专利名称：用于治疗cns病症的新苯并噻唑衍生物的制作方法
技术领域：
本发明涉及如上文所定义的式I的化合物及其盐。用于药物组合物的盐为药物上可接受的盐，但其它盐可以用于生产式I的化合物。
有机酸和无机酸可以用于形成本发明化合物的无毒性的药物上可接受的盐。药物上可接受的盐包括，但不限于盐酸盐和富马酸盐。这些盐易于由本领域公知的方法制备。
式I的某些化合物可以带有手性中心和/或几何异构中心(E-和Z-异构体)，并且应理解本发明包括所有这类旋光、非对映体和几何异构体。
药物组合物 本发明的一个方面提供了用于预防和/或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶5相关的疾病的药物组合物，它包括游离碱形式的式I化合物或其药物上可接受的盐。
该组合物可为适于口服给药的形式，例如为片剂，用于非胃肠道注射形式，为无菌溶液或混悬液。一般来说，可以按照常规方式，使用药物载体或稀释剂制备上述组合物。式I的化合物在治疗哺乳动物(包括人)中的合适每日剂量在口服给药时约为0.01-250mg/kg体重，并且在非胃肠道给药时约为0.001-250mg/kg体重。活性组分的典型每日剂量在宽范围内改变并且取决于各种因素，如相关适应征、给药途径、患者年龄、体重和性别并且可以由临床医师确定。
式I的化合物或其药物上可接受的盐可以单独使用，但通常以药物组合物的形式给药，其中式I的化合物/盐(活性组分)与药物上可接受的稀释剂或载体混合。随给药方式的不同，药物组合物可以包括0.05-99％w(重量百分比)，例如0.10-50％w的活性组分，所有重量百分比均基于总组成。
稀释剂或载体包括水、聚乙二醇水溶液、碳酸镁、硬脂酸镁、滑石粉、糖(如乳糖)、果胶、糊精、淀粉、西黄蓍胶、微晶纤维素、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠或可可脂。
本发明的组合物可以为片剂或注射剂。片剂还可以包括崩解剂和/或可以被包衣(例如肠溶包衣或用包衣剂，如羟丙基甲基纤维素包衣)。
本发明进一步提供了制备本发明药物组合物的方法，包括将如上所述式I的化合物或其药物上可接受的盐与药物上可接受的稀释剂或载体混合。
本发明药物组合物的实例为注射液，其含有如上所述本发明化合物或其药物上可接受的盐和无菌水，以及如果必要，可以含有氢氧化钠或盐酸以便将最终组合物的pH达到约pH5，并且任选地含有辅助溶解的表面活性剂。
液体溶液包括溶于水的式I的化合物或其盐。
医学应用 令人意外的是，已经发现本发明定义的游离碱形式的化合物或其药物上可接受的盐十分适合于抑制细胞周期蛋白依赖性激酶5。因此，预期本发明的化合物用于预防和/或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶5活性相关的疾病，即所述化合物可以用于对有这类预防和/或治疗需要的哺乳动物(包括人)产生对细胞周期蛋白依赖性激酶5的抑制作用。
细胞周期蛋白依赖性激酶5在中枢和外周神经系统和其它组织中高度表达。因此，预期本发明的化合物十分适合于预防和/或治疗与中枢和外周神经系统中细胞周期蛋白依赖性激酶5相关的疾病。特别地，预期本发明的化合物适合于预防和/或治疗尤其是与下列疾病相关的情况痴呆、阿尔茨海默氏病、帕金森病、帕金森型额颞痴呆、关岛震颤麻痹痴呆综合征、HIV痴呆、与神经原纤维缠结病理相关的疾病、进行性核上性麻痹和拳击员痴呆。
其它疾病选自肌萎缩性侧索硬化、皮质基质退化、唐氏综合征、亨廷顿舞蹈病、脑炎后帕金森综合征、进行性核上性麻痹、皮克氏病、尼曼-区克氏病、中风、头部创伤和其它慢性神经变性疾病。
其它疾病选自中风和长期药物滥用(chronic drug abuse)。
本发明的一个实施方案涉及预防和/或治疗痴呆和阿尔茨海默氏病。
治疗或预防性治疗特定疾病所需的剂量必然根据所治疗的宿主、给药途径和所治疗疾病的严重程度的不同而改变。
本发明还涉及如上文所述式I的化合物在制备用于预防和/或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶5相关的疾病的药物中的用途。
在本说明书的上下文中，除非有相反的具体表述，术语“治疗”还包括“预防”。术语“治疗(therapeutic)”和“治疗(therapeutically)”应相应解释。
本发明还提供了治疗和/或预防与cdk5相关的疾病的方法，包括对有这类治疗和/或预防需要的哺乳动物，包括人给药治疗有效量的如上所述式I的化合物。
非医学应用 除用于治疗药物外，游离碱形式的式I化合物或其药物上可接受的盐还用作药理学工具，用于在实验动物，如猫、狗、家兔、猴、大鼠和小鼠中评价细胞周期蛋白依赖性激酶5相关活性的抑制剂作用的体外和体内测试系统的开发和标准化，作为寻找新治疗剂的组成部分。
制备方法 本发明的另一个方面提供了制备游离碱形式的式I化合物或其药物上可接受的盐的方法。
在遍及这类方法的下述说明中，应理解，如果合适，可以以有机合成领域普通技术人员易于理解的方式将合适的保护基添加到各种反应物以及中间体中且随后从其中除去它们。例如，使用这类保护基的常规操作步骤和合适的保护基的实例描述在“Protective Groups in Organic Synthesis”T.W.Green，P.G.M.Wuts，Wiley-Interscience，New York，1999中。
制备中间体的方法 制备中间体的方法由下列步骤组成，其中除非另有说明，R、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8如式I中所定义
(i)可以通过使合适的苯胺II与溴和硫氰酸钾或硫氰酸铵反应形成式III的化合物。该反应可以在合适的溶剂，如乙酸中以及环境温度下进行。
(ii)可以通过形成式III化合物的重氮盐且随后用合适的卤化铜或试剂，如铜和HBr或HCl处理形成的重氮盐，使式III的化合物卤化-脱-重氮化(halo-de-diazoniation)而得到式IV的化合物。可以使用亚硝酸异戊酯或亚硝酸在如乙腈-聚乙二醇等合适的溶剂中获得重氮盐。
(iii)使式IV的化合物与3-噻吩基代硼酸反应而得到式V的化合物。可以使用合适的钯催化剂，如Pd(PPh3)4、Pd(dppf)Cl2或Pd(OAc)2与合适的配体，如P(叔丁基)3或2-(二环己基膦基)联苯或镍催化剂，如镍/活性炭或Ni(dppe)Cl2与Zn和三苯膦三间磺酸钠(sodium triphenylphosphinetrimetasulfonate)进行反应。在该反应中可以使用合适的碱，如烷基胺，例如三乙胺或碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钠或氟化铯，该反应在+20℃至+160℃的温度下使用油浴或微波炉在合适的溶剂或溶剂混合物，如甲苯、四氢呋喃、二甲氧基乙烷/水或N，N-二甲基甲酰胺中进行。
(iv)还可以在+70℃至+230℃的反应温度下通过使合适的苯胺基硫醇VI与噻吩-3-甲酸在合适的溶剂，如多磷酸或二甲苯中反应而获得式V的化合物。
(v)可以使用合适的卤化试剂，如碘、溴、氯；卤盐，如ICl、BrCl或HOCl或其它合适的卤化试剂，如N-溴琥珀酰亚胺或三溴化磷对R3为氢的式VII的化合物进行卤化，从而得到式VIII的化合物。该反应可以由金属或酸，如Fe、Cu-盐、乙酸或硫酸催化或由氧化剂，如硝酸、过氧化氢或三氧化硫辅助。该反应可以在合适的溶剂，如水、乙酸或氯仿在-70℃至+100℃的温度下进行。
(vi)使式VIII化合物的重氮盐去重氮化而得到式IX的化合物。可以通过使用用亚硝酸异戊酯或亚硝酸形成重氮盐，随后用合适的试剂，如次磷酸、硼氢化钠或乙醇还原重氮基。
(vii)使式IX的化合物与合适的芳基代硼酸或代硼酸酯偶联而得到式X的化合物。可以使用合适的钯催化剂，如Pd(PPh3)4、Pd(dppf)Cl2或Pd(OAc)2与合适的配体，如P(叔丁基)3或2-(二环己基膦基)联苯或镍催化剂，如镍/活性炭或Ni(dppe)Cl2与Zn和三苯膦三间磺酸钠进行反应。在该反应中可以使用合适的碱，如烷基胺，例如三乙胺，或碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钠或氟化铯，该反应在+20℃至+160℃的温度下使用油浴或微波炉在合适的溶剂或溶剂混合物，如甲苯、四氢呋喃、二甲氧基乙烷/水或N，N-二甲基甲酰胺中进行；
(viii)使式X的化合物与合适的碱，如丁基锂反应且随后使用合适的卤化试剂，如四溴化碳进行卤化，随后与3-噻吩基代硼酸偶联而得到式XI的化合物。可以使用合适的钯催化剂，如Pd(PPh3)4、Pd(dppf)Cl2或Pd(OAc)2与合适的配体，如P(叔丁基)3或2-(二环己基膦基)联苯或镍催化剂，如镍/活性炭或Ni(dppe)Cl2与Zn和三苯膦三间磺酸钠进行偶联。在该反应中可以使用合适的碱，如烷基胺，例如三乙胺，或碳酸钾、碳酸钠、氢氧化钠或氟化铯，该反应在+20℃至+160℃的温度下使用油浴或微波炉在合适的溶剂或溶剂混合物，如甲苯、四氢呋喃、二甲氧基乙烷/水或N，N-二甲基甲酰胺中进行；
(ix)可以通过使用合适的试剂，如氯磺酸、硫酸或三氧化硫在合适的溶剂，如氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷或四氯化碳中或在纯净状态下在-15℃至+50℃的反应温度下处理式XI的化合物形成式XII的磺酸。
(x)可以通过用卤化试剂，如PCl5、PCl3、亚硫酰氯或草酰氯处理式XII的化合物，从而卤化式XII的化合物得到式XIII的化合物。该反应可以在纯净状态下或在合适的溶剂，如POCl3、二氯甲烷、甲苯、四氢呋喃、二噁烷或N，N-二甲基甲酰胺中以及-20℃至+140℃的温度下进行。
制备最终产物的方法 本发明的另一个目的为制备通式I的化合物的方法，其中除非另有说明，R、R1、R2、R3、R4、R5、R6、R7和R8如式I中所定义，该方法由下列步骤组成
通过使式XIII的化合物与合适的胺反应，使式XIII的化合物酰胺化得到式I的化合物。该反应可以使用合适的碱，如吡啶，它也可以用作溶剂。该反应可以在合适的溶剂，如四氢呋喃、二氯甲烷、二噁烷或N，N-二甲基甲酰胺中以及0℃至+100℃的反应温度下进行。当将R4和R5定义为H时，可以在环境温度下将氨用于合适的溶剂，如甲醇中。
因此，本发明在一个方面中提供了制备权利要求1的式I化合物的方法，其中除非另有说明，R、R1、R2、R3、R4、R5如权利要求1的式I中所定义，
该方法包括使用合适的胺在有合适的溶剂存在下使式XIII的化合物酰胺化而得到式I的化合物。
实施例 用下列非限制性实施例来解释下列实施例。
缩写 GC-MS气相色谱质谱法 HPLC 高效液相色谱法 LC-MS液相色谱质谱法 NMR 核磁共振 δ 以ppm计的化学位移 br 宽峰 d双峰 m多重峰 q四重峰 s单峰 t三重峰 一般方法 所有原料均为商购的或预先描述在文献中。
使用在400MHz操作的Brucker400或使用在300MHz下操作的BrukerAvance记录1H NMR光谱。以ppm给出化学位移。使用热喷雾(Finnigan MATSSQ 7000，缓冲剂50nM在CH3CNH2O中的NH4Oac；3∶7，电子碰撞(Finnigan MAT SSQ 710)或电喷射(LC-MS；LCWaters 2790或LC-MS，Waters2690，柱XTerra MS C8 2.5μm 2.1×30mm，缓冲剂梯度H2O+0.1％TFACH3CN+0.04％TFA，MS微型质量ZMD电离技术记录质谱。
使用应用5973N质量选择性检测器，在Agilent 6890N GC系统上进行GC-MS。
柱色谱法使用Merck硅胶60(40-63μm)。
使用带有质量触发的分级收集器Shimadzu QP 8000的半制备型HPLC(安装有XTerra 5μm C18 100mm×19mm柱)或使用带有质量触发的分级收集器的Waters FractionLynx HPLC(安装有Ace C8 5μm 100mm×21.2mm柱)进行纯化。
实施例16-硝基-2-噻吩-3-基苯并噻唑 将3-噻吩代硼酸(1.3g，10.1mmol)和饱和碳酸钠水溶液(12mL)加入到2-溴-6-硝基苯并噻唑(2.0g，7.72mmol，描述在Lópes-Calahorra等Tetrahedron，2004，60，285-289中)在甲苯/乙醇(29mL，9∶2)的溶液中，随后添加[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)(0.254g，0.35mmol)，并且将该反应在80℃下和氮气环境中搅拌9小时。加入二氯甲烷和水并且分离各层。用二氯甲烷(2×15mL)提取水相并且用水和盐水洗涤合并的有机层，用硫酸镁干燥并且蒸发溶剂。通过硅胶柱色谱法纯化残余物，使用正-庚烷/乙酸乙酯(100至90∶10)作为洗脱剂而得到0.301g(产率15％)标题化合物1HNMR(CDCl3，300MHz)δ8.82(d，1H)，8.36(dd，1H)，8.11(m，2H)，7.73(dd，1H)，7.49(m，1H)。
如对实施例1所述合成下列实施例2-7。
实施例26-甲基-2-噻吩-3-基苯并噻唑 原料2-溴-6-甲基苯并噻唑，产率20％1H NMR(CDCl3.300 MHz)δ7.98(dd，1H)，7.92(d，1H)，7.69(dd，1H)，7.67(s，1H)，7.43(dd，1H)，7.29(dd，1H)和2.53(s，3H)。
实施例36-氟-2-噻吩-3-基苯并噻唑 原料2-溴-6-氟苯并噻唑，产率33％1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.38(d，1H)，8.05(m，2H)，7.79(m，1H)，7.71(d，1H)，7.40(dt，1H)。
实施例46-氯-2-噻吩-3-基苯并噻唑 原料2-溴-6-氯苯并噻唑，产率23％LC-MS(ES)m/z 252(M++1)。
实施例51-(2-噻吩-3-基-苯并噻唑-6-基)-乙酮 原料1-(2-溴-苯并噻唑-6-基)-乙酮，产率66％LC-MS(ES)m/z260(M++1)。
实施例67-(4-氟-苯基)-苯并噻唑 原料7-溴-苯并噻唑和4-氟苯基代硼酸，产率48％LC-MS(ES)m/z230(M++1)。
实施例77-(4-氟-苯基)-2-噻吩-3-基苯并噻唑 原料2-溴-7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑，产率69％LC-MS(ES)m/z312(M++1)。
实施例82-溴-7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑 将正-丁基锂(0.2mL，2.5M己烷溶液，0.5mmol)加入到冷却的(-78℃)7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑(0.100g，0.44mmol)在无水四氢呋喃(10mL)中的溶液中。将所得混合物在-78℃下搅拌1小时并且加入四溴化碳(0.138g，0.42mmol)，除去冷却并且将该混合物温热至室温。加入饱和氯化铵水溶液并且用乙酸乙酯稀释该混合物。用硫酸镁干燥有机层并且在真空中除去溶剂。通过制备型HPLC纯化残余物而得到45mg(39％产率)标题产物，为白色固体LC-MS(ES)m/z308(M++1)。
实施例94-(6-硝基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸 在氮气环境中将氯磺酸(1.15mL)滴加到冷却的(0℃)6-硝基-2-噻吩-3-基苯并噻唑(0.301g，1.15mmol)在氯仿(0.7mL)中的混悬液中并且使该混合物在5小时过程中达到环境温度。将该反应体系倾倒在冰上并且过滤沉淀的产物，用水洗涤并且在真空中干燥而得到0.320g(90％产率)标题化合物，将其不经进一步纯化用于下一步。
如对实施例9所述合成下列实施例10-14 实施例104-(6-甲基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸 原料6-甲基-2-噻吩-3-基苯并噻唑，产率81％。
实施例114-(6-氟-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸 原料6-氟-2-噻吩-3-基苯并噻唑，产率87％。
实施例124-(6-氯-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸 原料6-氯-2-噻吩-3-基苯并噻唑，产率38％LC-MS(ES)m/z332(M++1)。
实施例134-(6-乙酰基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸 原料1-(2-噻吩-3-基-苯并噻唑-6-基)-乙酮，产率96％LC-MS(ES)m/z340(M++1)。
实施例144-[7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑-2-基]-噻吩-2-磺酸 原料7-(4-氟-苯基)-2-噻吩-3-基苯并噻唑，产率63％LC-MS(ES)m/z392(M++1)。
实施例154-(苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯 将五氯化磷(0.581g，2.79mmol)加入到4-(苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸(0.554g，1.86mmol，描述在Vattoly，J.M.等Tetrahedron Lett.2003，44，8535-8537中)在磷酰氯(3.5mL)中的混悬液中。将该混合物在100℃下和氮气环境中进行2小时的加热。浓缩该反应混合物，用乙酸乙酯稀释并且分离各相。用硫酸镁干燥有机相并且蒸发溶剂而得到0.533g(91％产率)标题化合物，为白色固体，将其不经进一步纯化用于下一步。
如对实施例15所述合成下列实施例16-20 实施例164-(6-硝基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯 原料4-(6-硝基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸，产率96％。
实施例174-(6-甲基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯 原料4-(6-甲基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸，产率100％。
实施例184-(6-氟-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯 原料4-(6-氟-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸，产率33％。
实施例194-(6-氯-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯 原料4-(6-氯-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸，产率81％。
实施例204-[7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑-2-基]-噻吩-2-磺酰氯 原料4-[7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑-2-基]-噻吩-2-磺酸，产物未分离。
实施例214-(6-乙酰基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯 向4-(6-乙酰基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸(0，10g，0.30mmol)在磷酰氯(0.8mL，8.8mmol)中的混悬液中加入五氯化磷(0.1g，0.5mmol)。将该反应混合物在环境温度下搅拌过夜并且在真空中蒸发溶剂而得到0.070g(产率66％)标题化合物，为粗品，将其不经进一步纯化用于下一步。
实施例221-(2-氨基-苯并噻唑-6-基)-乙酮 在10℃下和3小时内将溴(3.79mL，74.0mmol)在乙酸(50mL)中的溶液滴加到4-乙酰基苯胺(10g，74.0mmol)、硫氰酸钠(9.0g，111mmol)和乙酸(250mL)的混合物中。将所得混合物在50℃下加热2小时。在将该反应体系冷却至环境温度后，过滤出形成的固体，悬浮于温水中并且用氢氧化钠(片)碱化至pH 9-10。通过过滤除去产物，用水洗涤并且在真空中用五氧化磷干燥而得到5.86g(41％产率)标题产物，为黄色固体LC-MS(ES)m/z193(M++1)。
实施例232-溴-6-硝基苯并噻唑 在氮气环境中将2-氨基-6-硝基苯并噻唑(2.2g，11.2mmol)在乙腈(169mL)和聚乙二醇(5.5g)中的溶液滴加到无水溴化铜(II)(6.05g，27mmol)和亚硝酸异戊酯(2.2mL，16.8mmol)在乙腈(55mL)和聚乙二醇(5.5g)中的混合物中。将该混合物在50℃下超声处理并且搅拌3小时。冷却该混合物(0℃)，将其倾入溴化氢(10％，500mL)，并且用乙醚提取(2×200mL)。用溴化氢(10％)洗涤合并的有机相，用饱和碳酸氢钠水溶液和盐水中和，用硫酸镁干燥并且蒸发溶剂而得到2.08g(71％产率)标题化合物，为黄色固体1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.20(d，1H)，8.36(dd，1H)，8.20(d，1H)。
如对实施例23所述合成下列实施例24-27 实施例242-溴-6-甲基苯并噻唑 原料2-氨基-6-甲基苯并噻唑，产率91％1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ7.88(m，2H)，7.35(dd，1H)，2.43(s，3H)。
实施例252-溴-6-氟苯并噻唑 原料2-氨基-6-氟苯并噻唑，产率92％1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.04(m，2H)，7.43(m，1H)。
实施例262-溴-6-氯苯并噻唑 原料2-氨基-6-氯苯并噻唑，产率89％LC-MS(ES)m/z 250(M++1)。
实施例271-(2-溴-苯并噻唑-6-基)-乙酮 原料1-(2-氨基-苯并噻唑-6-基)-乙酮，产率75％LC-MS(ES)m/z256(M++1)。
实施例282-溴-7-氯-6-氟-苯并噻唑，2-溴-5-氯-6-氟-苯并噻唑 将溴化铜(II)(2.75 g，12.3mmol)在110℃下于真空中干燥1小时。在烧瓶达到环境温度后，加入乙腈(90mL)和聚乙二醇200(3g)，随后加入亚硝酸异戊酯(1.05mL，7.70mmol)。在20分钟内向该混合物中滴加7-氯-6-氟-苯并噻唑-2-基胺和5-氯-6-氟-苯并噻唑-2-基胺的异构体混合物(1.04g，3∶7之比，描述在Cecchetti，V.J.Med.Chem.1987，30，467-473)在乙腈(30mL)和聚乙二醇200(3g)中的溶液。将该反应混合物在50℃下和氮气环境中搅拌4小时。在冷却至环境温度后，将该反应混合物倾入冷却的(0℃)10％溴化氢(400mL)并且用乙醚(3x)提取。用10％溴化氢、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤合并的有机相，用硫酸镁干燥并且在真空中浓缩。将粗物质悬浮于正-庚烷中并且过滤。收集的固体为纯的不合需要的异构体(0.738g，产率54％)。浓缩滤液并且在真空中干燥而得到0.481g(产率35％)的异构体混合物，根据GC，它含有70％的所需区域异构体(2-溴-7-氯-6-氟-苯并噻唑)和30％的不合需要的异构体。将该混合物不经分离用于下一步GC-MS(EI)m/z 267(M+)。
实施例297-氯-6-氟-2-噻吩-3-基苯并噻唑 将噻吩-3-代硼酸(0.255g，1.97mmol)、[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)(0.066g，0.09mmol)和饱和碳酸氢钠水溶液(5mL)加入到2-溴-7-氯-6-氟-苯并噻唑和2-溴-5-氯-6-氟-苯并噻唑的异构体混合物在甲苯/乙醇(10∶1)中的溶液中并且将该反应体系在80℃下和氮气环境中搅拌6.5小时。根据GC-MS发现反应并不完全。将该反应混合物在环境温度下保持18小时，然后再加入噻吩-3-代硼酸(0.070g，0.541mmol)和[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]氯化钯(II)(0.066g，0.09mmol)并且将该反应体系在80℃下和氮气环境中搅拌5小时。加入二氯甲烷和水，分离各层并且用二氯甲烷(3x)提取水相。用水和盐水洗涤合并的有机相，用硫酸镁干燥并且在真空中浓缩。通过硅胶柱色谱法纯化粗物质，使用正-庚烷/乙酸乙酯(95∶5)作为洗脱剂而得到0.196g(40％产率)所需的区域异构体(7-氯-6-氟-2-噻吩-3-基苯并噻唑)，为白色固体1H NMR(CDCl3，400MHz)δ.8.03(m，1H)，7.89(dd，1H)，7.68(d，1H)，7.46(m，1H)，7.31(t，1H)；GC-MS(EI)m/z 269(M+)。
实施例307-溴-苯并噻唑 将亚硝酸钠(0.229g，3.3mmol)加入到7-溴-苯并噻唑-6-基胺(0.380g，1.66mmol，描述在WO 97/31636中)在硫酸(10mL)中的溶液中并且将所得混合物在室温下搅拌20分钟。加入次磷酸(10mL)并且将该混合物在50℃下加热过夜。通过添加碳酸钠将pH调节至9-10，并且通过过滤除去粗产物且用水洗涤。通过制备型-HPLC纯化而得到0.265g(75％产率)标题化合物，为白色固体LC-MS(EI)m/z213(M++1)。
实施例314-(苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺 将氨水甲醇(1.2mL，7M)加入到4-(苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯粗品(0.060g，0.21mmol)中并且将所得混合物在环境温度下搅拌过夜。蒸发溶剂并且通过制备型-HPLC纯化残余物而得到0.030g(48％产率)标题化合物，为白色固体1H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.54(d，1H)，8.12(d，1H)，8.08(d，1H)，7.97(d，1H)，7.82(brs，2H)，7.50(t，1H)，7.42(t，1H)。
如对实施例31所述合成下列实施例32-37 实施例324-(6-硝基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺 原料4-(6-硝基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯，产率10％1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ9.25(d，1H)，8.77(d，1H)，8.40(m，2H)，8.22(d，1H)，8.15(d，1H)，7.91(brs，2H)。
实施例334-(6-甲基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺 原料4-(6-甲基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯，产率25％1HNMR(DMSO-d6，300MHz)
8.55(d，1H)，8.08(d，1H)，7.93(m，2H)，7.38(d，1H)，2.44(s，3H)。
实施例344-(6-氟-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺 原料4-(6-氟-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯，产率11％1HNMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.60(d，1H)，8.03-8.12(m，2H)和7.23-7.59(m，4H)。
实施例354-(6-氯-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺 原料4-(6-氯-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯，产率63％1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.62(s，1H)，8.33(d，1H)，8.10(s，1H)，8.04(d，1H)，7.86(brs，2H)，7.58(dd，1H)；MS(TSP)m/z331(M++1)。
实施例364-(6-乙酰基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺 原料4-(6-乙酰基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯，产率6％1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.86(s，1H)，8.70(1H)，8.11(m，3H)，7.84(brs 2H)，3.30(s，3H)；LC-MS(ES)m/z339(M++1)。
实施例374-[7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑-2-基]-噻吩-2-磺酰胺 原料4-[7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑-2-基]-噻吩-2-磺酰氯，产率63％1HNMR(DMSO-d6，400MHz)δ8.63(d，1H)，8.14(d，1H)，8.10(dd，1H)，7.89(brs，2H)，7.81(m，2H)，7.69(t，1H)，7.58(dd，1H)，7.42(t，2H)；LC-MS(ES)m/z391(M++1)。
实施例384-(7-氯-6-氟-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺 在氮气环境中将氯磺酸(2.0mL)滴加到冷却的(0℃)7-氯-6-氟-2-噻吩-3-基苯并噻唑(0.192g，0.712mmol)在氯仿(0.70mL)中的混悬液中。使该混合物达到环境温度并且搅拌5.5小时。将该反应体系倾倒在冰上，过滤出沉淀的产物，用水和乙醚洗涤并且用五氧化磷干燥而得到0.225g所需的磺酸和一些磺酰氯。将该物质悬浮于磷酰氯(2.0mL)中，加入五氯化磷(0.214g，)并且将该混合物在100℃下和氮气环境中加热2小时。浓缩该反应混合物并且在真空中干燥。向粗混合物中滴加氨(7M甲醇溶液，2.5mL)并且将该反应体系搅拌19小时。在真空中浓缩该反应混合物并且通过制备型-HPLC纯化而得到0.042g(3步内的产率为17％)标题化合物，为白色固体1H NMR(DMSO-d6，400MHz)
8.70(d，1H)，8.10(m，2H)，7.90(brs，2H)，7.67(t，1H)；LC-MS(ES)m/z346.9(M--1)。
实施例394-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酸(2-氟-乙基)-酰胺 将2-氟乙胺盐酸盐(0.039g，0.35mmol)加入到4-(苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯(0.092g，0.29mmol)在吡啶(2mL)中的溶液中并且将所得混合物在50℃下和氦气环境中加热20小时。将该混合物冷却后，加入水和二氯甲烷并且分离各层。用二氯甲烷(3x)提取水相并且用水、饱和碳酸氢钠水溶液和盐水洗涤合并的有机相，用硫酸镁干燥并且蒸发而在通过制备型-HPLC纯化后得到0.030g(30％产率)标题化合物1H NMR(DMSO-d6，300MHz)δ8.67(d，1H)，8.16(d，1H)，8.12(d，1H)，8.06(d，1H)，7.57，(m，1H)，7.48(m，1H)，4.53(t，1H)，4.37(t，2H)，3.28(t，1H)，3.19(t，1H)。
实施例40-43 一般探作步骤MPS 将4-(苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯(0.5mmol)和合适的氨基杂环(2当量)溶于吡啶(1mL)，并且将所得混合物在100℃下加热过夜。蒸发溶剂并且通过硅胶柱色谱法纯化残余物，使用乙酸乙酯/二氯甲烷(0至l00％乙酸乙酯)作为冼脱剂。
实施例44-46 一般操作步骤MPS 使用与对实施例40-43所述相同的操作步骤，但在50℃下加热。
实施例47[2-(4-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酰基氨基)-噻唑-4-基]-乙酸乙酯 将吡啶(0.75mL)加入到4-(苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯(0.3mmol)和(2-氨基-噻唑-4-基)-乙酸乙酯(2当量)的混合物中并且将该混合物在50℃下加热过夜。蒸发溶剂并且通过硅胶柱色谱法纯化残余物，使用乙酸乙酯/二氯甲烷(0至60％乙酸乙酯)作为洗脱剂而得到0.043g(30％产率)标题化合物，为固体1H NMR(DMSO-d6，400MHz)
13.06(brs，1H)，8.60(d，1H)，8.17(d，1H)，8.07(d，1H)，8.04(d，1H)，7.57(dd，1H)，7.49(dd，1H)，6.75(s，1H)，4.11(q，2H)，3.68(s，2H)，1.19(t，3H)；MS(ES)m/z 465.0(M++1)。
实施例484-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酸(4-甲基-吡啶-2-基)-酰胺 将吡啶(0.75mL)加入到4-(苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯(0.3mmol)和4-甲基-吡啶-2-基胺(2当量)的混合物中并且将该混合物在100℃下加热过夜。蒸发溶剂并且通过硅胶柱色谱法纯化残余物，使用乙酸乙酯/二氯甲烷(0至60％乙酸乙酯)作为洗脱剂而得到0.041g(40％产率)标题化合物1HNMR(DMSO-d6，400MHz)
13.27(brs，1H)，8.53(s，1H)，8.17(d，1H)，8.06(d，1H)，8.04(s，1H)，7.87(d，1H)，7.57(dd，1H)，7.49(dd，1H)，7.22(brs，1H)，6.75(d，1H)，2.33(s，3H)；MS(ES)m/z387.9(M++1)。
药理学 闪烁亲近测定法中的Cdk5/p25蛋白激酶的抑制测定 Cdk5/p25闪烁亲近测定法 在透明底部的384-孔微量滴定板(Corning，US，Item No 3706)中使用10种不同浓度的抑制剂按照一式两份进行测定实验。加入重组人Cdk5/p25(细胞周期蛋白依赖性激酶5)(AstraZeneca Biotech Laboratory，Sdertlje，Sweden)，使其在测定缓冲液中的最终浓度为3.3nM，所述测定缓冲液含有23.3mM羟乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)，pH7.35、0.2mM乙二胺四乙酸(cthylenedinitriotetraacetic acid)(EDTA)、12.5mM KCl、10mMβ-磷酸甘油、0.02％β-巯基乙醇、0.007％Brij35、0.8％甘油和0.05％牛血清白蛋白。15分钟后，通过添加2.95μM最终浓度的生物素化的肽底物，生物素-Ala-Lys-Lys-Pro-Lys-Thr-Pro-Lys-Lys-Ala-Lys-Lys-Leu-OH(Bachem，switzerland)、0.07μCi[γ-33P]ATP(Amersham，UK)、2μM未标记的ATP和10mM MgCl2启动反应，最终测定体积为21μL。40分钟后，在室温下温育40分钟后，添加30μl停止溶液终止各反应，所述停止溶液含有24mMEDTA、2.2mM ATP和0.225mg链霉抗生物素包被的闪烁亲近测定(SPA)的小珠(Amersham，UK)。以200g将微量滴定板离心2分钟并且用液体闪烁计数器(1450 MicroBeta Trilux，Wallac，Finland)测定放射性。通过非-线性回归，使用xL-拟合分析抑制曲线。对于Cdk5/p25，用于计算各化合物抑制常数(Ki)的ATP的Km值为10μM。
结果 本发明化合物的典型Ki值在约275nM-10000nM的范围。
权利要求
1.游离碱形式的式I化合物、或其药物上可接受的盐
其中
R、R1和R2各自并且独立地选自氢、卤素、硝基、CHO、CN、OC1-6烷基、C(O)C1-4烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟甲氧基、二氟甲氧基和三氟甲氧基；
R3选自氢、卤素、C0-6烷基NR6R7、CO2R8、CONR6R7、R6(CO)R6、O(CO)R6、(SO2)NR6R7、芳基或杂芳基，其中所述芳基和杂芳基可以被一个或多个A取代；
R4和R5各自并且独立地选自氢、OH、OC1-6烷基、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基C3-6环烷基、CO2R8、C0-6烷基芳基、C0-6烷基杂环烷基、C1-6烷基NR6R7和C0-6烷基杂芳基，其中任意的C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基C3-6环烷基、C0-6烷基杂环烷基、C0-6烷基芳基或C0-6烷基杂芳基可以被一个或多个A取代；或其中R4和R5可以一起形成含有一个或多个选自N、O或S的杂原子的4-、5-、6-或7-元杂环，其中所述杂环可以任选地被A取代；
R6和R7各自并且独立地选自氢、C1-6烷基、(CO)OR8、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基C3-6环烷基、C0-6烷基芳基和C0-6烷基杂芳基；或R6和R7可以一起形成含有一个或多个选自N、O或S的杂原子的4-、5-、6-或7-元杂环，该杂环可以任选地被A取代；
R8选自氢、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基C3-6环烷基、C0-6烷基芳基和C0-6烷基杂芳基；
A为卤素、硝基、CHO、CN、OR6、C1-6烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C0-6烷基C3-6环烷基、氟甲基、二氟甲基、三氟甲基、氟甲氧基、二氟甲氧基、三氟甲氧基、C0-6烷基NR6R7、OC1-6烷基NR6R7、C1-6(O)OR8、C1-6烷基OR6、CONR6R7、NR6(CO)R6、O(CO)R6、COR6、SR6、(SO2)NR6R7、(SO)NR6R7、SO3R6、SO2R6或SOR6。
2.权利要求1的游离碱形式的式I化合物、或其药物上可接受的盐，其中R和R1为氢。
3.权利要求1或2的游离碱形式的式I化合物、或其药物上可接受的盐，其中R2选自氢、卤素、硝基、C(O)C1-4烷基和C1-6烷基。
4.权利要求1-3中任一项的游离碱形式的式I化合物、或其药物上可接受的盐，其中R3选自氢、卤素和芳基，其中芳基可以被一个或多个A取代。
5.权利要求1-4中任一项的游离碱形式的式I化合物、或其药物上可接受的盐，其中R4选自氢、OH、C1-6烷基、C0-6烷基芳基和C0-6烷基杂芳基，其中任意的C1-6烷基、C0-6烷基芳基或C0-6烷基杂芳基可以被一个或多个A取代。
6.权利要求1-5中任一项的游离碱形式的式I化合物、或其药物上可接受的盐，其中R5为氢。
7.权利要求1-4中任一项的游离碱形式的式I化合物、或其药物上可接受的盐，其中R4和R5一起形成含有一个或多个选自N、O或S的杂原子的4-、5-、6-或7-元杂环，其中所述杂环可以任选地被A取代。
8.权利要求1-7中任一项的游离碱形式的式I化合物、或其药物上可接受的盐，其中A选自卤素、OR6、C1-6烷基和C1-6烷基OR6；R6选自氢和(CO)OR8；且R8为C1-6烷基。
9.权利要求1-8中任一项的游离碱形式的式I化合物、或其药物上可接受的盐，其中R和R1为氢；R2选自氢、卤素、硝基、C(O)C1-4烷基和C1-6烷基；R3选自氢、卤素和芳基，其中所述芳基可以被一个或多个A取代；R4选自氢、OH、C1-6烷基、C0-6烷基芳基和C0-6烷基杂芳基，其中任意的C1-6烷基、C0-6烷基芳基或C0-6烷基杂芳基可以被一个或多个A取代；R5为氢；且A选自卤素、OR6、C1-6烷基和C1-6烷基OR6；R6选自氢和(CO)OR8；且R8为C1-6烷基。
10.权利要求9的游离碱形式的式I化合物、或其药物上可接受的盐，其中R4和R5一起形成含有一个或多个选自N、O或S的杂原子的4-、5-、6-或7-元杂环，其中所述杂环可以任选地被A取代，所述A为C1-6烷基OR6；且R6为氢。
11.化合物，为
6-硝基-2-噻吩-3-基苯并噻唑；
6-甲基-2-噻吩-3-基苯并噻唑；
6-氟-2-噻吩-3-基苯并噻唑；
6-氯-2-噻吩-3-基苯并噻唑；
1-(2-噻吩-3-基-苯并噻唑-6-基)-乙酮；
7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑；
7-(4-氟-苯基)-2-噻吩-3-基苯并噻唑；
2-溴-7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑；
4-(6-硝基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸；
4-(6-甲基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸；
4-(6-氟-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸；
4-(6-氯-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸；
4-(6-乙酰基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酸；
4-[7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑-2-基]-噻吩-2-磺酸；
4-(苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯；
4-(6-硝基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯；
4-(6-甲基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯；
4-(6-氟-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯；
4-(6-氯-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯；
4-[7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑-2-基]-噻吩-2-磺酰氯；
4-(6-乙酰基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰氯；
1-(2-氨基-苯并噻唑-6-基)-乙酮；
2-溴-6-硝基苯并噻唑；
2-溴-6-甲基苯并噻唑；
2-溴-6-氟苯并噻唑；
2-溴-6-氯苯并噻唑；
1-(2-溴-苯并噻唑-6-基)-乙酮；
2-溴-7-氯-6-氟-苯并噻唑；
7-氯-6-氟-2-噻吩-3-基苯并噻唑；或
7-溴-苯并噻唑。
12.化合物，为
4-(苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺；
4-(6-硝基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺；
4-(6-甲基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺；
4-(6-氟-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺；
4-(6-氯-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺；
4-(6-乙酰基-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺；
4-[7-(4-氟-苯基)-苯并噻唑-2-基]-噻吩-2-磺酰胺；
4-(7-氯-6-氟-苯并噻唑-2-基)-噻吩-2-磺酰胺；
4-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酸(2-氟-乙基)-酰胺；
4-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酸噻唑-2-基酰胺；
4-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酸(4，5-二甲基-噻唑-2-基)-酰胺；
4-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酸(3-羟基-吡啶-2-基)-酰胺；
4-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酸(6-吗啉-4-基-吡啶-3-基)-酰胺；
4-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酸(吡啶-2-基甲基)-酰胺；
[1-(4-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酰基)-比咯烷-2-基]-甲醇；
4-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酸羟基酰胺；
[2-(4-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酰基氨基)-噻唑-4-基]-乙酸乙酯；或
4-苯并噻唑-2-基-噻吩-2-磺酸(4-甲基-吡啶-2-基)一酰胺.
13.一种药物组合物，其包括治疗有效量的权利要求1-12中任一项的化合物作为活性组分与药物上可接受的载体或稀释剂。
14.权利要求13所述药物组合物，用于预防和/或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶5相关的疾病。
15.权利要求1-12中任一项所定义的化合物在治疗中的用途。
16.权利要求1-12中任一项的化合物在制备用于预防和/或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶5相关的疾病的药物中的用途。
17.权利要求1-12中任一项的化合物在制备用于预防和/或治疗痴呆、阿尔茨海默氏病、帕金森病、帕金森型额颞痴呆、关岛震颤麻痹痴呆综合征、HIV痴呆、与神经原纤维缠结病理相关的疾病、进行性核上性麻痹和拳击员痴呆的药物中的用途。
18.权利要求17的化合物的用途，其中所述疾病为阿尔茨海默氏病。
19.权利要求1-12中任一项的化合物在制备用于预防和/或治疗肌萎缩性侧索硬化、皮质基质退化、唐氏综合征、亨廷顿舞蹈病、脑炎后帕金森综合征、进行性核上性麻痹、皮克氏病、尼曼-区克氏病、中风、头部创伤和其它慢性神经变性疾病的药物中的用途。
20.权利要求1-12中任一项的化合物在制备用于预防和/或治疗中风或长期药物滥用的药物中的用途。
21.预防和/或治疗与细胞周期蛋白依赖性激酶5相关的疾病的方法，包括对有这类预防和/或治疗需要的哺乳动物，包括人给药治疗有效量的权利要求1-12中任一项所定义的式I的化合物。
22.预防和/或治疗如下疾病的方法痴呆、阿尔茨海默氏病、帕金森病、帕金森型额颞痴呆、关岛震颤麻痹痴呆综合征、HIV痴呆、与神经原纤维缠结病理相关的疾病、进行性核上性麻痹和拳击员痴呆，包括对有这类预防和/或治疗需要的哺乳动物，包括人给药治疗有效量的权利要求1-12中任一项所定义的化合物。
23.权利要求22所述方法，其中所述疾病为阿尔茨海默氏病。
24.预防和/或治疗如下疾病的方法肌萎缩性侧索硬化、皮质基质退化、唐氏综合征、亨廷顿舞蹈病、脑炎后帕金森综合征、进行性核上性麻痹、皮克氏病、尼曼-区克氏病、中风、头部创伤和其它慢性神经变性疾病，包括对有这类预防和/或治疗需要的哺乳动物，包括人给药治疗有效量的权利要求1-12中任一项所定义的化合物。
25.预防和/或治疗中风或长期药物滥用的方法，包括对有这类预防和/或治疗需要的哺乳动物，包括人给药治疗有效量的权利要求1-12中任一项所定义的化合物。
26.制备权利要求1的式I的化合物的方法，其中除非另有说明，R、R1、R2、R3、R4 R5权利要求1的式I中所定义
该方法包括在有合适的溶剂存在下用合适的胺使式XIII的化合物酰胺化，得到式I的化合物。
全文摘要
本发明提供了式I的新化合物，及其制备方法和其中使用的新中间体，含有所述治疗活性化合物的药物制剂和所述活性化合物在治疗中的用途。
文档编号A61K31/428GK1980922SQ20058002244
公开日2007年6月13日 申请日期2005年6月29日 优先权日2004年7月2日
发明者乔纳斯·马姆斯特罗姆, 珍妮·维克伦德 申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司