五加皮提取物,含有该提取物的改善勃起功能障碍的保健食品及勃起功能障碍治疗剂的制作方法

专利名称：五加皮提取物,含有该提取物的改善勃起功能障碍的保健食品及勃起功能障碍治疗剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及五加皮提取物，更具体地，本发明涉及具有改善勃起功能障碍作用的五加皮醇提取物，含有所述五加皮醇提取物的改善勃起功能障碍的保健食品和勃起功能障碍治疗剂。
背景技术：
阴茎勃起经历复杂的生理过程，其不仅涉及血管系统，而且涉及内分泌系统和神经系统。阴茎勃起经过一系列阶段引起，例如通过各种刺激使阴茎海绵体平滑肌松弛、通过小窦的扩张和细动脉扩张增加血流、增大阴茎内压、通过压缩位于白膜和与外周窦状隙之间的内膜(subtunical)小静脉丛减少静脉血流出量，然后使阴茎的内压进一步增大(Lue TF，Tanagho EA.，J Urol，1987，137，829-36)。关于阴茎勃起的生理学解释以及应用于阴茎海绵体平滑肌的许多药物的药效和机理的研究，已经尝试将那些具有松弛阴茎海绵体平滑肌活性的药物用于勃起功能障碍的治疗。直至今天，已知的能使阴茎海绵体平滑肌松弛的药物有肾上腺素α-受体阻滞剂类、胆碱类、NO(氧化氮)、肽类、前列腺素、组胺类、钙通道抑制剂类、钙通道开放剂类、非特异的血管舒张药等(LinetOI，Ogrinc FG.，N Eng J Med，1996，334，873-7；Tong YC等人，Pharmacology，1992，45，241-9；Miller MA等人，Int J Impot Res，1995，7，91-100；Andersson K-E，Wagner G.，Physiol Rev，1995，75，191-236；Andersson K-E，Stief CG.，World J Uro，1997，115，14-20；Andersson KE.，Pharmacol Rev，2001，53，417-50)。
目前还没有关于勃起功能障碍发生频率的报导。然而，由寿命延长、成人疾病增加、饮食变化、工业和交通意外事故的增加以及由繁杂的现代生活引起的精神压力和身体疲劳的加剧等原因，使患有勃起功能障碍的患者人数明显增加。治疗勃起功能障碍的方法是包括服用药物和雄性激素的内科疗法；包括血管外科术和阴茎假体植入术等的外科疗法；以及向阴茎海绵体平滑肌内注射血管舒张药。用于内科疗法的药物的实例有雄性激素、育亨宾、阿朴吗啡和traszodone，但内科疗法并不适于治疗严重的间质(stromal)勃起功能障碍。然而，对这些药物所具有的副作用甚至其治疗效果仍值得怀疑。已知的具有可靠重现性的药物目前还没有报导(Andersson KE，Pharmacol Rev，2001，53，417-50；Montorsi F等人，BJU International，2003，91，446-54；Vitezic D，Pelcic JM，Int J ClinPharmacol Ther，2002，40(9)，393-403)，仅西地那非(sildenafil)被用于勃起功能障碍的初期治疗(Heaton JP，Dean J，Sleep DJ，Int J Impot Res，2002，14，61-4)。
在韩国，五加皮是熟知的传统药物。其性温、味苦，具有温五中之功效。已知五加皮用于消除肝和神经系统中的痛风，益气生精。五加皮已经在临床上用于治疗诸如“五脏虚损”(Oro)(由五脏虚弱引起的疲乏)，“七损”(Chilsang)(发生在男性体内的、由体虚引起的七种典型症状)以及挪步艰难等疾病。长期服用五加皮可以增加活力、保护胃部、益气生精、醒脑、增强毅力、预防衰老，有助于保持心情轻松，清除体内坏血。因此，五加皮已经被用于治疗脊柱痛、阳痿、阴囊湿疹、女性闭经等症状。在韩国，五加皮长期被用作天然滋补药物，并将其加入保健食品中。曾经有报导刺五加(Acanthopanax senticosus)提取物具有保肝活性(Chun-Ching Lin and Pei-Chen Huang，Phytotherapy Research，2000，14，489-494)。但却没有关于五加皮对性功能影响的报导。
因此，本发明者发现使用70％的乙醇或蒸馏水提取的白毛五加(Acanthopanax divaricatus var.albeofructus)、刺五加(Acanthopanaxsenticosus)、Min刺五加皮(Acanthopanax senticosus var.subinermis)、岛五加皮(Acanthopanax koreanum)的根和茎提取的提取物可以诱导阴茎勃起，通过证实所述提取物可以有效地用于生产勃起功能障碍的保健食品和治疗剂而完成了本发明。

发明内容
本发明的一个目的在于提供一种具有改善勃起功能障碍作用的五加皮醇提取物。
本发明的另一目的在于提供含有五加皮提取物作为有效成分的、用于改善勃起功能障碍的保健食品。
本发明的再一目的在于提供含有五加皮醇提取物作为有效成分的勃起功能障碍治疗剂。
为了实现上述目的，本发明提供了具有改善勃起功能障碍作用的五加皮醇提取物。
本发明还提供了含有五加皮提取物作为有效成分的、用于改善勃起功能障碍的保健食品。
本发明进一步提供了含有五加皮醇提取物作为有效成分的勃起功能障碍治疗剂。
下面将详细描述本发明。
本发明提供了具有改善勃起功能障碍作用的五加皮醇提取物。
本发明中，五加皮优先选自白毛五加、刺五加、Min刺五加皮和岛五加皮，更优选白毛五加。本发明的五加皮提取物优选从根或茎提取，更优选从五加皮的茎提取。此处所述的茎是指除去根以外的所有气生部分。
醇优先选自甲醇、乙醇、丙醇和丁醇，其中更优选乙醇。醇的浓度优选0～100％，更优选70％。
当使用从白毛五加、刺五加、Min刺五加皮或岛五加皮中的任意一种五加皮的根或茎提取的提取物处理兔阴茎海绵体平滑肌时，所述平滑肌的松弛随剂量依赖性地增大。当使用白毛五加的提取物处理时，阴茎海绵体平滑肌更为松弛，并且茎的提取物比根的提取物具有更佳的松弛效果(见图1a)。就从五加皮的茎提取的提取物而言，与蒸馏水的提取物相比，70％乙醇的提取物对兔阴茎海绵体平滑肌的松弛效果更佳(见图1b)。当使白鼠口服从白毛五加的茎制备的70％醇的提取物时，白鼠的阴茎勃起能力随剂量和给药周期依赖性地增强(见图3)。由此证明了五加皮的提取物通过促进阴茎海绵体平滑肌松弛而使阴茎勃起增强，在这些提取物中，经证实白毛五加茎的70％醇的提取物具有最佳的松弛效果。
目前已经确认NO(氧化氮)与阴茎海绵体平滑肌的松弛有关(BurnettAL，J Urol，1997，157，320-4；Burnett AL et al.，Science，1992，257，401-3)。NO产生剂结合于内皮细胞之细胞膜上的受体，引起游离钙浓度增加。钙增加的数目促进NO的合成和分离。分离的NO进入平滑肌细胞，激活平滑肌的鸟苷酸环化酶，引起cGMP生成增加。cGMP的增加诱导了平滑肌松弛(Gonzalez-Cadavid NF，Ignarro LJ，Rajfer J，Mol Urol，1999，3，51-9)。目前尚未发现NO和五加皮在阴茎海绵体平滑肌中的协同作用。本发明的优选实施方式中证实了HS具有的平滑肌松弛效果随着内皮细胞的去除或服用药物而变化，所述HS为松弛活性最好的白毛五加茎的70％乙醇的提取物，所述药物为抑制乙酰胆碱的阿托品和ODQ(鸟苷酸环化酶特异性抑制剂)；亚甲蓝、鸟苷酸环化酶抑制剂；焦酚、NO灭活剂；以及L-NNA、NO产生抑制剂(见图1c)。由此确认由HS诱导的阴茎海绵体平滑肌的松弛还与内皮细胞和NO有关。当阴茎海绵体平滑肌的松弛由HS启动时，所述平滑肌内的cGMP随HS剂量依赖性地增多，表明HS诱导了与阴茎海绵体平滑肌松弛相关的NO(见图2)。
当阴茎海绵体平滑肌处于稳定状态时，HS不诱导阴茎海绵体平滑肌内的松弛或收缩，而仅仅抑制自主活动性。在大多数情况下，神经药物不能抑制平滑肌的自主活动性，但药物中含有的钙或钾，或前列腺素生成抑制剂可以控制其自主活动性(Christ GJ等人，Br J Pharmacol，1990，101，375-81)。并且HS抑制自主活动性，所以白毛五加茎的70％乙醇的提取物一定会直接影响阴茎海绵体平滑肌。
当平滑肌的切片处于不含钙的富钾营养剂中时，平滑肌的基本张力消失。但加入钙可使其基本张力恢复，诱导平滑肌收缩。该机理可以通过膜电势依赖性钙通道进行，所述膜电势依赖性钙通道被十分缓慢地激活(Fovaeus M等人，J Urol，1987，138，1267-72；Karaki H等人，PharmacolRev，1997，49，157-230)。本发明的优选实施方式中，稳定在不含钙的富钾营养剂中的平滑肌的已被降低的基本张力被HS降得越来越低(见实施例2-2)。这缘于钙的细胞内运动，更确切地说，细胞内的钙流出的增加或钙流入肌细胞的增加，意味着细胞质内的分离钙的降低，使平滑肌的基本张力降低。稳定在不含钙的富钾营养剂中的平滑肌的CaCl2的收缩也被HS剂量依赖性地降低。此结果说明HS通过膜电势依赖性钙通道抑制细胞内钙运动，诱导肌肉随细胞内钙含量的降低而松弛，所述膜电势依赖性钙通道被缓慢地激活。
关于阴茎海绵体平滑肌的松弛，HS剂量依赖性地增加阴茎海绵体中cGMP和cAMP的含量(见图2和图4)。此结果表明由HS诱导的阴茎勃起不仅涉及cGMP相关的松弛，而且涉及cAMP相关的松弛。
本发明还提供了含有五加皮醇提取物作为有效成分的、用于改善勃起功能障碍的保健食品。
本发明的提取物强烈诱导兔阴茎海绵体平滑肌的松弛。当白鼠口服所述提取物时，勃起能力随剂量和给药周期依赖性地增强。因此，本发明含有五加皮的提取物作为有效成分的组合物可以有效地用于改善勃起功能障碍。
本发明的五加皮提取物可以单独或与其它食品或食品成分一起添加到食品中，并可用常规方法制剂。此时有效成分的混合比例取决于使用目的(预防、改善或治疗)。相对于原料，食品或饮料中添加的本发明的五加皮提取物通常优选0.2～20重量％，更优选0.24～10重量％。当长期给予所述提取物以控制健康状况或仅为了健康或保健目的使用时，可以少于上述剂量。然而，即使在长期服用的情况下，由于所述有效成分的安全性，也可以大于上述剂量。
对于可应用本发明的提取物的食品没有限制。因此，所述提取物可以添加在饮料(drinks)、肉、香肠、面包、米糕、巧克力、糖果、快餐、饼干、比萨饼、拉面、面条、口香糖、包括冰淇淋的乳制品、汤、饮料(beverages)、茶、饮料、含酒精饮料以及复合维生素等。
本发明进一步提供了含有五加皮醇提取物作为有效成分的勃起功能障碍治疗剂。
当口服本发明的提取物时，其对兔的阴茎海绵体平滑肌显示出强烈的松弛效果，并且随剂量和给药时间依赖性增强的白鼠的勃起能力。因此，本发明的提取物可以有效地用作勃起功能障碍治疗剂。
按下述方法对本发明的提取物对勃起功能障碍的改善效果进行考察将500mg的五加皮提取物紧密地装入胶囊中，制成所述提取物的药物剂型，然后让患有勃起功能障碍的48例患者口服所生产的药物两个月，每日3次，每次服用2粒胶囊，然后就性欲、勃起能力改善及满意度等问题与每位患者面谈和进行问卷调查。
结果是，72.9％(48例患者中的35例)感到勃起能力改善，除了两位消化不良的患者外，没有患者感到有副作用。因此，含有本发明的提取物作为有效成分的治疗剂可用于改善勃起功能障碍。
相对于勃起功能障碍治疗剂总重量份数，勃起功能障碍治疗剂中含有的本发明的五加皮提取物占1～100重量份，优选占50～100重量份。可以添加一种或多种药学可接受的载体，以制成含有所述提取物的药物剂型。所述载体选自盐水、缓冲盐水、水、甘油和乙醇，但所述的选择并不总限于此。可以得到本领域已知的任意可接受的药物剂型(Remington’s Pharmaceutical Science(最新版)，Mack PublishingCompany，Easton PA)。
本发明的五加皮提取物可以口服给药，并可以使用药物剂型中的常规剂型。本发明的提取物可以通过与常规使用的填充剂、补充剂、粘合剂、润湿剂、崩解剂、例如表面活性剂的稀释剂、或赋形剂混合，将本发明的提取物制备得用于口服。
可以根据年龄、性别、健康状况、活性成分的吸收、灭活率、排泄以及与之搭配使用的其它药物确定本发明提取物的有效剂量。例如，口服剂量可以为1～1.5g/天，但并不总限于此。本发明还包括剂量单位的药物剂型。这意味着所述剂型以单独部分存在，例如片剂、包衣片、胶囊、丸剂、栓剂和针剂，其中活性化合物的含量对应于部分或多倍的单个剂量。所述剂量单位可以含有例如1、2、3或4倍的单个剂量或1/2、1/3或1/4的单个剂量。所述单个剂量优选含有一次给药的活性化合物的量，，并且通常对应于1、1/2、1/3或1/4的日剂量。
口服的固体剂型为片剂、丸剂、粉剂、胶囊；口服的液体剂型为悬浮剂、溶液、乳剂和糖浆剂，上述剂型可以含有各种不同的赋形剂，例如润湿剂、甜味剂、芳香剂和防腐剂，以及常规使用的简单的稀释剂，如水和液体石蜡。


图1a为显示用70％的乙醇从白毛五加、刺五加、Min刺五加皮和岛五加皮的根或茎提取的提取物对兔阴茎海绵体平滑肌松弛作用的比较图；图1b为显示使用蒸馏水或70％的醇从白毛五加、刺五加、Min刺五加皮和岛五加皮的茎提取的提取物对兔阴茎海绵体平滑肌松弛作用的比较图；图1c为显示ODQ、亚甲蓝、焦酚、阿托品、L-NNA或去除内皮细胞对从五加皮的茎制备的70％乙醇的提取物(HS)诱导的兔阴茎海绵体平滑肌松弛的影响图；图1a～图1c中，KS刺五加茎的70％乙醇的提取物，HS白毛五加茎的70％乙醇的提取物，SS岛五加皮茎的70％乙醇的提取物，MSMin刺五加皮茎的70％乙醇的提取物，
KR刺五加根的70％乙醇的提取物，HR白毛五加根的70％乙醇的提取物，SR岛五加皮根的70％乙醇的提取物，MRMin刺五加皮根的70％乙醇的提取物。
图2为显示在使用不同浓度的70％乙醇提取的五加皮茎提取物HS处理动物后，兔阴茎海绵体平滑肌中cGMP和cAMP的浓度变化的一组图；图3为显示口服70％乙醇提取的白毛五加茎的提取物(HS)两周的白鼠与口服HS四周的白鼠的勃起能力的比较图；图4为显示白鼠阴茎海绵体平滑肌中cGMP和cAMP的浓度随给药时间变化的一组图。具体地说，以100mg/kg剂量将从白毛五加茎制备的70％乙醇的提取物口服，第一组口服给药两周，第二组口服给药四周，然后比较上述两种情况。
具体实施例方式
下面实施例将描述本发明实用并且优选的实施方式。
然而应当理解的是，在上述公开的基础上，本领域的技术人员可以在本发明的精神和范围内进行修改和改进。
实施例1五加皮提取物的制备从韩国天安的修身五加皮农场(Susin Ogapy Farm，Chonan，Korea)得到白毛五加、Min刺五加皮和岛五加皮，从韩国江原道青玉山(ChungokMountain，Kangwon-Do，Korea)采集刺五加，制备五加皮提取物。将根和茎彼此分开、干燥。干燥后将其切成小块，放入70％乙醇或蒸馏水中，然后根据食品和药物的标准提取。根据五加皮的种类，将本发明使用的五加皮提取物分类，表示如下白毛五加的提取物标记为H；刺五加的提取物标记为K；Min刺五加皮的提取物标记为M；以及岛五加皮的提取物标记为S。更具体地，根据用于提取的植物部位细分成组(茎(S)，意指除根以外的所有气生部分；以及根(R))。因此，四种不同的五加皮的每种70％乙醇的提取物分为HR、HS、KR、KS、MR、MS、SR和SS。同样，使用蒸馏水制备的每种茎提取物分为HSW、KSW、MSW以及SSW。
实施例2五加皮提取物对兔阴茎海绵体平滑肌的松弛作用(离体试验)2-1兔阴茎海绵体平滑肌切片的制备挑选85只4-6月龄的雄性新西兰白兔(Samtaco BIO KOREA，乌山，京畿道，韩国(Osan，Kyunggido，Korea))作为试验动物，因为它们与人类具有相似的阴茎海绵体平滑肌结构和勃起机理。向兔的耳静脉注射30～50mg/kg的戊巴比妥钠，使新西兰白兔麻醉。切下动物的阴茎，在供给95％O2和5％CO2混合气的低温Tyrode溶液(组成(mEq/L)Na+153.6、K+5.3、Ca2+3.0、Mg2+1.2、Cl-157.2、H2PO4-0.6、SO42-1.2、HCO3-7.1以及葡萄糖5.0)中，分离阴茎海绵体平滑肌。将分离得到的阴茎海绵体平滑肌切片成2×2×6mm的薄片，所得到的切片在装有Tyrode溶液的10ml器官浴器中固定。通过与之相连的等张收缩记录器(Biopac systems，圣巴巴拉，加利福尼亚，美国)记录阴茎海绵体平滑肌的运动。通过连续供给O2混合气，使器官浴器中Tyrode溶液的温度保持在37℃，pH设定为7.4。揉搓阴茎海绵体平滑肌以除去内皮细胞(KimN等人，J Clin Invest，1991，88，238-42)。用苯肾上腺素(5×10-6M，以下称为“PHE”)使上述制备的阴茎海绵体平滑肌切片收缩，然后用乙酰胆碱(Ach)诱导其松弛，以确认内皮细胞是否完全去除。当完全去除内皮细胞时，乙酰胆碱不能诱导其松弛，或者即使诱导了松弛，松弛度也应当为去除内皮细胞之前显示出的松弛度的10％以内。因此，选择这样的标本，即对乙酰胆碱无响应，或仅有很小的松弛，使制备的平滑肌切片没有内皮细胞。其它与内皮细胞无关的实验采用一般的阴茎海绵体平滑肌切片进行。
2-2等张收缩理想张力的测定使初始张力保持在2g。在稳定状态下，注射PHE以考察张力水平。用Tyrode溶液洗涤所述的内皮细胞切片以恢复稳定状态，在增加或降低张力控制的稳定状态下，考察相同PHE量时的收缩水平。当收缩水平连续两次均为先前收缩的10％以下时，确定为理想张力，并在这样的稳定和理想的张力条件下进行药物响应实验。
2-3五加皮提取物对阴茎海绵体平滑肌张力的影响用浓度为5×10-6M的PHE处理稳定的阴茎海绵体平滑肌以诱导收缩。然后，给予不同浓度(1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml或10mg/ml)的上述实施例1制备的五加皮提取物，采用上述实施例2-1描述的相同方法记录阴茎海绵体平滑肌的运动。
结果是，就提取部位(S或R)而言，用70％的乙醇从白毛五加(H)、刺五加(K)、Min刺五加皮(M)和岛五加皮(S)的茎(S)和根(R)提取的提取物HR、HS、KR、MR、MS、SR以及SS，从1mg/ml的剂量起，显示出兔阴茎海绵体平滑肌剂量依赖性的松弛效果。当比较松弛水平时，除M提取物的情况外，由S制备的提取物比由R制备的提取物具有更佳的松弛效果。H提取物观察到最佳效果，然后依次为K、M、S，表明所有的五加皮提取物中，HS具有最强的松弛效果(图1a)。因此，实验结果还证明了由茎制备的提取物的活性最佳。
其次，就溶剂而言，用70％乙醇提取的提取物(HS、KS、MS、SS)比用蒸馏水提取的其它提取物(HSW、KSW、MSW和SSW)具有更好的松弛效果，特别是HS显示出最佳的松弛效果(图1b)。
2-4对五加皮提取物诱导阴茎海绵体平滑肌的松弛机理的分析为了考察NO是否与阴茎海绵体平滑肌的松弛有关，用PHE使所述平滑肌的切片收缩，然后分别用10-4M的鸟苷酸环化酶特异性抑制剂31H-[1，2，4]-噁二唑[4，3-a]喹喔啉-1-酮(1H-[1，2，4]-oxadiazolo[4，3-Ipquinoxalin-1-one，以下简称“ODQ”)、10-4M的鸟苷酸环化酶非特异性抑制剂亚甲蓝、10-4M NO灭活剂焦酚，所述焦酚为一种氧自由基生成剂，以及3×10-4M NO生成抑制剂NW-硝基-L-精氨酸(以下简称“L-NNA”)处理。随后，用不同浓度(1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml或10mg/ml)的HS(五加皮提取物)处理切片以测量松弛水平。
为了考察胆碱能神经递质是否与之有关，用5×10-6M的阿托品处理所述切片，所述切片给予不同浓度(1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml或10mg/ml)的HS(五加皮提取物)，以测量松弛水平。
为了考察内皮细胞对五加皮提取物诱导的松弛的影响，用PHE使不含内皮细胞的阴茎海绵体平滑肌收缩，用不同浓度(1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml或10mg/ml)的五加皮提取物HS处理所述不含内皮细胞的阴茎海绵体平滑肌，以测量松弛水平。
结果是，从1mg/ml浓度起，由PHE引起收缩的切片被HS以剂量依赖的方式开始松弛，具体地，1mg/ml时松弛为27.6±8.20％、2mg/ml时松弛为45.2±16.37％、5mg/ml时松弛为69.3±12.57％以及10mg/ml时松弛为97.8±6.93％。所述HS对由PHE收缩的阴茎海绵体平滑肌切片具有松弛效果，去除内皮细胞以及一些其它药物如ODQ、亚甲蓝、焦酚、阿托品和L-NNA对上述松弛效果有显著影响(p＜0.05)。
为了证实五加皮提取物的松弛效果和钙之间的关系，用不含钙的富钾去极化溶液洗涤阴茎海绵体平滑肌切片以降低所述平滑肌的张力。当张力降低到最低水平时，保持其平衡，补充10-3M CaCl2，观察所述平滑肌的收缩。平滑肌的其它切片用不同浓度(1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml或10mg/ml)的五加皮提取物处理，然后向其中补充10-3M CaCl2，随后观察收缩。将获得的结果相互比较。
结果是，在向不含钙的富钾去极化溶液中补充10-3M CaCl2情况下，所述平滑肌的张力水平为2.12±1.21g。同时，用不同浓度(1mg/ml、2mg/ml、5mg/ml和10mg/ml)的HS处理所述平滑肌切片的情况下，由钙诱导的收缩分别降低62.85％±11.58％、43.00±7.60％、24.44±6.80％以及12.5±5.42％(p＜0.05)。
实施例3五加皮提取物对兔阴茎海绵体平滑肌中cGMP和cAMP浓度的影响(离体试验)
由PHE诱导兔阴茎海绵体平滑肌收缩后，给予其五加皮提取物以诱导松弛。在最大松弛时，立即冷冻组织并使其保持在-70℃。然后，使用cGMP和cAMP分析试剂盒(BIOTRA细胞信息传递分析试剂盒)(Amersham pharmcia biotech，白金汉郡，英国)进行酶免疫测定(EIA)以测量cGMP和cAMP的含量。
结果是，用五加皮提取物HS处理由PHE收缩的阴茎海绵体平滑肌切片时，cGMP和cAMP的浓度剂量依赖性地增大(见图2)。
使用excel程序处理实施例1至实施例4得到的所有结果，以计算平均值和标准偏差。进行曼-惠特尼U检验(Mann-Whitney U test)或t检验(student’s t test)以判断各组所有结果值之间的显著性。进行简单的回归检验以确定平滑肌张力随不同浓度的变化是否显著(当p＜0.05，确定有显著性变化)。
实施例4五加皮提取物对白鼠阴茎勃起的影响(体内试验)4-1五加皮提取物的制备本发明中，从韩国天安的修身五加皮农场得到白毛五加，然后使其茎干燥。将干燥后的茎切成小块，放入70％的乙醇中提取，根据食品和药物的标准制备得到提取物(HS)。
4-2口服五加皮提取物引起的白鼠阴茎海绵体内压的变化使用雄性Sprague Dawley白鼠(250-350g)。将其分为两组对照组和实验组，所述实验组使用五加皮提取物进行处理。用注射器将生理盐水中的50、100或200mg/kg剂量的五加皮提取物每天一次口服给予实验组，并持续给予两周或四周。
将30～50mg/kg的戊巴比妥注射于白鼠的腹腔使其麻醉。将腹腔于中央打开，露出膀胱和前列腺。将位于前列腺后外侧的主要骨盆神经中枢定位后，分离骨盆中的骨盆神经和阴茎海绵体神经。将铂电极置于阴茎海绵体神经上，随后将其连接至电刺激器(STM100A，Biopac system，圣巴巴拉，加利福尼亚，美国)。切开包皮，露出阴茎海绵体。将26G针连接于阴茎海绵体以测量其内压。为了检查实验期间的电刺激或药物对全身血流状况的影响，将22G血管针置于颈动脉内，通过传感器和多种扫描记录装置持续测量血压。将全身血压和阴茎海绵体的内压通过Sorenson transpac(Abbott Critical Care System，U.S.A.)传输给微分放大器(DA100，Biopac system，U.S.A.)，然后通过数据获取系统(MP100，Biopac system，U.S.A)进行测定，使用数据分析程序(Acqknowledge 3.2program，Biopac system，U.S.A)进行最后的数据分析。
为了评价对阴茎海绵体给予神经刺激诱导的阴茎勃起，在神经刺激(频率2Hz；阈值2伏特)后，测量阴茎海绵体的内压，随后将所测的内压与阴茎海绵体的最大内压相比较。
结果是，与对照组相比，口服HS使阴茎勃起得到显著改善(p＜0.05)。勃起能力随HS给药剂量和时间变化。当以50mg/kg/天的剂量给予HS两周时，勃起能力暂时得到改善。然而，当以100mg/kg/天的剂量给予HS四周时，勃起能力得到最大改善。勃起能力随给药时间延长而提高(图3)。
实施例5五加皮提取物对白鼠阴茎海绵体平滑肌中cGMP和cAMP浓度的影响(体内试验)通过神经刺激白鼠的阴茎海绵体平滑肌，诱导最大的阴茎勃起。在最大勃起状态下，立即冷冻组织并使其保存在-70℃。然后，使用cGMP和cAMP分析试剂盒(BIOTRA细胞信息传递分析试剂盒)(Amershampharmcia biotech，白金汉郡，英国)进行酶免疫测定(EIA)，以测量cGMP和cAMP的含量。
结果是，对阴茎海绵体平滑肌给予神经刺激的对照组中，在勃起状态下，白鼠阴茎海绵体平滑肌中的cGMP和cAMP浓度增加。与对照组相比，以100mg/kg/天的剂量口服给予HS两周或四周的实验组中，在勃起状态下，对阴茎海绵体给予神经刺激，cGMP和cAMP的含量显著增加(p＜0.05)(图4)。上述结果表明长期口服五加皮的提取物，阴茎海绵体平滑肌中的cGMP和cAMP浓度增大。
使用excel程序处理实施例1至实施例5得到的所有结果，以计算平均值和标准偏差。进行曼-惠特尼U检验(Mann-Whitney U test)或t检验(student’s t test)以判断各组的所有结果值之间的显著性。进行简单的回归检验以确定平滑肌张力随不同浓度的变化是否显著(当p＜0.05，确定有显著性变化)。
制造实施例1含五加皮提取物的保健食品的制备如前解释，本发明的五加皮提取物对勃起功能障碍具有显著的改善效果。因此本发明者制备了以下含有五加皮提取物作为有效成分的保健食品。
1-1饮料的制备蜂蜜522mg硫辛酸酰胺 5mg烟酰胺 10mg核黄素盐酸钠3mg维生素B6盐酸盐 2mg肌醇30mg原酸50mg五加皮提取物1.28mg水 200ml基于上述组分和含量采用常规的方法制备饮料。
1-2口香糖的制备胶基20％糖 76.36～76.76％五加皮提取物0.24～0.64％果味香料1％水 2％基于上述组分和含量采用常规的方法制备口香糖。
1-3糖果的制备糖50～60％淀粉糖浆 39.26～49.66％五加皮提取物 0.24～0.64％橙味香料 0.1％基于上述组分和含量采用常规的方法制备糖果。
1-4小点心的制备一级强力面粉 88kg一级低筋面粉 76.4kg精制糖16.5kg盐2.5kg葡萄糖2.7kg棕榈起酥 40.5kgAmmo 5.3kg小苏打0.6kg硫酸氢钠 0.55kg米粉 5.0kg维生素B1 0.003kg维生素B2 0.003kg牛奶香精 0.16kg水71.1kg全脂奶粉 4kg奶粉代用品1kg磷酸二氢钙0.1kg喷雾盐1kg喷雾奶25kg五加皮提取物 0.2～0.5kg基于上述组分和含量采用常规的方法制备小点心。
1-5冰激凌的制备乳脂 10.0％非脂乳固体10.8％糖12.0％淀粉糖浆 3.0％乳化稳定剂(司盘) 0.5％香精(草莓)0.15％水63.31～62.91％五加皮提取物 0.24～0.64％基于上述组分和含量采用常规的方法制备冰激凌。
1-6巧克力的制备糖34.36～34.76％可可油34％可可团(Cocoa mat) 15％可可粉15％卵磷脂0.5％香草香精 0.5％五加皮提取物 0.24～0.64％基于上述组分和含量采用常规的方法制备巧克力。
1-7包括拉面的面条的制备用大跨度的强力和面机将按照下表1所列组成和含量制备的2kg混合物与1.2kg和面溶液(dough solution)一起搅拌10～15分钟，制备食品组合物。用压面机将组合物制成面条的形状，然后用蒸汽蒸。首先放出蒸汽，然后使面条用冷冻干燥机干燥，得到的最终产物为干燥面条的形式。当自然干燥所述面条时，面条容易断裂并且太硬而不易煮熟。但当面条以冷冻干燥制备时，所述面条足够软易于煮熟且保持原来的形状不改变，而且味道很好，其中还含有活性成分。
可以使用上述制备面条的相同的方法以相同的成分制备拉面。但压面机的模具不同。成形后，将拉面在油中炸或用蒸汽蒸。放出蒸汽后，冷冻干燥拉面，然后包装。
表1

1-8米糕的制备将1kg和面溶液与按照下表2所列组成和含量制备的2kg混合物混合搅拌10～15分钟，然后用蒸汽蒸以得到目标组合物。将制备的组合物置于年糕条的模具或有印花图案的米糕模具中，然后用力模压，得到米糕。
表2

1-9面包的制备
900g和面溶液与按照下表3所列组成和含量制备的2kg混合物混合搅拌20分钟，然后在35℃～40℃发酵30分钟。将得到的组合物模压成想要的形状，然后在铁锅中用蒸汽蒸。
表3

制造实施例2含有五加皮醇提取物作为有效成分的勃起功能障碍治疗剂的制备本发明者制备的勃起功能障碍治疗剂按下述步骤制备由白毛五加的茎制备醇提取物、冻干、粉碎、装入胶囊，其中每个胶囊含有500mg醇提取物，已经证明所述白毛五加在所有种类的五加皮中对勃起功能障碍具有最佳的改善效果。
实施例6五加皮提取物用作勃起功能障碍治疗剂的临床试验在患有勃起功能障碍的患者中进行上述制造实施例2制备得到的勃起功能障碍治疗剂的临床试验。患者例数为48例，他们的平均年龄为43.4岁(年龄最大的50岁，最年轻的36岁)。给药方法为口服给药，每日3次，每次给药为2粒胶囊，持续给药2个月。患者组由10例糖尿病患者、6例高血压患者、4例高血脂患者、12例心因性阳痿患者、6例低睾丸激素患者以及10例原因不明的阳痿患者组成。然后就性欲、勃起功能障碍改善的水平和满意度等问题与患者面谈和进行问卷调查，以考察勃起功能障碍状况的变化。
结果是，在2个月的口服给药期间，72.9％的患者(48例患者中的35例)勃起功能障碍得到改善，除了两位消化不良的患者外，没有患者感到有副作用。因此，证实了本发明的勃起功能障碍治疗剂对勃起功能障碍具有极好的改善效果而没有副作用，因为所述治疗剂由安全的天然物质制备。
工业实用性如上所述，本发明由五加皮茎提取的醇提取物对阴茎海绵体平滑肌具有极好的松弛效果，并对勃起能力具有极好的促进效果，因此可以有效地用于生产保健食品、勃起功能障碍改善剂或勃起功能障碍治疗剂。
本领域的技术人员将会理解上述说明书中公开的构思和具体实施方式
可以容易地用作改变或设计成其它实施方式的基础，以实现与本发明相同的目的。本领域的技术人员也会理解这些等同的实施方式并没有背离本发明所附权利要求书提出的本发明的精神和范围。
权利要求
1.一种具有改善勃起功能障碍作用的五加皮醇提取物。
2.如权利要求1所述的五加皮醇提取物，其中所述的五加皮选自白毛五加、刺五加、Min刺五加皮和岛五加皮。
3.如权利要求2所述的五加皮醇提取物，其中所述的五加皮为白毛五加。
4.如权利要求1所述的五加皮醇提取物，其中所述五加皮的提取物由五加皮的茎或根制备。
5.如权利要求1所述的五加皮醇提取物，其中所述的醇选自甲醇、乙醇、丙醇和丁醇。
6.如权利要求5所述的五加皮醇提取物，其中所述的醇为乙醇。
7.一种改善勃起功能障碍的保健食品，其中含有权利要求1所述的五加皮醇提取物作为有效成分。
8.一种勃起功能障碍治疗剂，其中含有权利要求1所述的五加皮醇提取物作为有效成分。
全文摘要
本发明涉及五加皮醇提取物、含有所述提取物的改善勃起功能障碍的保健食品和治疗剂，更具体地，本发明涉及具有改善勃起功能障碍作用的五加皮醇提取物，含有所述五加皮醇提取物的改善勃起功能障碍的保健食品和勃起功能障碍治疗剂。本发明的五加皮醇提取物对阴茎勃起能力具有促进效果，因此可以有效地用于改善勃起功能障碍。
文档编号A61P15/10GK1852725SQ200480026478
公开日2006年10月25日 申请日期2004年9月14日 优先权日2003年9月15日
发明者李晶埈, 李定炯, 洪荣秀, 金荣镐, 崔永得 申请人:韩国生命工学研究院