专利名称：一种具有清除游离基活性的寡肽制备方法
技术领域：
本发明涉及一种从海棒槌(Paracaudina chinens var.)胶原蛋白中制备具有清除游离基活性的寡肽的方法。
背景技术：
目前已有人以玉米蛋白、扇贝、大豆、酪蛋白、鳕鱼皮蛋白、鲢鱼等为原料，采用木瓜蛋白酶、胰蛋白酶、碱性蛋白酶等水解制取了能够清除游离基的活性肽。所制得的产品主要作为一种氨基酸营养功能食品。国内许多人正在以不同的原料为对象开发研制能够清除游离基的活性肽，目前所用的水产原料中多为鱼和贝类，以低值海参为原料制备清除游离基的生物活性肽，目前尚未见报道。
海棒槌(Paracaudina chinens var.ransonnetti)是芋参科海参的一种，体呈纺锤形，长一般为10～12cm，体表光滑，无管足或肉刺。生活时体呈灰褐色或黄褐色，在我国南北沿海浅海均常见，体壁很薄，品质较差，食用价值很低。因此，以海棒槌为原料开发具有清除游离基活性的寡肽，是低值水产品高质化利用的一种需求。
发明内容
本发明的目的是提供一种利用菠萝蛋白酶酶解海棒槌(Paracaudinachinens var.)胶原蛋白制备具有清除游离基功能的活性肽的方法，它能弥补现有技术的上述需求。
一种具有清除游离基活性的寡肽制备方法，其特征是将海棒槌胶原蛋白置于pH5～6的磷酸盐缓冲液中，配制成浓度为15～18mg/100ml的溶液，在35～45℃的温度下，加入200-300U/ml的菠萝蛋白酶恒温酶解3-5小时，然后灭酶，冷却至常温，酶解液采用超滤膜分离，收集分子量≤5k的部分，利用Sephadex G-25凝胶柱进行柱层析，收集目标峰，冻干。
本发明以低值的芋参科海参还棒槌为原料，利用菠萝蛋白酶酶解制备具有清除游离基功能的生物活性寡肽，所得产物价格低，而且活力高，利用水杨酸法测得该寡肽对·OH自由基的清除率超过75％。
具体实施例方式
将海棒槌胶原蛋白置于pH5～6，最好是pH5.2的磷酸盐缓冲液中，配制成浓度为(15～18)mg/100ml，最好是18mg/100ml(以羟脯氨酸计)的溶液，在35～45℃，最好是40℃的温度下，加入200-300U/ml，最好是240U/ml的菠萝蛋白酶恒温酶解3-5小时，最好是4小时，然后在100℃下灭酶5分钟，冷却至常温，将所得酶解液采用5K超滤膜进行分离，收集分子量≤5k的部分，利用Sephadex G-25凝胶柱进行柱层析，收集目标峰，冻干即得目标活性肽。
权利要求
1.一种具有清除游离基活性的寡肽制备方法，其特征是将海棒槌胶原蛋白置于pH5～6的磷酸盐缓冲液中，配制成浓度为15～18mg/100ml的溶液，在35～45℃的温度下，加入200-300U/ml的菠萝蛋白酶恒温酶解3-5小时，然后灭酶，冷却至常温，酶解液采用超滤膜分离，收集分子量≤5k的部分，利用Sephadex G-25凝胶柱进行柱层析，收集目标峰，冻干。
全文摘要
一种具有清除游离基活性的寡肽制备方法，其特征是将海棒槌胶原蛋白置于pH5～6的磷酸盐缓冲液中，配制成浓度为15～18mg/100ml的溶液，在35～45℃的温度下，加入200－300U/ml的菠萝蛋白酶恒温酶解3－5小时，然后灭酶，冷却至常温，酶解液采用超滤膜分离，收集分子量≤5k的部分，利用Sephadex G－25凝胶柱进行柱层析，收集目标峰，冻干。本发明以低值的芋参科海参还棒槌为原料，利用菠萝蛋白酶酶解制备具有清除游离基功能的生物活性寡肽，所得产物价格低，而且活力高，利用水杨酸法测得该寡肽对·OH自由基的清除率超过75％。
文档编号A61P39/06GK1724684SQ200510044158
公开日2006年1月25日 申请日期2005年7月15日 优先权日2005年7月15日
发明者曾名湧, 肖枫, 董士远, 刘尊英 申请人:中国海洋大学