专利名称：氨苯砜作为神经保护剂在脑中风中的应用的制作方法
背景技术：
对于脑中风的药物治疗，过去曾经应用过一些临床疗效甚微的药物；其中我们可提及的有胞磷胆碱。在2002年出版的近期研究(Davalos A，Castillo J.，Alvarez-Sabin J.，Secades JJ.，Mercadal J.，Lopez S.，Cobo E.，Warach S.，Sherman D.，Clark WM.，Lozano R.，Oralciticoline in acute ischemic strokean individual patient data poolinganalysis of clinical trials.Stroke 33(12)2850-2857，2002)中，表明该药给予脑中风患者三个月后，产生平均25％的改善，而接受安慰剂的患者平均改善20％。从这些结果可以推断，该药物治疗不能使脑中风相关的脑损伤降低平均多于20-30％。
另一方面，防止脑中风后果的新药的研究和开发取得了令人失望的结果。例如美国食品药品管理局2001年批准了5种针对心脏病的药物，但是没有针对脑中风的药物。这得出这样的事实对于该严重疾病没有选择性的药物治疗。
本发明的目的是证明氨苯砜作为针对患者脑中风相关的致残后果的首选有效治疗的应用。
氨苯砜是目前已经使用的药物，其用于麻风病的化学治疗以及卡氏肺囊虫(pneumocystis carinii)引起的肺炎的预防。考虑到麻风病是一种不常见的疾病，氨苯砜的治疗应用近来受到局限。
急性脑中风是世界人群中排名第三的死因，并且是造成残疾的主要原因。考虑到脑中风意味着社会担负患者康复和医疗保健费用的严重后果，因此研究了比现有治疗药更有效的新的治疗药，合成氨苯砜作为新的神经保护化合物。
发明内容
本发明的目的是开发一种用于在急性脑中风治疗中治疗使用的产品。该疾病在世界人群中广泛分布，仅在美国每年就有500000-750000人发病，因此决定寻求比目前使用的产品更有效的其他治疗产品。
在研究比目前用于脑中风药物治疗更有效的新型治疗药的过程中，合成了作为下式的化合物的氨苯砜 自从八十年代以来药物氨苯砜在墨西哥已经不生产，并且它的原料也已不生产。
由于上述原因，通过实验模型以及通过急性脑中风患者临床对照试验，本文的工作表明，当缺血事件发生后的最初十二个小时之内给药时，氨苯砜有效地防止该疾病的有害后果。
采用将缝合线通过动物的颈内动脉引起大鼠大脑中动脉永久性梗塞的急性脑中风实验模型(实施例1)来进行药理学测试。该药物还给予急性脑中风患者，所述患者参加the Emergency Services of theNational Institute of Neurology and Neurosurgery“Manuel VelascoSuarez”，in Mexico City(实施例2)。
大鼠实验结果表明，9.325毫克/千克剂量的氨苯砜(I)具有93％的疗效，而12.5毫克/千克剂量的疗效为91％，所述疗效指降低大鼠实验性中风模型中激发的中风引起的脑损伤的体积。
患者中的疗效结果表明，剂量达200毫克的氨苯砜能使平均67％的患者的神经症状改善。
氨苯砜的有效剂量为0.013毫摩尔/千克。
所使用的剂量没有副作用出现。
特别地，使用下述技术氨苯砜的合成氨苯砜可以通过不同的路线合成，下面的合成仅作为实例提供。所述合成分两步进行1.-将60克N-乙酰苯胺置于锥形瓶中，缓慢加热直至所有固体物质熔化。将所得粘稠液体使用冰浴冷却，在该锥形瓶瓶底留下固体物质。不移去冰浴，加入165毫升氯磺酸。之后，从冰上移去该锥形瓶，小心搅拌，进行反应10分钟，10分钟结束时将反应混合物再次加热直至剩余的N-乙酰苯胺完全溶解，再继续反应10分钟。将产物冷却，并小心倒入盛有冰和水的容器中，过滤沉淀并用冷水洗涤。收集该沉淀，溶于氯仿中，并用水萃取3次，收集氯仿相，将其置于冰浴上，沉淀纯化的亚硫酰氯(cloruro de tionilo)(报告的中间产物熔点为149℃)。
2.-将123.6毫升无水硝基苯置于反应容器中，加入89.2克氯化铝并缓慢加热；向该热混合物中加入41.3克亚硫酰氯，将该反应混合物加热至140-145℃的温度，并缓慢加入13克N-乙酰苯胺，保持该反应温度两小时。在该期结束时，将粗反应物倒入104毫升盐酸酸化的水中，沉淀出深色产物，将其用稀乙酸重结晶。重结晶和过滤之后，将该固体物质与5N盐酸一起回流30分钟，之后中和反应混合物，沉淀白色晶体(粗DDS)，将其用乙醇重结晶。
氨苯砜的合成 合成化合物的化学性质为确定所合成的化合物的真实性，测量它们的熔点，结果反应中间产物亚硫酰氯的熔点为151-153℃，DDS的熔点为172-175℃。
这些化合物已报道的熔点中间产物和DDS分别是149℃和175-176℃。
本发明的优选实施方式实施例1-氨苯砜在大鼠大脑中动脉闭塞引起的急性脑中风中的神经保护作用的评价在大脑中动脉闭塞产生的急性脑中风模型中评价作为神经保护剂的氨苯砜。将该药物悬浮于适当的载体中。
3组动物每组5只，在如下所述的大脑中动脉闭塞后30分钟，通过腹膜内途径注射等渗盐水(SSI，对照组)、氨苯砜(12.5毫克/千克)和氨苯砜(9.375毫克/千克)来治疗。
通过将缝合线穿过颈动脉管腔在动物体内产生永久性选择性脑缺血。在外科手术过程中，所有动物都通过面罩接受1.5％氟烷(halotane)的持续麻醉。将动物仰卧位放置，固定，颈前区备皮，以沿胸骨向胸骨舌骨肌(sternohiodeous muscle)区至其侧缘的中线做切口，分辨该侧胸锁乳突肌中缘以及其深面颈浅筋膜，切除该部分以暴露颈总动脉弓(common carotid blow)以及深层二腹肌后腹。切开颈总动脉至舌下环(hypoglose loop)。分辨颈动脉分支，颈外动脉及其枕动脉和甲状腺动脉分支，后两者用8-0单丝尼龙线连接，并电凝其后的切开。将颈内动脉切开约5毫米的长度，同时分辨翼腭动脉。置入微芯片或将其用6-0单丝尼龙线连接。一旦将通过这些动脉流出的血流停止，将3-0单丝尼龙线通过颈外动脉根部向颈内动脉引入至距分支处17毫米的长度。缝合伤口，允许动物恢复，自由饮食水。所有病例，通过肉眼观察及线的位置证实缺血。
大鼠中氨苯砜神经保护作用的评价缺血操作后的96小时中，用功能量度每24小时对动物进行神经学评价。所述量度根据动物表现的症状严重程度建立，等级从0至50＝没有神经学改变；1＝难以完全伸展前肢；2＝向右转圈运动；3＝向右倒；4＝动物不能自然行走并且意识水平降低；5＝死亡。
组织损伤体积的测定96小时的观察之后，用过量的巴比妥钠通过腹膜内途径处死动物，并通过颅骨切除术取出它们的脑。一经取出，用无水乙醇将脑固定两周。进行常规组织学方法，10微米切片，每200微米保存一切片。后者用苏木精-伊红技术染色。所有切片均由一名不知道治疗组的病理专家观察，用肉眼和显微镜确定缺血区域。
用数字分析系统和照相放大器确定每张组织切片的面积。所有病例放大比为1∶10。根据该病理专家的检查，对每张切片评估3个测量结果A)总面积，包括室面积；B)室面积；C)缺血面积。用下式确定损伤体积V=P(0.2mm)10]]>其中P指面积的总和(以平方毫米计)，0.2毫米是每张切片之间的固定长度，除以10是由于为测量体积对每张切片进行了放大。应用该公式得到三种不同的体积总体积、室体积和缺血体积。总体积减去室体积可得脑实质的体积。后者用作参数，利用缺血体积，得出损伤百分率。
实施例2氨苯砜在急性脑中风患者中的神经保护作用的评价The Emergency Services of the National Institute of Neurology andNeurosurgery“Manuel Velasco Suarez”经准许进行了评价氨苯砜在患有血栓栓塞急性脑中风的患者中神经保护作用的研究。氨苯砜以单剂200毫克的混悬剂口服给药。该混悬剂于4℃冰箱中稳定保存可达一个月。
氨苯砜盲法给予15名患者，而另外15名患者给予抗酸混悬剂，该抗酸混悬剂作为安慰剂药物。使用便携式计算器产生的随机编号将患者随机地分入各治疗组中。两种药物都在脑中风后的最初12小时内给予。这些步骤使得所述临床试验在随机、双盲并有安慰剂对照的情况下进行。
临床征象和症状的评价由不知情的神经学专家按照NIH量度进行，该量度量化脑中风引起的残疾程度。所述量度在患者进入该研究时(第0日)、脑中风后第2、6和30日时使用。当NIH评价值高于七时，则认为中风为中等严重或严重。
统计学分析在患者口服或在大鼠腹膜内给药的情况下，氨苯砜的使用剂量为1-12.5毫克/千克。
大鼠神经学量度和损伤体积百分率的统计学显著性通过Kruskal-Wallis检验及之后的Mann-Whitney的U检验确定。
两组患者的NIH量度结果用单因素方差分析(ANOVA)进行统计学分析，使用进入日(第0日)的NIH量度以及性别、年龄、血压和患者表现的其他重要临床变量作为协变量。
取≤0.01和≤0.05的值以判断统计学显著性的界限。
大鼠神经学评价的结果显示在
图1中，其中可见引起大鼠中风后作为时间的函数的神经学测试评分。结果表示为4个独立实验的平均值。D＝氨苯砜(9.375和12.5指剂量，单位为毫克/千克，ip)。*P＜0.05(Kruskal-Wallis检验及之后的Mann-Whitney检验)。
大鼠神经学测试的数据显示，应用两种剂量的氨苯砜治疗的动物，与对照组的动物相比，自缺血损伤恢复得更好。
损伤体积的结果呈现在图2中，显示大鼠引起中风后96小时的缺血损伤百分率。结果表示为4个独立实验的平均值+/-标准差。D＝氨苯砜(9.375和12.5指剂量，单位为毫克/千克，ip)。*P＜0.05(Kruskal-Wallis检验及之后的Mann-Whitney检验)。
所得结果表明，与对照组相比，氨苯砜的保护在9.375毫克/千克剂量下为93％，在12.5毫克/千克剂量下为90％。
患有急性血栓栓塞性脑中风的患者的结果如图3所示，该图显示给予氨苯砜或安慰剂后作为时间(以日计)函数的神经学量度(NIH)得分。结果表示为每组15名患者的平均值+/-标准差。D＝氨苯砜，*P＜0.05，**P＜0.01(用协变量进行方差分析检验)。
口服200毫克氨苯砜治疗患者的结果显示出显著的临床改善。该改善平均为67％。
本发明的氨苯砜的神经保护作用的评价可以总结如下与对照组相比，观察到治疗组50％的大鼠神经学症状的严重性显著降低。还观察到这些相同的动物的损伤体积降低了93％和90％。
关于在患者中的研究，临床改善平均为67％。
这些结果表明，氨苯砜比目前市场上存在的用于治疗急性脑中风的药物更有效。虽然优选氨苯砜在急性脑中风最初的12小时内以1-12.5毫克/千克的剂量给药，不过氨苯砜也可以以重复剂量给药。
权利要求
1.氨苯砜用于制备药物的应用，所述药物在治疗中用作神经保护剂，用于治疗急性脑中风，其特征在于施用0.004-0.051毫摩尔/千克剂量的氨苯砜。
2.根据权利要求1的氨苯砜的应用，其在0.004-0.051毫摩尔/千克的剂量下具有67％的疗效。
3.根据权利要求1的氨苯砜的应用，其以100和200毫克的剂量口服。
4.根据上述权利要求的氨苯砜的应用，其中给药可以在所述中风后最初十二小时内进行。
5.根据权利要求4的氨苯砜的应用，其中优选的给药可以是每24小时重复给药。
全文摘要
本发明涉及氨苯砜作为针对患者脑中风相关的致残后果的首选有效治疗的应用。在大鼠大脑中动脉闭塞引起的脑中风模型和患有由血栓栓塞引起的急性脑中风患者中评价了作为神经保护剂的氨苯砜。在这两项研究中，氨苯砜均显示出使作为所述中风的后果发生的有害影响减轻70％至90％。
文档编号A61K31/135GK1852749SQ200480026445
公开日2006年10月25日 申请日期2004年3月16日 优先权日2003年7月22日
发明者路易斯·卡米洛·里奥斯卡斯塔涅达, 玛丽娜·阿尔塔格拉夏马丁内斯, 胡安·纳德尔卡瓦齐, 贾伊梅·卡拉夫佐夫吉尼齐 申请人:大都会自治大学, 墨西哥神经学和神经外科学院