专利名称：由红景天和葛根素制成的药用组合物的制作方法
技术领域：
本发明属于医药技术领域，涉及一种由红景天和葛根素制成的药用组合物，以及含有该药物组合物的制剂及其制备方法。
背景技术：
心脑血管疾病包括冠心病、心绞痛、心肌梗塞，瘀血型肺心病，缺血性脑病、脑血栓、高血压、高血脂等。这些疾病的主要发病原因是动脉硬化造成管腔狭窄、管道阻塞，从而导致脑供血不足，才引起头沉、头晕、头痛、胸闷等症状，严重者可导致脑中风及心肌梗塞的发生。心肌梗塞是指在冠状动脉病变的基础上，冠状动脉的血流中断，使相应的心肌出现严重而持久地急性缺血，最终导致心肌的缺血性坏死。心肌梗塞的原因，多数是冠状动脉粥样硬化斑块或在此基础上血栓形成，造成血管管腔堵塞所致，属冠心病的严重类型。心脑缺血后影响能量代谢，继发乳酸堆积、钙超载、自由基损伤等多种变化。多靶点逆转或改善这些变化，提高综合疗效是药物治疗的重要目标。
红景天为景天科Crassulaceae红景天属Rhodiola L.植物，为多年生草本或亚灌木植物，主要分布在前苏联地区以及我国东北、华北、西北及西南等高寒地区。我国红景天资源丰富，种类众多，约有73种，目前研究较多的景天科红景天属植物，具体选自玫瑰红景天Rhodiola rosea，大花红景天Rhodiolacrendata，棱叶红景天Rhodiola henryi，高山红景天Rhodiola sachlinensis，长鞭红景天Rhodiolafasskisa，菱叶红景天Rhodiola henryi，狭叶红景天Rhodiola kirilowii，喜马红景天Rhodiolahimalensis，圣地红景天Rhodiola saera，裂红红景天Rhodiola quadtifida，云南红景天Rhodiolayunnanensis，大紫红景天Rhodiola atropupurea，互生红景天Rhodiola alterna，帕米尔红景天Rhodiolapantiro。《神农本草经》中红景天被列为药中上品，无毒，多服久服不伤人，有“轻身益气”之功效。近年来，为综合利用红景天属药用植物资源，开展了广泛的研究。现代研究表明，红景天具有显著的抗疲劳、抗衰老、抗辐射、抗缺氧、抗高温和寒冷、抗辐射伤害、降血糖与血脂、调节免疫与血压等作用；近年的研究结果表明红景天在心脑血管疾病的防治方面亦具有独特的作用红景天可以降低心肌耗氧量和耗氧指数，拮抗心率失常，剂量增大还能降低冠状动脉阻力，但是对冠脉血流量无显著影响，并且还具有一定的降低血压和减慢心跳速率的作用，还可以抑制血小板聚集和抗体外血栓形成；对心肌缺氧引起的心肌损伤者和脑血管阻塞引起的脑缺氧者有着良好的治疗保护作用。现代化学成分研究显示，红景天的主要有效成分是红景天苷和酪醇。红景天苷结构式如下所示。
红景天苷葛根素系由豆科植物野葛Pueraria lobata(Willd.)Ohwi的干燥根中提取，分离得到的8-β-D-葡萄吡喃糖-4′，7-二羟基异黄酮。结构式如下所示。已收载入国家药典2000年版2002年增补本二部(新增)第1册77页，其中规定含C21H20O9不得少于97.0％。葛根素目前已有多家生产上市。葛根素在心血管系统具有增加心肌血流量，改善心肌供应，降低血小板聚集及血液粘度，改变心肌细胞自律性，延长不应期，使失常的心率得到改善等重要作用。广泛用于冠心病、肺心病、脑梗塞等治疗。
葛根素现代药理及药效学研究表明葛根素在治疗心脑血管疾病方面有较好的功效，近来的研究表明红景天在心血管方面也有潜在的应用价值。目前已有单一有效成分葛根素注射液上市。但利用红景天及葛根素的相互作用，配伍组方治疗心脑血管疾病的药物，还未见报道。
发明内容为了满足临床需要，更好的治疗心脑血管疾病，本发明提供了一种新的药物组合物及其制备方法和应用，其特征在于包括红景天或红景天提取物和葛根素。
本发明药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得山的，各组分用量在下述重量份数范围内都具有较好疗效。其重量份数为红景天300～1800份或相应重量份提取制得的红景天提取物、葛根素30～500份，优选为红景天500～1500份或相应重量份提取制得的红景天提取物、葛根素50～300份，最佳份数为红景天1000份或相应重量份提取制得的红景天提取物、葛根素150份。
以上组成，若以克为单位，可以制成100～1000次用量的制剂，如作为注射剂，可制成500～1000支，每次用量1～10支。如作为片剂，可制成1000片，每次服用1～10片。
以上组成是按重量份作为配比的，如大规模生产可以以千克为单位，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位。
以上重量份数对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。
红景天可以通过水提醇沉、醇提乙酸铅沉淀分离、乙醇渗漉、醇提后石油醚萃、醇提后正丁醇萃、醇浸后微波破壁、醇浸后絮凝、醇提壳聚糖吸附制备，例如可利用中国专利申请CN1534040A，王威等(中草药，1999，30(11)824～826)的方法获得。本发明提供了一种红景天的优选制备工艺，如下取红景天药材，粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次每次1小时，第一次加醇10倍量，第二、三次分别为8、8倍量。滤过，合并提取液，回收乙醇至每5ml含1g生药材，用2倍量石油醚脱脂后，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥，得红景天提取物(供口服用)。
通过本工艺制备的红景天提取物中红景天苷的含量不低于3％；得率为10～20％。
将上述红景天提取物用适量水溶解后，加于已事先处理好的大孔树脂，依次用水液、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇洗脱，洗脱速度为10ml/min。减压回收乙醇至相对密度为1.03～1.06(60℃)，喷雾干燥，得红景天提取物(供注射或口服用)。
通过本工艺制备的红景天提取物中红景天苷的含量不低于10％；得率为1～5％。
本发明的另一目的在于提供一种治疗心脑血管疾病的药物组合物。尤其适用于治疗心肌梗死、冠心病、心绞痛、缺血性脑病、脑血栓等。
该组合物可以加一种或多种药学上可接受的载体，以口服、鼻吸入或肠胃外给药的方式施用于患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、软胶囊、分散片、口服液、颗粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油悬浮剂等，如水针、冻干粉针、无菌粉针、输液等。本组合物优选的剂型是注射剂或口服制剂。
本发明的药物组合物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
本发明在制成注射剂时，为了增加其溶解度，可以加入吐温-80等增溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸纳、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本发明经过药理学和药效动物实验研究结果证明，以红景大与葛根素为组合物制成的药物，可显著改善脑循环，减轻脑缺血再灌注损伤，而发挥脑保护作用，改善大鼠的血流动力学各项指标，降低心肌耗氧量和耗氧指数，降低冠状动脉阻力，显著抗血小板聚集，显著降低试验性犬脑缺血重量。本发明试验研究结果证明，红景天与葛根素合并用药呈协同作用，药效明显增强。
本发明的优点在于根据中医方剂理论提供一种治疗心脑血管疾病的新的中药复方，并对红景天和葛根素的相互作用和配伍组方进行了研究。并对红景天进行了提取、精制制得红景天提取物，用红景天提取物和葛根素直接投料，避免了提取时造成的药物损失和由于原药材质量差异造成的不同产品质量差异较大的缺点，使药品纯度更高，杂质少，安全性更高，且不同批次药品间质量差异小，药品质量更均匀稳定，且使用方便，能够更好的服务临床。采用红景天提取物与葛根素合并用药后，经药理学研究证明两药协同增效，疗效显著，明显优于单用红景天或葛根素，且用药剂量减少，具有广阔的应用前景。
下列试验例进一步说明本发明试验例1 红景天的制备工艺红景天提取工艺取红景天药材粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次每次1小时，第一次加醇10倍量，第二、三次分别为8、8倍量。滤过，合并提取液，回收乙醇至每5ml含1g生药材，用2倍量石油醚脱脂后，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥，即得红景天粗提物。
乙醇浓度、加醇量、提取时间和提取次数对提取结果的影响较大，因此以红景天苷含量为指标，用正交试验法考察四种因素对提取结果的影响。因素及水平设计见表1。
表1 红景天醇提工艺考察因素水平表
试验方法 称取红景天100g，共9份，按表2各列号的要求提取，合并提取液，滤过，滤液浓缩并定容至1000ml，备用。
红景天苷含量测定色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(15∶85)为流动相，检测波长为275nm。理论板数按红景天苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 精密称取红景天苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密吸取上述样品液各20ml，水浴上蒸干后，残渣加甲醇溶解，移至10ml量瓶，用甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。结果见表2。
结果 由下表可知提取次数和乙醇浓度是影响红景天提取的主要因素，提取时间和加醇量对其影响不大，结合工业生产，确定红景天提取工艺为A2B2C1D3，即取红景天，加70％乙醇提取三次，每次1小时，第一次加醇10倍量，第二次、第三次各加醇8倍量。
表2 红景天醇提工艺考察正交试验表
红景天精制工艺将上述得到的红景天粗提物用适量水溶解后，加于已事先处理好的大孔树脂，依次用水液、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇洗脱，洗脱速度为10ml/min。减压回收乙醇至相对密度为1.03～1.06(60℃)，喷雾干燥，得红景天提取物。
红景天提取物鉴别试验取本品0.1g，加甲醇10ml，超声处理30min，摇匀，滤过，滤液蒸干，残渣加甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取红景天药材1g，同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-甲醇-丙酮-水(6∶3∶1∶1)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置碘蒸气中熏。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。
红景天提取物含量测定试验红景天苷的含量测定色谱条件与系统适用性试验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水(15∶85)为流动相，检测波长为275nm。理论板数按红景天苷峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 精密称取红景天苷对照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 精密称取本品0.1g，研匀，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10ml，密塞，摇匀，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
按照上述精制工艺制得三批红景天提取物，红景天苷含量和得率见表3。由结果可以看出，通过本工艺制得的红景天提取物中红景天苷含量不低于10％，得率为1～5％。
表3 红景天提取物的含量测定结果和得率
以下试验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些试验例包括本发明药物组合物的药效学试验，本发明药物组合物以下简称组合物。
试验例2 本发明组合物合并用药药效的研究试验动物 Wistar大鼠，雄性，体重200～220g，130只，每组10只，随机分为13组。
供试品 红景天组红景天注射液，自制葛根素组葛根素注射液，自制组合物注射液(不同配比)组，9组，自制试验方法 将大鼠随机分为13组生理盐水对照组；模型组；红景天注射液组；葛根素注射液组；组合物各配比注射液组如下表4所示。各药物均以生理盐水稀释至所需浓度，尾静脉注射给药。
大鼠试验性心肌梗死模型动物戊巴比妥腹腔注射麻醉(45mg/kg)仰位固定。气管插管，在胸骨左侧作2cm的纵切口，近胸骨侧剪断第3、第4肋软骨，打开胸腔后，连接人工呼吸机(通气量2ml/100g，50次/min)。剪开心包膜，暴露心脏，冠状动脉左前降支根部穿线以备结扎，记录标准II导联心电图，稳定10分钟，结扎冠状动脉左前降支，关闭胸腔。用针筒吸出动物喉部分泌物，使动物恢复自主呼吸。结扎冠状动脉15min后，静脉给药。结扎冠状动脉4小时后，摘取心脏，在结扎线以下横切5片，进行氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)染色，计算心肌梗死区面积占心室及心脏面积的百分比，并进行统计学处理(t检验)。结果见表4。
试验结果与结论 模型组与生理盐水组相比有显著差异，说明造模成功(p＜0.05)。各给药组都具有明显的抗心肌缺血作用(p＜0.05和p＜0.01)，其中红景天与葛根素配伍的各个配比的作用优于单用红景天或葛根素(p＜0.05)，提示两药配伍有协同增效作用，其中红景天为1000份、葛根素为150份时疗效更为显著。
表4 组合物对大鼠实验性心肌梗塞范围的影响(x±s)
注*p＜0.05，**p＜0.01，与模型组相比；#p＜0.05，与红景天或葛根素组相比；&p＜0.05，模型组与生理盐水组相比。
试验例3 本发明组合物对兔心肌缺血再灌注损伤保护作用的研究受试动物 家兔，120只，体重2.2～2.5kg，80只，随机分为7组。
供试品 假手术对照组脑缺血再灌注组红景天组红景天注射液，自制葛根素组葛根素注射液，自制组合物组红景天与葛根素分别为1g、150mg，分为低、中、高3个剂量组，自制试验方法 将家兔随机分为缺血再灌注组(I/R组)、组合物注射液低、中、高3个剂量治疗组、红景天注射液治疗组、葛根素注射液治疗组和假手术对照组(SOC组)。(1)缺血再灌注组(I/R组)12只，用25％的氨基甲酸乙脂溶液1g/kg体重耳缘静脉麻醉，颈部正中切口分离气管插入气管套管，暴露两侧颈总动脉，以动脉夹两侧夹闭20min，造成脑缺血，松夹分别再灌注1h、6h和12h，三个时间点各4只。分别在松夹10min后，耳缘静脉推注生理盐水5ml/kg体重。(2)组合物注射液治疗组每一配比的组合物注射液为一大组，共三大组，每大组12只，手术方法同I/R组，三个时间点各4只，分别在松夹10min后，耳缘静脉推注组合物注射液30mg/kg。(3)红景天注射液治疗组12只，手术方法同I/R组，三个时间点各4只，分别在松夹10min后，耳缘静脉推注红景天注射液30mg/kg。(4)葛根素注射液治疗组12只，手术方法同I/R组，三个时间点各4只，分别在松夹10min后，耳缘静脉推注葛根素注射液30mg/kg。(5)假手术对照组(SOC组)8只，动物仅行麻醉和动脉分离术而不夹闭，1h后处死。上述各组实验结束后即断头，在冰浴中剥出大脑，冰盘上解剖出双侧海马区组织，用锡纸包裹放在4℃冰箱中储存，备用。应用pH酸度计检测海马组织PLA2的活性；采用干湿重法、TTC染色法测定皮层脑组织含水量、梗死面积；光镜下观察脑组织病理变化。
试验结果 (1)对海马组织PLA2活性的影响I/R组再灌注1h、6h和12h后，海马组织PLA2活性较SOC明显增高(p＜0.01)，且随灌注时间延长，PLA2活性呈递减趋势，但各时间点间比较差异不显著(p＞0.05)；各个配比的组合物注射液治疗组(1h、6h、12h)PLA2活性明显降低，与SOC组和I/R各相应时间点比较具有显著性差异(p＜0.01，p＜0.001)，且随再灌时间延长，PLA2活性逐渐向正常水平恢复；红景天注射液治疗组和葛根素注射液治疗组(1h、6h、12h)PLA2活性降低，与SOC组和I/R各相应时间点比较具有明显差异(p＜0.05，p＜0.01)。(2)对皮层组织含水量(％)和梗死面积(％)的影响I/R组各时间点脑含水量均增高；各个配比的组合物注射液治疗组各时间点脑水含量与I/R组相比明显减轻(p＜0.001)，脑梗死面积与I/R组相比明显缩小(p＜0.01)；红景天注射液治疗组和葛根素注射液治疗组各时间点脑水含量与I/R组相比均减轻(p＜0.01)，脑梗死面积与I/R组相比均缩小(p＜0.05，p＜0.01)。(3)脑组织病理改变SOC组无梗死灶，神经元结构形态正常，无间质水肿；I/R组有梗死灶，梗死灶周神经元肿胀，细胞轮廓不清，间质水肿明显；各个配比的组合物注射液治疗组、红景天注射液治疗组、葛根素注射液治疗组梗死灶面积均缩小，梗死灶周神经元肿胀不明显，间质水肿明显减轻；组合物注射液治疗组作用更明显。
试验结论 上述试验结果表明，组合物注射液、红景天注射液、葛根素注射液均可通过降低PLA2活性，改善脑循环，减轻脑缺血再灌注损伤，而发挥脑保护作用。各个配比的组合物注射液在各项指标中均高于红景天注射液和葛根素注射液单独用药的效果，提示两药具有协同增效作用。
试验例4 本发明组合物抗血小板聚集作用试验动物 Wistar大鼠，雄性，体重200～220g，60只，每组10只，随机分为6组。
供试品 生理盐水对照组氯化钠注射液，山东华信制药有限公司红景天组红景天注射液，自制葛根素组葛根素注射液，自制组合物组红景天与葛根素处方量分别为1g、150mg，分为低、中、高3个剂量组，自制。
试验方法 将大鼠随机分为6组，每组10只，分别为生理盐水对照组；红景天注射液组；葛根素注射液组；组合物组，分为低、中、高3个剂量组。各组动物给药，每日一次，连续给药7天，末次给药后1小时，动物麻醉后自腹主动脉取血，抗凝剂采用3.28％枸橼酸钠，与血液以1∶9比例混合。将抗凝全血在20℃条件下1500r·min-1离心5min获得富血小板血浆(PPR)。留取定量PPR后，将剩余PPR再次以3000r·min1离心10min，获得自身对照贫富血小板血浆(PPP)。以PPP调节PPR浓度，使各PPR浓度相同。将PPR在37℃的恒温孔中预热后，加入ADP(终浓度为3μmol·L-1)引起血小板聚集，记录最大聚集率。结果见表5。
表5 抗血小板聚集作用(X±SD)
注*p＜0.05，与生理盐水对照组相比；**p＜0.01，与红景天组或葛根素组相比试验结果与结论 由上表结果可知各给药组都能明显抑制血小板聚集，其中组合物的作用最强(p＜0.01)，明显优于红景天和葛根素(p＜0.05)单独给药，且与组合物的给药剂量有关，给药剂量20mg/kg时作用最优。提示红景天与葛根素有协同增效的作用。
试验例5 本发明组合物对大鼠血液流变学的影响试验试验动物 Wistar大鼠，体重为200～220g，共70只，随机分为7组，每组10只。
供试品 生理盐水对照组氯化钠注射液，山东华信制药有限公司红景天组红景天注射液，自制葛根素组葛根素注射液，自制组合物组红景天与葛根素分别为1g、150mg，分为低、中、高三个剂量组，自制；试验方法 将大鼠随机分为7组，每组10只，分别为生理盐水对照组、血瘀模型组、红景天注射液组、葛根素注射液组、组合物注射液低剂量组、组合物注射液中剂量组、组合物注射液高剂量组。每日1次，连续尾静脉注射给药7d，末次给药后30min，除对照组用0.9％NS外，其余各组均皮下注射0.1％肾上腺素(0.9mg/kg)，30min后将大鼠放入冰水中冷浴8min，间隔2h后再注射等量肾上腺素，制备血瘀模型。腹主动脉取血5ml，肝素抗凝，测定10S-1、40S1、200S1全血粘度、血浆比粘度、红细胞压积。实验室温度控制在(20±1)℃。结果见表6。
试验结果与结论 试验结果表明与生理盐水组比较，血瘀模型组低、中、高切率的全血粘度、血浆比粘度、纤维蛋白原、红细胞压积均明显升高(p＜0.01)，说明模型可靠。与模型组比较，红景天注射液组、葛根素注射液组、组合物注射液组均能明显改善血液流变学指标，且组合物注射液中、高剂量组(p＜0.01)疗效优于红景天注射液组和葛根素注射液组单独给药(p＜0.05)，提示两药有协同作用。
表6 对急性血瘀模型大鼠血液流变学的影响
注与生理盐水组比较#p＜0.01；与模型组比较*p＜0.05，与模型组比较**p＜0.01试验例6 本发明组合物对实验性犬脑缺血的影响试验动物 杂种犬，30只，体重在11.0～13.0公斤，分为6组，每组5只。
供试品 生理盐水对照组氯化钠注射液，山东华信制药有限公司红景天组红景天注射液，自制葛根素组葛根素注射液，自制组合物组红景天与葛根素分别为1g、150mg，分为低、中、高3个剂量组，自制试验方法 取30只杂种犬，随机分为6组，每组5只，雌雄兼用，分别为生理盐水对照组；红景天组；葛根素组；组合物组，分为低、中、高3个剂量组。犬大脑中动脉结扎所致脑缺血模型的制作取犬腹腔注射3％戊巴比妥钠1.0ml/kg(30mg/kg)麻醉，固定犬于手术台上，然后在犬右外眼角与右耳根部1/2处(中点)，用电刀切开皮肤，分离肌肉，用手术专用颅骨钻钻开颅骨，以咬骨钳扩大颅骨孔，切开硬脑膜，找到大脑中动脉。先用多谱勒超声血流探测仪测定大脑中动脉血流速度，然后立即将大脑中动脉结扎造成脑缺血。大脑中动脉结扎6小时后，分离双侧颈总动脉并夹闭之，即刻从右侧颈总动脉夹闭处的远心端灌注20ml龙胆紫饱和溶液对脑组织进行染色，然后处死动物，开颅取出脑组织，称全脑重，遂切下未染色的脑组织(即缺血区脑组织)称重，求出其占全脑重量的百分率，并进行病理组织学检查，以判断其是否属于脑缺血性损伤，结果见表7。
表7 组合物对实验性犬脑缺血的影响(X±SD)
注*p＜0.05，**p＜0.01，与生理盐水对照组相比试验结果与结论 试验结果表明，各给药组都能不同程度的降低犬大脑中动脉结扎后的脑组织缺血区重量，其中组合物组的作用最强(p＜0.01)，且与组合物的用量有关，给药剂量20mg/kg时作用最优。提示两药协同增效。
试验例7 本发明组合物注射液安全性试验1、过敏性试验受试药物 组合物注射液红景天与葛根素分别为1g、150mg，自制阴性对照 氯化钠注射液，山东华信制药有限公司。
阳性对照药 5％卵白蛋白生理盐水溶液(自制)。
受试动物 豚鼠，18只，体重280～310g，雌雄兼用，随机分为供试药组、阴性对照和阳性对照三组，每大组6只。
给药剂量 致敏剂量0.5ml/只；致敏次数隔日腹腔注射1次，连续3次；攻击剂量1ml/只，静脉注射。
试验方法 按上述分组分别给豚鼠隔日腹腔注射上述药液0.5ml，共注射三次。然后将每大组豚鼠再分成两小组，每小组3只。第一小组豚鼠于第一次致敏后14天，第二小组于第一次致敏后21天进行抗原攻击，每只豚鼠均静脉注射上述药液1ml。观察并记录攻击后15min内豚鼠的表现。
试验结果及结论 供试药组和阴性对照药组豚鼠均未发现过敏反应，而卵白蛋白组产生过敏反应并死亡。表明，组合物注射液无致敏作用。
2、溶血性试验受试药物 组合物注射液红景天与葛根素分别为1g、150mg，自制受试动物 雄性家兔，1只，体重2.4kg。
试验方法 制备2％红细胞生理盐水混悬液备用。取洁净试管7支，编号并排列在试管架上，按下表顺序操作，混匀后置37℃水浴中温育，观察记录0.5、1、2、3、4h的结果。
试验结果及结论 供试品0.1～0.5ml各管在0.5、1、2、3、4h均未出现溶血和红细胞凝集现象。表明，组合物注射液无溶血性。
3、血管刺激性试验受试药物 组合物注射液红景天与葛根素分别为1g、150mg，自制对照药物 氯化钠注射液，山东华信制药有限公司。
受试动物 家兔，体重2.1～2.3kg，雌雄兼用。
给药剂量 家兔静滴给药剂量为20ml/kg。
试验方法 取健康家兔6只，随机分为供试药组和0.9％氯化钠注射液对照组，每组3只，剂量均为20ml/kg。给药前将兔置固定箱中，于耳缘静脉按上述分组分别滴注供试药和0.9％氯化钠注射液，滴速为1ml/min(20滴/min)，观察给药后24h注射局部有无充血、水肿、出血、坏死。连续给药3天，于末次给药后24h在远离注射部位1cm的向心端取兔耳用10％福尔马林固定，做病理学检查。
试验结果及结论 肉眼观察及病理检查表明，给药组与对照组无明显差别，用药部位的血管及周围组织均未见充血、水肿、出血、坏死，病理检查无异常。表明，组合物注射液静脉静滴对血管无刺激性。
试验例8 本发明组合物注射液稳定性试验供试品 组合物注射液红景天与葛根素分别为1g、150mg，自制考察项目 性状、pH值、澄明度、有关物质、标示含量；并在加速试验6个月和长期试验期末增加无菌和热原检查。
1、影响因素试验强光照射试验 取供试品，置照度为4500Lx的光照箱内放置10天。
高温试验 取供试品，分别置于40℃、60℃条件下放置10天。
低温试验 取供试品，在4℃冰箱中放置10天。
上述试验，分别于第5、10天取样测定。比较性状后测试各项指标，并将结果与0天比较。
结果 光照4500Lx、高温60℃条件下放置10天，除有关物质略有升高，标示含量略有下降外，其它各项指标均无明显变化。高温40℃、低温4℃条件下放置10天，各项指标无明显变化。
2、加速试验方法 置温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月。在试验期间分别于第1个月、2个月、3个月、6个月末取样，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在6个月末增加无菌和热原检查。
结果 温度40℃±2℃、相对湿度75％±5％的条件下放置6个月，除有关物质略有增加外，标示含量略有下降外，其它各项指标均无明显变化，加速试验6个月末，热原、无菌检查均符合规定。
3、长期试验方法 置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月。分别于第3个月、6个月、9个月、12个月、18个月，比较外观后，测试各项指标，将结果与0个月比较；并在18个月末增加无菌和热原检查。
结果 温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置18个月，各项指标均无明显变化，长期试验18个月末，热原、无菌检查均符合规定。
综上所述，药效学试验证明本发明提供的红景天和葛根素组合物具有协同增效作用，明显优于红景天、葛根素单独给药的药效。对组合物注射液进行的特殊安全性试验结果表明，本发明提供的组合物注射剂无致敏性、或溶血性、或血管刺激性；进行的稳定性试验结果表明，本发明提供的红景天与葛根素制成的注射剂的各项指标均比较稳定，可以用于放大生产。
具体实施方式以下通过实施例来进一步阐述本发明药物组合物的制备方法。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实施例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。以下实施例中各剂型制备工艺中的辅料可以用药学上可接受的辅料替换，或者减少、增加。
以下实施例6～11中用到的红景天提取物是通过实施例1制备的；以下实施例3～5中用到的红景天提取物都是通过实施例2制备的。
实施例1 红景天提取物的制备取红景天药材20kg，粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次每次1小时，第一次加醇10倍量，第二、三次分别为8、8倍量。滤过，合并提取液，回收乙醇至每5ml含1g生药材，用2倍量石油醚脱脂后，弃去石油醚液，再用水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥，制得红景天提取物3.07kg，得率13.36％；红景天苷的含量为5.67％。
实施例2 红景天提取物的精制取实施例1中得到的红景天提取物1.4kg用适量水溶解后，加于已事先处理好的大孔树脂，依次用水液、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇洗脱，洗脱速度为10ml/min。减压回收乙醇至相对密度为1.03～1.06(60℃)，喷雾干燥，制得红景天提取物0.25kg，得率为2.76％；红景天苷的含量为18.43％。
实施例3 本发明组合物粉针剂的制备处方葛根素150g红景天提取物 27.6g(相当于红景天药材1000g)聚山梨酯80100g甘露醇400g无菌注射用水 加至4000ml共制备1000支制备工艺1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将聚山梨酯80制成20％的水溶液，将葛根素加入加热搅拌溶解完全，红景天提取物加入配液量20％的无菌注射用水溶解完全。甘露醇加配液量40％的无菌注射用水加热搅拌溶解完全，合并上述溶液，补加无菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值。
6)经0.22um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时。
9)冻干结束，压塞，轧盖。
10)成品全检，包装入库。
处方葛根素150g红景天提取物 27.6g(相当于红景天药材1000g)丙二醇700ml注射用水 加至1000ml共制备1000支制备工艺1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)红景天提取物加入配液量20％的注射用水溶解完全，葛根素加入丙二醇加热搅拌溶解完全。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。
10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。
11)灯检，成品全检，包装入库。
实施例5 本发明组合物输液的制备氯化钠输液处方
葛根素150g红景天提取物 27.6g(相当于红景天药材1000g)聚山梨酯80100g氯化钠900g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶制备工艺1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将聚山梨酯80配制成20％的水溶液，将葛根素加入加热搅拌溶解完全，红景天提取物加入配液量20％的注射用水溶解完全。将氯化钠用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
葡萄糖输液处方葛根素150g红景天提取物 27.6g(相当于红景天药材1000g)聚山梨酯80100g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶制备工艺1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将聚山梨酯80配制成20％的水溶液，将葛根素加入加热搅拌溶解完全，红景天提取物加入配液量20％的注射用水溶解完全。将葡萄糖用配液量40％的注射用水溶解完全。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例6 本发明组合物片剂的制备处方葛根素150g红景天提取物 133.6g(相当于红景天药材1000g)淀粉 120.0g微晶纤维素40.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁 3.0g羧甲淀粉钠6.0g共制备1000片制备工艺1)将葛根素和红景天提取物粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将葛根素、红景天提取物、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的片重压片。
10)成品全检，包装入库。
实施例7 本发明组合物胶囊的制备处方葛根素150g红景天提取物 133.6g(相当于红景天药材1000g)淀粉 60.0g微晶纤维素20.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁 1.6g共制备1000粒制备工艺
1)将葛根素和红景天提取物粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将葛根素、红景天提取物、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的装量装入胶囊。
10)成品全检，包装入库。
实施例8 本发明组合物滴丸剂的制备处方葛根素150g红景天提取物 133.6g(相当于红景天药材1000g)聚乙二醇6000 600g制备工艺1)聚乙二醇6000在水浴中加热熔融。
2)全部熔融后加入葛根素和红景天提取物。
3)搅拌溶解，60目筛过滤。
4)保持60℃滴入冷至10℃以下的液体石蜡中制成丸。
实施例9 本发明组合物软胶囊的制备处方葛根素150g红景天提取物 133.6g(相当于红景天药材1000g)大豆油1000.0g大豆磷脂 500g蜂蜡 500g共制备1000粒制备工艺1)处方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蜡加热熔融，混匀，放冷。
2)加入葛根素、红景天提取物研匀，压制成软胶囊即可。
实施例10 本发明组合物颗粒的制备处方葛根素150g红景天提取物 133.6g(相当于红景天药材1000g)糖粉 1000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备1000袋制备工艺1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将葛根素和红景天提取物粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原料和辅料。
3)将葛根素、红景天提取物与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材，4)过20目筛制颗粒。
5)颗粒在60℃的条件下烘干。
6)干颗粒过18目筛整粒。
7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。
8)包装，成品全检，包装入库。
实施例11本发明组合物口服液的制备处方葛根素150g红景天提取物 133.6g(相当于红景天药材1000g)丙二醇3000ml苯甲酸钠 15g甜菊甙10g水加至10000ml共制备1000支制备工艺1)取配液量20％的注射用水，加入处方量的红景天提取物，加热搅拌溶解完全。将葛根素加丙二醇加热搅拌溶解完全。
2)将苯甲酸钠和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述溶液，补加水至全量。
4)过0.8um的微孔滤膜过滤。
5)半成品化验。
6)灌装。成品全检，包装入库。
权利要求
1.一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于该组合物是由红景天或红景天提取物及葛根素制成的。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于其重量份数为红景天300～1800份或相应重量份提取制得的红景天提取物、葛根素30～500份。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于其重量份数为红景天500～1500份或相应重量份提取制得的红景天提取物、葛根素50～300份。
4.根据权利要求3所述的药物组合物，其特征在于其重量份数为红景天1000份或相应重量份提取制得的红景天提取物、葛根素150份。
5.根据权利要求1～4所述的药物组合物的制备方法，其特征在于包括以下步骤a.取红景天药材，粉碎成粗粉，用乙醇提取，滤过，合并滤液，回收乙醇得浓缩液；b.将浓缩液脱脂，再用水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩至稠膏状，喷雾干燥，得红景天提取物；c.将红景天提取物、葛根素与药物可接受的载体混合，制成制剂。
6.根据权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，步骤b得到的红景天提取物中红景天苷的含量不低于3％。
7.根据权利要求5所述的药物组合物的制备方法，其特征在于，步骤b得到的红景天提取物还可以进一步精制，步骤为将红景天提取物用水溶解后，加于已事先处理好的大孔树脂，依次用水液和不同浓度的醇洗脱，减压回收乙醇，喷雾干燥，得红景天提取物。
8.根据权利要求1～4所述的任一药物组合物，其特征在于该组合物可以制成任何一种临床上或药学上可接受的剂型。
9.根据权利要求8所述的药物组合物，其特征在于临床上或药学上可接受的剂型为注射剂。
10.根据权利要求9所述的药物组合物，其中红景天提取物中红景天苷的含量不低于10％。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，公开了一种由红景天或红景天提取物及葛根素制备的治疗心脑血管疾病的药物组合物，以及含有该药物组合物的制剂及其制备方法，其重量份数为红景天300～1800份或相应重量份提取制得的红景天提取物、葛根素30～500份，优选为红景天500～1500份或相应重量份提取制得的红景天提取物、葛根素50～300份，最佳份数为红景天1000份或相应重量份提取制得的红景天提取物、葛根素150份。该组合物可制成临床或药学上可接受的剂型，优选注射剂。该组合物具有协同增效作用，稳定性好。
文档编号A61P9/00GK1931214SQ20051004459
公开日2007年3月21日 申请日期2005年9月14日 优先权日2005年9月14日
发明者蔡军 申请人:蔡军