专利名称：板蓝根提取物及其制备方法
技术领域：
本发明涉及一种中药提取物，具体是一种板蓝根提取物及其制备方法。
背景技术：
板蓝根是我国多年来常用的传统清热解毒中药之一，在中国有广泛的栽培，已连续数版被正式收载在我国国家一级药品标准(《中国药典》2005年版，一部p142)中。
它具有抗病毒、抗内毒素、解热，镇痛，抗炎、活血化瘀、抗癌的功效。板蓝根上述功效主要来自其所含水溶性氨基酸、多糖和脂溶性的靛玉红、靛蓝等有效成分。目前板蓝根制剂的主要生产工艺是将板蓝根用水煎煮，将合并的煎煮液浓缩，然后再加入乙醇，静置，取上清液，浓缩、干燥、得清膏，在清膏中加入适当的辅料，制成不同的板蓝根制剂，如板蓝根茶和板蓝根颗粒(《中国药典》2005年版一部p487)。此种工艺存在的问题是明显造成板蓝根脂溶性有效成分靛玉红、靛蓝等提率极低。申请号为03110306公开了一种板蓝根提取物组合物及其制备方法和用途的发明专利，用该专利所述方法获得的板蓝根提取物组合物。其中板蓝根的总碱提取物含量为50-90％重量，表告依春(一种生物碱)在总组合物中的含量为10-30％重量。”因上所述专利方法是以富集总生物碱为目的，则必然导致氨基酸、多糖类、有机酸类、甾醇类和其它有效成分的大量丢失；在一定程度上有悖于中药四气、五味、升降浮沉的组成原则；表告依春作为板蓝根总生物碱的质量检测指标也多有不妥，因质量检测指标原则上应选定与该中药证侯相一致的主要有效成分，而关于表告依春的药理作用未见明确报道；该方法较现行版《中国药典》收载的板蓝根制剂工艺显复杂，与我国大多中药制药企业现有条件尚有一定距离，若使用该法，势必给制药企业带来投资较大，成本较高问题；在生产周期长，成本高的条件下，所获得结果，即药物的药效，仅“优于一般的板蓝根饮片”，而未表明是否优于现行版《中国药典》收载的板蓝根制剂，如板蓝根颗粒剂或板蓝根茶的药效。
发明内容
本发明为了解决现有技术中存在的蓝根提取物中的水溶性和脂溶性的多种有效成份不集中，提取部位不全面以及有效成份转移率低的问题而提供了一种板蓝根提取物及其制备方法。
本发明是由以下技术方案实现的，一种板蓝根提取物，它是由下列制备步骤制得
a.选取板蓝根饮片，加饮片5～15倍重量的50～85％乙醇溶液，置于合适容器中，密闭，冷浸；b.加热回流提取，；c.过滤，减压回收乙醇，得药液；d.将药液减压浓缩至得到稠膏，得到本发明所述的板蓝根提取物。
还可以进一步将稠膏于50～80℃干燥，得到本发明所述的板蓝根提取物，以便于保存或运输。
本发明最佳的实施范围为所述步骤a冷浸的温度为10～30℃，时间为1～24小时，优选70％的乙醇，冷浸时间12～24小时。所述步骤b的操作重复1～4次，每次加热回流提取时间控制在0.5～5小时，合并后的乙醇浓度为50～70％；优选重复1～3次，每次0.5～2小时。步骤c加热温度控制在50～80℃。真空度控制在20～90kPa；所述步骤d得到的稠膏在50℃时测得的相对密度为1.25-1.35。
稠膏进一步在减压干燥的条件下得到产物，真空度控制在20～90kPa操作，干燥可以通过水浴蒸干，然后再烘干。
一种板蓝根提取物的制备方法，它包括下列制备步骤a.选取板蓝根饮片，加饮片5～15倍重量的50～85％乙醇溶液，置于容器中，密闭，冷浸；冷浸的温度为10～30℃，时间为1～24小时，优选70％的乙醇，冷浸时间12～24小时；b.对容器加热回流提取得到药物的乙醇溶液；操作重复1～4次，每次加热回流提取时间控制在0.5～5小时。优选重复1～3次，每次0.5～2小时；c.滤过，对提取液加热回收乙醇，得药的水溶液；加热温度控制在50～80℃，真空度控制在20～90kPa；d.将药液减压浓缩至得到稠膏；得到的稠膏在50℃时测得的相对密度为1.25-1.35；即得到本发明所述的板蓝根提取物。
还可以进一步将稠膏于50～80℃干燥的条件下得到干燥后的板蓝根提取物，也可以在减压条件下干燥，真空度控制在20～90kPa。干燥可以通过水浴蒸干，然后再烘干。
在提取的过程中对板蓝根饮片密闭、冷浸的过程中，乙醇溶液能够深入渗透到板蓝根组织的内部，从而缩短了热提取的时间，能够减少诸如对靛玉红、靛蓝等药物活性的破坏；由于溶解的充分还能将板蓝根中两种不同极性的有效成分同时最大程度转移到乙醇溶液中。加热回流提取温度控制在50～80℃和真空度控制在20～90kPa减压回收乙醇和浓缩药液主要是为了保护所提取物质的活性，避免高温对提取物结构的破坏。
本发明所述的板蓝根提取物与已公开专利申请文献所述提取工艺所获提取物仅为板蓝根所含的一部分生物碱相比，全面考虑了板蓝根有效成分的分布，最大限度地将水溶性和脂溶性两个部位的有效成分提出。同时，由于本发明操作步骤简单，不必使用色谱柱、大孔树脂吸附柱、重结晶等操作复杂、损失量较大的纯化步骤，且工艺非常适合我国中药制药企业的生产设备现状，有利于大规模推广应用，提高人民健康水平。
该提取物包括水溶性精氨酸、脯氨酸、谷氨酸、γ-氨基丁酸、缬氨酸、酪氨酸、亮氨酸和脂溶性的靛玉红和靛蓝。本发明获得的蓝根提取物毒性低、副作用少、高剂量使用无明显不良反应。
本发明所述板蓝根提取物的提取方法的有益效果，对通过中国药典水煎醇沉法制备的板蓝根颗粒和利用本发明所述的方法制备的板蓝根提取物质用TLC(薄层层析法)法检查靛玉红、靛蓝，(固定相为0.3-0.5％CMC-Na硅胶G薄层板，展开剂为甲苯—氯仿—丙酮(5∶4∶1)时，可对靛玉红、靛蓝进行半定量检出。)如附图1(结合彩图)所示，利用本发明所述的方法制备的板蓝根提取物靛玉红(粉红色斑点)、靛蓝(淡蓝色斑点)等脂溶性成份含量较现有技术至少高20倍。
对通过中国药典水煎醇沉法制备的板蓝根颗粒和利用本发明所述的板蓝根提取物质用TLC法检测总氨基酸含量，(固定相为0.3-0.5％CMC-Na硅胶G薄层板，正丁醇—冰醋酸—水(19∶5∶5)时，对精氨酸等多种水溶性氨基酸进行半定量检出。)如附图2所示，点4为中国药典水煎醇沉法制备的板蓝根颗粒，点7为利用本发明所述的板蓝根提取物质。总氨基酸水溶性成分的提取率大大高于现有技术的。实验具体结果如下表所示表1不同提取工艺对靛玉红和精氨酸转移率的影响
在确定了最佳提取工艺的前提下，又考察了不同提取工艺法对板蓝根中靛玉红和精氨酸转移率的影响。考察了现药典板蓝根颗粒剂制备工艺即水煎醇沉法得到的提取物，本发明所述提取法得到提取物和不经冷浸的本发明所述法提取物中靛玉红和精氨酸的转移率。
本发明所述的板蓝根提取物具有显著的解热、消炎、镇痛、抗病毒作用等，明显优于《中国药典》2005年版收载的板蓝根颗粒剂、板蓝根茶等的药效。
动物实验结果如下一、家兔发热模型的解热作用1.1动物家兔，2.0-2.5kg(山西医科大学实验动物中心提供)1.2器材DT-ITB型电子温度计，上海医用仪表厂，量制沪字00035911.3药品及试剂本工艺制备的提取物阿斯匹林片，山西医科大学制药厂，批号20041102伤寒—副伤寒四联菌苗，由太原市防疫站提供板蓝根颗粒，山西华康药业股份有限公司生产，批号200412012.实验方法伤寒—副伤寒四联菌苗致家兔发热模型选取家兔60只，雌雄各半，随机分为6组，每组10只。分别设蒸馏水空白对照组，阿司匹林0.2g/kg阳性对照组，板蓝根颗粒(生药)8.0g/kg阳性对照组，提取物(生药)2.0g/kg、4.0g/kg、8.0g/kg 3个剂量组。试验时将家兔置笼内安静后测3次体温(间隔30min)，以3次体温的均值作为正常体温、由耳缘静脉注射伤寒—副伤寒四联菌苗1.0ml/kg，立即一次性灌服以上剂量的受试药液或对照液。容量均为5.0ml/kg，然后每隔1h测1次肛温，共测5次，比较6组动物给药后体温的变化，结果见表2表2本工艺提取物对伤寒-副伤寒四联菌苗致家兔发热模型的解热作用(n＝10)
注与空白对照组相比，*P＜0.05结果表明，家兔在静脉注射伤寒—副伤寒四联菌苗后，1h体温明显升高，2h达峰值，以后体温缓慢下降，5h后恢复接近正常。从整个过程来看，阿斯匹林解热作用发挥较快，造模后1h就对体温上升有明显的抑制。本工艺制备的提取物对致热家兔亦有明显的解热作用，并表现出一定的剂量依赖关系，高剂量组解热作用尤为突出，尽管显效速度慢于阿司匹林，但解热的作用时间较长。从表上可以看到，本工艺制备的提取物与传统工艺制备的板蓝根颗粒相比较，解热作用明显增强。
二、对二甲苯所致小鼠耳廓肿胀的影响雄性昆明种小鼠72只，体重18-22g(山西医科大学实验动物中心提供)药品及试剂本工艺制备的提取物阿司匹林片，山西医科大学制药厂，批号20041102板蓝根颗粒，山西华康药业股份有限公司生产，批号20041201二甲苯，天津基准化学试剂有限公司，批号20040806小鼠72只，随机均分为6组，分别按表3所示剂量灌胃给药或生理盐水，每日1次，连续7d，最后一次给药1h后，在各鼠右耳的前后两面涂布0.02ml二甲苯致炎，4h后处死动物，剪下双耳，用内径4mm打孔器在双耳相同部位取耳片，精密称重，以左右耳片重量差值表示肿胀度，并以下式计算肿胀抑制率
表3本工艺提取物对小鼠耳肿胀的影响(X±S)
注与生理盐水组比较，*P＜0.05，**P＜0.01结果表明，本工艺制备的板蓝根提取物能抑制二甲苯所致的小鼠耳肿胀。与空白组相比，板蓝根提取物对耳廓的肿胀呈现了剂量依赖性的抑制作用，三个剂量组均有显著的差异，其抑制率分别达到25.52、43.93和54.49％。板蓝根颗粒组亦明显降低了耳廓肿胀度，抑制率为23.20％，但仍低于本工艺制备的提取物的低剂量组。
三、对甲醛疼痛试验的影响雄性昆明种小鼠60只，雌雄各半，体重18-22g(山西医科大学实验动物中心提供)药品及试剂本工艺制备的提取物阿司匹林片，山西医科大学制药厂，批号20041102板蓝根颗粒，山西华康药业股份有限公司生产，批号20041201甲醛，天津基准化学试剂有限公司，批号20030905小鼠60只，随机分为6组，每组各10只，雌雄各半，6组分别通过灌胃给药或生理盐水。剂量分别为阿司匹林0.2g/kg，板蓝根颗粒剂(生药)8.0g/kg，本工艺制备的提取物(生药)2.0g/kg、4.0g/kg、8.0g/kg，每天1次，连续给药5d。末次给药后30min，在小鼠左足底皮下注射2％甲醛20μl，注射后0min-5min之间以小鼠舔后足的时间(s)为快痛指标，注射后20min-30min之间以小鼠舔足底的时间(s)为慢痛指标，并计算疼痛抑制率(％)。
表4本工艺提取物对小鼠甲醛疼痛试验的影响(n＝10，X±S)
注与空白对照组比较，*P＜0.05，**P＜0.01结果表明，本工艺提取物对小鼠甲醛所致的快痛没有明显作用，但是对甲醛所致的慢痛有明显的抑制作用，并成剂量依赖关系。低剂量时镇痛作用亦明显优于板蓝根颗粒制剂，高剂量时与阿司匹林镇痛作用相一致。
四、对小鼠流感病毒感染死亡保护作用本工艺制备的提取物阿西洛韦注射液，山西亚宝药业集团股份有限公司，批号20040301
板蓝根颗粒，山西华康药业股份有限公司生产，批号20041201昆明种小鼠70只，雌雄各半，体重18-22g，由山西医科大学实验动物中心提供。
病毒，甲型流感病毒(A1/京防/97-53H1N1)山西医科大学微生物学与免疫学教研室保存。
将小鼠随机分为7组(每组10只)第一组正常对照组；第二组病毒对照组；第三组阿西洛韦注射液组(100mg/kg)；第四组板蓝根颗粒组(8g/kg)；第五组提取物低剂量组(2g/kg)；第六组提取物中剂量组(4g/kg)；第七组提取物高剂量组(8g/kg)。
小鼠均在乙醚轻度麻醉下，鼻腔内接种甲型流感病毒0.03ml/只，其剂量相当于2-5LD50含流感病毒的鸡胚尿囊液。本工艺提取物各组、板蓝根颗粒组及阿西洛韦注射液于病毒感染前2小时灌肠法给药1次，以后2次/天，0.2ml/次，共给药5天。病毒对照组及正常对照组按同法给予等量蒸馏水替代。
自病毒感染后连续观察15天，逐日观察并记录小鼠发病和死亡数，计算死亡率、死亡保护率、平均生活日和延长生命率。
表5本提取物对小鼠流感病毒感染死亡保护作阳
注与第2组比较，*为P＜0.05，**为P＜0.01本工艺制备的提取物对小鼠流感病毒引起死亡保护和延长动物的平均生活日均有明显意义。其本工艺提取物对感染病毒动物的死亡保护和平均生活日延长方面有均有显著作用，这种作用与给药剂量呈正相关。试验显示，在抗流感病毒的作用方面阿西洛韦注射液最强，本提取物的作用明显强与传统工艺制备的板蓝根颗粒制剂。
图1为靛玉红、靛蓝TLC色谱图1和5为按照中国药典的水煎醇沉法制备的板蓝根颗粒2和6为本发明所述提取物3为靛蓝对照品4为靛玉红对照品图2为总氨基酸TLC色谱图
1为亮氨酸2为缬氨酸3为精氨酸4为按照中国药典的水煎醇沉法制备的板蓝根颗粒5为脯氨酸6为酪氨酸7为本发明所述提取物8为谷氨酸具体实施方式
实施例1一种板蓝根提取物，它是由下列制备步骤制得取板蓝根饮片50克，置于提取罐中，添加药材8倍重量的70％乙醇溶液，保持乙醇溶液10℃浸渍24小时，对提取罐加热保持回流提取3次，每次0.5小时，合并乙醇提取药溶液，用立式高速离心机分去残渣，转到蒸溜塔中，通过抽真空控制蒸馏塔中的真空度保持70℃下对乙醇提取药溶液蒸馏并回收乙醇，至提取的药溶液无醇味为止，再在真空度为90kPa下对无乙醇的药溶液减压蒸出大部分水分，用70℃水浴干燥浓缩液至稠膏，即可得到产物。提取罐和蒸溜塔为市场上的常规出售的及制药工业用的常规器具。板蓝根饮片系指取板蓝根除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥等炮炙后的产物。
本发明获得的提取物可以制备药物，如添加甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，按照药厂常规工艺制备口服给药的颗粒剂，颗粒剂含有适用于制备颗粒剂的无毒可接受的矫味剂和赋形剂，如蔗糖或甜味剂、薄荷、冰片等；糊精、淀粉等。
实施例2一种板蓝根提取物，它是由下列制备步骤制得取板蓝根饮片200克，置于提取罐中，添加药材5倍重量的60％乙醇溶液，保持乙醇溶液20℃浸渍12小时，对提取罐加热保持75℃回流提取2次，每次1小时，合并乙醇提取药溶液，用立式高速离心机分去残渣，转到蒸溜塔中，通过抽真空控制蒸馏塔的真空度保持70℃对乙醇提取药溶液蒸馏并回收乙醇，至提取的药溶液无醇味为止，再在真空度为70kPa下对无乙醇的药溶液减压蒸出大部分水分，用60℃水浴干燥浓缩液至稠膏，50℃情况下测的其相对密度为1.30，稠膏于75℃干燥，即可得到产物。板蓝根饮片系指取板蓝根除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥等炮炙后的产物。
本发明获得的提取物可以制备药物，如添加甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，制备口服给药的片剂，片剂含有适用于制备片剂的无毒可接受的赋形剂混合的活性成分，如惰性稀释剂，碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；成粒剂及崩解剂，如褐藻酸；粘合剂，如淀粉、明胶或阿拉伯胶；润滑剂，如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。片剂可无糖衣或用已知技术包衣，来延缓在胃肠道内的解体和吸收，从而在较长时间内提供持续作用，可使用延时物质，如一硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。
实施例3一种板蓝根提取物，它是由下列制备步骤制得取板蓝根饮片1公斤，置于提取罐中，添加药材15倍重量的85％乙醇溶液，保持乙醇溶液30℃浸渍12小时，对提取罐加热保持60℃回流提取4次，每次0.5小时，合并乙醇提取药溶液，用立式高速离心机分去残渣，转到蒸溜塔中，通过抽真空控制蒸馏塔的真空度保持70℃对乙醇提取药溶液蒸馏并回收乙醇，至提取的药溶液无醇味为止，再在真空度为60kPa下对无乙醇的药溶液减压蒸出大部分水分，用50℃水浴干燥浓缩液至稠膏，50℃情况下测的其相对密度为1.35，稠膏即为所述的提取物。板蓝根饮片系指取板蓝根除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥等炮炙后的产物。
本发明获得的提取物可以制备口服的液体剂型的药物，如添加甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，制备口服给药的硬或软胶囊、糖浆剂等。口服使用的制剂还可制成硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固态稀释剂，如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或制成软明胶胶囊，其中提取物成分和水或油性介质，如花生油、液态石蜡或橄榄油混合。
实施例4一种板蓝根提取物，它是由下列制备步骤制得取板蓝根饮片5公斤，置于提取罐中，添加药材6倍重量的70％乙醇溶液，保持乙醇溶液25℃浸渍24小时，对提取罐加热至沸腾回流提取4次，每次0.5小时，合并乙醇提取的药溶液，用立式高速离心机分去残渣，转到蒸溜塔中，通过抽真空控制蒸馏塔的真空度保持70℃对乙醇提取药溶液蒸馏并回收乙醇，至提取的药溶液无醇味为止，再在真空度为80kPa下对无乙醇的药溶液减压蒸出大部分水分，用80℃水浴干燥浓缩液至稠膏，50℃情况下测的其相对密度为1.30。稠膏于75℃干燥，即可得到干燥后的产物。板蓝根饮片系指取板蓝根除去杂质，洗净，润透，切厚片，干燥等炮炙后的产物。
本发明获得的提取物可以制备药物，如添加甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂，制备口服给药的硬或软胶囊、糖浆剂等。口服使用的制剂还可制成硬明胶胶囊，其中活性成分与惰性固态稀释剂，如碳酸钙、磷酸钙或高岭土混合，或制成软明胶胶囊，其中提取物成分和水或油性介质，如花生油、液态石蜡或橄榄油混合。
权利要求
1.一种板蓝根提取物，其特征在于它是由下列制备步骤制得，a.选取板蓝根饮片，加饮片5～15倍重量的50～85％乙醇溶液，置于容器中，密闭，冷浸；b.对容器加热回流提取得到药物的乙醇溶液；c.滤过，对提取液加热回收乙醇，得药的水溶液；d.将药液减压浓缩至得到稠膏。
2.根据权利要求1所述的板蓝根提取物，其特征在于所述步骤a冷浸的温度为10～30℃，时间为1～24小时。
3.根据权利要求1所述的板蓝根提取物，其特征在于所述步骤b的操作重复1～4次，每次加热回流提取时间控制在0.5～5小时。
4.根据权利要求1所述的板蓝根提取物，其特征在于所述步骤c加热温度控制在50～80℃，真空度控制在20～90kPa。
5.根据权利要求3所述的板蓝根提取物，其特征在于合并后的乙醇浓度为50～70％。
6.根据权利要求1所述的板蓝根提取物，其特征在于所述步骤d得到的稠膏在50℃时测得的相对密度为1.25-1.35。
7.根据权利要求1所述的板蓝根提取物，其特征在于该提取物包括水溶性精氨酸、脯氨酸、谷氨酸、γ-氨基丁酸、缬氨酸、酪氨酸、亮氨酸和脂溶性的靛玉红和靛蓝。
8.一种板蓝根提取物的制备方法，其特征在于它包括下列制备步骤a.选取板蓝根饮片，加饮片5～15倍重量的50～85％乙醇溶液，置于容器中，密闭，冷浸；冷浸的温度为10～30℃，时间为1～24小时；b.对容器加热回流提取得到药物的乙醇溶液；操作重复1～4次，每次加热回流提取时间控制在0.5～5小时；c.滤过，对提取液加热回收乙醇，得药的水溶液；加热温度控制在50～80℃，真空度控制在20～90kPa；d.将药液减压浓缩至得到稠膏；得到的稠膏在50℃时测得的相对密度为1.25-1.35。
全文摘要
本发明涉及一种中药提取物，具体是一种板蓝根提取物。解决了现有技术中存在的板蓝根提取物中的水溶性和脂溶性的多种有效成分不集中和提取部位不全面以及有效成分转移率低的问题。它是由下列制备步骤制得取板蓝根饮片，加50～85％乙醇溶液5～15倍量，置于合适容器中，密闭，冷浸；加热回流提取，过滤，减压回收乙醇，得药液；真空度控制在20～90kPa将药液减压浓缩至得到稠膏；将稠膏于50～80℃干燥，得到产物。本发明所述的板蓝根提取物具有显著的解热、消炎、镇痛、抗病毒作用等，明显优于《中国药典》2005年版收载的板蓝根颗粒剂、板蓝根茶等的药效。全面考虑了板蓝根有效成分的分布，最大限度地将水溶性和脂溶性两个部位的有效成分提出。
文档编号A61P31/00GK1733042SQ20051001276
公开日2006年2月15日 申请日期2005年8月28日 优先权日2005年8月28日
发明者张中苏, 赵正保, 王玳 申请人:张中苏, 赵正保, 王玳