专利名称：佛波双酯大容量注射液及其制备方法
技术领域：
本发明是涉及一种临床上应用的新药品，特别是一种佛波双酯大容量注射液及其制备方法。
背景技术：
佛波双酯英文简称TPA(12-0-TetradecanoylPhorbol-13-Acetate)或称PMA(Phorbol-12-Myristate-13-ACETATE)，中文译名佛醇-12-肉豆蔻-13-乙酸酯。本品是从巴豆油中分离，提纯出来的一种具有很强生物活性的天然单体成份，结构上属四环二萜类化合物。分子式为C36H56O8；分子量为618.8，纯度≥99％。本品为白色或淡黄色树脂状物，可溶于甲醇，乙醇，丙酮，乙酸乙酯，不溶于水，但可溶于适当比例的醇、水溶液。
佛波双酯广泛应用于医学生物学实验研究，但作为医药用于人体达到治病目的并不多见，现经研究证明，佛波双酯(TPA)能有效地促进骨髓造血，升高白细胞。还发现，本品对粒细胞性白血病、前列腺癌、胰腺癌、肺癌、乳腺癌等有明显的抗肿瘤作用。和常规抗癌物不同，佛波双酯的抗肿瘤作用是通过抑制肿瘤细胞增值，诱导肿瘤细胞分化、凋亡实现的。由于佛波双酯特殊的理化及生物学性质，临床应用只能通过静脉滴注方式给药。尽管以往的佛波双酯小针剂可用于静脉滴注，如申请号为97123318.7的TPA注射液及其生产工艺所记载的，但小针剂中乙醇，1.2-丙二醇比例较高，佛波双酯溶解量受小容量限制。另外佛波双酯使用时需将药液注入输液剂充分混容后静脉滴注，这就需要考虑药物溶解度、稳定性、安全性等因素。由于不能直接用于注射，特别是大容量注射液，其使用受到限制，而且麻烦。
发明内容
针对上述情况，本发明之目的就是提供一种佛波双酯大容量注射液及其制备方法，可有效解决直接用于静脉滴注的大容量注射液的问题，其解决的技术方案是，该注射液由佛波双酯、无水乙醇、注射用水、丙二醇或丙三醇、氯化钠或葡萄糖制成，其制备方法是，先将佛波双酯用无水乙醇进行溶解，然后再加入丙二醇或丙三醇，常温下搅拌溶解，同时将氯化钠或葡萄糖用注射用水溶解加活性炭，过滤脱碳后，加入以溶解好的佛波双酯溶液中，室温下搅拌溶解均匀，再加注射用水至全量，调PH值，精滤后灌装容器内，冲氮气，封盖高压灭菌即可，本发明使用方便，工艺先进，用于医疗和商业化生产佛波双酯大容量注射液，有效克服了小容量的注射液使用的局限性，拓宽了使用面，提高了医学价值，是对佛波双酯注射液开拓创造性的贡献。
四、具体实事方式以下结合具体实施情况和实施例，对本发明的具体实施方式
作详细说明。由前技术方案所述，本发明注射液是由以体积百分比为佛波双酯0.05-2.0％，药用无水乙醇0.3-1.5％，药用1.2-丙二醇或丙三醇5-30％，药用氯化钠0.9％或葡萄糖5-10％和注射用水70-95％制成，总体积为100％。无需氯化钠或葡萄糖时，也可省去，构成无钠无糖注射液。需要说明的是佛波双酯0.05-2.0％是指在100ml的注射液中含有0.05-2.0克佛波双酯，药用氯化钠0.9％是指每100ml的注射液中含0.9克氯化钠，葡萄糖5-10％是指每100ml的注射液中含5-10克的葡萄糖。本发明可制成大容量50-500ml规格的佛波双酯注射液，例如1、无水乙醇，1.2-丙二醇，0.9％氯化钠溶媒系统150ug，250ug/50ml；150ug，250ug/100ml；150，250ug/250ml；150ug，250ug/500ml2、无水乙醇，1.2-丙二醇，5-10％葡萄糖溶媒系统150ug，250ug/50ml；150ug，250ug/100ml；150，250ug/250ml；150ug，250ug/500ml。
3、无水乙醇，1.2-丙二醇，注射用水溶媒系统150ug，250ug/50ml；150ug，250ug/100ml；150，250ug/250ml；150ug，250ug/500ml。
4、无水乙醇，丙三醇，0.9％氯化钠溶媒系统150ug，250ug/50ml；150ug，250ug/100ml；150，250ug/250ml；150ug，250ug/500ml5、无水乙醇，丙三醇，5-10％葡萄糖溶媒系统150ug，250ug/50ml；150ug，250ug/100ml；150，250ug/250ml；150ug，250ug/500ml。
6、无水乙醇，丙三醇，注射用水溶媒系统150ug，250ug/50ml；150ug，250ug/100ml；150，250ug/250ml；150ug，250ug/500ml。
其制备方法是，取体积百分比的佛波双酯0.05-2.0％，用无水乙醇0.3-1.5％溶解后，加入1.2-丙二醇或丙三醇5-30％，室温下搅拌溶解备用，同时取药用氯化钠0.9％或葡萄糖5-10％，加入注射用水70-95％，加热至70-80℃搅拌溶解后，加入加水量的0.5％的活性碳，保温30分钟，过滤，降温至室温后，同已溶解备用的佛波双酯混匀，再用质量浓度为2％的氢氧化钠及5％的盐酸调PH值为5.0-7.5(PH5.0-7.5)，过滤，灌装后冲氮气，具塞，轧盖，高压灭菌，检验合格后，包装，整个制备过程均在室温、避光条件下进行。
以下结合实施例对本发明作进一步说明。根据组份要求，大容量50-500ml佛波双酯注射液由以下配比制成(体积百分比)1、药用无水乙醇0.3％-1.5％、药用1.2-丙二醇5-30％、药用氯化钠0.9％、注射用水70-95％、佛波双酯0.05-2.0％；2、药用无水乙醇0.3％-1.5％、药用1.2-丙二醇5-30％、药用葡萄糖5-10％、注射用水70-95％、佛波双酯0.05-2.0％；3、药用无水乙醇0.3％-1.5％、药用1.2-丙二醇5-30％、注射用水70-95％、佛波双酯0.05-2.0％；4、药用无水乙醇0.3％-1.5％、药用丙三醇5-30％、药用氯化钠0.9％、注射用水70-95％、佛波双酯0.05-2.0％；5、药用无水乙醇0.3％-1.5％、丙三醇5-30％、药用葡萄糖5-10％、注射用水70-95％、佛波双酯0.05-2.0％；4、药用无水乙醇0.3％-1.5％、丙三醇5-30％、注射用水70-95％、佛波双酯0.05-2.0％。
以上体积总量均为100％。
按上述配方制备的大容量注射液，均应调PH为5.0-7.5，并在灌封时通入高纯度医用氮气。
现以制备150ug/50ml，配液量10000ml为例，说明佛波双酯(TPA)大容量注射液的制备工艺。
1、称取佛波双酯原料药30mg置玻璃配料器内，先加药用无水乙醇30ml溶解，然后再加药用1.2-丙二醇1000ml，室温18-25℃(以下同)下搅拌溶解；称取氯化钠90g用8500ml注射用水溶解后加入42.5克的活性碳进行脱碳，过滤之后加入配料器内，同已溶解的佛波双酯混合，室温下搅拌溶解，再加注射用水至全量，搅拌均匀，用氢氧化钠及盐酸调PH5.0-7.5，精滤，半成品检验合格后进行注射液灌注，冲氮气，具塞，轧盖，115℃/30分钟高压灭菌，灯检，包装。
2、称取佛波双酯原料药30mg置玻璃配料器内，先加药用无水乙醇30ml溶解，然后再加药用1.2-丙二醇1000ml，室温下搅拌溶解；称取药用葡萄糖500g，用8500ml注射用水溶解后加入配料器内，室温下搅拌溶解，再加注射用水至全量，搅拌均匀，调PH5.0-7.5，精滤，半成品检验合格后进行注射液灌注，冲氮气，具塞，轧盖，115℃/30分钟高压灭菌，灯检，包装。
3、取佛波双酯原料药30mg置玻璃配料器内，先加药用无水乙醇30mg溶解，然后再加药用1.2-丙二醇1000ml，室温下搅拌溶解；直接加注射用水8500ml于配料器内，室温下搅拌混溶，最后加注射用水至全量，搅拌均匀，调PH5.0-7.5，精滤，半成品检验合格后进行注射液灌注，冲氮气，具塞，轧盖，115℃/30分钟高压灭菌，灯检，包装。
4、称取佛波双酯原料药30mg置玻璃配料器内，先加药用无水乙醇30ml溶解，然后再加药用丙三醇1000ml，室温18-25℃(以下同)下搅拌溶解；称取氯化钠90g用8500ml注射用水溶解后加入42.5克的活性碳进行脱碳，过滤之后加入配料器内，同已溶解的佛波双酯混合室温下搅拌溶解，再加注射用水至全量，搅拌均匀，用氢氧化钠及盐酸调PH5.0-7.5精滤，半成品检验合格后进行注射液灌注，冲氮气，具塞，轧盖，115℃/30分钟高压灭菌，灯检，包装。
5、称取佛波双酯原料药30mg置玻璃配料器内，先加药用无水乙醇30ml溶解，然后再加药用丙三醇1000ml，室温下搅拌溶解；称取药用葡萄糖500g，用8500ml注射用水溶解后加入配料器内，室温下搅拌溶解，再加注射用水至全量，搅拌均匀，调PH5.0-7.5，精滤，半成品检验合格后进行注射液灌注，冲氮气，具塞，轧盖，115℃/30分钟高压灭菌，灯检，包装。
6、称取佛波双酯原料药30mg置玻璃配料器内，先加药用无水乙醇30mg溶解，然后再加药用丙三醇1000ml，室温下搅拌溶解；直接加注射用水8500ml于配料器内，室温下搅拌混溶，最后加注射用水至全量，搅拌均匀，调PH5.0-7.5，精滤，半成品检验合格后进行注射液灌注，冲氮气，具塞，轧盖，115℃/30分钟高压灭菌，灯检，包装。
工艺操作要点
1、无水乙醇，1.2-丙二醇，丙三醇使用前应先蒸馏精制，以确保纯度符合要求。
2、称取处方量的氯化钠，加入近全量的注射用水，加热至70-80℃搅拌溶解，加入加水量的0.5％的活性碳，保温30分钟，过滤，降至室温备用。
3、称取处方量的氯化钠，加入近全量的注射用水，加热至70-80℃搅拌溶解，加入加水量的0.5％的活性碳，保温30分钟，过滤，降至室温备用。
4、用质量浓度为2％的氢氧化钠及5％的盐酸溶液调PH5.0-7.5。
5、投料顺序称取佛波双酯原料药，先用处方量的无水乙醇溶解，加1.2-丙二醇或丙三醇搅拌混溶，再按处方量加入已脱碳的氯化钠或葡萄糖溶液，调PH5.0-7.5，过滤，得半成品。
6、半成品含量测定用HPLC法，固定相为C18填料，流动相为甲醇/水，检测波长为232nm或254nm。
7、半成品检验合格后即行罐装，冲氮气，具塞，轧盖，高压灭菌，灯检，包装。
8、制备过程应在室温18-25℃、避光条件下进行。
在上述成份中(1)无水乙醇(药用)分子式CH3CH2OH；分子量46.07；纯度≥99％；比重0.79(20℃)。在HPLC检测条件下对佛波双酯原料药无干扰。在大容量注射液中作为助溶剂应用，占总容量的0.3-1.5％。
(2)1.2-丙二醇(药用)分子式CH2OHCHOHCH3；分子量76.10；比重1.039(20℃)。本溶剂使用前需进行蒸馏除杂质，在HPLC检测时应对佛波双酯原料药无干扰。在佛波双酯大容量注射液中作为溶媒及稳定剂应用，其占溶媒系统的5-30％。
(3)丙三醇(药用)分子式C3H8O3；分子量92.09；比重1.2569(20℃)。在HPLC检测条件下对佛波双酯原料药无干扰。在佛波双酯大容量注射液中作为溶媒及稳定剂应用，其占溶媒系统的5-30％。
(4)氯化钠(药用) 分子式NaCl；分子量58.44；纯度＞99％。在佛波双酯大容量注射液中作为渗透压调节剂应用，其含量为0.9％。
(5)葡萄糖(药用)分子式C6H12O6·H2O分子量198.17。在佛波双酯大容量注射液中作为营养补充剂应用，其含量为5-10％。
(6)注射用水，除符合有关注射用水质量标注外，在HPLC检测条件下应对佛波双酯原料药无干扰。在佛波双酯大容量注射液为主要溶媒，其在溶媒系统占70-95％。
(7)其它，高纯度医用氮气，在灌注时通入输液瓶中，以达到置换液面的空气，稳定贮存之目的。
上述佛波双酯大容量注射液的适应症为升高肿瘤患者因放、化疗引起的白细胞降低；治疗白血症和其它实体肿瘤，无不良反应，并由实验得的证明。用大鼠100只，连续腹腔注射本品90天，剂量分别为250、125、62.5ug/kg，高剂量累积用药量达20mg/kg以上。所有动物一般情况良好，体重增长，对照组与用药组比较无明显差异。给药结束后处死动物，剖取各主要脏器做病理组织学检查。结果表明，佛波双酯大鼠长期腹腔给药，血象，肝肾功能及各主要脏器的病理组织学均无明显变化，与对照组相比无统计学差异，未发现有任何肿瘤生成的迹象。肿瘤患者试用本品250ug/每人次(静脉注射)，个别患者出现一过性寒战和发热反应，不经治疗，寒战持续5-10分钟，发热(38-39℃)持续2-4小时可自行消失。这些反应和生物制剂GM-CSF相类似。试用150ug/每人次，则未见寒战和发热反应。如果将本品药液滴漏在血管外，则将引起局部刺激反应。佛波双酯的上述反应可用糖皮质激素对抗。本品体外可诱导白血病细胞及某些实体瘤细胞分化；促进骨髓造血细胞增值、分化等。药效学实验，动物为LACA小鼠，阳性对照药为进口美国的rhGM-CSF。实验分模型对照组，阳性对照组，佛波双酯用药组。本品用药剂量为100，75，50，25，12.5ug/kg，rhGM-CSF剂量为100ug/kg。小鼠一次腹腔注射环磷酰胺100mg/kg，每天一次，连续3次，然后随机将小鼠分组，每组10只。阳性药及本品按上述剂量腹腔注射，每天一次，连续给药2次。分别于化疗前、后，实验用药后不同时间采血，计数白细胞。实验结果表明本品停药后一天，白细胞升高值高于模型组和阳性组，其中50ug/kg，12.5ug/kg组统计学上有明显性差别，表明本品升白作用强于rhGM-CSF。佛波双酯停药后第5天白细胞数仍保持较高水平，与rhGM-CSF组产生的白细胞高峰值无明显差别，表明比rhGM-CSF维持白细胞高峰期更持久。12.5/kg实验组虽在停药后第三天，第5天白细胞值低于其它剂量组，但停药后第8天仍明显高于模型组，提示佛波双酯低于12.5ug/kg对化疗引起的白细胞恢复仍有一定的促进作用。实验结果还表明，本品没有明显的量效依赖关系。
临床实验52例放，化疗后白细胞降低的肿瘤患者试用本品治疗。给药剂量为静脉滴注125ug-250/每天/每人次，给药一次或多次，停药后不同时间采血计数白细胞。给药前(放，化疗后)中性粒细胞计数为2.55±0.13×109/L；给药后平均计数为5.92±0.28×109/L，升高132％。给药前(放，化疗后)中性粒细胞计数为1.76±0.09×109/L；给药后平均计数为4.76±0.28×109/L，升高170％。
上述结果统计学上均有显著性差别(P＜0.01)。给药前(放，化疗后)中性粒细胞与淋巴细胞百分率分别为69％和31％，给药后分别为80％和20％。本品升高中性粒细胞与淋巴细胞百分比统计学上有明显差别(P＜0.01)。给药后，77％的患者白细胞数升高到正常范围(＞4.5×109/L)，84％的患者中性粒细胞数升高到正常范围(＞3.0×109/L)。实验结果表明，放，化疗后白细胞降低的肿瘤患者试用本品治疗，白细胞总数及中性粒细胞数迅速升高，有效率达到90％以上。部分临床实验还发现佛波双酯与维生素D3，小剂量Ara-C合用治疗已对化疗产生耐药的，难治性白血病，例如慢粒转急变患者有明显的分化诱导治疗作用。整个治疗过程白血病细胞减少，正常白细胞及血小板水平增高，患者无需输血等支持治疗。一例急性粒细胞性白血病患者经常规化疗后，白细胞数显著降低，应用G-CSF升高白细胞治疗，虽然白细胞总数明显升高，但细胞分类70％以上是原始细胞和早幼粒细胞。改用佛波双酯治疗，患者正常白细胞迅速升高，而白血病细胞则控制在较低水平。提示本品用于升高白血病患者的白细胞时，无引起癌细胞复发的危险。
总之，本发明可有效用于人体治疗，升高白细胞，优于生物制剂G-CSF，GM-CSF，且在治疗剂量毒副反应小，可逆，具有创新性，有广阔的商业及治疗开发应用前景，造福于人类。
权利要求
1.一种佛波双酯大容量注射液，其特征在于，是由以体积百分比为佛波双酯0.05-2.0％、药用无水乙醇0.3％-1.5％、药用1.2-丙二醇或丙三醇5-30％，药用氯化钠0.9％或葡萄糖5-10％和注射用水70-95％制成，总体积和为100％。
2.根据权利要求1所述的佛波双酯大容量注射液，其特征在于，由所说的佛波双酯、无水乙醇、1.2-丙二醇或丙三醇、氯化钠或葡萄糖制成的注射液，其佛波双酯含量为150ug，250ug/50ml；150ug，250ug/100ml；150，250ug/250ml；150ug，250ug/500ml。
3.根据权利要求1所述的佛波双酯大容量注射液的制备方法，其特征在于，将以体积百分比的佛波双酯0.05-2.0％，用无水乙醇0.3％-1.5％溶解后，加入1.2-丙二醇或丙三醇5-30％，室温下搅拌溶解备用，同时取药用氯化钠0.9％或葡萄糖5-10％，加入注射用水70-95％，加热至70-80℃，搅拌溶解后，加入加水量的0.5％的活性碳，保温30分钟，过滤，降温至室温后，同已溶解备用的佛波双酯混匀，再用质量浓度为2％的氢氧化钠及5％的盐酸调PH值为5.0-7.5，过滤，灌装后冲氮气，轧盖，高压灭菌，整个制备过程均在室温、避光条件下进行。
4.根据权利要求3所述的佛波双酯大容量注射液的制备方法，其特征在于，制备含量150ug/50ml的10000ml的佛波双酯注射液，其制备方法是将30mg的佛波双酯置于配料器内，用无水乙醇30ml溶解，然后再加药用1.2-丙二醇或丙三醇1000ml，室温18-25℃下搅拌溶解备用，再取氯化钠90g或葡萄糖500克或1000克，用8500ml注射用水溶解后，加入42.5克的活性碳，过滤脱碳后，加入配料器同已溶解的佛波双酯混合，室温下搅拌溶解，再加至10000ml，搅匀，用质量浓度为2％的氢氧化钠及5％的盐酸调PH为5.0-7.5，过滤，装灌，冲氮气，轧盖，115℃下高压灭菌30分钟。
全文摘要
本发明是一种佛波双酯大容量注射液及其制备方法，可有效解决直接用于静脉滴注的大容量注射液的问题，该注射液由佛波双酯、无水乙醇、注射用水、1.2－丙二醇或丙三醇，氯化钠或葡萄糖制成，制备方法是，先将佛波双酯用无水乙醇进行溶解，再加入1.2－丙二醇或丙三醇，搅拌溶解，同时将氯化钠或葡萄糖用注射用水溶解加入活性炭，过滤脱炭后，加入已溶解好的佛波双酯溶液中，溶解均匀，再加注射用水，并调pH值，过滤后灌装容器内，充氮气，封盖高压灭菌，本发明使用方便，工艺先进，用于医疗和商业化生产佛波双酯大容量注射液，有效克服了小容量的注射液使用的局限性，拓宽了使用面，提高了医学价值，是对佛波双酯注射液开拓创造性的贡献。
文档编号A61K31/215GK1634016SQ200410060589
公开日2005年7月6日 申请日期2004年10月28日 优先权日2004年10月28日
发明者韩正涛, 赵九芝, 李宁, 孙中淼 申请人:韩正涛, 赵九芝, 李宁, 孙中淼