丹参和葛根素的药用组合物的制作方法

专利名称：丹参和葛根素的药用组合物的制作方法
专利说明丹参和葛根素的药用组合物 本发明属于医药技术领域，涉及一种由丹参和葛根素制成的药物组合物，以及含有该药物组合物的制剂及其制备方法。心脑血管疾病一直号称威胁人类健康的头号杀手，据有关调查报告显示，我国每年死于心脑血管病的人有300多万，占我国每年总死亡人数的50％，而患病幸存下来的人75％不同程度丧失劳动能力，4％重残。特别是其发病和死亡的年龄日益呈年轻化趋势，如何有效防治也就引起人们的高度重视。
心脑血管疾病包括冠心病、心绞痛、心肌梗塞，瘀血型肺心病，缺血性脑病、脑血栓、高血压、高血脂等。这些疾病的主要发病原因是动脉硬化造成管腔狭窄、管道阻塞，从而导致心脑供血不足，才引起头沉、头晕、头痛、胸闷等症状，严重者可导致脑中风及心肌梗塞的发生。心脑缺血后影响能量代谢，继发乳酸堆积、钙超载、自由基损伤等多种变化。多靶点逆转或改善这些变化，提高综合疗效是药物治疗的重要目标。
丹参是唇形科植物丹参的干燥根及根茎，它具有多方面的药理作用对心血管系统可增加冠脉流量，降低心肌兴奋性和传导性，改善微循环，抗血小板的聚集和血栓的形成，使血液粘度下降，抗氧化，增加耐氧能力，抗菌消炎，改善肾功能，对脑组织缺血和在灌注损伤的保护等作用。丹参的有效成分可分为脂溶性的和水溶性的，其中，脂溶性成分有丹参酮I、丹参酮IIA、丹参酮IIB、隐丹参酮等；水溶性成分有丹参素钠、原儿茶酸、原儿茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C等。总丹参酚酸为丹参活血化瘀的有效成分，其中丹酚酸B镁盐的作用最强。
葛根素系由豆科植物野葛的干燥根中提取，分离得到的8-β-D-葡萄吡喃糖-4′，7-二羟基异黄酮。，已收载入国家药典2000年版2002年增补本二部(新增)第1册77页，其中规定含C21H20O9不得少于97.0％。葛根素目前已有多家生产上市。用葛根治疗一般疾病，早在我国古代的医学著作《本经》、《伤寒杂病记》和《医学大辞典》中就有记载。葛根素在心血管系统具有增加心肌血流量，改善心肌供应，降低血小板聚集及血液粘度，改变心肌细胞自律性，延长不应期，使失常的心率得到改善等重要作用。广泛用于冠心病、肺心病、脑梗塞等治疗。作为改善心脑血管循环的新药，葛根素毒性小、安全范围广、疗效好而极具临床应用价值。
现代药理及药效学研究都表明丹参及葛根素在治疗心脑血管疾病方面有较好的功效。目前已有单一有效成分的注射剂上市，如葛根素注射液、丹参注射液等单有效成分的注射剂。这种单一有效成分的制剂，便于控制质量、控制用药，但失去了中药复方中各有效成分协同作用的优点。
因此，有必要研制一种有效成分确定且含量准确的复方制剂。而且，利用丹参及葛根素相互作用，配伍组方治疗心脑血管疾病的药物，还未见报道。本发明的目的是提供一种治疗心脑血管疾病的药物，它由以下重量配比的药物制成丹参1500～15000份；葛根素100～1000份。优选丹参2500～10000份；葛根素120～400份。最佳优选丹参5000份；葛根素150份。
以上组成，若以克为单位，可以制成100～1000次用量的制剂，如作为注射剂，可制成1000支，每次用量1～10支。如作为片剂，可制成1000片，每次服用1～10片。
以上组成是按重量比作为配比的，在生产时可按照相应比例增大或减小，如大规模生产可以以千克为原料，或以吨为单位，小规模生产也可以以克为单位，重量可以增大或者减小，但各组成之间重量配比的比例不变。
以上重量配比的比例是经过科学筛选得到的，对于特殊病人，可以相应调整组成的比例，增加或者减少不超过100％。
丹参经过提取加工得到丹参提取物，丹参提取物再和药用辅料混合加工制成各种任何一种制剂。
丹参可以通过水提酸沉、醇提、水提醇沉、或水提过柱等多种方式制备，本发明对丹参的提取工艺进行了优选，如下取丹参药材粗粉，加水煎煮二次，第一次加水12倍量，第一次加水10倍量，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.08～1.12的浓缩液，加乙醇至含醇量至85％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加盐酸调PH值至2，用醋酸乙酯振摇提取3次，合并醋酸乙酯液，蒸干。残渣加PH值2的酸水溶解，加于已处理好的聚酰胺柱上，先用2倍柱体积的水洗脱，弃去水洗液，再用4倍柱体积的95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，并真空干燥，即得。
通过上述工艺制备的丹参提取物，得率1.5～2％丹参总酚酸含量＞70％丹酚酸B含量＞30％。
本发明药物还可以由一定比例的丹参提取物、葛根素组成，其重量配比为1∶0.05～64，优选配比1∶1～32，最优配比1∶2。丹参提取物可以是水提酸沉提取物、醇提取物、水提醇沉提取物、或水提过柱提取物。丹参提取物可以为丹参总酚酸或丹酚酸B。丹参提取物可利用现有技术的制备方法获得，例如可利用中国专利申请CN1352985A、CN1247855A、CN1242364A、CN1384090A、02117923.9，郭莹等(云南中医学院学报，2001，24(4)6)的制备方法获得。也可自行摸索制备工艺获得。本发明丹参提取物中丹酚酸B含量在45％～70％，其总酚酸含量在70％以上，最好在80％以上。无论是通过现有技术还是自行摸索制备工艺制备本发明的丹参提取物，如果未达到上述含量标准，则应进行精制，使之符合上述含量标准。
本发明的另一目的在于提供一种治疗心脑血管疾病的药物组合物。尤其适用于治疗急性心肌梗塞、冠心病、心绞痛、缺血性脑血管病、脑血栓、高血压等。
该组合物可以加一种或多种药学上可接受的载体，以口服、鼻吸入或肠胃外给药的方式施用于需要这种治疗的患者。用于口服时，可将其制成常规的固体制剂，如片剂、胶囊、软胶囊、分散片、口服液、颗粒、咀嚼片、口崩片、滴丸、缓释片、缓释胶囊、控释片、控释胶囊，制成液体制剂如水或油悬浮剂或其它液体制剂如糖浆等；用于肠胃外给药时，可将其制成注射用的溶液、水或油悬浮剂等，如水针、冻干粉针、无菌粉针、输液等。本组合物的优选的形式是注射剂或口服制剂，其中丹参提取物中，丹参总酚酸的含量不低于51％，丹酚酸B含量不低于30％。
本发明的药物可采用现有制药领域中的常规方法生产，需要的时候可以添加各种药学上可接受的载体。所述的载体包括药学领域常规的稀释剂、赋形剂、填充剂、粘合剂、湿润剂、崩解剂、吸收促进剂、表面活性剂、吸附载体、润滑剂等。
在注射剂中为了增加其溶解度，可以加入吐温-80等增溶剂。输液中可以加入用于调节渗透压的等渗调节剂，例如，氯化钠、氯化钾、氯化镁、氯化钙、乳酸钠、葡萄糖、木糖醇、山梨醇和右旋糖苷等，优选氯化钠或葡萄糖。粉针中可加入赋形剂，例如，甘露醇、葡萄糖等。
本发明经过药理学研究和药效动物实验研究结果证明，由丹参与葛根素为主要成分制成的药物，可以增加冠脉血流量，增加心肌供血，降低左室舒张末期压，降低心脏前负荷等，明显改善犬血液流动力学；改善脑血管循环，减小脑缺血面积；显著抗血小板聚集；显著减小心肌梗塞范围；对家兔脑缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。本发明实验研究结果证明，丹参与葛根素合并用药呈协同作用，药效明显增强。
本发明的优点在于对已知的丹参与葛根素的相互作用、配伍组方进行研究，以与葛根素为原料直接投料，制备工艺简单，避免了提取时造成的药物损失和由于原药材质量差异造成的不同产品质量差异较大的缺点，使药品纯度更高，杂质少，安全性更高，且不同批次药品间质量差异小，药品质量更均匀稳定。采用丹参与葛根素合理配伍后合并用药，经药理学实验证明，药效优于单独使用丹参或葛根素，药效提高，产生了意想不到的效果。丹参与葛根素合并用药呈协同作用，且用药剂量相对减小，具有广泛的应用前景。
本发明药物组分的用量是经过发明人进行大量摸索总结得出的，各组分用量在下述重量份范围内都具有较好的疗效。
以下通过实验例来进一步阐述本发明所述药物的有益效果，这些实验例包括本发明药物组合物的药效学实验，丹参提取物和葛根素的组合物以下简称GD组合物。实验例中的丹参提取物来自于实施例1。
受试动物Wister大鼠，雄性，体重200～220g，140只，每组10只，随机分为14组。
供试品生理盐水对照组模型组丹参提取物组丹参提取物注射液，自制葛根素组葛根素注射液，自制GD组合物注射液(不同配比)组，10组，自制实验方法将大鼠随机分为14组生理盐水对照组；模型组；丹参提取物组；葛根素组；GD组合物注射液组丹+葛(1∶0.5、1∶1、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5、1∶10、1∶20、1∶32、1∶64)。各药物均以生理盐水稀释至所需浓度，尾静脉注射给药。
大鼠实验性心肌梗死模型动物戊巴比妥腹腔注射麻醉(45mg/kg)仰位固定。气管插管，在胸骨左侧作2cm的纵切口，近胸骨侧剪断第3、第4肋软骨，打开胸腔后，连接人工呼吸机(通气量2ml/100g，50次/min)。剪开心包膜，暴露心脏，冠状动脉左前降支根部穿线以备结扎，记录标准II导联心电图，稳定10分钟，结扎冠状动脉左前降支，关闭胸腔。用针筒吸出动物喉部分泌物，使动物恢复自主呼吸。结扎冠状动脉15min后，静脉给药。结扎冠状动脉4小时后，摘取心脏，在结扎线以下横切5片，进行氯化硝基四氮唑蓝(N-BT)染色，计算心肌梗死区面积占心室及心脏面积的百分比，并进行统计学处理(t检验)。结果见表1。
表1 组合物对大鼠实验性心肌梗塞范围的影响(x±s)
注*P＜0.05，**P＜0.01，与模型组相比；#P＜0.05，与丹参提取物组或葛根素组相比；&P＜0.05，模型组与生理盐水组相比。
结论模型组与生理盐水组相比有显著差异，说明造模成功(&P＜0.05)。各给药组都具有明显的抗心肌缺血作用(*P＜0.05和**P＜0.01)，其中丹参提取物与葛根素配伍的各个配比(1∶0.5～64)的作用优于单用丹参提取物或葛根素(#P＜0.05)，提示两药配伍有协同增效作用；在配比为1∶2时，效果最好。
实验动物Wister大鼠，雄性，体重200～220g，60只，每组10只，随机分为6组。
供试品生理盐水对照组丹参提取物组丹参提取物注射液，自制葛根素组葛根素注射液，自制
GD组合物注射液(不同剂量配比)组，3组，自制实验方法将大鼠随机分为6组，每组10只，分别为生理盐水对照组；丹参提取物组；葛根素组；GD组合物注射液(丹+葛＝100mg+100mg；丹+葛＝75mg+150mg；丹+葛＝50mg+150mg)组。各组动物给药，每日一次，连续给药7天，末次给药后1小时，动物麻醉后自腹主动脉取血，抗凝剂采用3.28％枸橼酸钠，与血液以1∶9比例混合。将抗凝全血在20℃条件下1500r.min-1离心5min获得富血小板血浆(PPR)。留取定量PPR后，将剩余PPR再次以3000r.min-1离心10min，获得自身对照贫富血小板血浆(PPP)。以PPP调节PPR浓度，使各PPR浓度相同。将PPR在37℃的恒温孔中预热后，加入ADP(终浓度为3μmol.L-1)引起血小板聚集，记录最大聚集率。结果见表2。
表2 抗血小板聚集作用(X±SD)
注GD组与丹参提取物组或葛根素组相比，P＜0.05结论各给药组都能明显抑制血小板聚集(P＜0.05和P＜0.01)，其中GD组合物注射液的作用强于单用丹参提取物或葛根素(P＜0.05)，证明丹参提取物与葛根素配伍的组合物有很好的抗血小板聚集作用，且与组合物的剂量配比有关，丹+葛＝75mg+150mg时作用最强。
实验例3GD组合物注射液静脉给药对麻醉开胸犬血流动力学的影响实验动物杂种犬，30只，体重在11.0～13.0公斤，每组5只。
供试品生理盐水对照组丹参提取物组丹参提取物注射液，自制葛根素组葛根素注射液，自制GD组合物注射液(不同剂量配比)组，3组，自制给药剂量20mg/kg实验方法取30只杂种犬，体重在11.0～13.0公斤，每组5只，雌雄兼用，随机分为6组，分别为生理盐水对照组；丹参提取物组；葛根素组；GD组合物注射液(丹+葛＝100mg+100mg；丹+葛＝75mg+150mg；丹+葛＝50mg+150mg)组。各给药组在给药前用0.9％生理盐水配制所需浓度药液。
犬用3％戊巴比妥钠1ml/kg前肢静脉注射麻醉，仰卧位固定于手术台上，剪去颈部、胸部和右后肢内侧的毛。75％乙醇消毒剪毛区。分离气管，并插入气管插管，备人工呼吸用；分离颈外静脉，并从颈外静脉插管经上腔静脉进入右心房并达到心房窦处，用于抽取冠状静脉的血液；分离股静脉，插入静脉插管，整个实验过程中缓慢恒速注入10％葡萄糖。分离股动脉，插入动脉插管(管内充满25U/ml的肝素钠生理盐水)，接通TP-400T型压力换能器，由AP-641G型血压放大器记录血压(收缩压SAP，舒张压DAP，平均动脉压MAP)。人工呼吸下，于第4肋间开胸，剪开心包膜，分离升主动脉根部和左冠状动脉前降支，分别放置适宜内径的电磁血流量计探头(13，2mm)测量心输出量(CO)和冠状动脉血流量(CBF)。将左心室插管(管内充满25U/ml的肝素生理盐水)经左心室心尖部插入左心室内，通过TP-400T型压力换能器，由AP-641G型血压放大器记录左室内压(LVP)，通过AD-601G型放大器记录左室舒张末期压(LVEDP)将针状电极插入犬四肢皮下，描记标准II导联心电图(ECG)。上述测量信号均输入RM-6000型八道生理记录仪记录，描记。同时将心输出量、心电、血压及心室内压的电信号输入微机的生物医学生理信号处理系统进行处理，并由微机读出心室内压峰值(LVSP)、舒张末期压(LVEDP)、心室收缩参数(+dp/dtmax)、心室舒张参数(-dp/dtmax)。最后，计算心指数(CI)、每搏输出量(SV)、心搏指数(SI)、每搏功指数(SWI)、血管总外周阻力等参数(TPVR)。手术完成后稳定20min，将药物溶于100ml生理盐水中，15min内经股静脉恒速滴入。
在给药前、给药后1h、2h分别抽取左心室及冠状静脉血，肝素抗凝，注射于i-STAT G3+Cartridges(i-STAT公司G3+型测试片)中，通过血气分析仪测量动、静脉血氧分压。心肌耗氧量由Kanter公式计算而来，其公式是MVO2＝3.25×10×CF(PaO2-PvO2)/Wt。MVO2是指每100g左室心肌的耗氧量，CF为冠脉流量，PaO2、PvO2分别表示动、静脉血氧分压，Wt是左心室肌重。
所有数据均以平均值±标准偏差表示，根据用药前后各组中各个指标的变化，采用配对t-检验来判断用药前后各种指标改变的统计学意义。
实验结果(1)对麻醉犬总外周血管阻力的影响与对照组比较，各配比GD组合物注射液组均能显著降低麻醉犬总外周血管阻力(p＜0.01)，葛根素组能明显降低麻醉犬总外周血管阻力(p＜0.05)，丹参提取物组的作用较葛根素注射液组低(p＜0.05)。
(2)对麻醉犬左室舒张末期压的影响与对照组比较，各配比GD组合物注射液组均能显著降低麻醉犬左室舒张末期压(p＜0.01)，丹参提取物组以及葛根素注射液组能明显降低麻醉犬左室舒张末期压(p＜0.05)。
(3)对麻醉犬冠状动脉血流量的影响与对照组比较，各配比GD组合物注射液组均能显著增加麻醉犬冠状动脉血流量(p＜0.01)，丹参提取物组以及葛根素注射液组能明显增加麻醉犬冠状动脉血流量(p＜0.05)。
(4)对麻醉犬心室收缩参数的影响与对照组比较，各配比GD组合物注射液组均能显著增加麻醉犬心室收缩参数(p＜0.01)，丹参提取物组以及葛根素注射液组能明显增加麻醉犬心室收缩参数(p＜0.05)。
(5)对麻醉犬心室舒张参数的影响与对照组比较，各配比GD组合物注射液组均能显著增加麻醉犬心室舒张参数(p＜0.01)，丹参提取物组以及葛根素注射液组能明显增加麻醉犬心室舒张参数(p＜0.05)。
(6)对麻醉犬心输出量、每搏输出量、心指数以及心搏指数的影响与对照组比较，各配比GD组合物注射液组均能显著增加麻醉犬的心输出量、每搏输出量、心指数、心搏指数(p＜0.01)，丹参提取物组以及葛根素注射液组能明显增加麻醉犬的心输出量、每搏输出量、心指数、心搏指数(p＜0.05)。
结论丹参提取物和葛根素合并用药可通过增加冠状动脉血流量，使心肌的供血增加，降低左室舒张末期压，使血液易于从心外膜向心内膜下区域流动，对冠状动脉血流量进行重新分配；能明显降低心脏前负荷，对后负荷无明显影响；能显著改善心脏的泵血功能；能明显改善心脏的收缩和舒张功能。丹参提取物和葛根素合并用药的效果优于丹参提取物或葛根素单独用药的效果，提示两药有协同增效作用。
实验例4GD组合物对实验性犬脑缺血的影响实验动物杂种犬，30只，体重在11.0～13.0公斤，每组5只。
供试品生理盐水对照组丹参提取物组丹参提取物注射液，自制葛根素组葛根素注射液，自制GD组合物注射液(不同剂量配比)组，3组，自制实验方法取30只杂种犬，体重在11.0～13.0公斤，每组5只，雌雄兼用，随机分为6组，分别为生理盐水对照组；丹参提取物组；葛根素组；GD组合物注射液(丹+葛＝100mg+100mg；丹+葛＝75mg+150mg；丹+葛＝50mg+150mg)组。犬大脑中动脉结扎所致脑缺血模型的制作取犬腹腔注射3％戊巴比妥钠1.0ml/kg(30mg/kg)麻醉，固定犬于手术台上，然后在犬右外眼角与右耳根部1/2处(中点)，用电刀切开皮肤，分离肌肉，用手术专用颅骨钻钻开颅骨，以咬骨钳扩大颅骨孔，切开硬脑膜，找到大脑中动脉。先用多谱勒超声血流探测仪测定大脑中动脉血流速度，然后立即将大脑中动脉结扎造成脑缺血。大脑中动脉结扎6小时后，分离双侧颈总动脉并夹闭之，即刻从右侧颈总动脉夹闭处的远心端灌注20ml龙胆紫饱和溶液对脑组织进行染色，然后处死动物，开颅取出脑组织，称全脑重，遂切下未染色的脑组织(即缺血区脑组织)称重，求出其占全脑重量的百分率，并进行病理组织学检查，以判断其是否属于脑缺血性损伤，结果见表3。
表3 组合物对实验性犬脑缺血的影响(X±SD)
注*P＜0.05，**P＜0.01，与生理盐水对照组相比#P＜0.05，与丹参提取物组或葛根素组相比结论实验结果表明，各给药组都能不同程度的降低犬大脑中动脉结扎后的脑组织缺血区重量(*P＜0.05、**P＜0.01)。其中GD组合物注射液的作用强于单用丹参提取物或葛根素(#P＜0.05)，证明丹参提取物与葛根素配伍的组合物有很好的抗脑缺血作用，且与组合物的剂量配比有关，丹+葛＝75mg+150mg时作用最强。
实验例5GD组合物对家兔脑缺血灌注损伤的保护作用实验动物家兔，114只，雌雄兼用，体重2.4～2.8kg，随机分为缺血再灌注组(18只)、GD组合物注射液治疗组(每一配比18只)、丹参提取物治疗组(18只)、葛根素注射液治疗组(18只)和假手术对照组(6只)。
供试品氯化钠注射液对照组丹参提取物组丹参提取物注射液，自制葛根素组葛根素注射液，自制GD组合物注射液(不同剂量配比)组，3组(丹+葛＝100mg+100mg；丹+葛＝75mg+150mg；丹+葛＝50mg+150mg)，自制供试液的配制所有供试品均配成20mg/ml的供试液给药剂量20mg/kg实验方法(1)缺血再灌注组18只，用25％的氨基甲酸乙脂溶液1g/kg耳缘静脉麻醉，颈部正中切口分离气管插入气管套管，暴露两侧颈总动脉，夹闭两侧动脉20min，造成脑缺血，分别再灌注1、6和12h，3个时间点各6只。松夹10min后，耳缘静脉推注生理盐水5ml/kg。(2)GD组合物注射液治疗组每一配比的GD组合物注射液为一大组，共3大组，每大组18只，手术方法同缺血再灌注组，3个时间点各6只。松夹10min后，耳缘静脉推注GD组合物注射液20mg/kg。(3)丹参提取物治疗组18只，手术方法同缺血再灌注组，3个时间点各6只。松夹10min后，耳缘静脉推注丹参提取物供试液20mg/kg。(4)葛根素注射液治疗组18只，手术方法同缺血再灌注组，3个时间点各6只。松夹10min后，耳缘静脉推注葛根素注射液20mg/kg。(5)假手术对照组6只，仅行麻醉和动脉分离术而不夹闭，1h后处死。上述各组实验结束后即断头，在冰浴中剥出大脑，冰盘上解剖出双侧海马区组织，用锡纸包裹放在4℃冰箱中储存，备测磷脂酶A2(PLA2)；切取皮层组织测脑梗死面积、脑含水量，选取大脑中动脉供血区的额顶区组织标本进行病理学观察。所有计量资料数据均采用平均值±标准偏差表示，组间比较采用t检验。
实验结果(1)对海马组织PLA2活性的影响缺血再灌注组再灌注1h、6h和12h后，PLA2活性较假手术对照组明显增高(p＜0.01)，且随灌注时间延长，PLA2活性呈递减趋势，但各时间点间比较差异不显著(p＞0.05)；各个配比的GD组合物注射液治疗组(1h、6h、12h)PLA2活性明显降低，与假手术对照组和缺血再灌注组各相应时间点比较具有显著性差异(p＜0.01)，且随再灌时间延长，PLA2活性逐渐恢复正常水平；丹参提取物治疗组和葛根素注射液治疗组(1h、6h、12h)PLA2活性降低，与假手术对照组和缺血再灌注组各相应时间点比较具有明显差异(p＜0.05)，丹参提取物的作用低于葛根素注射液。
(2)对皮层组织含水量(％)和梗死面积(％)的影响缺血再灌注组各时间点脑含水量均增高；各个配比的GD组合物注射液治疗组各时间点脑水含量与缺血再灌注组相比明显减轻(p＜0.001)，脑梗死面积与缺血再灌注组相比明显缩小(p＜0.01)；丹参提取物治疗组和葛根素注射液治疗组各时间点脑水含量与缺血再灌注组相比明显降低(p＜0.01)，脑梗死面积与缺血再灌注组相比明显缩小(p＜0.05，p＜0.01)。
(3)脑组织病理改变假手术对照组无梗死状，神经元结构形态正常，无间质水肿；缺血再灌注组有梗死状，梗死状周神经元肿胀，细胞轮廓不清，间质水肿明显；各个配比的GD组合物注射液治疗组、丹参提取物治疗组、葛根素注射液治疗组梗死状面积均缩小，梗死状周神经元肿胀不明显，间质水肿明显减轻；GD组合物注射液治疗组作用更明显。
结论上述实验结果表明，脑缺血再灌注后，GD组合物注射液、丹参提取物、葛根素注射液均可降低海马组织PLA2活性，改善脑缺血所致内环境紊乱，减轻脑水肿，减小脑梗死面积；说明GD组合物、丹参提取物、葛根素均具有清除自由基，快速切断自由基连锁反应，抑制脂质过氧化，减轻迟发性脑损伤等脑组织保护作用。各个配比的GD组合物注射液在各项指标中药效均高于丹参提取物和葛根素注射液单独用药的效果，提示两药具有协同增效作用。
实验例6GD组合物注射液稳定性实验样品GD组合物注射液(自制，丹+葛＝75mg+150mg)考察项目性状、pH值、澄明度长期稳定性实验方法及结果将本品置温度25℃±2℃、相对湿度60％±10％的条件下放置6个月、12个月，各项指标均无明显变化，实验结果表明组合物注射液长期放置基本稳定。以下通过实施例来进一步阐述本发明药物组合物的制备方法。以下的实施例可以使本专业技术人员更全面地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例2-10所用的丹参提取物来自于实施例1。
实施例1丹参提取物的制备1.水提工艺筛选实验加水量、提取时间和提取次数对提取结果的影响较大，因此以丹参总酚酸含量和浸膏得率为指标，用正交实验法考察三种因素对提取结果的影响。因素及水平设计见表4。
表4 丹参醇提工艺考察因素水平表
实验方法 称取丹参100g，共9份，按表4各列号的要求提取，合并提取液，滤过，滤液浓缩并定容至500ml，备用。
丹参总酚酸的含量测定对照品溶液的制备 精密称取干燥的原儿茶醛对照品1mg，加水溶解，定容至100ml。
供试品溶液的制备 精密量取样品溶液25ml，置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度精密量取0.1ml置25ml容量瓶中加乙醇5ml，加入0.3％十二烷基硫酸钠2ml，0.6％铁氰化钾-0.9％三氧化铁(临用前等量混合)1ml，如此暗处放置5min，加入0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，暗处放置20min后，置lena比色池中，720nm处测定。
测定法 比色法浸膏得率的测定 精密量取各样品溶液25ml，置已恒重的蒸发皿中，于水浴蒸干后，在105℃干燥3小时，移置干燥器中冷却30分钟，迅速精密称定重量。计算浸膏得率。结果见表5。
表5 丹参水提工艺考察正交实验表
表6 丹参提取工艺方差分析表
F0.05(2，2)＝19.00F0.05(2，2)＝99.00由表5、表6结果可以看出，加水量是影响丹参提取的主要因素，提取时间和提取次数对其影响不大，结合工业生产，参考浸膏得率，确定丹参提取工艺为A3B3C2，即取丹参，加水煎煮两次，两次都为2小时，第一次加水12倍量，第二次加水10倍量。
2.醇沉工艺的考察醇沉浓度的考察实验方法 称取丹参200g，共3份，分别加水煎煮两次，第一次1.5小时，加水12倍量，第二次1小时，加水10倍量，合并提取液，滤过，滤液浓缩至相对密度为1.17～1.20(80℃)，用乙醇处理2次，第一次溶液中含乙醇量为75％，第二次分别为80％、85％、90％，每次均冷藏放置，滤过，回收乙醇，浓缩并定容至1000ml。精密量取50ml，照1项下含量测定与浸膏得率测定方法，测定总酚酸的含量和浸膏得率。实验结果见表7。
表7 醇沉浓度考察实验结果
由表7结果可以看出，当醇沉浓度为85％时，既能保证总酚酸的含量，又能达到除杂的目的，因此选择两次醇沉浓度为85％。
丹参提取物鉴别实验取本品0.2g，研细，加70％甲醇25ml，加热回流1小时，滤过，滤液蒸干，残渣加70％甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取丹酚酸B对照品，加70％甲醇制成每1ml含2mg的溶液，作为对照品溶液。用薄层色谱法测定，吸取上述两种溶液各5ul，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以甲苯-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(2∶3∶4∶0.5∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254nm)下检视。
供试品色谱中，在与对照品色谱相应位置上，显相同颜色的斑点。
丹参提取物含量测定实验总酚酸含量测定 比色法对照品溶液的制备 精密称取于105℃干燥至恒重的原儿茶醛对照品1mg，加水溶解，定容至100ml。
供试品溶液的制备 精密称取样品50mg，置50ml容量瓶中，加水稀释至刻度精密量取0.1ml置25ml容量瓶中加乙醇5ml，加入0.3％十二烷基硫酸钠2ml，0.6％铁氰化钾-0.9％三氧化铁(临用前等量混合)1ml，如此暗处放置5min，加入0.1mol/L盐酸溶液至刻度，摇匀，暗处放置20min后，置lena比色池中，720nm处测定。
丹酚酸B的含量测定 高效液相色谱法色谱条件与系统适用性实验 以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)为流动相；检测波长为286nm。理论塔板数按丹参素峰计算应不低于1500。
对照品溶液的制备 精密称取丹酚酸B对照品适量，加75％甲醇制成每1ml含0.14mg的溶液，即得。
供试品溶液的制备 取本品约0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，称定重量，加热回流1h，取出，放冷，再称定重量，用75％甲醇补足减失重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
测定法 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各20ul，注入液相色谱仪，测定，即得。
按照上述优选工艺，取丹参药材粗粉100kg，加水煎煮二次，第一次加水12倍量，第一次加水10倍量，每次2小时，合并煎液，滤过，滤液减压浓缩至相对密度1.08~1.12的浓缩液，加乙醇至含醇量至85％，冷藏24小时，滤过，滤液回收乙醇至无醇味，加盐酸调PH值至2，用醋酸乙酯振摇提取3次，合并醋酸乙酯液，蒸干。残渣加PH值2的酸水溶解，加于已处理好的聚酰胺柱上，先用2倍柱体积的水洗脱，弃去水洗液，再用4倍柱体积的95％乙醇洗脱，收集洗脱液，回收乙醇，并真空干燥，得丹参提取物。
按照上述方法获得3批丹参水溶性提取物，其中总酚酸和丹酚酸B含量测定结果见表8。从结果可以看出，本方法得到的丹参提取物的得率为1.5～2％，丹参总酚酸含量＞70％，丹酚酸B含量＞45％。
表8 丹参提取物的含量测定结果和得率
实施例2GD组合物粉针剂的制备处方丹参提取物 100g葛根素 100g聚山梨酯80 50g甘露醇 300g无菌注射用水 加至3000ml共制备 1000支丹参提取物 75g葛根素 150g聚山梨酯80 75g甘露醇 300g无菌注射用水 加至3000ml共制备 1000支丹参提取物 50g葛根素 150g聚山梨酯80 75g甘露醇 300g无菌注射用水 加至3000ml共制备 1000支制备工艺1)首先将配液用的容器具及抗生素玻璃瓶，胶塞等进行无菌处理。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将丹参提取物加入配液量30％无菌注射用水中加热溶解完全。甘露醇加配液量30％的无菌注射用水加热搅拌溶解完全，聚山梨酯80加20％的无菌注射用水后制成水溶液加入葛根素加热溶解，合并上述溶液，补加无菌注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值。
6)经0.22um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)分装于抗生素玻璃瓶中，半压塞。将样品放入冻干机中冷冻干燥。预冻-45℃5小时，低温真空干燥-45℃～0℃20小时，然后升温至25℃真空干燥3小时。
9)冻干结束，压塞，轧盖。
10)成品全检，包装入库。
实施例3GD组合物水针剂的制备处方丹参提取物100g葛根素100g丙二醇700ml注射用水 加至2000ml共制备1000支丹参提取物75g葛根素150g丙二醇700ml注射用水 加至2000ml共制备1000支丹参提取物50g葛根素150g丙二醇700ml注射用水 加至2000ml共制备1000支制备工艺1)一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将丹参提取物加入配液量20％的注射用水中加热搅拌溶解完全。葛根素加入丙二醇中加热搅拌溶解完全。
3)合并上述两溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)将溶液熔封于玻璃安瓿中。
9)100℃流通蒸汽灭菌30分钟。
10)趁热将样品放入0.01％的亚甲蓝溶液中检漏。
11)灯检，成品全检，包装入库。
实施例4GD组合物输液的制备氯化钠输液处方丹参提取物100g葛根素100g聚山梨酯8050g氯化钠900g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶丹参提取物75g葛根素150g聚山梨酯8075g氯化钠900g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶丹参提取物50g葛根素150g聚山梨酯8075g氯化钠900g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶制备工艺1)前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将丹参提取物加入配液量20％注射用水加热搅拌溶解完全，将氯化钠用配液量20％的注射用水溶解完全。聚山梨酯80加20％的无菌注射用水后制成水溶液加入葛根素加热溶解。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
葡萄糖输液处方丹参提取物100g葛根素100g聚山梨酯8050g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶丹参提取物75g葛根素150g聚山梨酯8075g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶丹参提取物50g葛根素150g聚山梨酯8075g葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制备1000瓶制备工艺1)提前一天处理配液用的管道及容器等，临用前再用新鲜的注射用水冲洗。
2)将丹参提取物加入配液量20％注射用水中加热搅拌溶解完全，将葡萄糖用配液量20％的注射用水溶解完全，加热煮沸15分钟。聚山梨酯80加20％的无菌注射用水后制成水溶液加入葛根素加热溶解。
3)合并上述溶液，补加注射用水至全量。
4)加入配液量0.1％的针用活性炭，加热搅拌15分钟。
5)经砂滤棒过滤脱炭。测定并调节溶液的PH值。
6)经0.45um的微孔滤膜精滤。
7)检查溶液的澄明度，半成品化验。
8)灌装于100ml的输液瓶中。
9)115℃热压灭菌30分钟。
10)灯检，成品全检，包装入库。
实施例5GD组合物片剂的制备处方丹参提取物75g葛根素150g淀粉 40.0g微晶纤维素40.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁 6.0g羧甲淀粉钠12.0g共制备1000片制备工艺1)将葛根素和丹参提取物粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将丹参提取物、葛根素、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁和羧甲淀粉钠，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的片重压片。
10)成品全检，包装入库。
实施例6GD组合物胶囊剂的制备处方丹参提取物75g葛根素150g淀粉 20.0g微晶纤维素60.0g2％HPMC水溶液 适量硬脂酸镁 6.0g共制备1000粒制备工艺1)将葛根素和丹参提取物粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将羟丙甲纤维素溶于水中制成2％的水溶液备用。
4)将丹参提取物、葛根素、淀粉、微晶纤维素混合均匀，加入2％HPMC水溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材。
5)过20目筛制颗粒。
6)颗粒在60℃的条件下烘干。
7)干燥好的颗粒加入硬脂酸镁，过18目筛整粒，混合均匀。
8)取样，半成品化验。
9)按照化验确定的装量装入胶囊。
10)成品全检，包装入库。
实施例7GD组合物颗粒剂的制备处方丹参提取物75g葛根素150g糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 适量共制备1000包制备工艺1)将蔗糖粉碎过100目筛备用。将葛根素和丹参提取物粉碎过100目筛备用。
2)按照处方量称取原辅料。
3)将葛根素、丹参提取物与糖粉以等量递加的方法混合均匀，加入2％HPMC50％乙醇溶液适量，搅拌均匀，制成适宜软材，4)过20目筛制颗粒。
5)颗粒在60℃的条件下烘干。
6)干颗粒过18目筛整粒。
7)取样，半成品化验颗粒中主药的含量，确定装量。
8)包装，成品全检，包装入库。
实施例8GD组合物滴丸剂的制备处方丹参提取物75g葛根素150g聚乙二醇6000 1000g制备工艺
将葛根素和丹参提取物粉碎过100目筛后备用。将聚乙二醇6000在水浴中加热熔融，待全部熔融后加入葛根素和丹参提取物，搅拌溶解，60目筛过滤，保持60℃滴入冷至10℃以下的液体石蜡中制成丸。
实施例9GD组合物软胶囊剂的制备处方丹参提取物75g葛根素150g大豆油1000.0g大豆磷脂 500g蜂蜡 500g共制备1000粒制备工艺将处方量的大豆油和大豆磷脂、蜂蜡加热熔融，混匀，放冷，加入丹参提取物、葛根素研匀，压制成软胶囊即可。
实施例10GD组合物口服液的制备处方丹参提取物75g葛根素150g丙二醇2000ml苯甲酸钠 15g甜菊甙10g纯化水加至10000ml共制备1000支制备工艺1)将丹参提取物加入配液量50％的纯化水中加热搅拌溶解完全。葛根素加入丙二醇加热搅拌溶解完全。
2)将苯甲酸钠和甜菊甙用配液量20％的水溶解完全。
3)合并上述溶液，补加纯化水水至全量。
4)过0.8um的微孔滤膜过滤。
5)半成品化验。
6)灌装。成品全检，包装入库。
权利要求
1.一种治疗心脑血管疾病的药物组合物，其特征在于，由以下重量配比的原料制成丹参1500～15000份葛根素100～1000份。
2.根据权利要求1所述的药物组合物，其特征在于，由以下重量配比的原料制成丹参2500～10000份葛根素120～400份。
3.根据权利要求2所述的药物组合物，其特征在于，其特征在由以下重量配比的原料制成丹参5000份葛根素150份。
4.根据权利要求1-3所述的任一药物，其特征在于所述的丹参经过提取加工得到丹参提取物，再与相应重量配比的葛根素和药用辅料混合加工制成各种任何一种制剂。
5.据权利要求4所述的药物，其特征在于其中的丹参的提取工艺包括以下步骤a)取丹参药材，粉碎，加水煎煮，滤过，合并滤液，浓缩；b)醇沉，过滤，滤液调PH值；c)萃取、振摇提取，提取液蒸干，得丹参提取物A；
6.据权利要求5所述的药物，其特征在于丹参提取物A还可以进一步精制，步骤为将丹参提取物A溶解，上聚酰胺柱分离，依次用水和乙醇洗脱，收集洗脱液，真空干燥，得丹参提取物B。
7.根据权利要求1-3所述的任一药物，其特征在于该药物可以制成任何一种药剂学上所说的剂型。
8.根据权利要求1所述的药物，其特征在于该药物还可以由丹参提取物、葛根素组成，其重量配比为1∶0.05～64，其中的丹参提取物的主要有效成分为丹参总酚酸或丹酚酸B，含量不低于30％。
9.根据权利要求8所述的药物，其特征在于丹参提取物及葛根素的重量配比为1∶1～32，其中的丹参提取物的主要有效成分为丹参总酚酸或丹酚酸B，含量不低于30％。
10.根据权利要求8-9所述的药物组合物，其特征在于临床上或药学上可接受的剂型为注射剂。
全文摘要
本发明属于医药技术领域，公开了一种由丹参及葛根素按一定比例制成的治疗心脑血管疾病的药物组合物，以及含有该药物组合物的制剂及其制备方法，其中丹参1500～15000份、葛根素100～1000份。该组合物可制成临床或药学上可接受的剂型，优选注射剂或口服制剂。该组合物中的丹参还可以由丹参提取物代替，以丹参提取物直接投料。该组合物具有协同增效作用，稳定性好，比单用同剂量的丹参提取物或葛根素的效果大大提高。
文档编号A61K9/08GK1931234SQ20051004459
公开日2007年3月21日 申请日期2005年9月14日 优先权日2005年9月14日
发明者蔡军 申请人:蔡军