专利名称：一种褐藻多糖硫酸酯及其用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种褐藻多糖硫酸酯及其用途。
背景技术：
海带又命昆布，属于褐藻门(phaeophyta)、褐子纲(phaeosporeae)、海带目(褐藻多糖硫酸酯minaralea)、海带科(褐藻多糖硫酸酯minaraceae)的海带属(褐藻多糖硫酸酯minaria)，其具有药理活性的成分为褐藻多糖硫酸酯。临床证明，这些多糖对缺血性心脑血管疾病及高血粘度综合症具有显著疗效，且有明显的抗凝、解痉、解聚、降压、降脂、降低血液粘度及扩张血管的作用。
发明内容
本发明提供了一种褐藻多糖硫酸酯。
本发明还提供了一种褐藻多糖硫酸酯的用途。
本发明提供的褐藻多糖硫酸酯是通过以下制备方法制备得到的将干海带粉碎后称重；用0.1mol/L的盐酸溶液提取；过滤出提取液；将提取液超滤，截留分子量5000～100000的多糖；再用氢氧化钠调pH至5～7，超滤除盐，得浓缩液；将上述浓缩液冷冻干燥得白色至淡黄色的粉末，其重均分子量为20000～30000。
本发明提供了褐藻多糖硫酸酯在改善微循环和影响血流变方面的作用。下面的实施例对本发明作进一步的说明，但并不表示本发明仅限于此。
具体实施例方式
制备例1 褐藻多糖硫酸酯的制备将干燥海带粉碎后称取1kg，加0.1mol/L盐酸液约10倍量，提取2次，滤布过滤出提取液，用超滤器超滤，截留分子量5000～100000的部分，再用0.5mol/L的氢氧化钠溶液调PH至5～7，经超滤除盐得浓缩液，冷冻干燥，即得浅黄色的褐藻多糖硫酸酯。
试验例1 口服褐藻多糖硫酸酯对正常大鼠耳廓、肠系膜动脉口径的影响褐藻多糖硫酸酯按照制备例方法制备。
实验动物普通级SD大鼠，体重280g-350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供，合格证号SYXK(鲁)20030020。
微循环显微镜成都麦赛科贸公司。
方法与结果取SD大鼠40只，随机分为4组生理盐水对照组，褐藻多糖硫酸酯高(240mg/kg)、中(120mg/kg)、低剂量组(60mg/kg)。连续灌胃7天，于末次给药后1h，10％水合氯醛麻醉大鼠(3ml/kg，腹腔注射)，固定于微循环显微镜下，以目镜测微尺测量大鼠耳廓(距耳尖2mm处)动脉的口径。随后，暴露肠系膜(空肠段)于恒温水浴槽上，按上述方法观测各组大鼠肠系膜动脉的口径，见表1。
表1.褐藻多糖硫酸酯对正常大鼠耳廓、肠系膜动脉口径的影响(n＝10，μm，X±SD)
与生理盐水组比较，*P＜0.01结果表明，褐藻多糖硫酸酯高、中剂量组对大鼠耳廓、肠系膜动脉口径均有明显增大作用。
试验例2 褐藻多糖硫酸酯对微循环障碍模型大鼠肠系膜微循环流速的影响褐藻多糖硫酸酯按照制备例方法制备。
实验动物普通级SD大鼠，体重280g-350g，山东省天然药物工程技术研究中心动物实验中心提供，合格证号SYXK(鲁)20030020。
实验仪器成都麦赛科贸公司E3-9XW型血流变仪；AUTOLAB18(AMS)血液学自动生化仪(意大利)；成都麦赛科贸公司E3-9XW型微循环观察仪。
方法与结果实验动物分组和给药同试验例1，麻醉后，舌下静脉注射羊水(0.15mL/100g)造成微循环障碍，用同样的方法分别观察记录给羊水后第1、5、10、20、30min的肠系膜微循环血流速度。试验显示褐藻多糖硫酸酯溶液可明显改善羊水造成的肠系膜毛细血管血流状态，见表2。
表2.褐藻多糖硫酸酯对正常大鼠肠系膜微循环流速的影响(n＝10，μm/s，X±SD)
与生理盐水组比较，*P＜0.05
试验例3 褐藻多糖硫酸酯对实验性高血脂鹌鹑血流变及微循环的影响褐藻多糖硫酸酯按照制备例方法制备。
藻酸双酯钠(PSS)10mg/kg，青岛国风集团华阳制药有限责任公司，批号031224。
洛伐他汀6mg/kg，江苏扬子江药业集团有限公司，批号04031101。
枸橼酸钠烟台三和化学试剂有限公司，批号030613。
♂鹌鹑山东烟台兴旺鹌鹑养殖厂。
全自动生化分析仪(AUTOLAB)意大利AMS公司。
E3-9XW型血流变仪成都麦赛科贸公司。
E3-9XW型微循环仪成都麦赛科贸公司。
方法与结果取经普通饲料喂养1wk的健康♂鹌鹑84只，随机分为7组正常对照组，喂普通饲料；高脂模型组；褐藻多糖硫酸酯高、中、低剂量组，PSS组(藻酸双酯钠)，洛伐他汀组。除正常对照组外，各组鹌鹑每天喂高脂饲料(高脂饲料配方普通饲料78.5％+胆固醇1.5％+猪油20％)，4wk后各组鹌鹑翅下静脉采血，用全自动生化分析仪测定血清CHO、TG、HDL-C和LDL-C，确定高血脂模型成立。之后开始给药，褐藻多糖硫酸酯组每天翅下静脉注射褐藻多糖硫酸酯(高、中、低剂量组给药剂量分别为8mg/kg、4mg/kg和2mg/kg)，PSS组注射PSS注射液10mg/kg，洛伐他汀组灌胃给药6mg/kg。正常对照组和高脂模型组均给等体积的生理盐水溶液。连续给药2wk后，开始测定实验指标。颈静脉采血与枸椽酸钠溶液按9∶1(v/v)比例混合抗凝，用血流变仪测全血高、中、低切黏度、红细胞亚积和纤维蛋白原含量。10％水合氯醛麻醉鹌鹑(3ml/kg，腹腔注射)，打开腹腔，取一小段肠系膜置于微循环灌流盒上，用微循环仪，通过视频采集卡输入微机。随机选取8个视野，统计选定视野的微动脉管径、微动脉血流速度、毛细血管交点计数(取约1mm2的四周由血管围成边界的固定血管区域，计数该区域内毛细血管与边界血管的交点数，未相交者不计数)，并观察各组鹌鹑肠系膜毛细血管弯曲度变化。
结果显示8mg/kg、4mg/kg褐藻多糖硫酸酯连续静脉注射2wk，可以明显降低高脂饲料饲养的鹌鹑的全血高、中、低切黏度(p＜0.05，p＜0.01)，并能极显著降低高血脂鹌鹑的血浆纤维蛋白原含量(p＜0.01)，但对红细胞压积没有明显影响，见表3。微循环实验结果显示8mg/kg、4mg/kg褐藻多糖硫酸酯能显著或极显著增加高血脂鹌鹑肠系膜微动脉管径(p＜0.01，p＜0.05)；并能显著或极显著增加微动脉血流速度(p＜0.05，p＜0.01)和毛细血管交点计数，见表4，其中8mg/kg剂量的效果好于PSS组。静脉注射褐藻多糖硫酸酯(8mg/kg)2wk后，可显著减轻高血脂模型动物毛细血管弯曲度。
结果显示，褐藻多糖硫酸酯8mg/kg、4mg/kg静脉给药2wk，能显著改善高血脂模型动物血流变指标，明显增加模型动物的微动脉管径和血液流速，增加肠系膜单位面积内毛细血管交点计数，并能显著减轻毛细血管弯曲度。
表3.褐藻多糖硫酸酯对高血脂鹌鹑血流变指标的影响(X±SD)
高脂模型组与正常对照组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01。其他组与高脂模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01表4.褐藻多糖硫酸酯对高血脂鹌鹑肠系膜微循环的影响(X±SD)
高脂模型组与正常对照组比较Δp＜0.05，ΔΔp＜0.01其他组与高脂模型组比较*p＜0.05，**p＜0.01试验例4 褐藻多糖硫酸酯的急性毒性实验小鼠最大耐受量实验结果表明，口服褐藻多糖硫酸酯5g/kg未见动物死亡(约为有效剂量的32倍)，静脉注射褐藻多糖硫酸酯500mg/kg未见动物死亡(约为有效剂量的100倍)。
权利要求
1.一种褐藻多糖硫酸酯，其特征在于通过以下制备方法制备1)干海带粉碎称重；2)用稀盐酸溶液提取，过滤提取液；3)提取液超滤，截留分子量5000～100000的多糖；4)用氢氧化钠调pH至5～7，超滤除盐，得浓缩液；5)浓缩液冷冻干燥得白色至浅黄色粉末即为褐藻多糖硫酸酯，其重均分子量为20000～30000。
2.根据权利要求1所述的褐藻多糖硫酸酯，其特征在于步骤2)中盐酸浓度为0.1mol/L。
3.权利要求1或2所述的褐藻多糖硫酸酯在改善微循环和血流变方面的应用。
全文摘要
本发明涉及一种褐藻多糖硫酸酯，以及褐藻多糖硫酸酯在改善微循环和影响血流变方面的应用。褐藻多糖硫酸酯能显著增加微动脉血流速度，并明显改善血流变指标。
文档编号A61K31/734GK1666998SQ20051005325
公开日2005年9月14日 申请日期2005年2月18日 优先权日2004年2月18日
发明者刘志峰, 高永林, 车鑫, 李春玲 申请人:山东绿叶天然药物研究开发有限公司