钠3.000硬脂酸镁 1.500*根据药物的活性，含量相应调整。
片剂的制备是按常规方法完成的，例如直接压片法、干法或湿法制粒法。片芯可以进行适当的包衣。
相似类型的固体组合物可以用于填充明胶或HPMC胶囊。优选的赋形剂包括乳糖、淀粉、纤维素、乳糖(milk sugar)或高分子量的聚乙二醇。对于含水的混悬剂和/或酏剂，可将本发明的化合物与各种甜味剂或矫味剂、色素或染料、乳化剂和/或助悬剂，稀释剂如水、乙醇、丙二醇和丙三醇，以及它们的混合物进行混合。
本发明的化合物还可以通过非胃肠道途径给药，例如静脉给药、动脉内给药、腹膜内给药、鞘内给药、心室内给药、尿道内给药、胸骨内给药、颅内给药、肌内或皮下给药，或者通过输液或无针注射技术给药。对于非胃肠道给药形式来说，最好使用含有其它一些成分，例如使溶液与血液等渗的足量的盐或葡萄糖的无菌水溶液的形式。如果需要的话，水溶液应适当地缓冲(优选至pH3-9)。在无菌条件下制备适宜的非胃肠道制剂可以通过本领域技术人员熟知的规范的制药技术很容易地完成。
对于向患者口服和非胃肠道给药，本发明的化合物的日剂量水平通常为0.01-30mg/kg，优选是0.01-5mg/kg(以单剂或分剂量形式给予)。
因此，本发明化合物的片剂或胶囊可以含有1-500mg的活性化合物，用于单剂给药，或在需要时，一次给药两剂或多剂。在任何情况下，医师可以确定最适于患者个体的实际剂量，该剂量会根据特定患者的年龄、体重和反应的不同而不同。上述剂量为一般情况的例子。当然，对于有些个体而言，更高或更低的剂量范围是有益的，因此也包括在本发明的范围之内。本领域技术人员可以理解，在治疗某些病症时，需要或希望本发明的化合物以单剂的形式给药。
本发明的化合物还可以鼻内给药或吸入给药，并可方便地以干燥粉末形式通过吸入器，或以喷雾剂形式通过压力容器、气泵、喷雾器或雾化器释药，其中，可使用或不使用适宜的喷射剂如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、氢化氟代烷烃如1，1，1，2-四氟乙烷(HFA 134A[商标])或1，1，1，2，3，3，3-七氟代丙烷(HFA 227EA[商标])、二氧化碳或其它适宜的气体。对于压力气雾剂，单元剂量通过提供可测定量的阀门来确定。压力容器、气泵、喷雾器或雾化器可以含有活性化合物的溶液或悬浮液，例如应用乙醇和喷射剂的混合物作为溶剂，另外还可以含有润滑剂如去水山梨糖醇三油酸酯。在吸入或吹入器中使用的胶囊及药筒(由例如明胶制成)可以装入本发明的化合物和适宜的粉末基质如乳糖或淀粉的粉末混合物。
或者，本发明的化合物可以以栓剂或阴道栓剂的形式给药，或可以以凝胶、水凝胶、洗液、溶液、霜剂、软膏或扑粉的形式局部给药。本发明的化合物还可以经皮或透皮给药，例如，通过使用皮肤贴剂进行给药。它们还可以通过肺或直肠的途径给药。
它们还可以通过经眼途径给药。对于眼科的应用，该化合物可以制成在等渗的、pH调节过的、无菌盐水中的微粒悬浮剂，或优选是在等渗的、pH调节过的、无菌盐水中的溶液，可任选地加入防腐剂，如苯扎氯铵。或者，它们还可以制成软膏，如凡士林。
对于皮肤的局部应用，本发明的化合物可以制成包含悬浮或溶解在下述混合物中的活性化合物的适宜的软膏，所述混合物含有如下一种或多种成分矿物油、液状石蜡、白凡士林、丙二醇、聚氧乙烯聚氧丙烯化合物、乳化蜡和水。或者，它们还可以制成适宜的洗剂或霜剂，悬浮或溶解于例如含有一种或多种如下成分的混合物中矿物油、失水山梨糖醇单硬脂酸酯、聚乙二醇、液状石蜡、聚山梨醇酯60、十六烷基酯蜡、十六/十八醇、2-辛基十二烷醇、苯甲醇和水。
本发明的化合物还可以用于与环糊精组合。已知环糊精可形成包合的及非包合的药物分子的复合物。药物-环糊精复合物的形成可以改善溶解性、溶解速率、生物利用度和/或药物分子的稳定性。药物-环糊精复合物通常可用于大多数药物剂型和给药途径。除了直接与药物形成复合体外，环糊精还可以用作辅料添加剂，例如载体、稀释剂或增溶剂。α-、β-和γ-环糊精是最常用的环糊精，其适宜的例子描述在WO-A-91/11172、WO-A-94/02518和WO-A-98/55148中。
应该理解这里所述的治疗包括治愈性、缓解性和预防性的治疗。
口服给药是优选的。
本发明中的具体实施方式
包括将本发明的化合物与一种或多种其它治疗剂共同给药，及包含本发明的化合物和一种或多种其它治疗剂的组合物。这样的联合治疗特别用于预防和/或治疗HIV及相关的逆转录病毒的感染，这些病毒会快速进化成对任何单一治疗有耐药性的毒株。或者，可能需要其它的治疗剂来治疗用本发明化合物进行治疗所引起的或所伴随的疾病。例如，在治疗HIV或相关的逆转录病毒感染中，可能需要额外治疗机会感染、肿瘤及其它由于患者的免疫妥协状态发生的病症。
优选的本发明的联合治疗包括同时或顺序应用本发明的化合物和一种或多种以下药物进行治疗(a)逆转录酶抑制剂，如阿巴卡韦、阿德福韦、双脱氧腺苷、拉米夫定、司他夫定、扎西他滨和齐多夫定；(b)非核苷类逆转录酶抑制剂，如capavirine、地拉夫定、依法韦仑和奈韦拉平；(c)HIV蛋白酶抑制剂如印地那韦、那非那韦、利托那韦和沙奎那韦；(d)CCR5拮抗剂如TAK-779或UK-427,857；(e)CXCR4拮抗剂如AMD-3100；(f)整合酶抑制剂，如L-870,810或S-1360；(g)病毒融合抑制剂，如T-20；(h)研究中的新药物，如三协唯、KNI-272、安泼那韦、GW-33908、FTC、PMPA、MKC-442、MSC-204、MSH-372、DMP450、PNU-140690、ABT-378、KNI-764、DPC-083、TMC-120或TMC-125；(i)抗真菌剂，如氟康唑、依曲康唑或伏立康唑；或(j)抗细菌剂，如阿齐红霉素。
本发明化合物作为逆转录酶抑制剂的活性可通过以下分析方法进行测定。
HIV-1逆转录酶抑制作用应用纯化的通过大肠杆菌表达获得的重组HIV-1逆转录酶(RT，EC，2.7.7.49)，建立96-孔平板分析测定系统以测定大量的样品，同时应用Poly(rA)-寡(dT)逆转录酶[3H]-SPA酶测定系统(Amersham NK9020)和[3H]-Flashplate酶测定系统(NEN-SMP 103)，按照制造商的说明使用。将化合物溶解于100％的DMSO中并用适当的缓冲液稀释到5％的DMSO终浓度。抑制活性用相对于DMSO的对照组的抑制百分数表示。化合物抑制逆转录酶达50％的浓度表示为化合物的IC50值。
按以上步骤进行测定，实施例1化合物的IC50值为295纳摩尔。
本发明化合物的代谢应用以下分析法测定。
A.在人类肝微粒体和SupermixTM中的代谢本发明化合物在肝微粒体和SupermixTM中的代谢不稳定性可按下述方法测定。
微粒体部分从人类肝脏中分离并测定P450含量。SupermixTM从Gentest获得。将人类微粒体(0.5μM细胞色素P450)和SupermixTM(0.05μM细胞色素P450)加入到含有50mM磷酸缓冲液(pH值7.4)、5mMMgCl2、1mM NADP和由异柠檬酸和异柠檬酸脱氢酶组成的NADPH生成系统的培养基中。底物浓度为1μM，并在37℃下培养1小时。在培养过程中的不同时间点提取样品并应用hplc-ms-ms法进行分析。
按照上述方法测定的实施例1的化合物的t1/2＞120分钟(人类微粒体和SupermixTM均如此)。
B.在人类肝细胞中的代谢本发明化合物在人类肝细胞中的代谢不稳定性可通过以下方法测定。
冷藏保存的人类肝细胞得自In vitro Technologies公司。将肝细胞解冻并以1百万个细胞/ml的浓度在50％的Krebs-Heinsleit缓冲液50％的包含10％胎牛血清的Williams E培养液中悬浮。底物浓度为3μM，并在37℃下培养3小时。在培养过程中的不同时间点提取样品并应用hplc-ms-ms法进行分析。
按照上述方法测定的实施例1的化合物的非结合肝细胞清除值为＜9ml/分钟/kg。
因此，本发明提供(i)式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或衍生物；(ii)式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或衍生物的制备方法；(iii)包含式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或衍生物，及可药用的赋形剂、稀释剂或载体的药物组合物；(iv)用作药物的式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或组合物；(v)用作逆转录酶抑制剂或调节剂的式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或组合物；(vi)用于治疗HIV或遗传上相关的逆转录病毒感染，或由此引起的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或组合物；(vii)式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或组合物在制备具有逆转录酶抑制或调节活性的药物中的应用；(viii)式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或组合物在制备用于治疗HIV或遗传上相关的逆转录病毒感染，或由此引起的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的药物中的应用；
(ix)一种治疗HIV或遗传上相关的逆转录病毒感染，或由此引起的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的方法，包括给予有效量的式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或组合物；和(xi)这里所公开的某些新的中间体。
以下实施例用于说明式(I)化合物的制备。在这里应用的特定中间体的合成在实施例后面的制备例部分作出描述。
所有的1H核磁共振(NMR)图谱与预料的结构相符。特征性化学位移值(δ)以向四甲基硅烷的低场偏移的百万分之一(ppm)给出，采用常规的缩写指定主要的峰，例如s，单峰；d，双峰；t，三重峰；q，四重峰；m，多重峰；br，宽峰。应用以下缩写进行描述HRMS，高分辨率质谱；hplc，高效液相色谱；nOe，核欧沃豪斯效应；m.p.，熔点；CDCl3，氘代氯仿；D6-DMSO，氘代二甲基亚砜；CD3OD，氘代甲醇。使用薄层色谱(TLC)时，指的是应用硅胶60 F254板的硅胶TLC，Rf值是指TLC板中化合物的展开距离与溶剂前沿展开距离的比值。
实施例15-{[3-环丙基-1-(2-羟乙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]氧基}间苯二氰 在氮气氛及室温下，将2-羟基乙基肼(1.15ml，16.9mmol)加入到制备例7的二酮(4.1g，15.4mmol)的乙酸(40ml)溶液中。搅拌18小时后，将混合物减压浓缩，将残余的油通过快速硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯∶戊烷(50∶50→100∶0，体积比)洗脱，得到需要进一步纯化的两种区域异构体样品。
低极性的级分以黄色固体(1.2g)的形式分离得到，用甲苯(5ml)重结晶其样品(815mg)得到无色针状的标题化合物(600mg)。将该物质的样品(580mg)进一步通过制备性HPLC进行纯化，应用Luna C8(II)150×21.2mm10μm柱，用95∶5的水∶乙腈(0.1％三氟乙酸水溶液)和乙腈(0-1分钟是，100∶0，然后在1分钟内变为70∶30，进行18分钟，然后在1分钟内变为100∶0)洗脱，得到标题化合物的样品。该物质通过溶解于二氯甲烷(50ml)，用饱和碳酸氢钠水溶液(50ml)洗涤去除所有残留的酸。有机相用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到泡沫状产物(270mg)，用甲苯(5ml)重结晶，得到无色针状的标题化合物样品(265mg)。M.p.127-128℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.84(m，4H)，1.58(m，1H)，2.13(s，3H)，4.03(m，2H)，4.13(m，2H)，7.42(s，2H)，7.59(s，1H)。
LRMS(常压化学电离)m/z[MH+]309。
微量分析实测值C，66.14；H，5.24；N，18.15。C17H16N4O2要求C，66.22；H，5.23；N，18.17％。
通过nOE NMR证实有区域异构体，并通过X-射线晶体分析法明确鉴定。
较高极性的级分进一步通过快速硅胶色谱法纯化，用乙酸乙酯∶甲苯(50∶50，体积比)洗脱，得到5-{[5-环丙基-1-(2-羟乙基)-3-甲基-1H-吡唑-4-基]氧基}间苯二氰(结构如下)，为白色固体(90mg)，M.p.129-130℃。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.68(m，2H)，0.87(m，2H)，1.58(m，1H)，2.03(s，3H)，4.07(m，2H)，4.31(m，2H)，7.39(s，2H)，7.59(s，1H)。
LRMS(常压化学电离)m/z[MH+]309。
实施例25-{[3-环丙基-1-(2-羟乙基)-5-甲基-1H-吡唑-4-基]氧基}间苯二氰搅拌下，向制备例9的吡唑(250mg，0.64mmol)的甲醇(6ml)溶液中加入对-甲苯磺酸(12mg，0.06mmol)。18小时后，将反应混合物浓缩，残余物在10％碳酸钾水溶液(20ml，w/v)和二氯甲烷(20ml)之间进行分配。水层用二氯甲烷(2×20ml)洗涤，合并有机相，用硫酸镁干燥，过滤并浓缩，得到淡黄色油状的标题化合物(195mg)，其不需进一步纯化直接使用。
1H NMR(400mHz，CDCl3)，与上述的一致。
LRMS(热喷雾法)m/z[MH+]309。
制备例11，3-二溴-5-甲氧基苯 0℃及氮气氛下，将甲醇钠(8.80ml的4.5M甲醇溶液，39.6mmol)在搅拌下滴加至3，5-二溴氟代苯(5.00g，19.0mmol)(Aldrich)的N，N-二甲基甲酰胺(95ml)溶液中。反应升温至室温，搅拌1小时，减压浓缩。残余物溶解于乙醚中(500ml)，并用水(3×300ml)和盐水(300ml)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，减压浓缩，得到白色固体状产物(5.13g)。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ＝3.79(s，3H)，7.00(s，2H)，7.26(s，1H)。
LRMS(热喷雾法)m/z[MH+] 266。
微量分析实测值C，31.56；H，2.29。C7H6OBr2需要C，31.62；H，2.27％。
制备例23，5-二氰基甲氧基苯
在室温及氮气氛下，将三(二亚苄基丙酮)二钯(O)(6.53g，7.15mmol)一次性加入到制备例1的溴化物(38.0g，143mmol)、1，1′-二(二苯基膦基)二茂铁(9.3g，16.8mmol)和氰化锌(20.0g，172mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(300ml)溶液中。反应加热至100℃反应14小时，然后冷却至室温。加入水(1500ml)，混合物用乙酸乙酯萃取(3×500ml)。合并有机相，过滤，滤液用水(500ml)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，所得固体加入甲苯(1000ml)研磨，得到标题化合物(18.0g)，为褐色固体。
1H-NMR(300MHz，CDCl3)δ＝3.83(3H，s)，7.31(2H，s)，7.48(1H，s)。
制备例33，5-二氰基羟基苯 0℃及氮气氛下，将制备例2的腈(9.60g，60.7mmol)在搅拌下分批加入至三氯化铝(32.4g，243mmol)的二氯甲烷(250ml)悬浮液中。悬浮液加热至45℃，并搅拌6天。反应冷却至室温，小心倾倒至冰上(450ml)。滴加浓盐酸(450ml)，所得悬浮液在室温下搅拌10分钟。过滤收集所得固体，用水洗涤，用五氧化二磷干燥后，得到标题化合物(7.83g)，为褐色固体，1H-NMR和微量分析表明，其中含有大约11％的原料。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)δ＝7.36(m，2H)，7.56(m，1H)。
制备例43-氧代丁酸
将氢氧化钠(37.9g，0.947mol)溶解于水(770ml)中，并在搅拌下用20分钟时间于室温滴加至3-氧代-丁酸甲酯(100g，0.861mol)(Aldrich)中。搅拌18小时，用硫酸铵(700g)终止反应，并在冰浴下缓慢用浓盐酸(21.5ml)的水(250ml)溶液进行酸化。反应混合物用二乙醚(6×200ml)萃取，合并有机相，用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到标题化合物(58.2g)，为淡黄色油状物，其为酮和烯醇的互变异构体混合物(如1H NMR所示)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝2.00(s，3H-烯醇)，2.30(s，3H-酮)，3.51(s，2H-酮)，5.02(s，1H-烯醇)。
制备例51-环丙基-1，3-丁二酮 将悬浮于甲醇(145ml)中的镁屑(3.04g，125mmol)在通氮气的情况下加热至回流1小时，冷却至室温，在冰冷却下滴加制备例4的β-酮酸(25.5g，250mmol)的甲醇(25ml)溶液。反应在室温下搅拌1小时，减压去除溶剂，得到酸的镁盐。同时，将环丙烷-甲酸(9.91ml，125mmol)溶解于二甲基甲酰胺(200ml)中，并在0℃和通氮气的情况下分批加入羰基二咪唑(22.4g，138mmol)。搅拌1.5小时，在0℃下加入上述镁盐的二甲基甲酰胺(100ml)溶液。反应在室温下搅拌92小时，混合物倾入到2M盐酸水溶液(85ml)中，随后用水(170m1)稀释。混合物用二乙醚(6×200ml)萃取，合并有机相，用盐水(3×200ml)洗涤，用硫酸镁干燥，减压浓缩。残留的橙色油状物通过快速硅胶色谱法纯化，用戊烷二乙醚(100∶0→90∶10，然后是80∶20，体积比)洗脱，得到标题化合物(7.39g)，其为黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.89(m，2H)，1.08(m，2H)，1.59(m，1H)，2.00(s，3H)，5.61(s，1H)，15.62(s，1H)。
LRMS(电喷雾法)m/z[MNa+]149。
制备例62-氯-1-环丙基-1，3-丁二酮 在室温和通氮气的条件下，将三甲基氯硅烷(18.9ml，174mmol)加入至四丁基溴化铵(932mg，2.89mmol)在干燥乙腈(50ml)中的溶液中，将混合物冷却至0℃。加入制备例5的二酮(7.3g，57.9mmol)的乙腈(36ml)溶液，随后滴加干燥的二甲基亚砜(12.3ml，174mmol)。反应在0℃下搅拌1.5小时，混合物用水(500ml)稀释，用二乙醚(2×200ml及100ml)萃取，合并有机相，用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩。残余油状物通过快速硅胶色谱法纯化，用戊烷∶二乙醚(100∶0→95∶5，然后是90∶10，体积比)洗脱，得到标题化合物(5.76g)，为无色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝1.04(m，2H)，1.18(m，2H)，2.27(s，3H)，2.42(m，1H)，15.78(s，1H)。
LRMS(电喷雾法)m/z[M-H+]159。
制备例75-[1-(环丙基羰基)-2-氧代丙氧基]间苯二氰
将碳酸铯(6.01g，18.5mmol)和得自制备例3的酚(2.66g，18.5mmol)在搅拌下、在通氮气和60℃的条件下加入到制备例6的二酮(2.46g，15.4mmol)的丙酮(75ml)溶液中，反应搅拌3小时。冷却后减压去除丙酮，所得残余物在1N盐酸水溶液(100ml)和二氯甲烷(100ml)之间进行分配。分离水相，用二氯甲烷(50ml)萃取。合并有机相，用硫酸镁干燥，减压浓缩得到标题化合物，其为乳白色固体(4.2g)。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.92(m，2H)，1.19(m，2H)，1.78(m，1H)，1.99(s，3H)，7.47(m，2H)，7.62(m，1H)。
LRMS(电喷雾法)m/z[M-H+]267。
制备例85-[(3-环丙基-5-甲基-1H-吡唑-4-基)氧基]间苯二氰 将水合肼(298μl，6.16mmol)在通氮气和室温下加入到制备例7的二酮(1.50g，5.60mmol)的乙酸(22ml)溶液中。在50℃下搅拌18小时后，将混合物冷却至室温并减压浓缩。残余物在10％的碳酸钾水溶液(50ml)和二氯甲烷(50ml)之间进行分配。分离出水层，用二氯甲烷洗涤两次(2×50ml)。合并有机相，用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到淡黄色油状物。粗产物通过快速硅胶色谱法纯化，用戊烷∶乙酸乙酯(75∶25→67∶33，体积比)洗脱，得到标题化合物(1.20g)，为淡黄色油状物。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.75(m，2H)，0.85(m，2H)，1.60(m，1H)，2.10(s，3H)，7.40(s，2H)，7.60(s，1H)。
LRMS(热喷雾法)m/z[MH+]260。
制备例95-({3-环丙基-5-甲基-1-[2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基}氧基)间苯二氰 于0℃下向搅拌的制备例8的吡唑(420mg，1.59mmol)的二甲基甲酰胺(4ml)溶液中加入氢化钠(70mg在矿物油中的60％w/w悬浮液)。完成后去除冷却浴，混合物在室温下搅拌30分钟。加入2-(2-溴代乙氧基)四氢-2H-吡喃(264μl，1.75mmol)在二甲基甲酰胺(2ml)中的溶液。2小时后，向反应混合物中加入水(20ml)终止反应，用二氯甲烷(3×20ml)萃取。合并有机相，用盐水(2×20ml)洗涤，用硫酸镁干燥，过滤，浓缩后得到黄色油状物。粗产物混合物通过快速硅胶色谱法纯化，用二氯甲烷∶甲醇(100∶0→98∶2，体积比)洗脱，得到两种区域异构体的混合物(594mg)。此两种区域异构体通过快速硅胶色谱法分离，用甲苯∶乙酸乙酯(100∶0→80∶20，75∶25，67∶33及50∶50体积比)洗脱，得到标题化合物(257mg)(低极性级分)和其区域异构体(90mg)(高极性级分)。
低极性级分1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝0.78(m，4H)，1.55(m，5H)，1.67(m，2H)，2.12(s，3H)，3.45(m，1H)，3.65(m，1H)，3.75(m，1H)，4.04(m，1H)，4.18(m，2H)，4.53(m，1H)，7.40(s，2H)，7.59(s，1H)。
LRMS(热喷雾法)m/z[MH+]393。
高极性级分5-({5-环丙基-3-甲基-1-[2-(四氢-2H-吡喃-2-基氧基)乙基]-1H-吡唑-4-基}氧基)间苯二氰
1H NMR(300MHz，CDCl3)δ＝0.68(m，2H)，0.85(m，2H)，1.53(m，3H)，1.72(m，4H)，2.10(s，3H)，3.51(m，1H)，3.72(m，1H)，3.83(m，1H)，4.17(m，1H)，4.35(m，2H)，4.58(m，1H)，7.38(s，2H)，7.59(s，1H)。
LRMS(热喷雾法)m/z[MH+]393。
权利要求
1.式(I)化合物 或其可药用盐、溶剂化物或衍生物。
2.一种药物组合物，其包含式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或衍生物，以及一种或多种可药用的赋形剂、稀释剂或载体。
3.如权利要求2所述的药物组合物，其中包含一种或多种其它附加的治疗剂。
4.用作药物的式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或衍生物，或如权利要求2或3所述的药物组合物。
5.用作逆转录酶抑制剂或调节剂的式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或衍生物，或如权利要求2或3所述的药物组合物。
6.用于治疗HIV或遗传上相关的逆转录病毒感染，或由此引起的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或衍生物，或如权利要求2或3所述的药物组合物。
7.式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或衍生物，或如权利要求2或3所述的药物组合物在制备具有逆转录酶抑制或调节活性的药物中的应用。
8.式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或衍生物，或如权利要求2或3所述的药物组合物在制备用于治疗HIV或遗传上相关的逆转录病毒感染，或由此引起的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的药物中的应用。
9.一种治疗HIV或遗传上相关的逆转录病毒感染，或由此引起的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)的方法，包括给予有效量的式(I)化合物或其可药用盐、溶剂化物或衍生物，或如权利要求2或3所述的药物组合物。
10.一种制备式(I)化合物或其盐、溶剂化物或可药用衍生物的方法，包括(A)将式(II)、(VI)或(VII)的化合物 与式(V)化合物或其盐或水合物缩合H2NNHCH2CH2OH (V)；(B)将式(XIII)的吡唑 用式(XIV)的烷基化剂或其保护的衍生物烷基化；Lg-CH2CH2OH (XIV)(C)将式(I)化合物的保护的衍生物脱保护；并且任选地将由步骤(A)到(C)任意一步所制备的式(I)化合物转变成其可药用盐、溶剂化物或衍生物。
11.式(II)、(VI)、(VII)、(VIII)、(IX)或(XIII)所述的化合物。
全文摘要
本发明涉及式(I)的吡唑衍生物及其可药用盐、溶剂化物或衍生物，其在药物中的应用，包含它们的组合物，它们的制备方法，以及在制备过程中应用的中间体。本发明的化合物可与逆转录酶相结合，并且是其调节剂，特别是抑制剂。逆转录酶涉及人免疫缺陷病毒(HIV)的感染生命周期。能够干扰该酶功能的化合物可用于治疗由HIV以及遗传上相关的逆转录病毒引起的病症，如获得性免疫缺陷综合征(AIDS)。
文档编号A61K31/415GK1681494SQ03821960
公开日2005年10月12日 申请日期2003年9月8日 优先权日2002年9月16日
发明者C·E·莫巴里, D·A·普莱斯, M·D·塞尔比, P·A·斯图普勒 申请人:辉瑞大药厂