专利名称：落葵薯提取物的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种植物提取物的用途，特别涉及一种植物提取物的保健用途。
背景技术：
落葵薯是落葵科(Basel laceae)植物落葵薯Anredera cordifolia(Tenre)Van Steen.的珠芽及块茎〔1〕。原产美洲热带地区，近年来国内已有栽培，地下部分为块茎。珠芽、根、叶可食用。落葵薯的珠芽可用于治疗头晕头疼，痛经虚弱之虚身骨痛，跌打损伤等。
近年来，大量的研究表明，多种疾病的发生、发展与自由基对组织细胞的损伤有关〔2〕。体内自由基反应亦与多种疾病的发生、发展和机体的老化过程有着密切的关系。脂质过氧化产物MDA含量的增加，是细胞老化的标志。
发明内容
本发明的目的是提供一种落葵薯清除氧自由基，抑制人体外抗脂质过氧化作用以及增长人体SOD含量和活性的用途。
本发明的目的由以下措施来实现落葵薯的珠芽及块茎的干鲜品，粉碎，加入70％乙醇，室温浸泡1小时，加热回流2小时，滤过，滤液减压浓缩，干燥，粉碎，加水，搅匀，再加饱和的正丁醇，搅拌，放置2小时，取上清液，蒸发干燥，即得所述落葵薯提取物。
一、大鼠急性毒性试验1.配制方法及溶剂落葵薯提取物粉碎后，加蒸馏水至80ml，配制成0.3g/ml混悬液。
2.方法健康成年SD纯种大鼠，大鼠体重150-180g，雌雄各半，每组20只。以大鼠安全灌胃容积2.15ml/100g体重，即给药量为21.5ml/kg体重，折合原药量为6.45g/kg体重，实验前将大鼠禁食12小时，24小时内一次经口灌服落葵薯提取物混悬液，相当于临床使用剂量的293倍。灌注后立即观察记录实验动物的外观行为活动状态、中毒症状、食物消耗情况以及死亡等情况。每天观察一次连续观察7天。
3.结果实验动物所有大鼠在灌注后7天内行为活动状态均正常，未见出现中毒症状，无一动物死亡。根据国际六级急性毒性分级标准判定落葵薯提取物的大鼠经口急性毒性属实际无毒类。
二、落葵薯提取物对Vitc-Fe2+诱导的大鼠肝线粒体脂质过氧化的抑制作用〔3〕肝线粒体的制备〔3〕SD大鼠、雄性、体重200g±10g。大鼠实验前禁食12小时，断头处死，立即开腹取出肝脏，迅速在4℃的冷冻0.25％mol/L，pH7.4蔗糖溶液中漂洗，洗净血液，用滤纸吸干表面水分，称重，放入内置4℃匀浆介质(pH7.4，0.01mol/L EDTA-2Na，0.01mol/L Tris-HCl，0.1mol/L EDTA-2Na溶液)的组织匀浆器中制成10％组织匀浆。匀浆于低温离心机中离心(4℃ 800g)20分钟，吸取上清液，再于4℃ 1000g离心20分钟，弃去上清液，取沉淀加入预冷的匀浆介质洗涤，再于4℃ 1000g离心20分钟，弃去上清液，沉淀物用4℃的匀浆介质制备成混悬液。取混悬液涂片，用1％詹钠斯绿B染液染色20分钟，镜检，可见呈亮绿色形态为棒状或哑铃状的线粒体。混悬液用考马斯亮兰法测定蛋白，使含蛋白量10mg.ml-1。保存于0～4℃冰箱备用。
取上述制备的线粒体蛋白，反应最终体积为1ml，内含0.5ml线粒体蛋白，Vitc 1m mol/L，FeSO21m mol/L，Tris-HCl 20m mol/L，pH7.0，KCl 175mmol/L及各种浓度的药物或缓冲液。以上各反应管迅速置37℃空气振荡器中振荡孵育。1小时后各管取0.1ml测定MDA。结果见表1。数据处理以X±S表示结果，用Excel软件进行T检验。
表1.落葵薯提取物对Vitc-Fe2+诱导的大鼠肝线粒体脂质过氧化的影响(X±S，N＝10)
与对照组比较P＜0.05*，P＜0.01**，P＜0.001***(下同)三、落葵薯提取物对O2的生成及测定〔4〕黄嘌呤(HX)在黄嘌呤氧化酶(XO)的作用下产生O2，O2可使细胞色素C(Cytoc)还原，，细胞色素C的最大吸收峰由557nm迁移至550nm，用双波长双光束紫外分光光度计测定其吸收值之差ΔA(550～557nm)。
O2的抑制率的测定在反应体系中加入HX 0.1mol/L；EDTA0.1mol/L；Cytoc 0.01mol/L；50mol/L；pH7.8的磷酸钾缓冲液以及用缓冲液稀释成不同浓度的落葵薯提取物。空白对照组用等体积缓冲液代替。最后以6.25u/L的XO启动反应。以前两分钟的反应速度V0的变化来计算落葵薯提取物对O2的抑制能力，落葵薯提取物的抑制率(Inh％)以下式计算Inh％＝V0对照-V0加提取物/V0对照×100％结果见表2。
表2.落葵薯提取物抑制HX和XO体产生O2的影响
(X±S，N＝10)
四、落葵薯提取物对大鼠肝匀浆脂质过氧化的抑制作用〔5〕大鼠试验前禁食12小时，断头处死，打开腹腔，迅速取出肝脏在4℃冰冷的生理盐水中漂洗，除去污血，滤纸吸干水分，称重，用4℃冰冷的生理盐水制成5％肝匀浆。试验设给药组和空白对照组。给药组每管加入落葵薯提取物的生理盐水稀释液0.1ml，药液浓度分别为6.0、3.0、1.0mg/ml，空白对照组加等体积生理盐水。上述各管分别加入1.5ml肝匀浆，于37℃恒温振荡器中振荡孵育1.5小时，各管分别迅速加入20％三氯醋酸1.5ml，静置10分钟，中止反应，然后1000g离心10分钟，吸取上清液1.5ml，加入0.67％的硫代巴比妥(TBA)1ml，沸水浴中加热10分钟，取出迅速冰水冷却，于532nm波长测定各管吸收度(A)。另外，在做样品反应时同条件同时制备MDA标准曲线组。待测得样品(A)直线。分别换算成MDA nmol/g(湿干重)的含量，并计算抑制百分率。结果进行统计学处理，结果见表3。
表3.落葵薯提取物对大鼠肝匀浆脂质过氧化的影响(X±S，N＝10)
试验数据表明，落葵薯提取物能抑制HX和XO体系产生的O2，对Vitc-Fe2+诱导大鼠肝线粒体脂质和肝匀浆脂质过氧化均有抑制作用。以上结果说明，落葵薯提取物具有抗超氧阴离子自由基和抗脂质过氧化作用。
五、人体临床试验1.受试者纳入标准选年龄在45～65岁，身体健康状况良好，无明显脑、心、肝、肺、肾、血液疾患，无长期服药史，志愿受试保证配合的人群。
2.排除受试者标准①妊娠或哺乳期妇女，对保健食品过敏者；②合并有心、肝、肾和造血系统等严重疾病患者；③短期内服用与受试功能有关的物品，影响到对结果的判断者；④不符合纳入标准，未按规定食用受试样品，无法判定功效或资料不全影响功效或安全性判断者。
3.试验方法采用自身间对照设计。男性10例，女性10例，年龄45～65岁，平均年龄55岁。试食组口服用受试产品落葵薯提取物胶囊，每次一粒，每日2次，连续一个月。试食组原生活、饮食不变。试食前后各检测1次静脉血血清超氧化物歧化酶(SOD)含量。
4.结果用药前SOD452.27±1.99；用药后SOD545.79±2；(X±Sng/ml)。SOD升高百分率20％；P值＜0.05。
SOD即超氧化物歧化酶，是一种抗氧化酶。它的存在和含量与机体的衰老和疾病有关。在自由基生物学和医学中，SOD被认为是清除衰老启动因子——超氧阴离子自由基最有效、最重要的抗氧化酶之一，是作为寿命决定因子的抗氧化物的代表。SOD含量和活性与最大寿限有密切关系，即SOD活性越高，最大寿限也相应增高。人体临床试验结果表明落葵薯提取物胶囊能提高人体静脉血血清超氧化物歧化酶(SOD)含量，20例受试者服用落葵薯提取物胶囊1个月，静脉血血清超氧化物歧化酶(SOD)含量提高20％。
从以上结果，可以得出本发明的优点在于落葵薯提取物未见毒副作用，服用安全，药理作用强，具有良好的药用前景。落葵薯来源丰富、价廉、制备工艺简单，并可做成口服剂型、胶囊、茶剂、冲剂、片剂等使用方便。
具体实施例方式
实施例1取落葵薯的珠芽及块茎的鲜品1000g，粉碎，加入70％乙醇5000ml，室温浸泡1小时，加热回流2小时，滤过，滤液减压浓缩，干燥得80g粗提取物，粉碎，加水400ml，搅匀，加饱和正丁醇提取三次，每次400ml，搅拌混合三次提取液，放置2小时，取上清液，蒸发干燥，即得所述落葵薯提取物18g。
实施例2取落葵薯提取物100g，微晶纤维素200g，无水乳糖50g，氧化硅30g，混合25～30分钟，筛入硬脂酸镁20g，继续混匀，压成片剂。
实施例3取落葵薯提取物100g，加入淀粉50g混合均匀，装入胶囊。
参考文献1.江苏新医学院编 中药大辞典(下册)上海人民出版社 197726952.莫简 医用自由基生物学导论 北京人民卫生出版社 1989933.龚国清等 西红花酸的体外抗氧化作用的研究 中国药科大学学报2001，32(4)3064.黄诒森等《中国药理学与毒理学》1990，(4)2755.陈奇主编 中药药理研究方法学 北京人民卫生出版社，199394权利要求
1.落葵薯提取物在制备保健品中的应用。
2.落葵薯提取物在制备清除氧人体氧自由基的保健品中的应用。
3.落葵薯提取物在制备抑制人体外抗脂质过氧化作用的保健品中的应用。
4.落葵薯提取物在制备增长人体SOD含量和活性的保健品中的应用。
全文摘要
本发明涉及落葵薯提取物的用途。落葵薯提取物经大鼠和人体试验证明能够清除人体氧自由基，抑制人体外抗脂质过氧化作用和增长人体SOD含量和活性。落葵薯提取物未见毒副作用、使用安全，药理作用强，具有良好的药用前景。落葵薯来源丰富、价廉、制备工艺简单，并可做成口服剂型、胶囊、茶剂、冲剂、片剂等使用方便。
文档编号A61P1/00GK1579516SQ20041002728
公开日2005年2月16日 申请日期2004年5月20日 优先权日2004年5月20日
发明者仇洁, 谭玉兰, 范汉通, 吴思洋 申请人:仇洁