用于预防或治疗炎症性疾病的方法及药物组合物的制作方法

专利名称：用于预防或治疗炎症性疾病的方法及药物组合物的制作方法
技术领域：
本发明主张2004年10月21日申请的韩国专利申请号为10-2004-81498的专利申请的优先权，其内容以引用方式全部并入本文。
本发明涉及用于预防或治疗炎症性疾病的方法及药物组合物。更具体地说，本发明涉及包括将FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂施用于需要抑制FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的受试者以抑制淋巴细胞和内皮细胞黏附的方法或炎症性疾病的治疗方法。本发明还涉及含有上述FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂的药物组合物、上述FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂的用途、及筛选抑制淋巴细胞和内皮细胞黏附的药物或用于治疗炎症性疾病的药物的筛选方法，其包括选择FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂的步骤。
背景技术：
所谓的炎症是指白细胞为了保护组织免受病原体侵入、除去由于组织损伤而产生的组织碎片的一系列反应。上述白细胞可分为淋巴细胞、单核细胞、粒细胞(嗜中性细胞、嗜酸细胞、嗜碱细胞)。
另一方面，发生炎症反应的重要步骤之一是从循环系统向炎症发生部位或受伤部位移动白细胞。上述白细胞的移动经过多个步骤而发生，其中包括在毛细血管后微静脉中的白细胞与内皮细胞的相互作用。即，白细胞经过一连串的捕捉、滚动、及黏附(firm adhesion)步骤，接下来经过通过相邻内皮细胞之间的迁移，向除血管以外的部位移动(Muller，W.A.et al.，Lab.Invest.82521-533，2002)。经过上述步骤，白细胞黏附在内皮细胞上后，其在细胞表面上移动，并通过细胞内连接移动到炎症发生部位或受伤部位(Harlan J.M.，Blood，65513-525，1985)。
然而，当上述炎症反应发生不适当调节时，可诱发多种炎症性疾病。通常的炎症性疾病包括感染性鼻炎、过敏性鼻炎、慢性鼻炎、急性鼻窦炎等的鼻炎及鼻窦炎；急性化脓性中耳炎及慢性化脓性中耳炎等的中耳炎；细菌性肺炎、支气管肺炎、大叶性肺炎、军团菌肺炎及病毒性肺炎等的肺炎；急性或慢性胃炎、感染性小肠结肠炎、克罗恩病(Crohn′s disease)、特发性溃疡性大肠炎、胃膜性大肠炎等的肠炎；化脓性关节炎、结核性关节炎、退行性关节炎及风湿性关节炎等的关节炎；以及糖尿病性眼病等。
已知，在炎症反应中白细胞与血管内皮细胞的黏附通过细胞黏附分子(cell adhesion molecule，CAM)进行介导。上述细胞黏附分子在作为白细胞与血管内皮细胞黏附的介质之外，在保持或发起特定组织的结构或功能中也是必须的，且在维持人体的动态平衡性上有重要的作用(Edelman，G.M.，Annu.Rev Cell Bio.，281-116，1986；Gumbiner，B.M.，Cell，84345-357，1996)。
至今为止，已知的细胞黏附分子包括钙粘蛋白(cadherin)、整联蛋白(integrin)、选择蛋白(selectin)以及免疫球蛋白细胞黏附分子(immunoglobulin superfamily cell adhesion molecule，IgCAM)等(Humphries，M.J.et al.，Trends Cell Biol.，878-83，1998)。其中，已经获知选择蛋白作为钙离子依赖性细胞膜结合凝集素家族，其引发白细胞对血小板或内皮细胞的黏附(Lasky，Science 258964-969，1992)。选择蛋白可划分为三种在白细胞内表达的L-选择蛋白、在细胞因子活性的内皮细胞内表达的E-选择蛋白、及在凝血酶活性的血小板和内皮细胞内表达的P-选择蛋白。最近，正在活跃地进行研究，通过利用细胞黏附分子如选择蛋白的活性抑制剂开发抗炎剂，其中细胞黏附分子介导白细胞与内皮细胞的黏附并引起炎症。
韩国专利公开公报第2004-0039440号公开了一种抑制由选择蛋白介导的炎症抑制剂，韩国专利第371784号公开了一种用于治疗炎症性疾病、与L-选择蛋白特异性反应的人源化抗体。
另一方面，fas-1结构域是从包括哺乳类、昆虫、海胆、植物、酵母及细菌的多种物种的分泌蛋白或膜锚定蛋白中发现的高度保守序列(KawamotoT.et al.，Biochim.Biophys，Acta，288-292，1988)。fas-1结构域包括约110-140个氨基酸，特别是，fas-1结构域包括两个亚基(H1及H2)，其含有高度同源性的约10个氨基酸且高度保守(Kawamoto T.et al.，Biochim.Biophys，Acta，288-292，1988)。含有fas-1结构域的蛋白质包括βig-h3、成骨细胞特异性因子2(periostin)、成束蛋白I(fasciclin I)、海胆HLC-2(sea urchin HLC-2)、海藻-CAM(algal-CAM)、海藻-CAM(algal-CAM)及分支杆菌MPB70(mycobacterium MPB70)等(Huber，O.et al.，EMBO J.，4212-4222，1994；Matsumoto，S.et al.，J.Immunol.，281-287，1995；Takeshita，S.et al.，Biochem.J.，271-278，1993；Wang，W.C.et al.，J.Biol.Chem.，1448-1455，1993)。上述蛋白质中的βig-h3、成骨细胞特异性因子2和成束蛋白I有4个fas-1结构域，HLC-2有2个fas-1结构域，MPB70仅有一个fas-1结构域。虽然还没有清楚地了解含有fas-1结构域的蛋白质的生物学功能，但是已报道了几个蛋白质有作为细胞黏附分子的功能。其中，报道了βig-h3介导成纤维细胞与上皮细胞的黏附、成骨细胞特异性因子2介导成骨细胞内的黏附、以及成束蛋白I介导神经细胞内的黏附(LeBaron，R.G.et al.，J.Invest.Dermatol.，844-849，1995；Horinchi，K.et al.，J.Bone Miner.Res.，1239-1249，1999；Wang，W.C.et al.，J.Biol.Chem.，1448-1455，1993)。进一步地，研究证实海藻-CAM是存在于鸟类团藻的胚胎中的细胞黏附分子(Huber，O.et al.，EMBO J.，4212-4222，1994)。
如上所述，尽管已知含有fas-1结构域的几个蛋白质有作为细胞黏附分子的功能，但并不是含有fas-1结构域的所有蛋白质都可作为细胞粘附分子。

发明内容
技术问题这里，本发明者们已进行了大量研究以开发新的炎症性疾病的治疗剂，结果发现了内皮细胞内存在的FEX-2多肽是一种新的细胞黏附分子，其介导淋巴细胞的黏附。以此为基础，表明上述FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂可抑制淋巴细胞与内皮细胞的黏附，因此能够用于治疗炎症性疾病。
技术方案因此，本发明的一个目的是，提供一种抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的方法，其中，该方法包括将FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂施用于所需受试者。
本发明的另一目的是，提供一种用于预防或治疗炎症性疾病的方法，该方法包括将FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂施用于所需受试者。
本发明的又一目的是，提供一种用于抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的药物组合物，其含有FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂及药物可接受的载体。
本发明的又一目的是，提供一种用于预防或治疗炎症性疾病的药物组合物，其含有FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂及药物可接受的载体。
本发明的又一目的是，提供上述FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂在制备用于抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的药物中的用途。
另外，本发明的又一目的是，提供上述FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂在制备用于预防或治疗炎症性疾病的药物中的用途。
另外，本发明的又一目的是，提供一种抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的药物的筛选方法，其包括测定待检试剂是否抑制FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的步骤。
另外，本发明的又一目的是，提供一种用于预防或治疗炎症性疾病的药物的筛选方法，其包括测定检测试剂是否抑制FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的步骤。
为了达成如上所述的本发明的目的，本发明提供一种抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的方法，其中，该方法包括将FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂施用于所需受试者。
另外，本发明还提供一种用于预防或治疗炎症性疾病的方法，其中，该方法包括将FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂施用于所需受试者。
另外，本发明还提供一种用于抑制淋巴细胞和内皮细胞黏附的药物组合物，其中，其含有FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂及药物可接受的载体。
另外，本发明还提供一种用于预防或治疗炎症性疾病的药物组合物，其中，其含有FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂及药物可接受的载体。
另外，本发明还提供FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂用于制备用于抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的药物中的用途。
另外，本发明还提供FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂用于制备用于预防或治疗炎症性疾病的药物中的用途。
另外，本发明还提供一种抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的药物的筛选方法，其特征在于，其确定待检试剂是否抑制FEX-2多肽与淋巴细胞的黏附。
另外，本发明还提供一种用于预防或治疗炎症性疾病的药物的筛选方法，其测定试验试剂是否抑制FEX-2多肽与淋巴细胞的黏附。
以下，对本发明进行详细地说明。
除非另有说明，本说明书中使用的所有的技术用语及科学用语均具有与本领域技术人员所通常理解的相同的意义。下面的参考文献为本领域技术人员提供了本文所用的各种用语和表达的一般定义。Singleton et al.，DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOTY(2d ed.1994)；THE CAMBRIDGE DICTIONARY OF SCIENCE AND TECHNOLOGY(Walker ed.，1988)；及Hale & Marham，THE HARPER COLLINSDICTIONARY OF BIOLOGY。进一步地，为了方便读者，提供以下技术用语的定义。
本发明中的“多肽”与“多肽等或蛋白质(等)”互换使用，是指氨基酸残基的聚合物，尤其是在自然界中的蛋白质中发现的氨基酸残基的聚合物。
本发明中的FEX-2多肽可来自哺乳动物，优选来自选自由人、大鼠(rat)以及小鼠(mouse)所组成的组中的任一种。更优选的FEX-2多肽是来自序列号1表示的人FEX-2多肽或序列号9表示的小鼠FEX-2多肽。最优选的是，来自序列号1表示的人FEX-2多肽。
上述FEX-2多肽是本发明者们用已公开的多核苷酸数据库克隆的基因，通过试验能够确认在血管内皮细胞内存在，同时具有介导淋巴细胞与血管内皮细胞黏附的功能。
具体而言，本发明者们根据在细胞黏附分子中发现含有fas-1结构域的蛋白质这一事实，用公知的核苷酸数据库检索含有fas-1结构域的部分的人cDNA，从中选拔出还没有探明特性的三个cDNA。基于上述cDNA设计出引物后，将从人脾中提取的总RNA作为模板，以如上述设计的引物为引物，进行RT-PCR(逆转录PCR)及5′RACE PCR(cDNA末端的快速扩增)，新克隆出含有fas-1结构域的人类基因(参照实施例1)。
本发明者们合成的上述基因有7个fas-1结构域、23个EGF样(EGF-like)的结构域、1个X连接(X-link)结构域及1个跨膜结构域(参照图1)。根据如上述的结构域结构，将上述基因命名为FEX-2，将上述基因序列注册到基因银行(YA311388)中。人FEX-2具有的氨基酸序列如序列号1的序列所示。
本发明者们为了确认由本发明制备的重组FEX-2蛋白质是否作为细胞黏附分子起作用，首先，检查FEX-2是否能够在细胞表面表达。
为此，本发明者们构建了含有人FEX-2基因的重组载体，用该重组载体将小鼠成纤维细胞的L细胞转化，转化体被命名为L/FEX-2(参照实施例1)。然后，分别制备出人FEX-2的多克隆抗体及单克隆抗体，用免疫印迹法来检测是否上述抗体能够检出在人脾组织及L/FEX-2细胞中的FEX-2的表达(参照实施例2)。其结果是，确认本发明的FEX-2抗体能够特异地检出人脾组织及L/FEX-2细胞中表达的FEX-2蛋白质。
因此，本发明者们利用上述FEX-2的特异抗体通过FACS分析法及表面生物素化法测定FEX-2是否在L/FEX-2细胞表面被表达(参照实施例3)。其结果是，能够确认FEX-2在L/FEX-2细胞表面上被表达(参见图3和4)。
进一步地，本发明者们为了确定FEX-2通过何种组织被表达，利用人FEX-2多克隆抗体进行免疫染色法检测多种人类组织内的FEX-2的表达(参照实施例4)。其结果是，可确认FEX-2可通过人脾窦血管内皮细胞表达(参照图5)。进一步地，也确认了FEX-2也可在肝与淋巴结的窦血管内皮细胞内表达(该结果未示出)。由此，推定FEX-2能够在血管内皮细胞被表达，并能够与血液内存在的细胞相互作用。
为了实现FEX-2蛋白质的表达，本发明者们检查了淋巴细胞与转化了的L/FEX-2细胞的黏附活性(参照实施例5)。其结果是，与对照相比，能够确认有大量的淋巴细胞黏附在L/FEX-2细胞表面上(参照图6及图7)。
进一步地，为了确认淋巴细胞与L/FEX-2细胞的黏附是否是由于FEX-2蛋白质，本发明者们调查了在抗-FEX-2抗体的存在下淋巴细胞是否与上述L/FEX-2细胞黏附(参照实施例6)。其结果是，能够确认抗-FEX-2抗体能特异地抑制淋巴细胞与L/FEX-2细胞的黏附(参照图8)。
因此，本发明者们从上述实验结果，能够确认FEX-2具有介导淋巴细胞黏附的细胞粘附分子的功能。
进一步地，本发明者们为了更具体地表征作为细胞黏附分子的FEX-2，鉴定了上述FEX-2的细胞表面受体。
为此，在本发明的一个实施例中，调查了锰、镁及钙离子对淋巴细胞与FEX一2黏附的影响(参照实施例7)。其结果是，能够确认淋巴细胞与FEX-2的细胞黏附由于锰离子而被最高地促进，其次是由于镁离子而被促进，而钙离子没有促进黏附(参照图9)。由此可知，在FEX-2的细胞表面受体与配体的作用中，上述二价阳离子是必要的。FEX-2的细胞表面受体的特征与细胞黏附机理中结合配体的整联蛋白受体的特征一致。
本发明者们鉴定了介导淋巴细胞与FEX-2黏附的整联蛋白受体(参照实施例7)。其结果是，能够确认αLβ2整联蛋白及αMβ2整联蛋白与FEX-2相互作用，因此参与了淋巴细胞的黏附(参照图10)。
从上述试验结果可知，本发明者们能够初步探明，FEX-2存在于血管内皮细胞内，通过淋巴细胞与αLβ2整联蛋白或αMβ2整联蛋白相互作用，FEX-2具有介导淋巴细胞与血管内皮细胞黏附的活性。
另外，本发明者们更加具体地研究FEX-2的哪个片段与淋巴细胞的黏附有直接关联，检测了是否含有与淋巴细胞的黏附相关的FEX-2片断的多肽可用作抑制淋巴细胞与FEX-2黏附的抑制剂。
为此，在本发明的另一实施例中，将上述FEX-2蛋白质分成4个小单位体(subunit)，制备各自制备重组蛋白质(参照图11)。将上述小单位体与淋巴细胞一起预培养，向表达FEX-2的L/FEX-2细胞中添加所述淋巴细胞进行培养，然后测定淋巴细胞与FEX-2的黏附程度(参照实施例<8-1>)。其结果是，能够确认当淋巴细胞与上述小单位体预培养并被添加至L/FEX-2细胞后，大大地抑制了淋巴细胞与FEX-2的黏附(参照图12)。
进一步地，本发明者们将第三个FEX-2蛋白质的小单位体，即Nus-U3分成三部分，制备含有FEX-2的第三EGF样重复结构域的多肽(Nus-EGF3)和分别含有FEX-2的第五与第六fas-1结构域的多肽(Nus-Fas5，Nus-Fas6)(参照图13)，接着，将上述多肽与淋巴细胞一同预培养，并将培养的淋巴细胞添加至L/FEX-2细胞中，检查淋巴细胞与FEX-2的黏附程度(参照实施例8)。其结果是，含有fas-1结构域的Nus-Fas5及Nus-Fas6多肽与淋巴细胞一同预培养时，显示出了可抑制淋巴细胞与L/FEX-2细胞的黏附，但是对于含有EGF样重复结构域的多肽，却没有显示出抑制淋巴细胞的黏附的活性(参照图14)。
进一步地，在本发明的再一实施例中，淋巴细胞通过与各个浓度的含有上述fas-1结构域的多肽一同预培养，并将该淋巴细胞添加至L/FEX-2细胞中，来检查淋巴细胞与FEX-2蛋白质的黏附程度(参照实施例9)，其结果是，随着上述多肽浓度的增加，淋巴细胞与FEX-2黏附的抑制程度也增加(参照图15)。
因此，从上述实验结果可知，预培养淋巴细胞与含有fas-1结构域的多肽时，上述fas-1结构域部分与淋巴细胞黏附，并与L/FEX-2细胞表达的FEX-2蛋白有竞争作用。因此，能够确认淋巴细胞黏附在FEX-2蛋白质的fas-1结构域上，含有上述fas-1结构域的多肽能够用作抑制淋巴细胞与FEX-2蛋白质黏附的抑制剂。
进一步地，本发明者们检测了是否含有人FEX-2蛋白质内含有的7个fas-1结构域的多肽，及含有除人FEX-2蛋白质以外的其他蛋白质如结核分支杆菌蛋白质mpt83与mpt70的fas-1结构域的多肽能够抑制淋巴细胞与FEX-2蛋白质的黏附(参照实施例10)。其结果是，能够确认含有FEX-2蛋白质中含有的7个fas-1结构域的多肽全部具有抑制淋巴细胞与FEX-2黏附的活性(图16)。进一步地，含有结核分支杆菌蛋白质mpt83与mpt70内的fas-1结构域的多肽也具有抑制淋巴细胞与FEX-2黏附的活性，表现出了上述淋巴细胞黏附的抑制活性依赖于多肽的浓度(参照图17)。
如上所述，本发明初步探明了，通过淋巴细胞与αLβ2整联蛋白或αMβ2整联蛋白的相互作用，FEX-2具有介导血管内皮细胞与淋巴细胞黏附的活性。进一步地，本发明能够确认，抑制FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂能够抑制淋巴细胞与内皮细胞的黏附。
因此，本发明提供一种抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的方法，其中，该方法包括将FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂施用于所需受试者。上述淋巴细胞与内皮细胞的黏附是通过含有fas-1结构域的细胞黏附分子优选为FEX-2多肽所介导。
另一方面，炎症反应是由淋巴细胞与血管内皮细胞黏附后，向炎症部位移动而引起的，如果淋巴细胞与血管内皮细胞上存在的细胞黏附分子的黏附活性受到抑制，则抑制了淋巴细胞向炎症部位的移动，从而抑制了炎症反应(Ulbrich，H.et al.，Trends Pharmacol.Sci.24640-647，2003；Harlan，J.M.etal.，Crit.Care Med.30(5 Suppl)S214-219，2002；van Assche，G.et al.，Inflamm.Bowel Dis.8291-300，2002)。因此，对淋巴细胞与血管内皮细胞上存在的细胞黏附分子FEX-2的黏附活性的抑制，可抑制淋巴细胞向炎症部位的移动，能够抑制炎症反应。
因此，本发明提供一种用于预防或治疗炎症性疾病的方法，其中，该方法包括将FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂施用于所需受试者。
本发明中，“受试者”是指动物，优选为哺乳动物。受试者也可以是来自动物的细胞、组织或器官。
本发明中的“淋巴细胞与FEX-2多肽黏附的抑制剂”是指与FEX-2多肽结合抑制淋巴细胞的黏附的化合物，或与淋巴细胞结合抑制淋巴细胞与FEX-2黏附的化合物，或抑制编码FEX-2蛋白质的基因的表达的化合物。
所述抑制FEX-2蛋白质与淋巴细胞黏附的化合物包括肽、多肽、蛋白质、肽模拟物、化合物及生物制剂，但并不仅限于此。
优选地，与FEX-2结合而抑制淋巴细胞与FEX-2结合的化合物包括抗-FEX-2抗体。此外，与淋巴细胞结合而抑制淋巴细胞与FEX-2结合的化合物包括含有fas-1结构域的多肽。
本发明的含有fas-1结构域的多肽可来自哺乳动物，优选来自由人、大鼠以及小鼠所组成的组中的任意一种。本发明中的含有fas-1结构域的多肽，可利用来自所有已知的含有fas-1结构域的蛋白质的fas-1结构域。因此，本发明的fas-1结构域可以是从本领域公知的蛋白质序列检索数据库，例如(NCBI Entrez(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Entrez/)，EMBL-EBI(http://www.ebi.ac.uk/)或SMART(http://smart.embl-heidelberg.de/)检索得到的fas-1结构域。
本发明的多肽优选含有来自选自由FEX-2、mpt70、mpt83、βig-h3、成骨细胞特异性因子2及FEX-1所组成的组中的蛋白质的fas-1结构域。更优选的多肽是含有由序列号1至序列号12表示的人FEX-2的fas-1结构域的多肽、含有来自序列号13及序列号14表示的结核分支杆菌蛋白质mpt70及mpt83的fas-1结构域的多肽、含有序列号15至序列号21表示的小鼠FEX-2的fas-1结构域的多肽及含有序列号22至序列号25表示的大鼠FEX-2的fas-1结构域的多肽、含有序列号26至序列号29表示的人βig-h3的fas-1结构域的多肽、含有序列号30至序列号33表示的小鼠βig-h3的fas-1结构域的多肽、含有序列号34或序列号35表示的大鼠βig-h3的fas-1结构域的多肽、含有序列号36至序列号39表示的人成骨细胞特异性因子2的fas-1结构域的多肽、含有序列号40至序列号43表示的小鼠成骨细胞特异性因子2的fas-1结构域的多肽、含有序列号44至序列号47表示的大鼠成骨细胞特异性因子2的fas-1结构域的多肽、含有序列号48至序列号54表示的人FEX-2的fas-1结构域的多肽、含有序列号55至序列号60表示的小鼠FEX-1的fas-1结构域的多肽、含有序列号61至序列号66表示的大鼠FEX-1的fas-1结构域的多肽。最优选为含有序列号1至序列号12表示的人FEX-2的fas-1结构域的多肽，或含有序列号13及序列号14表示的结核分支杆菌蛋白mpt83及mpt70的fas-1结构域的多肽。本发明中的来自含有fas-1结构域的蛋白质的fas-1结构域可单独使用或组合使用。
本发明中，“含有fas-1结构域的多肽”的范围还包括fas-1结构域的功能等同物及其盐。“功能等同物”是指表现出与本发明的fas-1结构域实质上相同的生理活性的多肽，即，只要表现出与本发明的多肽具有实质上相同的生理活性，氨基酸序列以及结构上相同或类似的多肽也在本发明的范围内。上述“实质上相同的生理活性”是指抑制淋巴细胞与细胞黏附分子FEX-2黏附的活性。更具体地，上述用语是指淋巴细胞与整联蛋白αLβ2或αMβ2相互作用而抑制淋巴细胞黏附FEX-2的活性。
进一步地，本发明的功能等同物的范围包括维持本发明的多肽的基本骨架及其生理活性，其化学结构得到修饰的多肽衍生物。例如，包括为了改变多肽的稳定性、贮藏稳定性、挥发性或溶解度等而使结构得到修饰的多肽。
含有本发明的fas-1结构域的多肽可通过本领域公知的化学合成方法(Creightion，Proteins；Structures and Molecular Principles，W.H.Freeman andCo.，NY，1983)而容易地被制备。作为代表的方法包括液相或固相方法(Chemical Approaches to the Synthesis of Peptides and Proteins，Williams et al.，Eds.，CRC Press，Boca Raton Florida，1997；A Practical Approach，Athert on &Sheppard，Eds.，IRL Press，Oxford，England，1989)，但并不限于此。
进一步地，含有本发明的fas-1结构域的多肽，可通过生物技术的方法制备。即，通过通常的方法制备编码上述多肽的DNA序列。可通过使用合适的引物进行PCR扩增，制备DNA序列。作为其他的方法，例如可使用本领域公知的使用自动DNA合成仪(Biosearch或Applied Biosystems销售的机器)合成DNA序列。制备的DNA序列被插入到载体中，该载体包括至少一个表达调节序列(expression control sequence，如启动子、增强子等)，该表达调节序列可操作性地连接(operatively linked)到该DNA序列以调节DNA序列的表达，由此形成的重组表达载体用于转化宿主细胞。为了表达上述DNA序列，在合适的培养基及条件下培养生成的转化体、从培养物回收由上述DNA序列编码的基本上纯净的多肽。上述回收可采用本领域公知的方法进行(例如色谱法)。上述“基本上纯净的多肽”是指本发明的多肽，实质上不含有任何来自宿主细胞的其它蛋白质。制备本发明的多肽的生物技术方法可参考下述文献(Maniatis et al.，Molecular Cloning；A laboratoryManual，Cold Spring Harbor laboratory，1982；Sambrook et al.，supra；GeneExpression Technology，Method in Enzymology，Genetics and MolecularBiology，Method in Enzymology，Guthrie & Fink(eds.)，Academic Press，SanDiego，Calif，1991；及Hitzeman et al.，J.Biol.Chem.，25512073-12080，1990)。
本发明中，抗-FEX-2抗体可以是多克隆抗体或单克隆抗体。本发明的抗体可以利用FEX-2蛋白质作为抗原，通过免疫学领域公知的通常的方法制备。
多克隆抗体可利用马、牛、山羊、羊、狗、鸡、火鸡、兔、小鼠或大鼠的各种温血动物，采用该领域的通常技术制备。即，通过将抗原通过腹膜内、肌内、眼内或皮下注射使动物免疫。对于上述抗原的免疫性，可使用佐剂，例如，弗氏(Freund)完全佐剂或不完全佐剂而得到增加。在激发(booster)免疫处理后，收集血清小样品，测试目的抗原的反应性。如果从抗原的反应性来看，动物的滴度达到一定的稳定水平时，则每周可通过动物出血或动物放血，获得大量的多克隆免疫血清。
单克隆体也可采用公知的技术生成(Kennettm McKearn，andBechtol(eds.)，Monoclonal Antibodies，Hybridomas；A New Dimension inBiological Analyses，Plenum Press，1980)。单克隆抗体，可以FEX-2蛋白质作为免疫原使动物免疫，将免疫后的动物的脾细胞与骨髓瘤细胞融合生成杂交瘤，筛选选择性识别FEX-2蛋白质的杂交瘤，培养筛选的杂交瘤，从杂交瘤的培养液分离出抗体。进一步地，本发明的单克隆抗体，可通过将产生选择性识别FEX-2蛋白质的抗-FEX-2抗体的上述杂交瘤注入动物中，然后经过一定期间后从动物的腹水中分离抗体。
本发明的一个实施例中制备的生产人FEX-2单克隆抗体的杂交瘤5G3，于2004年5月21日以保藏号为KCTC-10639BP，在布达佩斯条约承认的国际保藏机构韩国生命工学院遗传资源中心基因银行(KCTC)(韩国大田市儒城区鱼隐洞52号韩国生命工学研究院)进行了保藏。上述保藏物质，在专利授权的全部期间，能够在韩国生命工学院遗传资源中心基因银行保持存活，根据保藏管理法的规定没有任何限制地对非商业用途的任何人或实体开放。
此外，能够抑制编码FEX-2蛋白质的基因表达的物质，是指能够抑制上述基因的转录或抑制基因翻译成蛋白质的物质。上述基因表达的抑制，不只是使基因表达完全停止，也包括使表达减少的情形。
抑制编码FEX-2蛋白质的基因表达的物质的代表性实例是能够抑制特定内在基因的表达的反义分子。反义分子抑制目的基因表达的作用包括通过形成三链结构而抑制转录的发生；通过RNA聚合酶在局部开环结构的形成位点处形成杂交而抑制转录；通过在正在合成的RNA上形成杂交而抑制转录；在内含子与外显子的接合处形成杂交而抑制剪接；通过在内含子与外显子的接合点处形成杂交而抑制剪接；通过在剪接复合体(splicosome)形成位点处形成杂交而抑制剪接；通过与mRNA形成杂交而抑制从核向细胞质的转移；通过在翻译开始因子结合位点处形成杂交而抑制翻译的发生等。所述反义分子抑制转录、剪接(splicing)、或翻译过程，由此抑制目的基因的表达。
本发明中使用的反义分子，可以通过上述的任意一种作用抑制目的基因的表达。代表性的反义分子包括三螺旋形成剂(triple helix forming agent)、核酶(ribozyme)、RNAi、或反义核酸等。三螺旋形成剂，是通过被传递至双链螺旋DNA周边而形成三螺旋，由此抑制转录的开始(Maher et al.，Antisense Res.and Dev.，1(3)227，1991；Helene，C.，Anticancer Drug Design，6(6)569，1991)。
核酶是能够切断单链RNA的酶。核酶通过识别目的RNA分子内的特定多核苷酸序列并特异地切断序列来抑制目的基因的蛋白质表达(Cech，J.Amer.Med.Assn.，2603030，1998；Sarver et al.，Science 2471222-1225，1990)。
RNAi(RNA干扰)是通过使用作用于特异碱基序列的发夹状小分子的RNA，在转录水平或转录后水平抑制基因表达的方法(Mette et al.，EMBO J.，195194-5201，2000)。上述RNAi方法中使用的小分子RNA是与目的基因具有同源性的双链RNA分子。
上述RNA分子的制备可采用公知的化学合成方法或酶的方法。例如，RNA分子的化学合成可利用文献中公开的方法(Verma and Eckstein，Annu.Rev.Biochem.67，99-134，1999)。对于RNA分子的酶的合成，在文献中已记载了利用噬菌体T7、T3或SP6聚合酶的RNA聚合酶的方法(Milligan andUhlenbeck，Methods Enzymol.18051-62，1989)。
反义核酸是指与目的mRNA分子至少一部分相互补的DNA或RNA分子(Weintraub，Scientific American，26240，1990)。通过在细胞内反义核酸与与其相应的mRNA杂交，形成双链分子，由此抑制目的基因的mRNA的解读和蛋白质的表达(Marcus-Sakura，Anal.Biochem.，172289，1988)。上述反义核酸，特别对于抑制本发明的FEX-2表达的抑制剂有用。上述反义核酸优选是寡核苷酸，可通过本领域公知的任意的合适方法制备。具体而言，反义寡核苷酸可通过化学方法，例如，如文献(Tetrahedron Lett.，1991，32，30005-30008)中所记载的，包括用乙腈中的二硫化四乙基秋兰姆硫化的亚磷酰胺(phosphoramidite)化学方法而制备。
通过本发明的方法能够预防或治疗的炎症性疾病包括炎症反应自身或由炎症反应诱发的各种疾病。具体的炎症性疾病的非限定性实例包括炎症、炎症性肠病、糖尿病性眼病、腹膜炎、骨髓炎、蜂巢炎、脑膜炎、脑炎、胰腺炎、创伤性休克、支气管哮喘、鼻炎、鼻窦炎、中耳炎、肺炎、胃炎、肠炎、囊性纤维化、中风、支气管炎、细支气管炎、肝炎、肾炎、关节炎、痛风、脊椎炎、赖特尔综合征、结节性多动脉炎、过敏性血管炎、韦格纳肉芽肿病、风湿性多肌痛、巨细胞动脉炎、钙结晶沉积性关节病、假痛风、非关节性风湿症、滑囊炎、腱鞘炎、上髁炎(网球肘)、神经性关节病(夏科氏关节)、关节血肿、过敏性紫癜、肥大性骨关节病、多中心网状组织细胞瘤、脊柱侧凸、血色素症、镰状红细胞症及其他的血红蛋白病、高脂蛋白血症、低丙种球蛋白血症、甲状旁腺机能亢进、肢端肥大症、家族性地中海热、白塞氏病、系统性红斑狼疮、回归热、银屑病、多发性硬化症、败血症、败血症性休克、急性呼吸窘迫综合症、多器官衰竭、慢性阻塞性肺疾病、急性肺损伤及支气管-肺发育不良，但不限于此。
本发明的另一方面提供了一种用于抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的药物组合物，其含有FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂及药物可接受的载体。
本发明还提供了一种用于预防或治疗炎症性疾病的药物组合物，其含有FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂及药物可接受的载体。
上述“药物可接受的”是指生理学上允许用于人类，不会引起诸如胃肠紊乱、眩晕等的过敏反应或类似反应的成分。药物可接受的载体可包括如口服给药载体和胃肠外给药载体。口服给药载体可包括乳糖、淀粉、纤维素衍生物、硬脂酸镁、硬脂酸等。胃肠外给药载体可包括水、合适的油、盐水溶液、含水的葡萄糖及乙二醇等。本发明的组合物可进一步包括稳定剂及防腐剂。合适的稳定剂包括如亚硫酸氢钠、亚硫酸钠或抗坏血酸等的抗氧化剂。合适的防腐剂包括氯化苄烷铵、对羟基苯甲酸甲酯或对羟基苯甲酸丙酯及氯丁醇。其他的药物可接受的载体可参考下述文献中记载的内容(Remington′sPharmaceutical Sciences，19th ed.，Mack Publishing Company，Easton，PA，1995)。
本发明的药物组合物可与上述药物可接受的载体混合并通过本领域技术人员已知的方法制成适宜剂型。即，本发明的药物组合物可通过公知的方法制成各种口服或胃肠外给药剂型。胃肠外给药剂型优选包括注射剂型，如等渗水溶液或悬浮液。注射剂型可使用合适的分散剂或湿润剂及悬浮剂，通过本领域公知的技术制备。例如，在盐水溶液或缓冲液中溶解各成分，制成注射剂型。口服给药剂型的实例包括粉末、颗粒、片剂、丸剂及胶囊，并不限于此。
如上制成的药物组合物可通过口服、经皮、皮下、静脉内或肌内的给药途径给予有效量。所述“有效量”，是指表现出预防或治疗效果的化合物或提取物的量。本发明的药物组合物的施用量，可根据给药途径、给药对象、年龄、性别、体重、个体差异及疾病状态进行适宜的选择。优选含有本发明的多肽的药物组合物，以成人作为标准时，有效单位剂量为10μg至10mg，每日可施用一次或数次。根据疾病的严重程度，有效剂量可不同。
本发明还提供了FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂用于制备抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的药物的用途。
本发明还提供了FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂用于制备预防或治疗炎症性疾病的药物的用途。
本发明提供了一种抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的药物的筛选方法。
更具体地，当待检试剂与表达FEX-2的细胞特异地作用时，本发明的筛选方法包括以下步骤(a)在待检试剂存在下或不在待检试剂存在下预培养表达FEX-2多肽的细胞；(b)在上述(a)步骤中的在待检试剂存在下预培养的细胞中或不在待检试剂存在下预培养的细胞中添加淋巴细胞进行继续培养；以及(c)测定淋巴细胞与在待检试剂存在下预培养的细胞的黏附程度，与淋巴细胞与不在待检试剂存在下预培养的细胞的黏附程度比较，由此确定上述待检试剂是否抑制淋巴细胞的黏附。
另外，当待检试剂与淋巴细胞有特异地作用时，本发明的筛选方法包括以下步骤(a)在待检试剂存在下或不在待检试剂存在下预培养淋巴细胞；(b)在上述(a)步骤中在待检试剂存在下或不在待检试剂存在下预培养的淋巴细胞中添加表达FEX-2多肽的细胞进行继续培养；以及(c)测定淋巴细胞与在待检试剂存在下预培养的细胞的黏附程度，与淋巴细胞与不在待检试剂存在下预培养的细胞的黏附程度比较，由此确定上述待检试剂是否抑制淋巴细胞的黏附。
本发明还提供了一种用于预防或治疗炎症性疾病的药物的筛选方法。
本发明的用于预防或治疗炎症性疾病的药物的筛选方法，其除了上述抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的药物的筛选方法中的步骤(a)-(c)之外，还进一步包含步骤(d)，即将上述(c)步骤中确认的抑制淋巴细胞黏附的待检试剂施用于患有炎症性疾病的动物以检测治疗效果。
在上述方法中，所述动物优选为非人动物。进一步地，上述(d)步骤中“治疗效果”是指缓和或改善炎症性疾病及症状或抑制炎症性疾病进展的效果。
本发明中的“试剂”或“待检试剂”，包括任意的物质、分子、元素、化合物、实体或其组合。例如，包括蛋白质、多肽、有机小分子、多糖、多核苷酸等，但不限于此。进一步地，也可以是天然产物、合成产物或化学化合物或其组合。只要没有特别地限定，可以互换地使用试剂、物质及化合物。
可通过本发明的方法筛选或鉴定的待检试剂包括多肽类、β折叠拟态类(beta-turn mimetics)、多糖、磷脂类、荷尔蒙类、前列腺素类、类固醇、芳香族化合物、杂环化合物、苯并二氮卓类(benzodiazepines)、N-取代甘氨酸寡聚物、低聚氨基甲酸酯类(oligocarbamates)、糖类、脂肪酸类、嘌呤类、嘧啶类或上述物质的衍生物、结构类似物或组合。待检试剂可以是合成物质，也可以是天然物质。上述待检试剂可从包括合成或天然化合物库的各种来源获得。组合文库(combinatorial library)，能够得出可以按逐步反应方式合成的各种化合物。多数的组合文库化合物等可通过ESL(encoded synthetic libraries)方法(WO 95/12608，WO93/06121，WO 94/08051，WO 95/395503及WO 95/30642)制备。细菌、微生物、植物及动物的提取物形式的天然化合物文库可商购得到或从现场收集。另外，为了制备结构类似物，可将已知的药理制剂进行如酰化、烷基化、酯化、酰胺化等设计的或随机的化学修饰。上述待检试剂也可是天然的蛋白质或其片段。上述的待检试剂可从天然来源，例如，细胞或组织溶解物获得。多肽制剂的文库，例如，可通过通常的方法生成或商业上得到的cDNA文库获得。待检试剂也可以是肽，例如，具有约5-30个，优选为约5-20个，更优选为约7-15个的氨基酸的肽。上述肽也可以是天然蛋白质的剪切产物、随机肽或“偏移化(biased)”随机肽。
待检试剂也可以是“核酸”。核酸待检试剂可以是天然核酸、随机核酸或“偏移化”随机核酸。例如，可以与上述记载的类似方式使用原核或真核基因组的剪切物。
待检试剂也可以是小分子(例如具有约1,000以下的分子量的分子)。在筛选小分子的方法中，优选使用高通量筛选法。如上述记载的小分子待检试剂的组合文库也可容易地使用本发明的筛选方法。几个分析系统在上述筛选中是有用的(Shultz，Bioorg.Med.Chem.Lett.，82409-2414，1998；Weller，Mol.Drivers.，361-70，1997；Fernandes，Curr.Opin.Chem.Biol.，2597-603，1998；and Sittampalam，Curr.Opin.Chem.Biol.，1384-91，1997)。
本发明的“表达FEX-2多肽的细胞”，是指被含有编码上述FEX-2多肽的基因的载体转化的细胞。尽管没有特别的限定，优选细胞内不存在FEX-2多肽以外的细胞黏附分子。例如细胞包括小鼠成纤维细胞，L细胞。除小鼠L细胞以外，也可使用中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cells(CHO))、小鼠肉瘤细胞S180及果蝇S2细胞。
含有编码FEX-2多肽的基因的载体，可通过公知的方法从公知的FEX-2基因序列制备cDNA，并将上述cDNA克隆至合适的载体上而容易地制备。本发明中示例的表达载体可以是pcDNA FEX-2。
上述方法使用的淋巴细胞优选用萤光色素标记。上述荧光色素可使用能够通过向细胞膜的扩散而使淋巴细胞染色，并能用荧光显微镜观察的所有荧光色素。
淋巴细胞与转化的细胞的黏附程度，可用光学显微镜对转化细胞上黏附的淋巴细胞的数目计数而测定，或如下测定将转化细胞与淋巴细胞一起培养，用细胞溶解缓冲液溶解上述细胞，得到溶解产物，然后测定溶解产物的荧光。
当利用显微镜计数黏附的淋巴细胞的数目时，将转化的细胞与淋巴细胞一起培养，然后洗涤除去没有黏附的淋巴细胞，用显微镜观察随意设定的10个位置，计数黏附的淋巴细胞的数量而求出平均值。
当测定细胞溶解产物的萤光时，将转化的细胞与淋巴细胞一起培养，洗涤除去没有黏附的淋巴细胞，然后添加细胞溶解缓冲液，用荧光酶标仪(fluorescent microplate reader)测定获得的细胞溶解产物的萤光值。
以下，通过实施例详细地说明本发明。但是，下述实施例仅用于示例本发明，本发明的内容并不限定于实施例。


图1是图示人FEX-2蛋白质的各结构域的示意图。
图2是利用人FEX-2单克隆抗体，用蛋白质印迹法(Western Blotting)分析测定人脾组织、L/FEX-2细胞及L/Mock细胞的FEX-2蛋白质的表达结果。
图3是利用人FEX-2单克隆抗体，用FACS(Fluoresence Activated CellSorter)分析在L/Mock细胞与L/FEX-2细胞的表面的FEX-2蛋白质的表达结果。
图4是用表面生物素化分析法测定L/FEX-2细胞表面的FEX-2蛋白质的表达结果(-不添加、+添加)。
图5是利用人脾组织中的人FEX-2多克隆抗体进行免疫组织染色的结果(a对照、b试验)。
图6是用显微镜观察在L/Mock细胞与L/FEX-2细胞上淋巴细胞的黏附程度的照片(aL/Mock细胞，bL/FEX-2细胞，箭头淋巴细胞)。
图7是表示出淋巴细胞在L/Mock细胞与L/FEX-2细胞上黏附程度的图形。
图8是表示出人FEX-2单克隆抗体抑制淋巴细胞与L/FEX-2细胞黏附的图形。
图9是表示出多种二价阳离子对淋巴细胞与L/FEX-2细胞黏附的影响的图形。
图10是表示出由多种整联蛋白的抑制抗体诱导而抑制淋巴细胞与L/FEX-2细胞黏附的图形β1用抗-β1抗体处理，αLβ2用抗-αL抗体处理，αMβ2用抗-αM抗体处理，αXβ2用抗-αX抗体处理。
图11是表示将人FEX-2蛋白质划分成4个小单位体的示意图。
图12是表示出抑制淋巴细胞与分成4个小单位体的FEX-2黏附的图形Nus-U1FEX-2蛋白质的第一小单位体附在Nus蛋白质后的物质Nus-U2FEX-2蛋白质的第二小单位体附在Nus蛋白质后的物质Nus-U3FEX-2蛋白质的第三小单位体附在Nus蛋白质后的物质Nus-U4FEX-2蛋白质的第四小单位体附在Nus蛋白质后的物质图13是将人FEX-2蛋白质的第三个小单位体(Nus-U3)进一步划分成三个部分的示意图。
图14是表示出由分成三部分的Nus-U3制备的多肽诱导而抑制淋巴细胞与人FEX-2蛋白质黏附的图形Nus-U3FEX-2蛋白质的第三小单位体附在Nus蛋白质后的物质Nus-EGF3FEX-2蛋白质的第三EGF-样重复结构域附在Nus蛋白质后的物质Nus-Fas5FEX-2蛋白质的第五fas-1结构域附在Nus蛋白质后的物质Nus-Fas6FEX-2蛋白质的第六fas-1结构域附在Nus蛋白质后的物质图15是表示当使用由分成三部分的人FEX-2蛋白质的Nus-U3制备的多肽时，淋巴细胞与FEX-2黏附的抑制程度随多肽浓度的改变而变化的图形Nus-UnitFEX-2蛋白质的第三小单位体附在Nus蛋白质后的物质Nus-EGFFEX-2蛋白质的第三EGF-样重复结构域附在Nus蛋白质后的物质Nus-FasFEX-2蛋白质的第五fas-1结构域附在Nus蛋白质后的物质图16是表示出由含有FEX-2蛋白质内的7个fas-1结构域的多肽诱导而抑制淋巴细胞与FEX-2黏附的图形。
图17是表示出由含有结核分支杆菌蛋白质mpt70与mpt83内的fas-1结构域的多肽诱导而抑制淋巴细胞与FEX-2黏附的图形。
本发明的最佳实施方式下面，根据实施例详细地说明本发明。然而，可以理解下述实施例仅出于示例本发明的目的，而无意于限制本发明的范围。
实施例1人FEX-2cDNA的克隆<1-1>表达载体的制备为了鉴定含有fas-1结构域的新型细胞黏附分子，用如基因银行(Genbank)与Celera基因组(Celera genomics)的多核苷酸数据库检索含有fas-1结构域的序列。其结果是，检索到未被表征的部分人cDNA克隆体(FLJ00112，DZKZp434E0321，CD44样前体FELL)。通过RT-PCR与5′RACE PCR从人脾细胞制备全长cDNA序列。
首先，根据上述检索到的含有fas-1结构域的3种人脾的部分cDNA克隆体设计出2对引物(序列号67至序列号70)(表1)。然后，利用从人脾提取的2μg RNA作为模板，利用上述设计的每对引物，进行逆转录酶聚合酶链反应(RT-PCR)，获得含有fas-1结构域的蛋白质的部分cDNA的两个片段。利用PCR系统(Expand high fidelity PCR system，Roche)，在95℃下反应2分钟、然后进行94℃下反应30秒、60℃下反应30秒、72℃下反应30秒的30个循环，进行PCR反应。其结果是，分别获得3.6kb与2.0kb的扩增产物。用限制酶ClaI及SacI(TaKaRa)酶切上述扩增产物中的3.6kbcDNA后，然后使用T4连接酶(ligase，Invitrogen)插入到pBluescript-KS(+)载体(Stratagene)的相同限制酶的位点处，由此构建重组载体‘pBS-Fex23’。另外，用限制酶SacI及HindIII(TaKaRa)酶切上述扩增产物内的2.0kb cDNA，然后使用T4连接酶(ligase，Invitrogen)插入到pET-29b载体(Novagen)的相同限制酶的位点处，由此构建重组载体‘pET-Fex45’。然后，如下进行两个cDNA序列的融合。首先，用klenow酶处理被EcoRI酶切的pET-Fex45的片段，得到平头片段(blunt fragment)；进一步用SacI酶切平头片段，并将其克隆至上述重组载体PET-Fex23的相同限制酶的位点处，从而构建重组载体‘pET-Fex2345’。
用下述的方法测定含有fas-1结构域的cDNA的5′末端。用表1表示出的引物(序列号71)扩增从人脾获得的RNA，制备cDNA。以上述cDNA作为模板，利用表1中表示的引物(序列号72及序列号73)与5′RACE系统(5′RACE system for Rapid Amplification of cDNA Ends version 2.0，Invitrogen)提供的接头(adapter)引物，按照制备者手册指示的方法，进行5’RACE PCR，获得扩增产物。然后，用序列分析仪(Applied BiosystemsAB13700)分析上述扩增产物，确定了FEX-2的5′末端碱基序列。以上述5′末端的碱基序列作为基础，设计引物。利用以人脾提取的2μg RNA作为模板、根据上述的5′碱基序列设计的一对引物(序列号74及序列号75)，进行逆转录酶聚合酶链反应(reverse transcriptase polymerase chain reaction，RT-PCR)，获得2.5kb的5′末端cDNA。通过限制酶EcoRI及Cla I(TaKaRa)酶切上述扩增产物，然后插入到pBluescript-KS(+)载体(Stratagene)的相同限制酶的位点处，由此构建重组载体‘pBS-Fex1’。如下将完整的碱基序列克隆到表达载体上。首先，以限制酶KpnI与HindIII酶切上述制备的pET-Fex2345，然后插入到pcDNA3.1(-)/Myc-His载体(Invitrogen)的相同限制酶的位点处，由此构建‘pcDNA-Fex45’。然后，用BamH I与KpnI进一步酶切pET-Fex2345，并插入到pcDNA-Fex45的相同限制酶的位点处，由此构建‘pcDNA-Fex2345’，最后用EcoR I与Cla I酶切上述pBS-Fex1，然后插入到pcDNA-Fex2345的相同限制酶的位点处。
用碱基序列分析仪(Applied Biosystems AB13700)分析上述制备的质粒，将所述碱基序列注册到基因银行(GenebankTM accession numberAY311388)，将上述制备的含有FEX-2的完整碱基序列的表达载体命名为“pcDNA-Fex2”。
从上述碱基序列分析结果推定的氨基酸序列，与清道夫受体FEEL-2(Scavenger receptor FEEL-2) (Adachi H.et al.，J.Biol.Chem.27734264-34270，2002)和透明质酸受体Stabilin-2(encocytic hyaluronanreceptor Stabilin-2)(Politz O.et al.，Biochem J.362155-164，2002)实质上相同。FEX-2包括7个fas-1结构域、23个EGF样结构域、1个X-连接结构域及1个跨膜结构域(图1)。
表1 Fex-2克隆中使用的引物

<1-2> L细胞的转化用上述实施例<1-1>构建的表达载体pcDNA-Fex2转化小鼠成纤维细胞，L细胞(ATCC CCL-1，获自Dr.Dakechi，Dept.of biophysics，Tokyo Univ.)。在添加10％热灭活的FBS、青霉素G及链霉素的DMEM培养基(Dulbecco′smodified Eagle′s medium)中培养上述L细胞。上述小鼠L细胞是钙粘蛋白不发生表达的细胞系，因而是细胞黏附活性的研究中普遍使用的细胞(Nose，A.Cell 54993-1001，1988)。
为了用重组载体pcDNA-Fex2转化上述L细胞，使用Lipofectamine(Lipofectamine，Invitrogen)，按照制备者手册指示的方法进行转化。转化后48小时，用G418(400μg/ml)处理细胞并培养10至12天。在培养期间，分离出G418抗性的各菌落。将通过上述的方法进行了转化的细胞命名为L/FEX-2。在阴性对照(L/Mock)中，使用不含有FEX-2基因的载体pcDNA3.1(-)/Myc-His转化细胞。
实施例2FEX-2的多克隆抗体与单克隆抗体的制备<2-1>人FEX-2的多克隆抗体的制备为了制备人FEX-2的多克隆抗体，通过PCR扩增，制备含有对应于人FEX-2的全部氨基酸序列(序列号1)的554位-655位氨基酸的碱基序列的cDNA与含有对应于2188位-2551位氨基酸的碱基序列的cDNA。上述cDNA，可通过以实施例<1-1>的pcDNA-Fex2 DNA作为模板，利用下述引物(序列号76至序列号79)，进行PCR反应而获得(表2)。PCR反应条件为，在95℃下反应2分钟；在94℃下反应30秒、60℃下反应30秒和72℃下反应30秒下，进行25个循环。用限制酶SalI及HindIII(TaKaRa)酶切含有对应于554位-655位氨基酸的碱基序列的扩增产物，然后插入到pET-29b载体(Novagen)的相同限制酶的位点处。用限制酶BamHI及XhoI(TaKaRa)酶切含有对应于2188位-2551位氨基酸的碱基序列的扩增产物，然后插入到pET28a载体(Novagen)的相同限制酶的位点处。
表2作为抗原使用的重组蛋白质的制备中使用的引物

将上述制备的表达载体分别命名为“pET-FEX2-5”与“pET-FEX2-2”，用上述载体转化大肠杆菌BL21 DE3。用含有50mg/ml卡那霉素(kanamycin)的LB培养基培养转化的大肠杆菌，为了诱使重组蛋白质的表达，当培养液的600nm时的吸光度为0.5至0.6时，添加1mM IPTG(异丙基-D-(-)-硫代半乳糖苷)(isopropyl--D-(-)-thiogalactopyranoside)，在37℃下继续培养大肠杆菌3小时。然后，用公知的方法纯化表达的蛋白质(Kim，J.-E.et al.，J.Cell.Biochem.，77169-187，2000)。首先，离心分离上述转化大肠杆菌的培养液，获得细胞后，用溶解缓冲液(50mM Tris-HCl(pH 8.0)，100mM NaCl，1mMEDTA，1％Triton X-100，1mM PMSF，0.5mM DTT)使细胞再悬于其中。用超声波匀化上述细胞悬浮液，用8M尿素改性缓冲液溶解以包涵体(inclusionbody)形式表达的蛋白质，然后利用Ni-NTA树脂(Qiagen)纯化被修饰的蛋白质。用200mM咪唑溶液洗脱上述重组蛋白质，按照含有50mM氯化钠的20mMTris-HCl缓冲液内的尿素浓度由高到低的顺序透析而纯化蛋白。通过SDS-PAGE确认上述纯化的重组蛋白质(其结果未图示)。
分别给不同的兔子注射上述制备的2种重组蛋白质(200μg/ml)，以制备抗体。即，每1ml上述重组蛋白质与相同量的弗氏(Freund)完全佐剂混合，并给兔子注射。然后，将上述重组蛋白质与相同量的弗氏(Freund)不完全佐剂混合，经皮下给兔子注射，每两周进行1次，总共进行8周。产生抗体之后采血。采集的血样在室温下，放置2小时左右，然后于4℃下用1000×g离心分离30分钟，分离抗血清。使用蛋白质A琼脂糖凝胶(Protein ASepharose，Amersham Pharmacia)，按照制备者使用手册指示的方法进行纯化上述抗血清，获得免疫球蛋白组分。
<2-2>人FEX-2的单克隆抗体的制备制备人FEX-2的单克隆抗体，制备含有对应于人FEX-2的全部氨基酸序列(序列号1)中的1173位-1727位氨基酸的碱基序列的cDNA。上述cDNA，可以上述实施例<1-1>的pcDNA-fex2 DNA作为模板，使用下述引物(序列号80及序列号81)(表3)，通过PCR反应而获得。PCR反应条件为，在95℃下反应2分钟；在94℃下反应30秒、60℃下反应30秒、72℃下反应30秒的条件下进行25个循环。以限制酶BamHI及XhoI(TaKaRa)酶切上述扩增产物，并插入到pET43.1a载体(Novagen)的相同限制酶的位点处。
表3作为抗原使用的重组蛋白质的制备中使用的引物

将上述制备的表达载体命名为“pET-4E5”，以与实施例<2-1>中相同的方法进行蛋白质的表达与分离。委托Dinona社(Dinona Inc.，Seoul，Korea)制备单克隆抗体。更具体的说，将20μg上述制备的重组蛋白质以2周的间隔免疫接种到6只小鼠体内，获得阳性杂交瘤克隆体(clone 5G3)。将该阳性杂交瘤克隆体注入小鼠的腹腔中，通过采集腹水，获得单克隆抗体。上述获得的杂交瘤5G3，于2004年5月21日以保藏编号为KCTC-10639BP在布达佩斯条约承认的国际保藏机构韩国生命工学院遗传资源中心(KCTC)中进行了保藏。
使用IsoStrip小鼠单克隆抗体同种型试剂盒(IsoStrip mouse monoclonalantibody isotyping kit，Roche)测定上述单克隆抗体的同种型(isotype)。其结果是，确认了本发明的单克隆抗体的同种型是具有λ链的IgG1。
<2-3>利用人FEX-2单克隆抗体，测定人脾组织及L/FEX-2细胞的FEX-2蛋白质的表达通过蛋白质印迹分析，测定上述实施例<2-2>制备的人FEX-2的单克隆抗体5G3能否检出人脾组织表达的FEX-2蛋白质。进一步地，通过蛋白质印迹分析测定，是否人FEX-2蛋白质在实施例<1-2>的L/FEX-2细胞内进行表达。使用L/Mock细胞作为对照。
首先，在0.5mg人脾组织中添加5ml细胞溶解缓冲液，用组织匀化机(tissue homogenizer)匀化所得混合物，然后在冰上放置1小时，获得细胞溶解物。进一步地，用PBS多次洗涤L/FEX-2细胞和对照L/Mock细胞，添加细胞溶解缓冲液使细胞溶解，在4℃下12,000rpm离心分离上述细胞溶解物10分钟，获得含有可溶解的蛋白质的上清液。然后，为了定量分析蛋白质的浓度，将BSA作为定量基准蛋白质，进行考马斯亮兰分析(Bradfordassay；BioRad，Hercules，CA)。将从上述制备的脾组织、L/FEX-2细胞及L/Mock提取的蛋白质试样30μg，在含有6％SDS的聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。利用电泳将凝胶上的蛋白质移至硝酸纤维素膜上，然后使该蛋白质与5％脱脂乳溶液反应1小时，阻止非特异蛋白的结合。然后，用TBS-T(50mMTris-HCl，pH7.6，150mM NaCl，0.1％Tween 20)溶液稀释抗FEX-2单克隆抗体(5G3)，在冷却状态下，使其与硝酸纤维素膜结合至少16小时。反应完成后，用TBS-T溶液将膜洗涤3次。然后，进一步添加结合HRP的2次抗体(结合HRP的抗小鼠IgG；Santa Cruz Co.，CA，USA)，于常温下使其进行1小时结合反应。将膜洗涤3次，向膜添加1ml ECL(化学发光物质)，使抗原-抗体发生反应的部位可视，将该部分暴露在X射线下。
试验结果是，在人脾细胞的情形下，能检出约270kDa及约200kDa大小的带，在L/FEX-2中也可检出相同大小的带(图2)。从上述试验结果，能够确认人FEX-2的单克隆抗体，特异性地与脾组织及L/FEX-2细胞内的FEX-2进行反应。
实施例3FEX-2在L/FEX-2细胞表面上表达的测定<3-1>FACS分析为了确认FEX-2是否在上述实施例<1-2>的L/FEX-2细胞的表面上表达，将实施例<2-3>制备的FEX-2特异性人单克隆抗体(5G3)进行FACS分析。
用含有0.25％胰蛋白酶及0.05％EDTA的PBS缓冲液处理培养至汇合的L/FEX-2细胞板，从板表面除去细胞。用PBS缓冲液洗涤2次细胞后，再悬浮于PBS缓冲液中。在细胞悬浮液中添加抗-FEX-2单克隆抗体(5G3)，在4℃下培养1小时。然后，向细胞培养液中添加10μg/ml的结合FITC的二抗，即兔抗小鼠IgG抗体(Santa Cruz Biotechnology，Inc.，CA)，在4℃下进一步培养细胞1小时，利用安装有5瓦特激光的流式细胞仪(flowcytometer FACS Calibur system，Becton Dickinson，San Jose，CA)，在488nm下进行分析。使用小鼠免疫球蛋白代替上述抗-FEX-2单克隆抗体作为对照。
试验结果是，能够确认FEX-2在L/FEX-2细胞的表面上进行表达。另一方面，确认FEX-2没有在L/Mock细胞表面上进行表达(图3)。
<3-2>表面生物素化分析(surface biotinylaion assay)为了确定FEX-2是否在L/FEX-2细胞表面上表达，进行表面生物素化分析。用冰冷却的磷酸缓冲液(pH8.0)洗涤3次上述实施例<1-2>的L/FEX-2细胞。接下来，将上述细胞悬浮于磷酸缓冲液，使浓度为2.5×107细胞/ml，向其中添加1mg硫代-NHS-LS-生物素(Pierce)，在室温下反应30分钟。对照中不添加硫代-NHS-LS-生物素。向上述反应混合物添加免疫沉淀缓冲液(含有50mM Tris-HCl、150mM NaCl、1％Triton X-100、1mM CaCl2、1mMMgCl2与蛋白质分解酶抑制剂混合物(Roche)，pH值为7.4)使细胞溶解，在4℃下以12,000rpm离心分离10分钟上述细胞溶解物，获得含有可溶解的蛋白质的上清液。为了减少与磁珠的非特异性反应，将上述细胞溶解物加入G蛋白珠(protein G beads)，于4℃下反应2小时后，除去磁珠。然后，将所得产物与结合了实施例<2-1>的FEX-2多克隆抗体的G蛋白琼脂糖凝胶基体在4℃下反应过夜，进行免疫沉淀。洗涤上述磁珠3次后，添加20μl试样缓冲液，并使其沸腾，然后使试样在含有6％SDS的聚丙烯酰胺凝胶上进行电泳。利用电泳使凝胶上的蛋白质转移至硝酸纤维素膜上。使移至膜上的蛋白质与5％的脱脂乳溶液反应1小时来阻止非特异性蛋白质的结合。然后，用TBS-T溶液(50mM Tris-HCl，pH7.6，150mM NaCl，0.1％Tween 20)稀释抗FEX-2抗体，然后在冷却状态下使抗体与硝酸纤维素膜结合至少16小时。反应完成后，用TBS-T溶液将膜洗涤3次。然后，添加结合HRP的二次抗体(结合HRP的抗兔-IgG抗体，Santa CruzCo.，CA，USA)，在常温下使结合反应1小时。再将膜洗涤3次，向膜添加1ml ECL(化学发光物质)将该部分暴露在X射线下，使抗原-抗体反应的部位可视。此外，使硝酸纤维素膜与结合HRP的链霉亲和素(streptavidin)，而非抗-FEX-2抗体，在常温下结合反应1小时，向膜添加1ml ECL，使抗原-抗体反应发生的部位可视，当所述部分暴露在X射线下。
试验结果是，没有被生物素处理过的对照中，通过FEX-2抗体免疫沉淀的FEX-2蛋白质没有被链霉亲和素检出，但被FEX-2抗体检出。另一方面，生物素处理过的实验组中，抗FEX-2抗体与链霉亲和素都能检出FEX-2蛋白质(图4)。
从上述试验结果可知，通过生物素处理使细胞表面上存在的FEX-2蛋白质发生生物素化，该生物素化后的产物，可通过结合FEX-2抗体的磁珠而被免疫沉淀，进而被抗FEX-2抗体及链霉亲和素检出。另一方面，对于没有被生物素处理的对照，由于FEX-2蛋白质没有发生生物素化，不能通过链霉亲和素检出。因此，可确认在L/FEX-2的细胞表面上存在FEX-2蛋白质。
实施例4通过免疫染色法鉴定表达FEX-2的组织为了调查FEX-2的表达方式，使用实施例<2-1>制备的人FEX-2多克隆抗体对人的肝、脾、胰、心脏、睾丸、肺、淋巴结、卵巢、皮肤及肾上腺等的20多种组织(庆北大学校病理学室获得)实施免疫染色分析。
首先，将各组织浸入3.7％低聚甲醛(paraformaldehyde)中，在室温下过夜固化，以5μm间隔切断组织。然后，分别在二甲苯与乙醇中浸渍5分钟左右，为了抑制内在的过氧化物酶的活性，用0.5％过氧化氢处理10分钟。为了阻止非特异性反应，将各组织的片段在50mM NH4Cl中放置30分钟后，添加封闭溶液(1×PBS，1％BSA，0.05％皂甙及0.2％明胶)，使所得混合物在4℃下反应1小时。然后，在4℃下使处理的组织与上述人FEX-2多克隆抗体进行结合反应过夜。反应之后，洗涤组织3次，添加化学发光试剂，使抗原-抗体反应的发生部分可视。使用与抗原预培养的抗体作为对照。
试验结果是，能够观察到FEX-2蛋白质在人脾静窦中(venous sinus)表达(图5)。进一步地，显示出了FEX-2蛋白质也在淋巴结的上颌窦(maxillarysinus)与肝的窦状血管(sinusoid)中表达(其结果未图示)。由此，能够推定，FEX-2在窦状(sinusoidal)内皮细胞内表达，与血液内的细胞相互作用。
实施例5FEX-2与淋巴细胞的黏附活性检测为了调查FEX-2与淋巴细胞的黏附活性，利用Ficoll(Pharmacia Biotech)梯度离心分离法，从血管分离外周血液淋巴细胞(Johnson-Leger C.A.et al.，Blood，100，2479-2486，2002)。在含有DMEM培养基的12-孔板上培养实施例<1-2>中获得的L/FEX-2细胞与对照L/Mock细胞至细胞汇合(confluent)，向其中添加1×105个用DiI荧光色素(Molecular Probe)标记的淋巴细胞，在37℃下培养细胞30分钟。然后，用相同的培养基洗涤细胞3次，在HMMF(high magnification fields，×400)下任意选择10个位置，用光学显微镜观察，对黏附在L/FEX-2细胞上的淋巴细胞计数。
试验结果是，与对照L/Mock细胞相比，表达FEX-2的L/FEX-2细胞上黏附了大量的淋巴细胞(图6及图7)。
实施例6由FEX-2单克隆抗体促使的淋巴细胞与FEX-2黏附的抑制为了确认是否是FEX-2介导淋巴细胞与L/FEX-2细胞的黏附，评价FEX-2的特异性抗体是否抑制淋巴细胞与L/FEX-2细胞的黏附。
首先，在35mm板上培养上述实施例1的L/FEX-2细胞，并添加上述实施例<2-2>的FEX-2单克隆抗体(5G3)，在37℃下预培养30分钟。然后，向预培养细胞中添加用DiI荧光色素(Molecular Probe)标记的淋巴细胞，在37℃下培养30分钟，采用与上述实施例5相同的方法检测淋巴细胞是否与L/FEX-2黏附。作为对照，使用免疫球蛋白G代替FEX-2单克隆抗体。
试验结果是，能够确认FEX-2单克隆抗体能够特异性地抑制淋巴细胞在L/FEX-2细胞表面上的黏附(图8)。
实施例7整联蛋白受体的鉴定<7-1>2价阳离子对淋巴细胞与FEX-2的黏附的影响介导淋巴细胞与细胞黏附的整联蛋白受体需要2价阳离子。基于该事实，测定淋巴细胞与FEX-2黏附的活性是否受到二价阳离子(Mn2+、Mg2+及Ca2+)的影响。为此，在没有钙与镁的HBSS(Hank′s Balanced Salt Solution)中分别添加2mM的CaCl2、MgCl2及MnCl2。将含有2价阳离子的溶液添加至实施例5的L/FEX-2与淋巴细胞的培养液中。经过培养后，用与实施例5相同的方法，对L/FEX-2细胞上黏附的淋巴细胞计数。
试验结果是，Mn2+的添加能够最大程度地促进淋巴细胞在L/FEX-2上的黏附，Mg2+的添加也呈现了第二大程度地促进作用。虽然Ca2+也能促进淋巴细胞的黏附活性，但是，与对照相比没有显示出显著差异(图9)。
<7-2>参与淋巴细胞与FEX-2黏附的整联蛋白受体的鉴定为了鉴定参与淋巴细胞与FEX-2黏附的整联蛋白受体，使用多种抗体进行细胞黏附抑制检测。
在37℃下，于1ml培养溶液中，使各种整联蛋白-特异性单克隆抗体(Chemicon，International Inc，Temecula，CA)(分别为10μg/ml)分别与3×105细胞/ml的淋巴细胞预培养30分钟。本实施例使用的抗体有P5D2(β1的抗体)、25.3(αL的抗体)、Bear 1(αM的抗体)、3.9(αX的抗体)。作为对照，用正常鼠的免疫球蛋白代替上述整联蛋白-特异性单克隆抗体进行预培养。然后，在培养的L/FEX-2细胞中，分别添加上述与抗体一起预培养的淋巴细胞，在37℃下继续培养30分钟。以与上述实施例5相同的方法测定所黏附的细胞。
试验结果是，淋巴细胞与FEX-2的黏附受到αL整联蛋白及αM整联蛋白的抗体特异性地抑制，相反，不被αX、β1整联蛋白的抗体抑制(图10)。
因此，能够确认淋巴细胞与具有FEX-2蛋白质的细胞的黏附受到αLβ2整联蛋白与αMβ2整联蛋白的介导。
实施例8FEX-2蛋白质的缺失突变重组体对淋巴细胞与FEX-2黏附的抑制<8-1>由FEX-2的4个小单位体导致的对淋巴细胞与FEX-2的黏附的抑制将FEX-2的细胞外部分划分成4个小单位体Nus-U1、Nus-U2、Nus-U3及Nus-U4(图11)。上述Nus-U1、Nus-U2及Nus-U3具有极类似的结构域结构。具体地说，上述Nus-U1、Nus-U2及Nus-U3具有1个EGF样重复结构域与2个fas-1结构域。Nus-U4具有一个EGF样重复结构域、一个fas-1结构域及一个X-连接结构域。
为了制备重组蛋白质Nus-U1、Nus-U2、Nus-U3及Nus-U4，以pcDNA-fex2DNA作为模板，利用下述引物(序列号82至序列号89)(表4)进行PCR扩增，获得分别编码66-655、691-1268、1303-1883及1913-2449氨基酸的cDNA片段。PCR反应条件为，在95℃下反应2分钟；并进行25个94℃下反应30秒、60℃下反应30秒和72℃下反应30秒的循环。分别以限制酶BamHI(TaKaRa)及XhoI(TaKaRa)酶切上述各扩增产物，然后插入到pET-43.1a载体(Novage)的相同限制酶的位点处。将上述制备的表达载体命名为“pET-U1”、“pET-U2”、“pET-U3”及“pET-U4”。以与实施例<2-1>相同的方法将上述表达载体转化至大肠杆菌后，诱使蛋白质表达，通过分离及纯化，得到蛋白质Nus-U1、Nus-U2、Nus-U3及Nus-U4。
表4制备Nus-U1、Nus-U2、Nus-U3及Nus-U4的cDNA的引物

为了确定上述重组蛋白质Nus-U1、Nus-U2、Nus-U3及Nus-U4是否抑制淋巴细胞与FEX-2的黏附，在用DiI荧光色素标记的淋巴细胞中，分别添加10μM上述重组蛋白质Nus-U1、Nus-U2、Nus-U3及Nus-U4，在37℃下预培养30分钟。然后，在表达FEX-2的L/FEX-2细胞中添加预培养的淋巴细胞，在37℃下培养30分钟。以与上述实施例5相同的方法检测淋巴细胞在L/FEX-2上的黏附。使用Nus蛋白质作为对照。
试验结果是，淋巴细胞与重组蛋白质Nus-U1、Nus-U2、Nus-U3及Nus-U4的预培养明显地抑制了淋巴细胞与FEX-2的黏附(图12)。
<8-2>重组蛋白质Nus-EGF3、Nus-Fas5及Nus-Fas6导致的对淋巴细胞与FEX-2黏附的抑制将上述实施例<8-1>的小单位体中的Nus-U3进一步划分为Nus-EGF3、Nus-Fas5及Nus-Fas6，并检测这些重组蛋白质对淋巴细胞与FEX-2黏附的影响。Nus-EGF3是含有FEX-2蛋白质中的第三EGF样重复结构域的多肽，Nus-Fas5及Nus-Fas6分别是含有第五fas-1结构域及第六fas-1结构域的多肽(图13)。
为了制备上述FEX-2蛋白质的缺失突变体Nus-EGF3、Nus-Fas5及Nus-Fas6，以上述实施例<1-1>的pcDNA-FEX2为模板，使用下述引物(序列号90至序列号95)(表5)进行PCR扩增，获得编码FEX-2蛋白质的1301-1596、1631-1727及1778-1883氨基酸的cDNA各片段。PCR反应条件为，在95℃下反应2分钟，以及25个在94℃下反应30秒、在60℃下反应30秒和在72℃下反应30秒的循环。分别以限制酶BamHI(TaKaRa)及XhoI(TaKaRa)酶切上述扩增产物，然后插入到pET-43.1a载体(Novagen)的相同限制酶的位点处。将上述制备的表达载体分别命名为“pET-EGF3”、“pET-Fas5”及“pET-Fas6”，用与上述实施例<2-1>相同的方法，用表达载体转化大肠杆菌，诱使蛋白质的表达。分离并纯化蛋白质，分别制备得到重组蛋白质Nus-EGF3、Nus-Fas5及Nus-Fas6。
表5制备Nus-EGF3、Nus-Fas5及Nus-Fas6的cDNA的引物

为了测定重组蛋白质Nus-EGF3、Nus-Fas5及Nus-Fas6是否抑制淋巴细胞的黏附，在DiI荧光色素标记的淋巴细胞中分别添加10μM上述重组蛋白质Nus-U3、Nus-EGF3、Nus-Fas5及Nus-Fas6，在37℃下预培养30分钟。然后，在表达FEX-2的L/FEX-2细胞中添加预培养的淋巴细胞，在37℃下培养30分钟，用与上述实施例5相同的方法检测淋巴细胞与L/FEX-2的黏附。使用Nus蛋白质作为对照。
试验结果是，含有fas-1结构域的Nus-Fas5及Nus-Fas6多肽明显地抑制了淋巴细胞的黏附。然而，含有EGF样结构域的重组蛋白质对淋巴细胞的黏附几乎不产生影响(图14)。
实施例9含有fas-1结构域的多肽的浓度对淋巴细胞黏附的抑制用与上述实施例8相同的方法，检测Nus-U3、Nus-EGF3及Nus-Fas5对淋巴细胞黏附的抑制程度，其中所述各蛋白的浓度是0.1、1、10μM的可变浓度。
试验结果是，随着含有fas-1结构域的重组蛋白质的浓度增加，淋巴细胞的黏附也增加。另一方面，随着含有EGF样结构域的重组蛋白质浓度的增加，淋巴细胞的黏附也略微增加，但是影响不大(图15)。
实施例10由含有fas-1结构域的多种多肽诱发的淋巴细胞与FEX-2黏附的抑制<10-1>FEX-2蛋白质内的fas-1结构域诱发的淋巴细胞与FEX-2黏附的抑制检测FEX-2蛋白质内含有的全部fas-1结构域对淋巴细胞与FEX-2黏附的抑制活性。
为了制备由上述FEX-2蛋白质内含有的全部fas-1结构域得到的重组蛋白质，以pcDNA-Fex2 DNA为模板，通过使用下述引物(序列号96至序列号105)(表6)进行PCR反应，获得分别编码FEX-2氨基酸406位-508位、554位-655位、1030位-1130位、1173位-1268位、及2235位-2449位的cDNA的片段。PCR反应条件为，在95℃下反应2分钟；以及25个94℃下反应30秒、60℃下反应30秒和72℃下反应30秒的循环。除第7个fas-1结构域之外，上述扩增的FEX-2蛋白质的fas-1结构域分别用限制酶BamHI(TaKaRa)及XhoI(TaKaRa)酶切，并插入到pET-43.1a载体(Novagen)的相同限制酶的位点处。用限制酶BamHI(TaKaRa)及EcoRI(TaKaRa)酶切上述扩增的FEX-2蛋白质的第7个fas-1结构域，并插入到pET-43.1a载体(Novagen)的相同限制酶的位点处。将上述制备的表达载体分别命名为“pET-Fas1”、“pET-Fas2”、“pET-Fas3”、“pET-Fas4”及“pET-Fas7”。以与上述实施例<2-1>相同的方法转化大肠杆菌后，诱使蛋白质的表达，分别制备重组蛋白质Nus-Fas1、Nus-Fas2、Nus-Fas3、Nus-Fas4及Nus-Fas7。
表6 FEX-2蛋白质内的fas-1结构域的cDNA制备中使用的引物

用与实施例<8-2>相同的方法检测上述制备的Nus-Fas1、Nus-Fas2、Nus-Fas3、Nus-Fas4及Nus-Fas7和上述实施例<8-2>中制备的Nus-Fas5及Nus-Fas6，是否抑制淋巴细胞与FEX-2的黏附。
试验结果是，含有FEX-2内存在的全部fas-1结构域的重组蛋白质都抑制淋巴细胞的黏附(图16)。
<10-2>结核分支杆菌蛋白质中的fas-1结构域对淋巴细胞与FEX-2黏附的抑制作用在本实施例中，检测了结核分支杆菌蛋白质mpt83与mpt70内的fas-1结构域是否抑制淋巴细胞与FEX-2的黏附。为此，首先，以结核分支杆菌(M.Tuberculosis)的RNA作为模板，使用下述引物(序列号106至序列号109)(表7)，进行RT-PCR反应，由此获得编码mpt70蛋白质的130-256位氨基酸的cDNA片段以及编码mpt83蛋白质的123-218位氨基酸的cDNA片段。按照制备者使用手册的指示，使用Trizol(Invitrogen)从上述结核分支杆菌提取RNA。PCR反应条件为，在95℃下反应2分钟，以及25个94℃下反应30秒、60℃下反应30秒和72℃下反应30秒的循环。用限制酶BamHI(TaKaRa)与XhoI酶切上述扩增的mpt70蛋白质及mpt83蛋白质的fas-1结构域，并插入到pET-28a载体(Novagen)的相同限制酶的位点处。将上述制备的表达载体分别命名为“pET-mpt70”及“pET-mpt83”，以与上述实施例<2-1>相同的方法转化大肠杆菌后，诱使蛋白质表达，经分离与纯化后，分别制成重组蛋白质Nus-mpt70及Nus-mpt83。
表7结核分支杆菌蛋白质内的fas-1结构域的cDNA制备中使用的引物

用与实施例<8-2>相同的方法检测上述制备的Nus-mpt70与Nus-mpt83是否抑制淋巴细胞与FEX-2的黏附。此时，Nus-mpt70与Nus-mpt83各蛋白的添加浓度为0.1，1和10μM。
试验结果是，含有结核分支杆菌蛋白质mpt83与mpt70内的fas-1结构域的多肽能够抑制淋巴细胞与FEX-2的黏附。此外，随着上述多肽的浓度的增加，淋巴细胞的黏附也增加(图17)。
适用例1 关节炎关节炎是由自身免疫异常导致。随着病情的发展，关节间的滑液腔中产生的慢性炎症导致软骨破坏。关节炎有感染性关节炎、退行性关节炎、风湿性关节炎、股骨头缺血性坏死、强直性脊椎炎、先天性畸形的关节炎等多种，但是不管什么原因，病情发展的过程中都在滑液腔中发生慢性炎症。而且，已报道根据种类不同，可发生原发性或继发性炎症反应，由此破坏软骨，从而在病情发展中起到重要的作用。在此时，淋巴细胞通过与内皮细胞的相互作用，进入到关节内是其重要的病理机理(Haskard D.O.Curr.Opin.Rheumatol.7229-34，1995)。关节炎治疗中，优先选择抑制痛症及炎症，最大限度地延迟关节或肌肉等的破坏速度，使功能消失最小化。因此，本发明的药物组合物在关节炎的预防与治疗方面是极其有效的。
适用例2 糖尿性眼病糖尿性眼病，是招致失明的糖尿病的主要并发症之一，其与血糖调节程度无关，糖尿病患病时间变长，就会发生糖尿性眼病。最近随着糖尿病的治疗方法的提高，在延长糖尿病患者的寿命的同时，有增加并发糖尿性视网膜病的趋势。因此，糖尿病性视网膜病，是西欧当然也是韩国的成人失明的最大原因。已报道糖尿性视网膜病患者的细胞黏附分子增加，这些细胞黏附分子引起白细胞淤滞症(leukostasis)、无灌注(non-perfusion)、血管漏出(vascularleakage)及内皮细胞损伤等(Miyamoto K.Proc.Natl.Acad.Sci.USA.9610836-41，1999；Joussen A.M.Am.J.Pathol.158147-52，2001；Barouch F.C.Invest Ophthalmol.Vis.Sci.41(5)1153-8，2000)。特别地，报道了由淋巴细胞的黏附诱导的炎症反应在糖尿性眼病如糖尿病性视网膜病中起了重要作用(Joussen A.M.FASEB J.181450-1452，2004)。因此，本发明的药物组合物在糖尿病性眼病预防及治疗方面是极其有效的。
适用例3 炎症炎症，是具有血管的组织对局部损伤的反应，虽然其产生原因有感染、外伤等多种原因，但是，其显示出了与原因以及反应组织的差异无关的、几乎一样的变化。该变化包括血流的增加、血管壁的透过性增加、淋巴细胞的浸润。细胞黏附分子参与了该全部的变化(Jackson，J.R.et al.，FASEB，J.11457-465，1997)。炎症，是对损伤进行修复的机理，而不是有害的反应。但是过度或不当的炎性反应如自身免疫，会招致组织的损伤与变形。在调节上述的过度或不当的炎症反应中，本发明的用于抑制炎症性疾病的组合物是有效的。
工业实用性如上所述，本发明的预防或治疗炎症性疾病的方法及药物组合物，通过抑制FEX-2多肽与淋巴细胞黏附，有抑制淋巴细胞在内皮细胞上黏附从而能够预防或治疗炎症性疾病的効果。进一步地，本发明的筛选方法，通过确认待检试剂是否抑制淋巴细胞与FEX-2多肽的黏附活性，能够筛选淋巴细胞与内皮细胞黏附抑制剂或炎症性疾病的治疗剂。
国际表格[布达佩斯条约国际承认的用于专利程序的微生物保藏]原始保藏物受理通知书依据由本页下方证明的国际保藏当局规则7.1签署受文者(请求保藏人)名称金仁山地址韩国 大邱广域市

序列表<110>庆北大学校产学协力团(Kyungpook National University Industry-Academic Cooperation Foundation)<120>用于预防或治疗炎症性疾病的方法及药物组合物(METHOD ANDPHARMACEUTICAL COMPOSITION FOR PREVENTING ORTREATING DISEASESASSOCIATED WITH INFLAMMATION)<160>109<170>KopatentIn 1.71<210>1<211>2551<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>肽(PEPTIDE)<222>(1)..(2551)<223>人类(human) FEX-2<400>1Met Met Leu Gln His Leu Val Ile Phe Cys Leu Gly Leu Val Val Gln1 5 10 15Asn Phe Cys Ser Pro Ala Glu Thr Thr Gly Gln Ala Arg Arg Cys Asp20 25 30Arg Lys Ser Leu Leu Thr Ile Arg Thr Glu Cys Arg Ser Cys Ala Leu35 40 45Asn Leu Gly Val Lys Cys Pro Asp Gly Tyr Thr Met Ile Thr Ser Gly50 55 60Ser Val Gly Val Arg Asp Cys Arg Tyr Thr Phe Glu Val Arg Thr Tyr65 70 75 80Ser Leu Ser Leu Pro Gly Cys Arg His Ile Cys Arg Lys Asp Tyr Leu85 90 95
Gln Pro Arg Cys Cys Pro Gly Arg Trp Gly Pro Asp Cys Ile Glu Cys100 105 110Pro Gly Gly Ala Gly Ser Pro Cys Asn Gly Arg Gly Ser Cys Ala Glu115 120 125Gly Met Glu Gly Asn Gly Thr Cys Ser Cys Gln Glu Gly Phe Gly Gly130 135 140Thr Ala Cys Glu Thr Cys Ala Asp Asp Asn Leu Phe Gly Pro Ser Cys145 150 155 160Ser Ser Val Cys Asn Cys Val His Gly Val Cys Asn Ser Gly Leu Asp165 170 175Gly Asp Gly Thr Cys Glu Cys Tyr Ser Ala Tyr Thr Gly Pro Lys Cys180 185 190Asp Lys Pro Ile Pro Glu Cys Ala Ala Leu Leu Cys Pro Glu Asn Ser195 200 205Arg Cys Ser Pro Ser Thr Glu Asp Glu Asn Lys Leu Glu Cys Lys Cys210 215 220Leu Pro Asn Tyr Arg Gly Asp Gly Lys Tyr Cys Asp Pro Ile Asn Pro225230 235 240Cys Leu Arg Lys Ile Cys His Pro His Ala His Cys Thr Tyr Leu Gly245 250 255Pro Asn Arg His Ser Cys Thr Cys Gln Glu Gly Tyr Arg Gly Asp Gly260 265 270Gln Val Cys Leu Pro Val Asp Pro Cys Gln Ile Asn Phe Gly Asn Cys275 280 285Pro Thr Lys Ser Thr Val Cys Lys Tyr Asp Gly Pro Gly Gln Ser His290 295 300Cys Glu Cys Lys Glu His Tyr Gln Asn Phe Val Pro Gly Val Gly Cys305 310 315 320Ser Met Thr Asp Ile Cys Lys Ser Asp Asn Pro Cys His Arg Asn Ala325 330 335Asn Cys Thr Thr Val Ala Pro Gly Arg Thr Glu Cys Ile Cys Gln Lys340 345 350Gly Tyr Val Gly Asp Gly Leu Thr Cys Tyr Gly Asn Ile Met Glu Arg355 360 365Leu Arg Glu Leu Asn Thr Glu Pro Arg Gly Lys Trp Gln Gly Arg Leu370375 380Thr SerPhe Ile Ser Leu Leu Asp Lys Ala Tyr Ala Trp Pro Leu Ser
385 390 395 400Lys Leu Gly Pro Phe Thr Val Leu Leu Pro Thr Asp Lys Gly Leu Lys405 410 415Gly Phe Asn Val Asn Glu Leu Leu Val Asp Asn Lys Ala Ala Gln Tyr420 425 430Phe Val Lys Leu His Ile Ile Ala Gly Gln Met Asn Ile Glu Tyr Met435 440 445Asn Asn Thr Asp Met Phe Tyr Thr Leu Thr Gly Lys Ser Gly Glu Ile450455 460Phe Asn Ser Asp Lys Asp Asn Gln Ile Lys Leu Lys Leu His Gly Gly465 470 475 480Lys Lys Lys Val Lys Ile Ile Gln Gly Asp Ile Ile Ala Ser Asn Gly485 490495Leu Leu His Ile Leu Asp Arg Ala Met Asp Lys Leu Glu Pro Thr Phe500 505 510Glu Ser Asn Asn Glu Gln Thr Ile Met Thr Met Leu Gln Pro Arg Tyr515 520 525Ser Lys Phe Arg Ser Leu Leu Glu Glu Thr Asn Leu Gly His Ala Leu530 535 540Asp Glu Asp Gly Val Gly Gly Pro Tyr Thr Ile Phe Val Pro Asn Asn545 550 555 560Glu Ala Leu Asn Asn Met Lys Asp Gly Thr Leu Asp Tyr Leu Leu Ser565570 575Pro Glu Gly Ser Arg Lys Leu Leu Glu Leu Val Arg Tyr His Ile Val580 585 590Pro Phe Thr Gln Leu Glu Val Ala Thr Leu Ile Ser Thr Pro His Ile595 600 605Arg Ser Met Ala Asn Gln Leu Ile Gln Phe Asn Thr Thr Asp Asn Gly610 615 620Gln Ile Leu Ala Asn Asp Val Ala Met Glu Glu Ile Glu Ile Thr Ala625 630 635 640Lys Asn Gly Arg Ile Tyr Thr Leu Thr Gly Val Leu Ile Pro Pro Ser645 650 655Ile Val Pro Ile Leu Pro His Arg Cys Asp Glu Thr Lys Arg Glu Met660 665 670Lys Leu Gly Thr Cys Val Ser Cys Ser Leu Val Tyr Trp Ser Arg Cys
675 680 685Pro Ala Asn Ser Glu Pro Thr Ala Leu Phe Thr His Arg Cys Val Tyr690 695 700Ser Gly Arg Phe Gly Ser Leu Lys Ser Gly Cys Ala Arg Tyr Cys Asn705 710 715 720Ala Thr Val Lys Ile Pro Lys Cys Cys Lys Gly Phe Tyr Gly Pro Asp725 730 735Cys Asn Gln Cys Pro Gly Gly Phe Ser Asn Pro Cys Ser Gly Asn Gly740 745750Gln Cys Ala AsP Ser Leu Gly Gly Asn Gly Thr Cys Ile Cys Glu Glu755 760 765Gly Phe Gln Gly Ser Gln Cys Gln Phe Cys Ser Asp Pro Asn Lys Tyr770 775 780Gly Pro Arg Cys Asn Lys Lys Cys Leu Cys Val His Gly Thr Cys Asn785 790795 800Asn Arg Ile Asp Ser Asp Gly Ala Cys Leu Thr Gly Thr Cys Arg Asp805 810 815Gly Ser Ala Gly Arg Leu Cys Asp Lys Gln Thr Ser Ala Cys Gly Pro820 825 830Tyr Val Gln Phe Cys His Ile His Ala Thr Cys Glu Tyr Ser Asn Gly835 840 845Thr Ala Ser Cys Ile Cys Lys Ala Gly Tyr Glu Gly Asp Gly Thr Leu850 855 860Cys Ser Glu Met Asp Pro Cys Thr Gly Leu Thr Pro Gly Gly Cys Ser865 870 875 880Arg Asn Ala Glu Cys Ile Lys Thr Gly Thr Gly Thr His Thr Cys Val885 890 895Cys Gln Gln Gly Trp Thr Gly Asn Gly Arg Asp Cys Ser Glu Ile Asn900 905 910Asn Cys Leu Leu Pro Ser Ala Gly Gly Cys His Asp Asn Ala Ser Cys915 920 925Leu Tyr Val Gly Pro Gly Gln Asn Glu Cys Glu Cys Lys Lys Gly Phe930 935 940Arg Gly Asn Gly Ile Asp Cys Glu Pro Ile Thr Ser Cys Leu Glu Gln945 950 955 960Thr Gly Lys Cys His Pro Leu Ala Ser Cys Gln Ser Thr Ser Ser Gly965 970 975
Val Trp Ser Cys Val Cys Gln Glu Gly Tyr Glu Gly Asp Gly Phe Leu980 985 990Cys Tyr Gly Asn Ala Ala Val Glu Leu Ser Phe Leu Ser Glu Ala Ala995 1000 1005Ile Phe Asn Arg Trp Ile Asn Asn Ala Ser Leu Gln Pro Thr Leu Ser101010151020Ala Thr Ser Asn Leu Thr Val Leu Val Pro Ser Gln Gln Ala Thr Glu1025 1030 1035 1040Asp Met Asp Gln Asp Glu Lys Ser Phe Trp Leu Ser Gln Ser Asn Ile10451050 1055Pro Ala Leu Ile Lys Tyr His Met Leu Leu Gly Thr Tyr Arg Val Ala1060 10651070Asp Leu Gln Thr Leu Ser Ser Ser Asp Met Leu Ala Thr Ser Leu Gln1075 10801085Gly Asn Phe Leu His Leu Ala Lys Val Asp Gly Asn Ile Thr Ile Glu10901095 1100Gly Ala Ser Ile Val Asp Gly Asp Asn Ala Ala Thr Asn Gly Val Ile1105 11101115 1120His Ile Ile Asn Lys Val Leu Val Pro Gln Arg Arg Leu Thr Gly Ser112511301135Leu Pro Asn Leu Leu Met Arg Leu Glu Gln Met Pro Asp Tyr Ser Ile114011451150Phe Arg Gly Tyr Ile Ile Gln Tyr Asn Leu Ala Asn Ala Ile Glu Ala1155 11601165Ala Asp Ala Tyr Thr Val Phe Ala Pro Asn Asn Asn Ala Ile Glu Asn1170 11751180Tyr Ile Arg Glu Lys Lys Val Leu Ser Leu Glu Glu Asp Val Leu Arg118511901195 1200Tyr His Val Val Leu Glu Glu Lys Leu Leu Lys Asn Asp Leu His Asn12051210 1215Gly Met His Arg Glu Thr Met Leu Gly Phe Ser Tyr Phe Leu Ser Phe122012251230Phe Leu His Asn Asp Gln Leu Tyr Val Asn Glu Ala Pro Ile Asn Tyr12351240 1245Thr Asn Val Ala Thr Asp Lys Gly Val Ile His Gly Leu Gly Lys Val12501255 1260Leu Glu Ile Gln Lys Asn Arg Cys Asp Asn Asn Asp Thr Thr Ile Ile
1265 1270 1275 1280Arg Gly Arg Cys Arg Thr Cys Ser Ser Glu Leu Thr Cys Pro Phe Gly128512901295Thr Lys Ser Leu Gly Asn Glu Lys Arg Arg Cys Ile Tyr Thr Ser Tyr13001305 1310Phe Met Gly Arg Arg Thr Leu Phe Ile Gly Cys Gln Pro Lys Cys Val13151320 1325Arg Thr Val Ile Thr Arg Glu Cys Cys Ala Gly Phe Phe Gly Pro Gln1330 1335 1340Cys Gln Pro Cys Pro Gly Asn Ala Gln Asn Val Cys Phe Gly Asn Gly1345 1350 13551360Ile Cys Leu Asp Gly Val Asn Gly Thr Gly Val Cys Glu Cys Gly Glu13651370 1375Gly Phe Ser Gly Thr Ala Cys Glu Thr Cys Thr Glu Gly Lys Tyr Gly13801385 1390Ile His Cys Asp Gln Ala Cys Ser Cys Val His Gly Arg Cys Asn Gln13951400 1405Gly Pro Leu Gly Asp Gly Ser Cys Asp Cys Asp Val Gly Trp Arg Gly141014151420Val His Cys Asp Asn Ala Thr Thr Glu Asp Asn Cys Asn Gly Thr Cys1425 143014351440His Thr Ser Ala Asn Cys Leu Thr Asn Ser Asp Gly Thr Ala Ser Cys1445 1450 1455Lys Cys Ala Ala Gly Phe Gln Gly Asn Gly Thr Ile Cys Thr Ala Ile1460 14651470Asn Ala Cys Glu Ile Ser Asn Gly Gly Cys Ser Ala Lys Ala Asp Cys1475 1480 1485Lys Arg Thr Thr Pro Gly Arg Arg Val Cys Thr Cys Lys Ala Gly Tyr149014951500Thr Gly Asp Gly Ile Val Cys Leu Glu Ile Asn Pro Cys Leu Glu Asn15051510 15151520His Gly Gly Cys Asp Lys Asn Ala Glu Cys Thr Gln Thr Gly Pro Asn15251530 1535Gln Ala Ala Cys Asn Cys Leu Pro Ala Tyr Thr Gly Asp Gly Lys Val154015451550Cys Thr Leu Ile Asn Val Cys Leu Thr Lys Asn Gly Gly Cys Ser Glu1555 1560 1565
Phe Ala Ile Cys Asn His Thr Gly Gln Val Glu Arg Thr Cys Thr Cys1570 1575 1580Lys Pro Asn Tyr Ile Gly Asp Gly Phe Thr Cys Arg Gly Ser Ile Tyr158515901595 1600Gln Glu Leu Pro Lys Asn Pro Lys Thr Ser Gln Tyr Phe Phe Gln Leu160516101615Gln Glu His Phe Val Lys Asp Leu Val Gly Pro Gly Pro Phe Thr Val16201625 1630Phe Ala Pro Leu Ser Ala Ala Phe Asp Glu Glu Ala Arg Val Lys Asp1635 1640 1645Trp Asp Lys Tyr Gly Leu Met Pro Gln Val Leu Arg Tyr His Val Val165016551660Ala Cys His Gln Leu Leu Leu Glu Asn Leu Lys Leu Ile Ser Asn Ala166516701675 1680Thr Ser Leu Gln Gly Glu Pro Ile Val Ile Ser Val Ser Gln Ser Thr1685 1690 1695Val Tyr Ile Asn Asn Lys Ala Lys Ile Ile Ser Ser Asp Ile Ile Ser17001705 1710Thr Asn Gly Ile Val His Ile Ile Asp Lys Leu Leu Ser Pro Lys Asn1715 1720 1725Leu Leu Ile Thr Pro Lys Asp Asn Ser Gly Arg Ile Leu Gln Asn Leu1730 17351740Thr Thr Leu Ala Thr Asn Asn Gly Tyr Ile Lys Phe Ser Asn Leu Ile1745 1750 17551760Gln Asp Ser Gly Leu Leu Ser Val Ile Thr Asp Pro Ile His Thr Pro1765 1770 1775Val Thr Leu Phe Trp Pro Thr Asp Gln Ala Leu His Ala Leu Pro Ala17801785 1790Glu Gln Gln Asp Phe Leu Phe Asn Gln Asp Asn Lys Asp Lys Leu Lys179518001805Glu Tyr Leu Lys Phe His Val Ile Arg Asp Ala Lys Val Leu Ala Val18101815 1820Asp Leu Pro Thr Ser Thr Ala Trp Lys Thr Leu Gln Gly Ser Glu Leu1825 18301835 1840Ser Val Lys Cys Gly Ala Gly Arg Asp Ile Gly Asp Leu Phe Leu Asn1845 18501855Gly Gln Thr Cys Arg Ile Val Gln Arg Glu Leu Leu Phe Asp Leu Gly
1860 1865 1870Val Ala Tyr Gly Ile Asp Cys Leu Leu Ile Asp Pro Thr Leu Gly Gly1875 1880 1885Arg Cys Asp Thr Phe Thr Thr Phe Asp Ala Ser Gly Glu Cys Gly Ser1890 18951900Cys Val Asn Thr Pro Ser Cys Pro Arg Trp Ser Lys Pro Lys Gly Val1905 19101915 1920Lys Gln Lys Cys Leu Tyr Asn Leu Pro Phe Lys Arg Asn Leu Glu Gly1925 19301935Cys Arg Glu Arg Cys Ser Leu Val Ile Gln Ile Pro Arg Cys Cys Lys19401945 1950Gly Tyr Phe Gly Arg Asp Cys Gln Ala Cys Pro Gly Gly Pro Asp Ala195519601965Pro Cys Asn Asn Arg Gly Val Cys Leu Asp Gln Tyr Ser Ala Thr Gly1970 19751980Glu Cys Lys Cys Asn Thr Gly Phe Asn Gly Thr Ala Cys Glu Met Cys1985 199019952000Trp Pro Gly Arg Phe Gly Pro Asp Cys Leu Pro Cys Gly Cys Ser Asp2005 20102015His Gly Gln Cys Asp Asp Gly Ile Thr Gly Ser Gly Gln Cys Leu Cys2020 2025 2030Glu Thr Gly Trp Thr Gly Pro Ser Cys Asp Thr Gln Ala Val Leu Pro203520402045Ala Val Cys Thr Pro Pro Cys Ser Ala His Ala Thr Cys Lys Glu Asn2050 2055 2060Asn Thr Cys Glu Cys Asn Leu Asp Tyr Glu Gly Asp Gly Ile Thr Cys2065 20702075 2080Thr Val Val Asp Phe Cys Lys Gln Asp Asn Gly Gly Cys Ala Lys Val208520902095Ala Arg Cys Ser Gln Lys Gly Thr Lys Val Ser Cys Ser Cys Gln Lys2100 21052110Gly Tyr Lys Gly Asp Gly His Ser Cys Thr Glu Ile Asp Pro Cys Ala2115 2120 2125Asp Gly Leu Asn Gly Gly Cys His Glu His Ala Thr Cys Lys Met Thr21302135 2140Gly Pro Gly Lys His Lys Cys Glu Cys Lys Ser His Tyr Val Gly Asp214521502155 2160
Gly Leu Asn Cys Glu Pro Glu Gln Leu Pro Ile Asp Arg Cys Leu Gln21652170 2175Asp Asn Gly Gln Cys His Ala Asp Ala Lys Cys Val Asp Leu His Phe218021852190Gln Asp Thr Thr Val Gly Val Phe His Leu Arg Ser Pro Leu Gly Gln2195 22002205Tyr Lys Leu Thr Phe Asp Lys Ala Arg Glu Ala Cys Ala Asn Glu Ala2210 2215 2220Ala Thr Met Ala Thr Tyr Asn Gln Leu Ser Tyr Ala Gln Lys Ala Lys2225 22302235 2240Tyr His Leu Cys Ser Ala Gly Trp Leu Glu Thr Gly Arg Val Ala Tyr2245 2250 2255Pro Thr Ala Phe Ala Ser Gln Asn Cys Gly Ser Gly Val Val Gly Ile22602265 2270Val Asp Tyr Gly Pro Arg Pro Asn Lys Ser Glu Met Trp Asp Val Phe227522802285Cys Tyr Arg Met Lys Asp Val Asn Cys Thr Cys Lys Val Gly Tyr Val2290 2295 2300Gly Asp Gly Phe Ser Cys Ser Gly Asn Leu Leu Gln Val Leu Met Ser2305 2310 2315 2320Phe Pro Ser Leu Thr Asn Phe Leu Thr Glu Val Leu Ala Tyr Ser Asn232523302335Ser Ser Ala Arg Gly Arg Ala Phe Leu Glu His Leu Thr Asp Leu Ser2340 23452350Ile Arg Gly Thr Leu Phe Val Pro Gln Asn Ser Gly Leu Gly Glu Asn23552360 2365Glu Thr Leu Ser Gly Arg Asp Ile Glu His His Leu Ala Asn Val Ser23702375 2380Met Phe Phe Tyr Asn Asp Leu Val Asn Gly Thr Thr Leu Gln Thr Arg2385 23902395 2400Leu Gly Ser Lys Leu Leu Ile Thr Ala Ser Gln Asp Pro Leu Gln Pro2405 24102415Thr Glu Thr Arg Phe Val Asp Gly Arg Ala Ile Leu Gln Trp Asp Ile24202425 2430Phe Ala Ser Asn Gly Ile Ile His Val Ile Ser Arg Pro Leu Lys Ala2435 2440 2445Pro Pro Ala Pro Val Thr Leu Thr His Thr Gly Leu Gly Ala Gly Ile
2450 2455 2460Phe Phe Ala Ile Ile Leu Val Thr Gly Ala Val Ala Leu Ala Ala Tyr2465 24702475 2480Ser Tyr Phe Arg Ile Asn Arg Arg Thr Ile Gly Phe Gln His Phe Glu24852490 2495Ser Glu Glu Asp Ile Asn Val Ala Ala Leu Gly Lys Gln Gln Pro Glu2500 25052510Asn Ile Ser Asn Pro Leu Tyr Glu Ser Thr Thr Ser Ala Pro Pro Glu2515 2520 2525Pro Ser Tyr Asp Pro Phe Thr Asp Ser Glu Glu Arg Gln Leu Glu Gly253025352540Asn Asp Pro Leu Arg Thr Leu2545 2550<210>2<211>103<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(103)<223>人类(human) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>2Thr Val Leu Leu Pro Thr Asp Lys Gly Leu Lys Gly Phe Asn Val Asn1 5 10 15Glu Leu Leu Val Asp Asn Lys Ala Ala Gln Tyr Phe Val Lys Leu His20 25 30Ile Ile Ala Gly Gln Met Asn Ile Glu Tyr Met Asn Asn Thr Asp Met35 40 45Phe Tyr Thr Leu Thr Gly Lys Ser Gly Glu Ile Phe Asn SerAsp Lys50 55 60Asp Asn Gln Ile Lys Leu Lys Leu His Gly Gly Lys Lys Lys Val Lys65 70 75 80
Ile Ile Gln Gly Asp Ile Ile Ala Ser Asn Gly Leu Leu His Ile Leu85 90 95Asp Arg Ala Met Asp Lys Leu100<210>3<211>102<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(102)<223>人类(human) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>3Thr Ile Phe Val Pro Asn Asn Glu Ala Leu Asn Asn Met Lys Asp Gly1 5 10 15Thr Leu Asp Tyr Leu Leu Ser Pro Glu Gly Ser Arg Lys Leu Leu Glu20 25 30Leu Val Arg Tyr His Ile Val Pro Phe Thr Gln Leu Glu Val Ala Thr3540 45Leu Ile Ser Thr Pro His Ile Arg Ser Met Ala Asn Gln Leu Ile Gln50 55 60Phe Asn Thr Thr Asp Asn Gly Gln Ile Leu Ala Asn Asp Val Ala Met65 70 75 80Glu Glu Ile Glu Ile Thr Ala Lys Asn Gly Arg Ile Tyr Thr Leu Thr85 90 95Gly Val Leu Ile Pro Pro100<210>4<211>101<212>PRT
<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(101)<223>人类(human) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>4Thr Val Leu Val Pro Ser Gln Gln Ala Thr Glu Asp Met Asp Gln Asp1 5 10 15Glu Lys Ser Phe Trp Leu Ser Gln Ser Asn Ile Pro Ala Leu Ile Lys20 25 30Tyr His Met Leu Leu Gly Thr Tyr Arg Val Ala Asp Leu Gln Thr Leu35 40 45Ser Ser Ser Asp Met Leu Ala Thr Ser Leu Gln Gly Asn Phe Leu His50 55 60Leu Ala Lys Val Asp Gly Asn Ile Thr Ile Glu Gly Ala Ser Ile Val65 70 7580Asp Gly Asp Asn Ala Ala Thr Asn Gly Val Ile His Ile Ile Asn Lys85 90 95Val Leu Val Pro Gln100<210>5<211>96<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(96)<223>人类(human) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>5
Thr Val Phe Ala Pro Asn Asn Asn Ala Ile Glu Asn Tyr Ile Arg Glu1 5 10 15Lys Lys Val Leu Ser Leu Glu Glu Asp Val Leu Arg Tyr His Val Val20 25 30Leu Glu Glu Lys Leu Leu Lys Asn Asp Leu His Asn Gly Met His Arg35 40 45Glu Thr Met Leu Gly Phe Ser Tyr Phe Leu Ser Phe Phe Leu His Asn50 55 60Asp Gln Leu Tyr Val Asn Glu Ala Pro Ile Asn Tyr Thr Asn Val Ala65 70 75 80Thr Asp Lys Gly Val Ile His Gly Leu Gly Lys Val Leu Glu Ile Gln8590 95<210>6<211>97<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(97)<223>人类(hunan) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>6Thr Val Phe Ala Pro Leu Ser Ala Ala Phe Asp Glu Glu Ala Arg Val1 5 10 15Lys Asp Trp Asp Lys Tyr Gly Leu Met Pro Gln Val Leu Arg Tyr His20 25 30Val Val Ala Cys His Gln Leu Leu Leu Glu Asn Leu Lys Leu Ile Ser35 40 45Asn Ala Thr Ser Leu Gln Gly Glu Pro Ile Val Ile Ser Val Ser Gln50 55 60Ser Thr Val Tyr Ile Asn Asn Lys Ala Lys Ile Ile Ser Ser Asp Ile
657075 80Ile Ser Thr Asn Gly Ile Val His Ile Ile Asp Lys Leu Leu Ser Pro85 90 95Lys<210>7<211>106<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(106)<223>人类(human) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>7Thr Leu Phe Trp Pro Thr Asp Gln Ala Leu His Ala Leu Pro Ala Glu1 5 10 15Gln Gln Asp Phe Leu Phe Asn Gln Asp Asn Lys Asp Lys Leu Lys Glu20 25 30Tyr Leu Lys Phe His Val Ile Arg Asp Ala Lys Val Leu Ala Val Asp35 40 45Leu Pro Thr Ser Thr Ala Trp Lys Thr Leu Gln Gly Ser Glu Leu Ser50 55 60Val Lys Cys Gly Ala Gly Arg Asp Ile Gly Asp Leu Phe Leu Asn Gly65 70 75 80Gln Thr Cys Arg Ile Val Gln Arg Glu Leu Leu Phe Asp Leu Gly Val85 90 95Ala Tyr Gly Ile Asp Cys Leu Leu Ile Asp100 105<210>8<211>94
<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(94)<223>人类(human) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>8Thr Leu Phe Val Pro Gln Asn Ser Gly Leu Gly Glu Asn Glu Thr Leu1 5 10 15Ser Gly Arg Asp Ile Glu His His Leu Ala Asn Val Ser Met Phe Phe2025 30Tyr Asn Asp Lell Val Asn Gly Thr Thr Leu Gln Thr Arg Leu Gly Ser35 40 45Lys Leu Leu Ile Thr Ala Ser Gln Asp Pro Leu Gln Pro Thr Glu Thr50 55 60Arg Phe Val Asp Gly Arg Ala Ile Leu Gln Trp Asp Ile Phe Ala Ser65 70 75 80Asn Gly Ile Ile His Val Ile Ser Arg Pro Leu Lys Ala Pro85 90<210>9<211>590<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>肽(PEPTIDE)<222>(1)..(590)<223>人类(human) FEX-2的第一单位体(Unit 1)<400>9Val Gly Val Arg Asp Cys Arg Tyr Thr Phe Glu Val Arg Thr Tyr Ser
1 5 10 15Leu Ser Leu Pro Gly Cys Arg His Ile Cys Arg Lys Asp Tyr Leu Gln20 25 30Pro Arg Cys Cys Pro Gly Arg Trp Gly Pro Asp Cys Ile Glu Cys Pro35 40 45Gly Gly Ala Gly Ser Pro Cys Asn Gly Arg Gly Ser Cys Ala Glu Gly50 55 60Met Glu Gly Asn Gly Thr Cys Ser Cys Gln Glu Gly Phe Gly Gly Thr65 70 75 80Ala Cys Glu Thr Cys Ala Asp Asp Asn Leu Phe Gly Pro Ser Cys Ser85 90 95Ser Val Cys Asn Cys Val His Gly Val Cys Asn Ser Gly Leu Asp Gly100 105 110Asp Gly Thr Cys Glu Cys Tyr Ser Ala Tyr Thr Gly Pro Lys Cys Asp115 120 125Lys Pro Ile Pro Glu Cys Ala Ala Leu Leu Cys Pro Glu Asn Ser Arg130 135 140Cys Ser Pro Ser Thr Glu Asp Glu Asn Lys Leu Glu Cys Lys Cys Leu145 150 155 160Pro Asn Tyr Arg Gly Asp Gly Lys Tyr Cys Asp Pro Ile Asn Pro Cys165 170 175Leu Arg Lys Ile Cys His Pro His Ala His Cys Thr Tyr Leu Gly Pro180 185 190Asn Arg His Ser Cys Thr Cys Gln Glu Gly Tyr Arg Gly Asp Gly Gln195 200 205Val Cys Leu Pro Val Asp Pro Cys Gln Ile Asn Phe Gly Asn Cys Pro210 215 220Thr Lys Ser Thr Val Cys Lys Tyr Asp Gly Pro Gly Gln Ser His Cys225 230 235 240Glu Cys Lys Glu His Tyr Gln Asn Phe Val Pro Gly Val Gly Cys Ser245 250 255Met Thr Asp Ile Cys Lys Ser Asp Asn Pro Cys His Arg Asn Ala Asn260 265 270Cys Thr Thr Val Ala Pro Gly Arg Thr Glu Cys Ile Cys Gln Lys Gly275 280 285Tyr Val Gly Asp Gly Leu Thr Cys Tyr Gly Asn Ile Met Glu Arg Leu290 295 300
Arg Glu Leu Asn Thr Glu Pro Arg Gly Lys Trp Gln Gly Arg Leu Thr305 310 315 320Ser Phe Ile Ser Leu Leu Asp Lys Ala Tyr Ala Trp Pro Leu Ser Lys325330 335Leu Gly Pro Phe Thr Val Leu Leu Pro Thr Asp Lys Gly Leu Lys Gly340 345 350Phe Asn Val Asn Glu Leu Leu Val Asp Asn Lys Ala Ala Gln Tyr Phe355 360 365Val Lys Leu His Ile Ile Ala Gly Gln Met Asn Ile Glu Tyr Met Asn370375 380Asn Thr Asp Met Phe Tyr Thr Leu Thr Gly Lys Ser Gly Glu Ile Phe385 390395 400Asn Ser Asp Lys Asp Asn Gln Ile Lys Leu Lys Leu His Gly Gly Lys405 410 415Lys Lys Val Lys Ile Ile Gln Gly Asp Ile Ile Ala Ser Asn Gly Leu420 425 430Leu His Ile Leu Asp Arg Ala Met Asp Lys Leu Glu Pro Thr Phe Glu435 440445Ser Asn Asn Glu Gln Thr Ile Met Thr Met Leu Gln Pro Arg Tyr Ser450 455 460Lys Phe Arg Ser Leu Leu Glu Glu Thr Asn Leu Gly His Ala Leu Asp465 470 475 480Glu Asp Gly Val Gly Gly Pro Tyr Thr Ile Phe Val Pro Asn Asn Glu485 490 495Ala Leu Asn Asn Met Lys Asp Gly Thr Leu Asp Tyr Leu Leu Ser Pro500505 510Glu Gly Ser Arg Lys Leu Leu Glu Leu Val Arg Tyr His Ile Val Pro515 520 525Phe Thr Gln Leu Glu Val Ala Thr Leu Ile Ser Thr Pro His Ile Arg530 535 540Ser Met Ala Asn Gln Leu Ile Gln Phe Asn Thr Thr Asp Asn Gly Gln545 550 555 560Ile Leu Ala Asn Asp Val Ala Met Glu Glu Ile Glu Ile Thr Ala Lys565 570575Asn Gly Arg Ile Tyr Thr Leu Thr Gly Val Leu Ile Pro Pro580 585 590
<210>10<211>578<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>肽(PEPTIDE)<222>(1)..(578)<223>人类(human) FEX2的第二单位体(Unit 2)<400>10Asn Ser Glu Pro Thr Ala Leu Phe Thr His Arg Cys Val Tyr Ser Gly1 5 10 15Arg Phe Gly Ser Leu Lys Ser Gly Cys Ala Arg Tyr Cys Asn Ala Thr20 25 30Val Lys Ile Pro Lys Cys Cys Lys Gly Phe Tyr Gly Pro Asp Cys Asn35 40 45Gln Cys Pro Gly Gly Phe Ser Asn Pro Cys Ser Gly Asn Gly Gln Cys50 55 60Ala Asp Ser Leu Gly Gly Asn Gly Thr Cys Ile Cys Glu Glu Gly Phe65 70 75 80Gln Gly Ser Gln Cys Gln Phe Cys Ser Asp Pro Asn Lys Tyr Gly Pro85 90 95Arg Cys Asn Lys Lys Cys Leu Cys Val His Gly Thr Cys Asn Asn Arg100 105 110Ile Asp Ser Asp Gly Ala Cys Leu Thr Gly Thr Cys Arg Asp Gly Ser115 120 125Ala Gly Arg Leu Cys Asp Lys Gln Thr Ser Ala Cys Gly Pro Tyr Val130 135 140Gln Phe Cys His Ile His Ala Thr Cys Glu Tyr Ser Asn Gly Thr Ala145 150 155 160Ser Cys Ile Cys Lys Ala Gly Tyr Glu Gly Asp Gly Thr Leu Cys Ser165 170 175
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<221>肽(PEPTIDE)<222>(1)..(581)<223>人类(human) FEX-2的第三单位体(Unit 3)<400>11Glu Lys Arg Arg Cys Ile Tyr Thr Ser Tyr Phe Met Gly Arg Arg Thr1 5 10 15Leu Phe Ile Gly Cys Gln Pro Lys Cys Val Arg Thr Val Ile Thr Arg20 25 30Glu Cys Cys Ala Gly Phe Phe Gly Pro Gln Cys Gln Pro Cys Pro Gly35 40 45Asn Ala Gln Asn Val Cys Phe Gly Asn Gly Ile Cys Leu Asp Gly Val
50 55 60Asn Gly Thr Gly Val Cys Glu Cys Gly Glu Gly Phe Ser Gly Thr Ala65 70 75 80Cys Glu Thr Cys Thr Glu Gly Lys Tyr Gly Ile His Cys Asp Gln Ala85 90 95Cys Ser Cys Val His Gly Arg Cys Asn Gln Gly Pro Leu Gly Asp Gly100 105 110Ser Cys Asp Cys Asp Val Gly Trp Arg Gly Val His Cys Asp Asn Ala115 120 125Thr Thr Glu Asp Asn Cys Asn Gly Thr Cys His Thr Ser Ala Asn Cys130135 140Leu Thr Asn Ser Asp Gly Thr Ala Ser Cys Lys Cys Ala Ala Gly Phe145 150 155 160Gln Gly Asn Gly Thr Ile Cys Thr Ala Ile Asn Ala Cys Glu Ile Ser165 170 175Asn Gly Gly Cys Ser Ala Lys Ala Asp Cys Lys Arg Thr Thr Pro Gly180 185 190Arg Arg Val Cys Thr Cys Lys Ala Gly Tyr Thr Gly Asp Gly Ile Val195 200 205Cys Leu Glu Ile Asn Pro Cys Leu Glu Asn His Gly Gly Cys Asp Lys210 215 220Asn Ala GluCys Thr Gln Thr Gly Pro Asn Gln Ala Ala Cys Asn Cys225 230 235 240Leu Pro Ala Tyr Thr Gly Asp Gly Lys Val Cys Thr Leu Ile Asn Val245 250 255Cys Leu Thr Lys Asn Gly Gly Cys Ser Glu Phe Ala Ile Cys Asn His260265270Thr Gly Gln Val Glu Arg Thr Cys Thr Cys Lys Pro Asn Tyr Ile Gly275 280 285Asp Gly Phe Thr Cys Arg Gly Ser Ile Tyr Gln Glu Leu Pro Lys Asn290295 300Pro Lys Thr Ser Gln Tyr Phe Phe Gln Leu Gln Glu His Phe Val Lys305 310 315 320Asp Leu Val Gly Pro Gly Pro Phe Thr Val Phe Ala Pro Leu Ser Ala325 330 335Ala Phe Asp Glu Glu Ala Arg Val Lys Asp Trp Asp Lys Tyr Gly Leu
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<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>肽(PEPTIDE)<222>(1)..(537)<223>人类(human) FEX-2的第四单位体(Unit 4)<400>12Arg Trp Ser Lys Pro Lys Gly Val Lys Gln Lys Cys Leu Tyr Asn Leu1 5 10 15Pro Phe Lys Arg Asn Leu Glu Gly Cys Arg Glu Arg Cys Ser Leu Val20 25 30Ile Gln Ile Pro Arg Cys Cys Lys Gly Tyr Phe Gly Arg Asp Cys Gln35 40 45Ala Cys Pro Gly Gly Pro Asp Ala Pro Cys Asn Asn Arg Gly Val Cys50 55 60Leu Asp Gln Tyr Ser Ala Thr Gly Glu Cys Lys Cys Asn Thr Gly Phe65 70 75 80Asn Gly Thr Ala Cys Glu Met Cys Trp Pro Gly Arg Phe Gly Pro Asp85 90 95Cys Leu Pro Cys Gly Cys Ser Asp His Gly Gln Cys Asp Asp Gly Ile100 105 110Thr Gly Ser Gly Gln Cys Leu Cys Glu Thr Gly Trp Thr Gly Pro Ser115 120 125Cys Asp Thr Gln Ala Val Leu Pro Ala Val Cys Thr Pro Pro Cys Ser130 135 140Ala His Ala Thr Cys Lys Glu Asn Asn Thr Cys Glu Cys Asn Leu Asp145 150155 160Tyr Glu Gly Asp Gly Ile Thr Cys Thr Val Val Asp Phe Cys Lys Gln165 170 175Asp Asn Gly Gly Cys Ala Lys Val Ala Arg Cys Ser Gln Lys Gly Thr180 185 190Lys Val Ser Cys Ser Cys Gln Lys Gly Tyr Lys Gly Asp Gly His Ser195 200 205Cys Thr Glu Ile Asp Pro Cys Ala Asp Gly Leu Asn Gly Gly Cys His
210 215 220Glu His Ala Thr Cys Lys Met Thr Gly Pro Gly Lys His Lys Cys Glu225 230 235 240Cys Lys Ser His Tyr Val Gly Asp Gly Leu Asn Cys Glu Pro Glu Gln245 250 255Leu Pro Ile Asp Arg Cys Leu Gln Asp Asn Gly Gln Cys His Ala Asp260265 270Ala Lys Cys Val Asp Leu His Phe Gln Asp Thr Thr Val Gly Val Phe275 280 285His Leu Arg Ser Pro Leu Gly Gln Tyr Lys Leu Thr Phe Asp Lys Ala290 295 300Arg Glu Ala Cys Ala Asn Glu Ala Ala Thr Met Ala Thr Tyr Asn Gln305 310 315 320Leu Ser Tyr Ala Gln Lys Ala Lys Tyr His Leu Cys Ser Ala Gly Trp325 330 335Leu Glu Thr Gly Arg Val Ala Tyr Pro Thr Ala Phe Ala Ser Gln Asn340 345 350Cys Gly Ser Gly Val Val Gly Ile Val Asp Tyr Gly Pro Arg Pro Asn355 360 365Lys Ser Glu Met Trp Asp Val Phe Cys Tyr Arg Met Lys Asp Val Asn370375 380Cys Thr Cys Lys Val Gly Tyr Val Gly Asp Gly Phe Ser Cys Ser Gly385 390 395 400Asn Leu Leu Gln Val Leu Met Ser Phe Pro Ser Leu Thr A8n Phe Leu405 410 415Thr Glu Val Leu Ala Tyr Ser Asn Ser Ser Ala Arg Gly Arg Ala Phe420 425 430Leu Glu His Leu Thr Asp Leu Ser Ile Arg Gly Thr Leu Phe Val Pro435 440 445Gln Asn Ser Gly Leu Gly Glu Asn Glu Thr Leu Ser Gly Arg Asp Ile450 455 460Glu His His Leu Ala Asn Val Ser Met Phe Phe Tyr Asn Asp Leu Val465 470 475480Asn Gly Thr Thr Leu Gln Thr Arg Leu Gly Ser Lys Leu Leu Ile Thr485 490 495Ala Ser Gln Asp Pro Leu Gln Pro Thr Glu Thr Arg Phe Val Asp Gly500 505 510
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<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(96)<223>mpt70的fas-1结构域(DOMAIN)<400>13Thr Val Phe Ala Pro Thr Asn Ala Ala Phe Ser Lys Leu Pro Ala Ser1 5 10 15Thr Ile Asp Glu Leu Lys Thr Asn Ser Ser Leu Leu Thr Ser Ile Leu20 25 30Thr Tyr His Val Val Ala Gly Gln Thr Ser Pro Ala Asn Val Val Gly35 40 45Thr Arg Gln Thr Leu Gln Gly Ala Ser Val Thr Val Thr Gly Gln Gly50 55 60Asn Ser Leu Lys Val Gly Asn Ala Asp Val Val Cys Gly Gly Val Ser65 70 75 80Thr Ala Asn Ala Thr Val Tyr Met Ile Asp Ser Val Leu Met Pro Pro85 90 95<210>14<211>96<212>PRT<213>结核分支杆菌(Mycobacterium tuberculosis)
<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(96)<223>mpt83的fas-1结构域(DOMAIN)<400>14Thr Val Phe Ala Pro Thr Asn Ala Ala Phe Asp Lys Leu Pro Ala Ala1 5 10 15Thr Ile Asp Gln Leu Lys Thr Asp Ala Lys Leu Leu Ser Ser Ile Leu20 25 30Thr Tyr His Val Ile Ala Gly Gln Ala Ser Pro Ser Arg Ile Asp Gly35 40 45Thr His Gln Thr Leu Gln Gly Ala Asp Leu Thr Val Ile Gly Ala Arg50 55 60Asp Asp Leu Met Val Asn Asn Ala Gly Leu Val Cys Gly Gly Val His65 70 75 80Thr Ala Asn Ala Thr Val Tyr Met Ile Asp Thr Val Leu Met Pro Pro85 90 95<210>15<211>2559<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>肽(PEPTIDE)<222>(1)..(2559)<223>小鼠(mouse) FEX-2<400>15Met Ala Arg Ser Lys Leu Leu Leu Gly Lys Leu Leu Pro Leu Ile Leu1 5 10 15Ile Phe Leu Gly Leu Leu Val Gln Asn Ala Cys Ser Pro Thr Glu Ala
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Leu Val Ser Thr Leu His Ile Arg Ser Met Ala Asn Gln Ile Ile Thr610 615 620Phe Asn Ile Ser Ser Lys Gly Gln Ile Leu Ala Asn Asn Val Ala Val625 630 635 640Asp Glu Thr Glu Val Ala Ala Lys Asn Gly Arg Ile Tyr Thr Leu Thr645 650 655Gly Val Leu Ile Pro Pro Ser Ile Leu Pro Ile Leu Pro His Arg Cys660 665 670Asn Glu Thr Lys Arg Glu Met Lys Leu Gly Thr Cys Val Arg Cys Phe675 680 685Met Lys Asn Trp Ser Lys Cys Pro Thr Asn Ser Glu Pro Thr Ala Ile690695700Phe Thr Asn Lys Cys Phe Tyr Gly Ser Arg Ala Trp Asn Leu Lys Ile705710 715 720Gly Cys Ala Arg Tyr Cys Asp Val Thr Val Glu Ile Pro Arg Cys Cys725730 735Lys Gly Phe Phe Gly Pro Asp Cys Asn Pro Cys Pro Gly Gly Phe Met740745 750Asn Pro Cys Ser Gly Asn Gly Gln Cys Ile Asp Gly Leu Gly Gly Asn755 760 765Gly Thr Cys Ile Cys Glu Asp Gly Phe Gln Gly Ser Arg Cys Gln Phe770 775 780Cys Ser Lys Pro Asn Arg Tyr Gly Pro Gln Cys Asn Arg Thr Cys Gln785 790 795800Cys Val His Gly Ile Cys Asp Asn Arg Leu Asp Ser Asp Gly Ser Cys805 810 815Leu Pro Gly Thr Cys Arg Glu Gly Thr Ala Gly Arg Phe Cys Asp Lys820 825 830Gln Thr Ser Ala Cys Gly Pro Tyr Met Gln Phe Cys His Ile His Ala835 840 845Thr Cys Glu Tyr Ser Asn Glu Thr Ala Ser Cys Val Cys Asn Asp Gly850 855 860Tyr Glu Gly Asp Gly Thr Leu Cys Ser Lys Lys Asp Pro Cys Leu Gly865 870 875 880Ser Thr Ser Arg Gly Gly Cys Ser Pro Asn Ala Glu Cys Ile Gln Ala885 890 895Ser Thr Gly Thr Tyr Ser Cys Val Cys Gln Arg Gly Trp Thr Gly Asn
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14751480 1485Cys Ser Ala Lys Ala Asp Cys Lys Arg Thr Ile Pro Gly Ser Arg Val14901495 1500Cys Val Cys Lys Ala Gly Tyr Thr Gly Asp Gly Ile Val Cys Leu Glu1505 15101515 1520Ile Asn Pro Cys Leu Glu Asn His Gly Gly Cys Asp Arg His Ala Glu1525 15301535Cys Thr Gln Thr Gly Pro Asn Gln Ala Val Cys Asn Cys Leu Pro Lys154015451550Tyr Thr Gly Asp Gly Lys Val Cys Thr Leu Ile Asn Val Cys Leu Thr155515601565Asn Asn Gly Gly Cys Ser Pro Phe Ala Phe Cys Asn His Thr Glu Gln157015751580Asp Gln Arg Thr Cys Thr Cys Lys Pro Asp Tyr Thr Gly Asp Gly Ile1585 159015951600Val Cys Arg Gly Ser Ile His Ser Glu Leu Pro Lys Asn Pro Ser Thr1605 16101615Ser Gln Tyr Phe Phe Gln Leu Gln Glu His Ala Val Gln Glu Leu Ala16201625 1630Gly Pro Gly Pro Phe Thr Val Phe Val Pro Ser Ser Asp Ser Phe Asn1635 16401645Ser Glu Ser Lys Leu Lys Val Trp Asp Lys Gln Gly Leu Met Ser Gln16501655 1660Ile Leu Arg Tyr His Val Val Ala Cys Gln Gln Leu Leu Leu Glu Asn16651670 16751680Leu Lys Val Ile Thr Ser Ala Thr Thr Leu Gln Gly Glu Pro Ile Ser16851690 1695Ile Ser Val Ser Gln Asp Thr Val Leu Ile Asn Lys Lys Ala Lys Val1700 17051710Leu Ser Ser Asp Ile Ile Ser Thr Asn Gly Val Ile His Val Ile Asp1715 1720 1725Thr Leu Leu Ser Pro Gln Asn Leu Leu Ile Thr Pro Lys Gly Ala Ser1730 1735 1740Gly Arg Val Leu Leu Asn Leu Thr Thr Val Ala Ala Asn His Gly Tyr1745 17501755 1760Thr Lys Phe Ser Lys Leu Ile Gln Asp Ser Gly Leu Leu Lys Val Ile
1765 17701775Thr Asp Pro Met His Thr Pro Val Thr Leu Phe Trp Pro Thr Asp Lys178017851790Ala Leu Gln Ala Leu Pro Gln Glu Gln Gln Asp Phe Leu Phe Asn Glu1795 18001805Asp Asn Lys Asp Lys Leu Lys Ala Tyr Leu Lys Phe His Val Ile Arg181018151820Asp Thr Met Ala Leu Ala Ser Asp Leu Pro Arg Ser Ala Ser Trp Lys1825 18301835 1840Thr Leu Gln Gly Ser Glu Leu Ser Val Arg Cys Gly Thr Gly Ser Asp1845 18501855Val Gly Glu Leu Phe Leu Asn Gly Gln Met Cys Arg Ile Ile Gln Arg1860 1865 1870Arg Leu Leu Phe Asp Gly Gly Val Ala Tyr Gly Ile Asp Cys Leu Leu18751880 1885Met Asp Pro Thr Glu Gly Gly Arg Cys Asp Thr Phe Thr Thr Phe Asn189018951900Ile Pro Gly Glu Cys Gly Ser Cys Phe Ser Thr Pro Arg Cys Pro Leu190519101915 1920Gln Ser Lys Pro Lys Gly Val Arg Lys Lys Cys Ile Tyr Asn Pro Leu1925 19301935Pro Phe Arg Arg Asp Val Glu Gly Cys Gln Asn Leu Cys Thr Leu Val19401945 1950Val His Val Pro Arg Cys Cys Ser Gly Tyr Phe Met Pro Asp Cys Gln19551960 1965Ala Cys Pro Gly Gly Pro Asp Thr Pro Cys Asn Asn Arg Gly Met Cys1970 19751980Tyr Asp Gln Tyr Lys Pro Thr Gly Gln Cys Gln Cys His Thr Gly Phe1985 19901995 2000Asn Gly Thr Ala Cys Glu Leu Cys Leu Pro Gly Arg Phe Gly Pro Asp200520102015Cys Gln Pro Cys Gly Cys Ser Glu His Gly Gln Cys Asp Glu Gly Ile202020252030Thr Gly Ser Gly Gln Cys Leu Cys Glu Ala Gly Trp Thr Gly Arg Phe20352040 2045Cys Asp Ala Pro Thr Val Val Ile Pro Val Cys Ile Pro Ala Cys Ser20502055 2060
Met His Ala Thr Cys Met Glu Asn Asn Thr Cys Val Cys Asn Leu Asn2065 207020752080Tyr Glu Gly Asp Gly Ile Thr Cys Thr Val Val Asp Phe Cys Lys Gln2085 20902095Asn Asn Gly Gly Cys Ala Lys Val Ala Lys Cys Ser Gln Lys Gly Thr21002105 2110Gln Val Ser Cys Ser Cys Gln Lys Gly Tyr Lys Gly Asp Gly His Ser2115 21202125Cys Thr Glu Ile Asp Pro Cys Ala Asn Gly Val Asn Gly Gly Cys His2130 21352140Glu His Ala Thr Cys Arg Met Thr Gly Pro Gly Lys Gln Lys Cys Glu2145 21502155 2160Cys Lys Ser His Tyr Val Gly Asp Gly Arg Asp Cys Glu Pro Glu Gln216521702175Leu Pro Leu Asp Arg Cys Leu Gln Asp Asn Gly Gln Cys His Pro Asp218021852190Ala Asn Cys Val Asp Leu His Phe Gln Asp Thr Thr Val Gly Val Phe219522002205His Leu Arg Ser Pro Leu Gly Gln Tyr Lys Leu Thr Phe Asp Lys Ala22102215 2220Lys Glu Ala Cys Ala Lys Glu Ala Ala Ser Ile Ala Thr Tyr Asn Gln22252230 2235 2240Leu Ser Tyr Ala Gln Lys Ala Lys Tyr His Leu Cys Ser Ala Gly Trp22452250 2255Leu Glu Ser Gly Arg Val Ala Tyr Pro Thr Ile Tyr Ala Ser Lys Lys2260 2265 2270Cys Ala Asn Ile Val Gly Ile Val Asp Tyr Gly Thr Arg Thr Asn Lys2275 22802285Ser Glu Met Trp Asp Val Phe Cys Tyr Arg Met Lys Asp Val Asn Cys229022952300Thr Cys Lys Ala Gly Tyr Val Gly Asp Gly Phe Ser Cys Asn Gly Asn2305 2310 2315 2320Leu Leu Gln Val Leu Met Ser Phe Pro Ser Leu Thr Asn Phe Leu Thr232523302335Glu Val Leu Val Phe Ser Arg Ser Ser Ala Gln Gly Arg Ala Phe Leu2340 23452350
Lys His Leu Thr Asp Leu Ser Ile SerGly Thr Leu Phe Val Pro Gln2355 2360 2365Asn Ser Gly Leu Pro Lys Asn Lys Ser Leu Ser Gly Arg Asp Ile Glu237023752380His His Leu Thr Asn Val Asn Val Ser Phe Tyr Asp Asp Leu Val Asn2385 2390 23952400Gly Thr Val Leu Lys Thr Arg Leu Gly Ser Gln Leu Leu Ile Thr Ser24052410 2415Ser Gln Asp Gln Leu His Gln Glu Ala Arg Phe Val Asp Gly Arg Ala2420 24252430Ile Leu Gln Trp Asp Ile Ile Ala Ser Asn Gly Val Leu His Ile Ile2435 2440 2445Ser Glu Pro Leu Lys Ala Pro Pro Thr Ala Ala Thr Ala Ala His Ser2450 24552460Gly Leu Gly Thr Gly Ile Phe Cys Ala Val Val Leu Val Thr Gly Ala246524702475 2480Ile Ala Leu Ala Ala Tyr Ser Tyr Phe Arg Leu Asn Gln Arg Thr Thr248524902495Gly Phe Arg Arg Phe Glu Ser Glu Asp Asp Ile Asp Ala Leu Ala Phe25002505 2510Gly Lys Gln Gln Pro Glu Ser Ile Thr Asn Pro Leu Tyr Glu Thr Ser2515 2520 2525Thr Pro Ala Ala Pro Glu Pro SerCys Asp Pro Phe Thr Asp Ser Gly2530 2535 2540Glu Arg Glu Leu Glu Asn Ser Asp Pro Leu Gly Ala Leu Arg Ser254525502555<210>16<211>102<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(102)
<223>小鼠(mouse) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>16Thr Val Leu Leu Pro Ser Asp Lys Gly Leu Lys Gly Val Asp Val Lys1 5 10 15Glu Leu Leu Met Asp Lys Glu Ala Ala Arg Tyr Phe Val Lys Leu His20 25 30Ile Ile Ala Gly Gln Met Ser Thr Glu Gln Met Tyr Asn Leu Asp Thr35 40 45Phe Tyr Thr Leu Thr Gly Lys Ser Gly Glu Ile Ile Asn Lys Asp Lys50 55 60Asp Asn Gln Leu Lys Leu Lys Leu Tyr Gly Ser Lys Ile Val Gln Ile65 70 7580Ile Gln Gly Asn Ile Val Ala Ser Asn Gly Leu Val His Ile Leu Asp85 90 95Arg Ala Met Asp Lys Ile100<210>17<211>102<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(102)<223>小鼠(mouse) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>17Thr Ile Phe Val Pro Ser Asn Glu Ala Leu Ser Asn Met Thr Ala Gly15 10 15Val Leu Asp Tyr Leu Leu Ser Pro Glu Gly Ser Arg Lys Leu Leu Glu20 25 30Leu Val Arg Tyr His Ile Val Ala Phe Thr Gln Leu Glu Val Ala Thr
35 40 45Leu Val Ser Thr Leu His Ile Arg Ser Met Ala Asn Gln Ile Ile Thr50 55 60Phe Asn Ile Ser Ser Lys Gly Gln Ile Leu Ala Asn Asn Val Ala Val65 7075 80Asp Glu Thr Glu Val Ala Ala Lys Asn Gly Arg Ile Tyr Thr Leu Thr85 90 95Gly Val Leu Ile Pro Pro100<210>18<211>101<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(101)<223>小鼠(mouse) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>18Thr Val Leu Val Pro Ser Leu Gln Ala Ile Lys Asp Met Asp Gln Asn1 5 10 15Glu Lys Ser Phe Trp Leu Ser Arg Asn Asn Ile Pro Ala Leu Ile Lys20 25 30Tyr His Thr Leu Leu Gly Thr Tyr Arg Val Ala Asp Leu Gln Thr Leu35 40 45Pro Ser Ser His Met Leu Ala Thr SerLeu Gln Gly Ser Phe Leu Arg50 55 60Leu Asp Lys Ala Asp Gly Asn Ile Thr Ile Glu Gly Ala SerPhe Val65 70 75 80Asp Gly Asp Asn Ala Ala Thr Asn Gly Val Val His Ile Ile Asn Lys85 90 95Val Leu Ile Pro Gln100
<210>19<211>96<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(96)<223>小鼠(mouse) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>19Thr Val Phe Val Pro Asn Asn Glu Ala Ile Glu Ser Tyr Ile Arg Glu1 5 10 15Lys Lys Ala Thr Ser Leu Lys Glu Asp Ile Leu Gln Tyr His Val Val20 25 30Leu Gly Glu Lys Leu Leu Arg Asn Asp Leu His Asn Gly Met His Arg35 40 45Glu Thr Met Leu Gly Phe Ser Tyr Leu Leu Ala Phe Phe Leu His Asn50 55 60Asp Gln Leu Tyr Val Asn Glu Ala Pro Ile Asn Tyr Thr Asn Val Ala65 70 75 80Thr Asp Lys Gly Val Ile His Gly Leu Glu Lys Val Leu Glu Ile Lys8590 95<210>20<211>97<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(97)<223>小鼠(mouse) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)
<400>20Thr Val Phe Val Pro Ser Ser Asp Ser Phe Asn Ser Glu Ser Lys Leu1 5 10 15Lys Val Trp Asp Lys Gln Gly Leu Met Ser Gln Ile Leu Arg Tyr His20 25 30Val Val Ala Cys Gln Gln Leu Leu Leu Glu Asn Leu Lys Val Ile Thr35 40 45Ser Ala Thr Thr Leu Gln Gly Glu Pro Ile Ser Ile Ser Val Ser Gln50 5560Asp Thr Val Leu Ile Asn Lys Lys Ala Lys Val Leu Ser Ser Asp Ile65 70 75 80Ile Ser Thr Asn Gly Val Ile His Val Ile Asp Thr Leu Leu Ser Pro85 90 95Gln<210>21<211>107<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(107)<223>小鼠(mouse) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>21Thr Leu Phe Trp Pro Thr Asp Lys Ala Leu Gln Ala Leu Pro Gln Glu1 5 10 15Gln Gln Asp Phe Leu Phe Asn Glu Asp Asn Lys Asp Lys Leu Lys Ala20 2530Tyr Leu Lys Phe His Val Ile Arg Asp Thr Met Ala Leu Ala Ser Asp35 40 45Leu Pro Arg Ser Ala Ser Trp Lys Thr Leu Gln Gly Ser Glu Leu Ser
50 55 60Val Arg Cys Gly Thr Gly Ser Asp Val Gly Glu Leu Phe Leu Asn Gly65 70 75 80Gln Met Cys Arg Ile Ile Gln Arg Arg Leu Leu Phe Asp Gly Gly Val85 90 95Ala Tyr Gly Ile Asp Cys Leu Leu Met Asp Pro100 105<210>22<211>96<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(96)<223>大鼠(rat) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>22Thr Val Phe Val Pro Asn Asn Glu Ala Ile Glu Asn Tyr Ile Arg Glu1 5 10 15Lys Lys Ala Thr Ser Leu Lys Glu Asp Ile Leu Arg Tyr His Val Val20 25 30Leu Gly Glu Lys Leu Leu Lys Asn Asp Leu His Asn Gly Met His Arg35 40 45Glu Thr Met Leu Gly Phe Ser Tyr Leu Leu Ala Phe Phe Leu Arg Asn50 55 60Asp Gln Leu Tyr Val Asn Glu Ala Pro Ile Asn Tyr Thr Asn Val Ala65 70 75 80Thr Asp Lys Gly Val Ile His Gly Leu Glu Lys Val Leu Glu Ile Gln85 90 95<210>23<211>97
<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(97)<223>大鼠(rat) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>23Thr Val Phe Ala Pro Leu Ser Ser Ser Phe Asn His Glu Pro Arg Ile1 5 10 15Lys Asp Trp Asp Gln Gln Gly Leu Met Ser Gln Val Leu Arg Tyr His20 25 30Val Val Gly Cys Gln Gln Leu Leu Leu Asp Asn Leu Lys Val Thr Thr35 40 45Ser Ala Thr Thr Leu Gln Gly Glu Pro Val Ser Ile Ser Val Ser Gln50 55 60Asp Thr Val Phe Ile Asn Asn Glu Ala Lys Val Leu Ser SerAsp Ile65 70 75 80Ile Ser Thr Asn Gly Val Ile His Val Ile Asp Lys Leu Leu Ser Pro85 90 95Lys<210>24<211>107<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(107)<223>大鼠(rat) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)
<400>24Thr Val Phe Trp Pro Thr Asp Lys Ala Leu Glu Ala Leu Pro Pro Glu1 5 10 15Gln Gln Asp Phe Leu Phe Asn Gln Asp Asn Lys Asp Lys Leu Lys Ser20 2530Tyr Leu Lys Phe His Val Ile Arg Asp Ser Lys Ala Leu Ala Ser Asp35 40 45Leu Pro Arg Ser Ala Ser Trp Lys Thr Leu Gln Gly Ser Glu Leu Ser50 55 60Val Arg Cys Gly Thr Gly Ser Asp Ile Gly Glu Leu Phe Leu Asn Glu65 70 75 80Gln Met Cys Arg Phe Ile His Arg Gly Leu Leu Phe Asp Val Gly Val85 90 95Ala Tyr Gly Ile Asp Cys Leu Leu Met Asn Pro100 105<210>25<211>94<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(94)<223>大鼠(rat) FEX-2的fas-1结构域(DOMAIN)<400>25Thr Leu Phe Val Pro Gln Asn Ser Gly Leu Pro Gly Asn Lys Ser Leu1 5 10 15Ser Gly Arg Asp Ile Glu His His Leu Thr Asn Val Asn Val Ser Phe20 25 30Tyr Asn Asp Leu Val Asn Gly Thr Phe Leu Arg Thr Met Leu Gly Ser35 40 45Gln Leu Leu Ile Thr Phe Ser Gln Asp Gln Leu His Gln Glu Thr Arg50 55 60
Phe Val Asp Gly Arg Ser Ile Leu Gln Trp Asp Ile Ile Ala Ala Asn65 70 7580Gly Ile Leu His Ile Ile Ser Glu Pro Leu Arg Ala Pro Pro8590<210>26<211>103<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(103)<223>人类TGF-β可诱导基因-h3(human TGF-beta inducible gene-h3)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>26Gly Pro Gly Ser Phe Thr Ile Phe Ala Pro Ser Asn Glu Ala Trp Ala1 5 10 15Ser Leu Pro Ala Glu Val Leu Asp Ser Leu Val Ser Asn Val Asn Ile20 25 30Glu Leu Leu Asn Ala Leu Arg Tyr His Met Val Gly Arg Arg Val Leu35 40 45Thr Asp Glu Leu Lys His Gly Met Thr Leu Thr Ser Met Tyr Gln Asn50 55 60Ser Asn Ile Gln Ile His His Tyr Pro Asn Gly Ile Val Thr Val Asn6570 75 80Cys Ala Arg Leu Leu Lys Ala Asp His His Ala Thr Asn Gly Val Val85 90 95His Leu Ile Asp Lys Val Ile100<210>27<211>122
<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(122)<223>人类TGF-β可诱导基因-h3(human TGF-beta inducible gene-h3)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>27Thr Phe Glu Thr Leu Arg Ala Ala Val Ala Ala Ser Gly Leu Asn Thr1 5 10 15Met Leu Glu Gly Asn Gly Gln Tyr Thr Leu Leu Ala Pro Thr Asn Glu20 25 30Ala Phe Glu Lys Ile Pro Ser Glu Thr Leu Asn Arg Ile Leu Gly Asp35 40 45Pro Glu Ala Leu Arg Asp Leu Leu Asn Asn His Ile Leu Lys Ser Ala50 55 60Met Cys Ala Glu Ala Ile Val Ala Gly Leu Ser Val Glu Thr Leu Glu65 70 75 v80Gly Thr Thr Leu Glu Val Gly Cys Ser Gly Asp Met Leu Thr Ile Asn85 90 95Gly Lys Ala Ile Ile Ser Asn Lys Asp Ile Leu Ala Thr Asn Gly Val100 105 110Ile His Tyr Ile Asp Glu Leu Leu Ile Pro115 120<210>28<211>112<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(1 12)<223>人类TGF-β可诱导基因-h3(human TGF-beta inducible gene-h3)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>28Ser Thr Ala Ile Asp Leu Phe Arg Gln Ala Gly Leu Gly Asn His Leu1 5 10 15Ser Gly Ser Glu Arg Leu Thr Leu Leu Ala Pro Leu Asn Ser Val Phe20 25 30Lys Asp Gly Thr Pro Pro Ile Asp Ala His Thr Arg Asn Leu Leu Arg35 40 45Asn His Ile Ile Lys Asp Gln Leu Ala Ser Lys Tyr Leu Tyr His Gly50 55 60Gln Thr Leu Glu Thr Leu Gly Gly Lys Lys Leu Arg Val Phe Val Tyr65 70 75 80Arg Asn Ser Leu Cys Ile Glu Asn Ser Cys Ile Ala Ala His Asp Lys85 90 95Arg Gly Arg Tyr Gly Thr Leu Phe Thr Met Asp Arg Val Leu Thr Pro100105 110<210>29<211>133<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(133)<223>人类TGF-β可诱导基因-h3(human TGF-beta inducible gene-h3)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>29Met Gly Thr Val Met Asp Val Leu Lys Gly Asp Asn Arg Phe Ser Met1 5 10 15Leu Val Ala Ala Ile Gln Ser Ala Gly Leu Thr Glu Thr Leu Asn Arg2025 30Glu Gly Val Tyr Thr Val Phe Ala Pro Thr Asn Glu Ala Phe Arg Ala35 40 45
Leu Pro Pro Arg Glu Arg Ser Arg Leu Leu Gly Asp Ala Lys Glu Leu50 55 60Ala Asn Ile Leu Lys Tyr His Ile Gly Asp Glu Ile Leu Val Ser Gly65 7075 80Gly Ile Gly Ala Leu Val Arg Leu Lys Ser Leu Gln Gly Asp Lys Leu85 90 95Glu Val Ser Leu Lys Asn Asn Val Val Ser Val Asn Lys Glu Pro Val100 105 110Ala Glu Pro Asp Ile Met Ala Thr Asn Gly Val Val His Val Ile Thr115 120 125Asn Val Leu Gln Pro130<210>30<211>103<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(103)<223>小鼠TGF-β可诱导基因-h3(mouse TGF-beta inducible gene-h3)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>30Gly Pro Gly Ser Phe Thr Ile Phe Ala Pro Ser Asn Glu Ala Trp Ser1 5 10 15Ser Leu Pro Ala Glu Val Leu Asp Ser Leu Val Ser Asn Val Asn Ile20 25 30Glu Leu Leu Asn Ala Leu Arg Tyr His Met Val Asp Arg Arg Val Leu35 40 45Thr Asp Glu Leu Lys His Gly Met Thr Leu Thr Ser Met Tyr Gln Asn50 55 60Ser Asn Ile Gln Ile His His Tyr Pro Asn Gly Ile Val Thr Val Asn
65 70 75 80Cys Ala Arg Leu Leu Lys Ala Asp His His Ala Thr Asn Gly Val Val85 90 95His Leu Ile Asp Lys Val Ile100<210>31<211>122<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(122)<223>小鼠TGF-β可诱导基因-h3(mouse TGF-beta inducible gene-h3)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>31Thr Phe Glu Thr Leu Arg Ala Ala Val Ala Ala Ser Gly Leu Asn Thr1 5 10 15Val Leu Glu Gly Asp Gly Gln Phe Thr Leu Leu Ala Pro Thr Asn Glu20 25 30Ala Phe Glu Lys Ile Pro Ala Glu Thr Leu Asn Arg Ile Leu Gly Asp35 40 45Pro Glu Ala Leu Arg Asp Leu Leu Asn Asn His Ile Leu Lys Ser Ala50 55 60Met Cys Ala Glu Ala Ile Val Ala Gly Met Ser Met Glu Thr Leu Gly65 70 75 80Gly Thr Thr Leu Glu Val Gly Cys Ser Gly Asp Lys Leu Thr Ile Asn85 90 95Gly Lys Ala Val Ile Ser Asn Lys Asp Ile Leu Ala Thr Asn Gly Val100 105 110Ile His Phe Ile Asp Glu Leu Leu Ile Pro115 120
<210>32<211>112<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(112)<223>小鼠TGF-β可诱导基因-h3(mouse TGF-beta inducible gene-h3)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>32Ser Thr Ala Ile Asp Ile Leu Lys Gln Ala Gly Leu Asp Thr His Leu15 10 15Ser Gly Lys Glu Gln Leu Thr Phe Leu Ala Pro Leu Asn Ser Val Phe20 25 30Lys Asp Gly Val Pro Arg Ile Asp Ala Gln Met Lys Thr Leu Leu Leu35 40 45Asn His Met Val Lys Glu Gln Leu Ala Ser Lys Tyr Leu Tyr Ser Gly50 55 60Gln Thr Leu Asp Thr Leu Gly Gly Lys Lys Leu Arg Val Phe Val Tyr65 70 75 80Arg Asn Ser Leu Cys Ile Glu Asn Ser Cys Ile Ala Ala His Asp Lys85 90 95Arg Gly Arg Phe Gly Thr Leu Phe Thr Met Asp Arg Met Leu Thr Pro100105 110<210>33<211>133<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)
<222>(1)..(133)<223>小鼠TGF-β可诱导基因-h3(mouse TGF-beta inducible gene-h3)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>33Met Gly Thr Val Met Asp Val Leu Lys Gly Asp Asn Arg Phe Ser Met1 5 10 15Leu Val Ala Ala Ile Gln Ser Ala Gly Leu Met Glu Ile Leu Asn Arg20 2530Glu Gly Val Tyr Thr Val Phe Ala Pro Thr Asn Glu Ala Phe Gln Ala35 40 45Met Pro Pro Glu Glu Leu Asn Lys Leu Leu Ala Asn Ala Lys Glu Leu50 55 60Thr Asn Ile Leu Lys Tyr His Ile Gly Asp Glu Ile Leu Val Ser Gly65 70 75 80Gly Ile Gly Ala Leu Val Arg Leu Lys Ser Leu Gln Gly Asp Lys Leu85 90 95Glu Val Ser Ser Lys Asn Asn Val Val Ser Val Asn Lys Glu Pro Val100 105 110Ala Glu Thr Asp Ile Met Ala Thr Asn Gly Val Val Tyr Ala Ile Asn115 120 125Thr Val Leu Gln Pro130<210>34<211>98<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(98)<223>大鼠TGF-β可诱导基因-h3(rat TGF-beta inducible gene-h3)的fas-1结构域(DOMAIN)
<400>34His Leu Ser Gly Lys Glu Gln Leu Thr Phe Leu Ala Pro Leu Asn Ser1 5 10 15Val Phe Lys Asp Gly Val Pro Arg Ile Asp Gly Gln Met Lys Thr Leu20 25 30Leu Leu Asn His Met Val Lys Gly Gln Leu Ala Ser Lys Tyr Leu Tyr35 40 45Ser Gly Gln Thr Val Asp Thr Leu Gly Gly Lys Lys Leu Arg Val Phe50 55 60Val Tyr Arg Asn Ser Leu Cys Ile Glu Asn Ser Cys Ile Ala Ala His65 70 7580Asp Lys Lys Gly Arg Tyr Gly Thr Leu Phe Thr Met Asp Arg Met Leu85 90 95Thr Pro<210>35<211>111<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(111)<223>大鼠TGF-β可诱导基因-h3(rat TGF-beta inducible gene-h3)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>35Met Gly Thr Val Met Asp Val Leu Lys Gly Asp Asn Arg Phe Ser Met1 5 10 15Leu Val Ala Ala Ile Gln Ser Ala Gly Leu Met Glu Thr Leu Asn Arg20 25 30Glu Gly Val Tyr Thr Val Phe Ala Pro Thr Asn Glu Ala Phe Gln Ala35 40 45Met Pro Pro Glu Glu Leu Asn Lys Leu Leu Ala Asn Ala Lys Glu Leu
50 55 60Thr Asn Ile Leu Lys Tyr His Ile Gly Asp Glu Ile Leu Val Ser Gly65 70 75 80Gly lie Gly Ala Leu Val Arg Leu Lys Set Leu Gln GIy Asp Lys Leu85 90 95Glu Val Ser Ser Lys Asn Asn Val Val Ser Val Asn Lys Glu Pro100 105 110<210>36<211>120<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(120)<223>人类(human)成骨细胞特异性因子2(periostin)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>36Thr Thr Thr Gln Arg Tyr Ser Asp Ala Ser Lys Leu Arg Glu Glu Ile1 5 10 15Glu Gly Lys Gly Set Phe Thr Tyr Phe Ala Pro Ser Asn Glu Ala Trp20 25 30Asp Asn Leu Asp Ser Asp Ile Arg Arg Gly Leu Glu Ser Asn Val Asn35 40 45Val Glu Leu Leu Asn Ala Leu His Ser His Met Ile Asn Lys Arg Met50 55 60Leu Thr Lys Asp Leu Lys Asn Gly Met Ile Ile Pro Set Met Tyr Asn65 70 75 80Asn Leu Gly Leu Phe Ile Asn His Tyr Pro Asn Gly Val Val Thr Val85 90 95Asn Cys Ala Arg Ile Ile His Gly Asn Gln Ile Ala Thr Asn Gly Val100 105 110Val His Val Ile Asp Arg Val Leu115 120
<210>37<211>133<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(133)<223>人类(human) 成骨细胞特异性因子2(periostin)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>37Thr Ser Ile Gln Asp Phe Ile Glu Ala Glu Asp Asp Leu Ser Ser Phe15 10 15Arg Ala Ala Ala Ile Thr Ser Asp Ile Leu Glu Ala Leu Gly Arg Asp20 25 30Gly His Phe Thr Leu Phe Ala Pro Thr Asn Glu Ala Phe Glu Lys Leu35 40 45Pro Arg Gly Val Leu Glu Arg Phe Met Gly Asp Lys Val Ala Ser Glu50 55 60Ala Leu Met Lys Tyr His Ile Leu Asn Thr Leu Gln Cys Ser Glu Ser65 70 75 80Ile Met Gly Gly Ala Val Phe Glu Thr Leu Glu Gly Asn Thr Ile Glu85 90 95Ile Gly Cys Asp Gly Asp Ser Ile Thr Val Asn Gly Ile Lys Met Val100 105 110Asn Lys Lys Asp Ile Val Thr Asn Asn Gly Val Ile His Leu Ile Asp115 120 125Gln Val Leu Ile Pro130<210>38<211>116<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)
<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(116)<223>人类(human) 成骨细胞特异性因子2(periostin)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>38Lys Gln Gln Thr Thr Phe Thr Asp Leu Val Ala Gln Leu Gly Leu Ala1 5 10 15Ser Ala Leu Arg Pro Asp Gly Glu Tyr Thr Leu Leu Ala Pro Val Asn20 25 30Asn Ala Phe Ser Asp Asp Thr Leu Ser Met Val Gln Arg Leu Leu Lys35 40 45Leu Ile Leu Gln Asn His Ile Leu Lys Val Lys Val Gly Leu Asn Glu50 55 60Leu Tyr Asn Gly Gln Ile Leu Glu Thr Ile Gly Gly Lys Gln Leu Arg65 70 75 80Val Phe Val Tyr Arg Thr Ala Val Cys Ile Glu Asn Ser Cys Met Glu85 90 95Lys Gly Ser Lys Gln Gly Arg Asn Gly Ala Ile His Ile Phe Arg Glu100 105 110Ile Ile Lys Pro115<210>39<211>135<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(135)<223>人类(human)成骨细胞特异性因子2(periostin)的fas-1结构域(DOMAIN)
<400>39Glu Lys Ser Leu His Glu Lys Leu Lys Gln Asp Lys Arg Phe Ser Thr1 5 10 15Phe Leu Ser Leu Leu Glu Ala Ala Asp Leu Lys Glu Leu Leu Thr Gln20 25 30Pro Gly Asp Trp Thr Leu Phe Val Pro Thr Asn Asp Ala Phe Lys Gly35 40 45Met Thr Ser Glu Glu Lys Glu Ile Leu Ile Arg Asp Lys Asn Ala Leu50 5560Gln Asn Ile Ile Leu Tyr His Leu Thr Pro Gly Val Phe Ile Gly Lys65 70 7580Gly Phe Glu Pro Gly Val ThrAsn Ile Leu Lys Thr Thr Gln Gly Ser85 90 95Lys Ile Phe Leu Lys Glu Val Asn Asp Thr Leu Leu Val Asn Glu Leu100 105 110Lys Ser Lys Glu Ser Asp Ile Met Thr Thr Asn Gly Val Ile His Val115 120125Val Asp Lys Leu Leu Tyr Pro130 135<210>40<211>120<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(120)<223>小鼠(mouse)成骨细胞特异性因子2(periostin)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>40Thr Thr Thr Gln His Tyr Ser Asp Val Ser Lys Leu Arg Glu Glu Ile1 5 10 15Glu Gly Lys Gly Ser Tyr Thr Tyr Phe Ala Pro Ser Asn Glu Ala Trp20 25 30
Glu Asn Leu Asp Ser Asp Ile Arg Arg Gly Leu Glu Asn Asn Val Asn35 40 45Val Glu Leu Leu Asn Ala Leu His Ser His Met Val Asn Lys Arg Met50 55 60Leu Thr Lys Asp Leu Lys His Gly Met Val Ile Pro Ser Met Tyr Asn65 70 75 80Asn Leu Gly Leu Phe Ile Asn His Tyr Pro Asn Gly Val Val Thr Val85 90 95Asn Cys Ala Arg Val Ile His Gly Asn Gln Ile Ala Thr Asn Gly Val100 105 110Val His Val Ile Asp Arg Val Leu115 120<210>41<211>133<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(133)<223>小鼠(mouse)成骨细胞特异性因子2(periostin)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>41Thr Ser Ile Gln Asp Phe Leu Glu Ala Glu Asp Asp Leu Ser Ser Phe1 5 10 15Arg Ala Ala Ala Ile Thr Ser Asp Leu Leu Glu Ser Leu Gly Arg Asp20 25 30Gly His Phe Thr Leu Phe Ala Pro Thr Asn Glu Ala Phe Glu Lys Leu35 40 45Pro Arg Gly Val Leu Glu Arg Ile Met Gly Asp Lys Val Ala Ser Glu50 55 60Ala Leu Met Lys Tyr His Ile Leu Asn Thr Leu Gln Cys Ser Glu Ala65 70 75 80Ile Thr Gly Gly Ala Val Phe Glu Thr Met Glu Gly Asn Thr Ile Glu
8590 95Ile Gly Cys Glu Gly Asp Ser Ile Ser Ile Asn Gly Ile Lys Met Val100 105 110Asn Lys Lys Asp Ile Val Thr Lys Asn Gly Val Ile His Leu Ile Asp115 120 125Glu Val Leu Ile Pro130<210>42<211>116<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(1 16)<223>小鼠(mouse)成骨细胞特异性因子2(periostin)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>42Lys Gln Gln Thr Thr Phe Thr Asp Leu Val Ala Gln Leu Gly Leu Ala1 5 10 15Ser Ser Leu Lys Pro Asp Gly Glu Tyr Thr Leu Leu Ala Pro Val Asn20 25 30Asn Ala Phe Ser Asp Asp Thr Leu Ser Met Asp Gln Arg Leu Leu Lys35 40 45Leu Ile Leu Gln Asn His Ile Leu Lys Val Lys Val Gly Leu Ser Asp50 55 60Leu Tyr Asn Gly Gln Ile Leu Glu Thr Ile Gly Gly Lys Gln Leu Arg65 70 75 80Val Phe Val Tyr Arg Thr Ala Ile Cys Ile Glu Asn Ser Cys Met Val85 90 95Arg Gly Ser Lys Gln Gly Arg Asn Gly Ala Ile His Ile Phe Arg Glu100 105 110Ile Ile Gln Pro115
<210>43<211>135<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(135)<223>小鼠(mouse)成骨细胞特异性因子2(periostin)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>43Glu Lys Ser Leu His Asp Lys Leu Arg Gln Asp Lys Arg Phe Ser Ile1 5 10 15Phe Leu Ser Leu Leu Glu Ala Ala Asp Leu Lys Asp Leu Leu Thr Gln20 25 30Pro Gly Asp Trp Thr Leu Phe Ala Pro Thr Asn Asp Ala Phe Lys Gly35 40 45Met Thr Ser Glu Glu Arg Glu Leu Leu Ile Gly Asp Lys Asn Ala Leu50 55 60Gln Asn Ile Ile Leu Tyr His Leu Thr Pro Gly Val Tyr Ile Gly Lys65 70 7580Gly Phe Glu Pro Gly Val Thr Asn Ile Leu Lys Thr Thr Gln Gly Ser85 90 95Lys Ile Tyr Leu Lys Gly Val Asn Glu Thr Leu Leu Val Asn Glu Leu100 105 110Lys Ser Lys Glu Ser Asp Ile Met Thr Thr Asn Gly Val Ile His Val115 120 125Val Asp Lys Leu Leu Tyr Pro130 135<210>44<211>120<212>PRT
<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(120)<223>大鼠(rat)成骨细胞特异性因子2(periostin)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>44Thr Thr Thr Gln His Tyr Ser Asp Val Ser Lys Leu Arg Glu Glu Ile1 5 10 15Glu Gly Lys Gly Ser Tyr Thr Tyr Phe Ala Pro Ser Asn Glu Ala Trp20 25 30Asp Asn Leu Asp Ser Asp Ile Arg Arg Gly Leu Glu Asn Asn Val Asn35 40 45Val Glu Leu Leu Asn Ala Leu His Ser His Met Val Asn Lys Arg Met50 55 60Leu Thr Lys Asp Leu Lys His Gly Met Val Ile Pro Ser Met Tyr Asn65 70 75 80Asn Leu Gly Leu Phe Ile Asn His Tyr Pro Asn Gly Val Val Thr Val85 90 95Asn Cys Ala Arg Val Ile His Gly Asn Gln Ile Ala Thr Asn Gly Val100 105 110Val His Val Ile Asp Arg Val Leu115 120<210>45<211>133<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(133)<223>大鼠(rat)成骨细胞特异性因子2(periostin)的fas-1结构域(DOMAIN)
<400>45Thr Ser Ile Gln Asp Phe Ile Glu Ala Glu Asp Glu Leu Ser Ser Phe1 5 10 15Arg Ala Ala Ala Ile Thr Ser Asp Leu Leu Glu Ser Leu Gly Arg Asp20 25 30Gly His Phe Thr Leu Phe Ala Pro Thr Asn Glu Ala Phe Glu Lys Leu35 40 45Pro Arg Gly Val Leu Glu Arg Ile Met Gly Asp Lys Val Ala Ser Glu50 55 60Ala Leu Met Lys Tyr His Ile Leu Asn Thr Leu Gln Cys Ser Glu Ala6570 75 80Ile Thr Gly Gly Ala Val Phe Glu Thr Met Glu Gly Asn Thr Ile Glu85 90 95Ile Gly Cys Glu Gly Asp Ser Ile Ser Ile Asn Gly Ile Lys Met Val100 105 110Asn Lys Lys Asp Ile Val Thr Lys Asn Gly Val Ile His Leu Ile Asp115 120 125Glu Val Leu Ile Pro130<210>46<211>116<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(116)<223>大鼠(rat)成骨细胞特异性因子2(periostin)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>46Lys Gln Gln Thr Thr Phe Thr Asp Leu Val Ala Gln Leu Gly Leu Ala1 5 10 15Ser Ser Leu Lys Pro Asp Gly Glu Tyr Thr Leu Leu Ala Pro Val Asn20 25 30Asn Ala Phe Ser Asp Asp Thr Leu Ser Met Asp Gln Arg Leu Leu Lys
35 40 45Leu Ile Leu Gln Asn His Ile Leu Lys Val Lys Val Gly Leu Ser Asp50 55 60Leu Tyr Asn Gly Gln Ile Leu Glu Thr Ile Gly Gly Lys Gln Leu Arg65 70 75 80Val Phe Val Tyr Arg Thr Ala Ile Cys Ile Glu Asn Ser Cys Met Val85 90 95Arg Gly Ser Lys Gln Gly Arg Asn Gly Ala Ile His Ile Phe Arg Glu100 105 110Ile Ile Gln Pro115<210>47<211>135<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(135)<223>大鼠(rat) 成骨细胞特异性因子2(periostin)的fas-1结构域(DOMAIN)<400>47Glu Lys Ser Leu His Glu Lys Leu Arg Gln Asp Lys Arg Phe Ser Ile15 10 15Phe Leu Ser Leu Leu Glu Ala Ala Asp Leu Lys Asp Leu Leu Thr Gln20 25 30Pro Gly Asp Trp Thr Leu Phe Ala Pro Thr Asn Asp Ala Phe Lys Gly35 40 45Met Thr Asn Glu Glu Arg Glu Ile Leu Ile Gly Asp Lys Asn Ala Leu50 55 60Gln Asn Ile Ile Leu Tyr His Leu Thr Pro Gly Val Tyr Ile Gly Lys65 70 7580Gly Phe Glu Pro Gly Val Thr Asn Ile Leu Lys Thr Thr Gln Gly Ser85 90 95
Lys Ile Tyr Val Lys Gly Val Asn Glu Thr Leu Leu Val Asn Glu Leu100 105 110Lys Ser Lys Glu Ser Asp Ile Met Thr Thr Asn Gly Val Ile His Val115 120125Val Asp Lys Leu Leu Tyr Pro130 135<210>48<211>101<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(101)<223>人类(human) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>48Thr Val Leu Val Pro Ser Val Ser Ser Phe Ser Ser Arg Thr Met Asn1 5 10 15Ala Ser Leu Ala Gln Gln Leu Cys Arg Gln His Ile Ile Ala Gly Gln20 25 30His Ile Leu Glu Asp Thr Arg Thr Gln Gln Thr Arg Arg Trp Trp Thr35 40 45Leu Ala Gly Gln Glu Ile Thr Val Thr Phe Asn Gln Phe Thr Lys Tyr50 55 60Ser Tyr Lys Tyr Lys Asp Gln Pro Gln Gln Thr Phe Asn Ile Tyr Lys65 70 75 80Ala Asn Asn Ile Ala Ala Asn Gly Val Phe His Val Val Thr Gly Leu85 90 95Arg Trp Gln Ala Pro100<210>49
<211>104<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(104)<223>人类(human) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>49Phe Thr Val Phe Ala Pro Ser Asn Glu Ala Val Asp Ser Leu Arg Asp1 5 10 15Gly Arg Leu Ile Tyr Leu Phe Thr Ala Gly Leu Ser Lys Leu Gln Glu20 25 30Leu Val Arg Tyr His Ile Tyr Asn His Gly Gln Leu Thr Val Glu Lys35 40 45Leu Ile Ser Lys Gly Arg Ile Leu Thr Met Ala Asn Gln Val Leu Ala50 55 60Val Asn Ile Ser Glu Glu Gly Arg Ile Leu Leu Gly Pro Glu Gly Val65 70 7580Pro Leu Gln Arg Val Asp Val Met Ala Ala Asn Gly Val Ile His Met85 90 95Leu Asp Gly Ile Leu Leu Pro Pro100<210>50<211>100<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(100)<223>人类(human) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)
<400>50Thr Ala Leu Val Pro Ser Glu Ala Ala Val Arg Gln Leu Ser Pro Glu1 5 10 15Asp Arg Ala Phe Trp Leu Gln Pro Arg Thr Leu Pro Asn Leu Val Arg20 25 30Ala His Phe Leu Gln Gly Ala Leu Phe Glu Glu Glu Leu Ala Arg Leu35 40 45Gly Gly Gln Glu Val Ala Thr Leu Asn Pro Thr Thr Arg Trp Glu Ile50 55 60Arg Asn Ile Ser Gly Arg Val Trp Val Gln Asn Ala Ser Val Asp Val65 70 75 80Ala Asp Leu Leu Ala Thr Asn Gly Val Leu His Ile Leu Ser Gln Val85 90 95Leu Leu Pro Pro100<210>51<211>93<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(93)<223>人类(human) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>51Thr Ile Phe Val Pro Thr Asn Arg Ser Leu Glu Ala Gln Gly Asn Ser1 5 10 15Ser His Leu Asp Ala Asp Thr Val Arg His His Val Val Leu Gly Glu20 25 30Ala Leu Ser Met Glu Thr Leu Arg Lys Gly Gly His Arg Asn Ser Leu35 40 45Leu Gly Pro Ala His Trp Ile Val Phe Tyr Asn His Ser Gly Gln Pro
50 55 60Glu Val Asn His Val Pro Leu Glu Gly Pro Met Leu Glu Ala Pro Gly65 70 75 80Arg Ser Leu Ile Gly Leu Ser Gly Val Leu Thr Val Gly85 90<210>52<211>97<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(97)<223>人类(human) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>52Thr Ile Phe Val Pro His Ala Asp Leu Met Ser Asn Leu Ser Gln Asp1 5 10 15Glu Leu Ala Arg Ile Arg Ala His Arg Gln Leu Val Phe Arg Tyr His20 25 30Val Val Gly Cys Arg Arg Leu Arg Ser Glu Asp Leu Leu Glu Gln Gly35 40 45Tyr Ala Thr Ala Leu Ser Gly His Pro Leu Arg Phe Ser Glu Arg Glu50 55 60Gly Ser Ile Tyr Leu Asn Asp Phe Ala Arg Val Val Ser Ser Asp His65 70 75 80Glu Ala Val Asn Gly Ile Leu His Phe Ile Asp Arg Val Leu Leu Pro85 90 95Pro<210>53<211>106
<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(106)<223>人类(human) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>53Thr Met Leu Trp Pro Thr Asp Ala Ala Phe Arg Ala Leu Pro Pro Asp1 5 10 15Arg Gln Ala Trp Leu Tyr His Glu Asp His Arg Asp Lys Leu Ala Ala20 25 30Ile Leu Arg Gly His Met Ile Arg Asn Val Glu Ala Leu Ala Ser Asp35 40 45Leu Pro Asn Leu Gly Pro Leu Arg Thr Met His Gly Thr Pro Ile Ser50 55 60Phe Ser Cys Ser Arg Thr Arg Pro Gly Glu Leu Met Val Gly Glu Asp65 70 75 80Asp Ala Arg Ile Val Gln Arg His Leu Pro Phe Glu Gly Gly Leu Ala85 90 95Tyr Gly Ile Asp Gln Leu Leu Glu Pro Pro100 105<210>54<211>96<212>PRT<213>人类(Homo sapiens)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(96)<223>人类(human) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)
<400>54Thr Leu Phe Val Pro Val Asn Glu Gly Phe Val Asp Asn Met Thr Leu1 5 10 15Ser Gly Pro Asp Leu Glu Leu His Ala Ser Asn Ala Thr Leu Leu Ser20 25 30Ala Asn Ala Ser Gln Gly Lys Leu Leu Pro Ala His Ser Gly Leu Ser35 40 45Leu Ile Ile Ser Asp Ala Gly Pro Asp Asn Ser Ser Trp Ala Pro Val5055 60Ala Pro Gly Thr Val Val Val Ser Arg Ile Ile Val Trp Asp Ile Met6570 75 80Ala Phe Asn Gly Ile Ile His Ala Leu Ala Ser Pro Leu Leu Ala Pro85 90 95<210>55<211>103<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(103)<223>小鼠(mouse) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>55Thr Val Phe Ala Pro Ser Asn Glu Ala Val Asp Ser Leu Arg Asp Gly1 5 10 15Arg Leu Ile Tyr Leu Phe Thr Ala Gly Leu Ser Lys Leu Gln Glu Leu20 25 30Val Arg Tyr His Ile Tyr Asn His Gly Gln Leu Thr Val Glu Lys Leu35 40 45Ile Ser Lys Gly Arg Val Leu Thr Met Ala Asn Gln Val Leu Thr Val50 55 60Asn Ile Ser Glu Gly Gly Arg Ile Leu Leu Gly Pro Gly Gly Ile Pro65 70 75 80
Val Arg Arg Val Asp Val Pro Ala Ala Asn Gly Val Ile His Met Leu85 90 95Glu Gly Ile Leu Leu Pro Pro100<210>56<211>100<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(100)<223>小鼠(mouse) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>56Thr Ala Leu Val Pro Ser Glu SerAla Ile Arg Arg Leu Ser Leu Glu1 5 10 15Asp Gln Ala Phe Trp Leu Gln Pro Lys Met Leu Pro Glu Leu Ala Arg20 25 30Ala His Phe Leu Gln Gly Ala Phe Ser Glu Glu Glu Leu Ala Arg Leu35 40 45Asn Gly Gln Gln Val Ala Thr Leu Ser Ala Thr Thr Arg Trp Gln Ile50 55 60His Asn Ile Ser Gly Lys Val Trp Val Gln Asn Ala Thr Val Asp Val65 70 75 80Pro Asp Leu Leu Ala Thr Asn Gly Ile Leu His Ile Val Ser Gln Val85 90 95Leu Leu Pro Pro100<210>57<211>93<212>PRT
<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(93)<223>小鼠(mouse) FEX-l的fas-1结构域(DOMAIN)<400>57Thr Ile Phe Val Pro Thr Asn His Ser Leu Glu Thr Gln Gly Asn Asn1 5 10 15Ser Val Leu Gly Ile Asp Thr Val Arg His His Val Ile Leu Gly Glu20 2530Ala Leu Ser Val Glu Val Leu Arg Lys Gly Gly His Arg Asn Ser Leu35 40 45Leu Gly Pro Ala His Trp Leu Val Phe Tyr Asn His Ser Gly Gln Pro50 55 60Glu Val Asn His Met Pro Leu Glu Gly Pro Leu Leu Glu Ala Pro Gly65 70 75 80Ser Ser Leu Phe Gly Leu Ser Gly Ile Leu Ala Val Gly8590<210>58<211>97<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(97)<223>小鼠(mouse) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>58Thr Val Phe Val Pro His Ala Asp Leu Ile Ser Asn Met Ser Gln Asp1 5 10 15
Glu Leu Ala Arg Ile Arg Ala His Arg Gln Leu Val Phe Arg Tyr His20 25 30Val Val Gly Cys Arg Lys Leu Trp Ser Gln Glu Met Leu Asp Gln Gly35 40 45Tyr Ile Thr Thr Leu Ser Gly His Thr Leu Arg Val Ser Glu Arg Glu50 55 60Gly Ser Ile Tyr Leu Asn Asp Phe Ala Arg Val Val Ser Ser Asp Leu65 70 75 80Glu Val Val Asn Gly Val Leu His Phe Ile Asp His Val Leu Leu Pro85 90 95Pro<210>59<211>106<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(106)<223>小鼠(mouse) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>59Thr Met Leu Trp Pro Thr Asp Ser Ala Leu Gln Ala Leu Pro Pro Asp1 5 10 15Arg Lys Asn Trp Leu Phe His Glu Asp His Arg Asp Lys Leu Ala Ala20 25 30Ile Leu Arg Gly His Met Ile Arg Asn Ile Glu Ala Leu Ala Ser Asp35 40 45Leu Pro Asn Leu Gly Gln Leu Arg Thr Met His Gly Asn Thr Ile Ser50 55 60Phe Ser Cys Gly Leu Thr Arg Pro Gly Glu Leu Ile Val Gly Glu Asp65 70 75 80Glu Ala His Ile Val Gln Arg His Leu Thr Phe Glu Gly Gly Leu Ala
85 90 95Tyr Gly Ile Asp Gln Leu Leu Glu Pro Pro100 105<210>60<211>96<212>PRT<213>小鼠(mouse)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(96)<223>小鼠(mouse) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>60Thr Leu Phe Val Pro Val Asn Lys Gly Phe Val Asp Asn Met Thr Leu1 5 10 15Ser Gly Pro Asp Leu Glu Leu His Ala Ser Asn Ala Thr Phe Leu Ser20 25 30Ile Asn Ala Ser Arg Gly Thr Leu Leu Pro Ala His Ser Gly Leu Ser35 40 45Leu Phe Ile Ser Asp Thr Gly Pro Asp Asn Thr Ser Leu Val Pro Leu50 55 60Ala Pro Gly Ala Val Val Val Ser His Val Ile Val Trp Asp Ile Met65 70 75 80Ala Phe Asn Gly Ile Ile His Ala Leu Ala Ser Pro Leu Leu Met Pro8590 95<210>61<211>103<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(103)<223>大鼠(rat) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>61Thr Val Phe Ala Pro Ser Asn Glu Ala Val Asp Ser Leu Arg Asp Gly1 5 10 15Arg Leu Ile Tyr Leu Phe Thr Ala Gly Leu Ser Lys Leu Gln Glu Leu20 25 30Val Arg Tyr His Ile Tyr Asn His Gly Gln Leu Thr Val Glu Lys Leu35 40 45Ile Ser Lys Gly Arg Val Leu Thr Met Ala Asn Gln Val Leu Thr Val50 55 60Asn Ile Ser Glu Gly Gly Arg Ile Leu Leu Gly Pro Gly Gly Ile Pro65 70 75 80Val Arg Arg Val Asp Val Pro Ala Ala Asn Gly Val Ile His Met Leu85 9095Glu Gly Ile Leu Leu Pro Pro100<210>62<211>100<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(100)<223>大鼠(rat) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>62Thr Ala Leu Val Pro Ser Glu Ser Ala Ile Arg Arg Leu Ser Leu Glu1 510 15Asp Gln Ala Phe Trp Leu Gln Pro Lys Met Leu Pro Glu Leu Ala Arg
20 25 30Ala His Phe Leu Gln Gly Ala Phe Ser Glu Glu Glu Leu Ala Arg Leu35 40 45Asn Gly Gln Gln Val Ala Thr Leu Ser Ala Thr Thr Arg Trp Gln Ile50 55 60His Asn Ile Ser Gly Lys Val Trp Val Gln Asn Ala Thr Val Asp Val65 70 75 80Pro Asp Leu Leu Ala Thr Asn Gly Ile Leu His Ile Val Ser Gln Val85 90 95Leu Leu Pro Pro100<210>63<211>93<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(93)<223>大鼠(rat) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>63Thr Ile Phe Val Pro Thr Asn His Ser Leu Glu Thr Gln Gly Asn Asn15 10 15Ser Val Leu Gly Ile Asp Thr Val Arg His His Val Ile Leu Gly Glu20 2530Ala Leu Ser Val Glu Val Leu Arg Lys Gly Gly His Arg Asn Ser Leu35 40 45Leu Gly Pro Ala His Trp Leu Val Phe Tyr Asn His Ser Gly Gln Pro50 55 60Glu Val Asn His Met Pro Leu Glu Gly Pro Leu Leu Glu Ala Pro Gly65 70 75 80Ser Ser Leu Phe Gly Leu Ser Gly Ile Leu Ala Val Gly
85 90<210>64<211>97<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(97)<223>大鼠(rat) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>64Thr Val Phe Val Pro His Ala Asp Leu Ile Ser Asn Met Ser Gln Asp1 5 10 15Glu Leu Ala Arg Ile Arg Ala His Arg Gln Leu Val Phe Arg Tyr His20 25 30Val Val Gly Cys Arg Lys Leu Trp Ser Gln Glu Met Leu Asp Gln Gly35 40 45Tyr Ile Thr Thr Leu Ser Gly His Thr Leu Arg Val Ser Glu Arg Glu50 55 60Gly Ser Ile Tyr Leu Asn Asp Phe Ala Arg Val Val Ser Ser Asp Leu65 70 75 80Glu Val Val Asn Gly Val Leu His Phe Ile Asp His Val Leu Leu Pro85 90 95Pro<210>65<211>106<212>PRT<213>大鼠(rat)
<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(106)<223>大鼠(rat) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>65Thr Met Leu Trp Pro Thr Asp Ser Ala Leu Gln Ala Leu Pro Pro Asp1 5 10 15Arg Lys Asn Trp Leu Phe His Glu Asp His Arg Asp Lys Leu Ala Ala20 25 30Ile Leu Arg Gly His Met Ile Arg Asn Ile Glu Ala Leu Ala Ser Asp3540 45Leu Pro Asn Leu Gly Gln Leu Arg Thr Met His Gly Asn Thr Ile Ser50 55 60Phe Ser Cys Gly Leu Thr Arg Pro Gly Glu Leu Ile Val Gly Glu Asp65 70 75 80Glu Ala His Ile Val Gln Arg His Leu Thr Phe Glu Gly Gly Leu Ala85 90 95Tyr Gly Ile Asp Gln Leu Leu Glu Pro Pro100 105<210>66<211>96<212>PRT<213>大鼠(rat)<220>
<221>结构域(DOMAIN)<222>(1)..(96)<223>大鼠(rat) FEX-1的fas-1结构域(DOMAIN)<400>66Thr Leu Phe Val Pro Val Asn Lys Gly Phe Val Asp Asn Met Thr Leu1 5 10 15
Ser Gly Pro Asp Leu Glu Leu His Ala Ser Asn Ala Thr Phe Leu Ser20 25 30Ile Asn Ala Ser Arg Gly Thr Leu Leu Pro Ala His Ser Gly Leu Ser35 40 45Leu Phe Ile Ser Asp Thr Gly Pro Asp Asn Thr Ser Leu Val Pro Leu50 55 60Ala Pro Gly Ala Val Val Val Ser His Val Ile Val Trp Asp Ile Met65 7075 80Ala Phe Asn Gly Ile Ile His Ala Leu Ala Ser Pro Leu Leu Met Pro85 90 95<210>67<211>22<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Fex23正义引物(sense primer)<400>67tgccccatcg atgtgatgaa ac 22<210>68<211>25<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Fex23反义引物(antisens primer)<400>68caaacaagag ctcccgctgc acaat 25
<210>69<211>25<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Fex45正义引物(sense primer)<400>69gcagcgggag ctcttgtttg acctg25<210>70<211>25<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Fex45反义引物(antisens primer)<400>70cccgtccaag cttgcacagt gtcct25<210>71<211>24<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>RACE-GSP-1反义引物(antisense primer)<400>71
tcccagctta ctcagtggcc aggc24<210>72<211>29<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>RACE-GSP-2反义引物(antisense primer)<400>72caggcccatc atatttgcac actgtagac 29<210>73<211>26<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>RACE-GSP-3反义引物(antisense primer)<400>73agttaatttg gcaggggtcc acaggc 26<210>74<211>25<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>FEX1正义引物(sense primer)
<400>74aaggcaggtc tcacctatct cctgg25<210>75<211>22<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>FEX1反义引物(antisense primer)<400>75tcacaaatgc atgtcccgtt gc 22<210>76<211>25<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>hFex2-5正义引物(sense primer)<400>76caaatgtgtc gacctccact tccag25<210>77<211>25<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>hFex2-5反义引物(antisense primer)<400>77cccgtccaag cttgcacagt gtcct25<210>78<211>26<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>hFex2-2正义引物(sense primer)<400>78ataaggatcc accatttttg ttccaa 26<210>79<211>26<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>hFex2-2反义引物(antisense primer)<400>79aataactcga gactgggaat gagaac 26<210>80<211>25<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223>hFex2-4E5正义引物(sense primer)<400>80aaaaaggatc cacagtgttt gctcc25<210>81<211>27<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>hFex2-4E5反义引物(antisense primer)<400>81ttttactcga gacttttggg agatagc 27<210>82<211>28<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-U1正义引物(sense primer)<400>82aaaaaggatc cgtaggggtt cgagattg28<210>83<211>29
<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-U1反义引物(antisense primer)<400>83aataactcga gactgggagg aatgagaac 29<210>84<211>27<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-U2正义引物(sense primer)<400>84aaaaaggatc caactctgag cccacag 27<210>85<211>36<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-U2 antisene primer<400>85aaatactcga gtgactgaat ttccagaact tttccc36
<210>86<211>26<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-U3正义引物(sense primer)<400>86aaaaaggatc cgagaagagg agatgc 26<210>87<211>28<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-U3反义引物(antisense primer)<400>87ttttactcga gactatcaat cagcagac 28<210>88<211>29<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-U4正义引物(sense primer)<400>88aaaatggatc caggtggagt aaaccaaag29
<210>89<211>30<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-U4反义引物(antisense primer)<400>89aaatagaatt ctcagggtgc ttttaaaggc 30<210>90<211>26<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-EGF3正义引物(sense primer)<400>90aaaaaggatc cgagaagagg agatgc 26<210>91<211>29<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-EGF3反义引物(antisense primer)<400>91aaaaactcga gtcaggattt acctgccgc 29
<210>92<211>25<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas5正义引物(sense primer)<400>92ttttaggatc cactgttttt gcacc 25<210>93<211>27<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas5反义引物(antisense primer)<400>93ttttactcga gacttttggg agatagc 27<210>94<211>25<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas6正义引物(sense primer)
<400>94ttttaggatc cactctcttc tggcc 25<210>95<211>28<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas6反以引物(antisens primer)<400>95ttttactcga gactatcaat cagcagac28<210>96<211>25<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas1正义引物(sense primer)<400>96aaaaaggatc cacggtgctg ttacc 25<210>97<211>31<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas1反义引物(antisense primer)
<400>97aaaaactcga gacttaactt gtccatggct c 31<210>98<211>26<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas2正义引物(sense primer)<400>98ataaggatcc accatttttg ttccaa 26<210>99<211>29<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas2反义引物(antisense primer)<400>99aataacycga gactgggagg aatgagaac29<210>100<211>28<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<223>Nus-Fas3正义引物(sense primer)<400>100tttacggatc cactgtcctc gtgccttc 28<210>101<211>27<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas3反义引物(antisense primer)<400>101tttaactcga gactttgtgg gaccagc 27<210>102<211>25<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas4正义引物(sense primer)<400>102aaaaaggatc cacagtgttt gctcc 25<210>103<211>36<212>DNA
<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas4反义引物(antisense primer)<400>103aaatactcga gtgactgaat ttccagaact tttccc 36<210>104<211>27<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas7正义引物(sense primer)<400>104tttaaggatc caccctcttt gtgccac27<210>105<211>30<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-Fas7反义引物(antisense primer)<400>105aaatagaatt ctcagggtgc ttttaaaggc 30<210>106
<211>24<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-mpt70正义引物(sense primer)<400>106aaaaaggatc cacggtgttc gcac 24<210>107<211>27<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-mpt70反义引物(antisense primer)<400>107aaaatctcga gtcacggagg cattagc27<210>108<211>24<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-mpt83正义引物(sense primer)<400>108aattaggatc caccgttttc gccc 24
<210>109<211>26<212>DNA<213>人工序列(Artificial Sequence)<220>
<223>Nus-mpt83反义引物(antisense primer)<400>109aaaatctcga gtcacggggg catcag 2权利要求
1.一种抑制淋巴细胞黏附到内皮细胞的方法，其包括将FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂施用于所需受试者。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述FEX-2多肽来自哺乳动物。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述FEX-2多肽含有序列号1或序列号9表示的氨基酸。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂选自由含有fas-1结构域的多肽、抗-FEX-2抗体、三螺旋形成剂、核酶、与目的分子FEX-2mRNA具有同源性的双链RNA及FEX-2基因的反义核酸所组成的组。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述fas-1结构域来自哺乳动物。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物选自由人、大鼠以及小鼠所组成的组。
7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述fas-1结构域来自选自由FEX-2、mpt70、mpt83、βig-h3、成骨细胞特异性因子2及FEX-1所组成的组中的蛋白质。
8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，所述含有fas-1结构域的多肽具有选自由序列号1至序列号66所组成的组中的氨基酸序列。
9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述含有fas-1结构域的多肽具有选自由序列号1至序列号14所组成的组中的氨基酸序列。
10.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述抗-FEX-2抗体是多克隆抗体或单克隆抗体。
11.根据权利要求10所述的方法，其特征在于，所述单克隆抗体由杂交瘤(保藏号为KCTC10639BP)生成。
12.一种用于预防或治疗炎症性疾病的方法，其特征在于，该方法包括将FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂施用于所需受试者。
13.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述FEX-2多肽来自哺乳动物。
14.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述FEX-2多肽含有序列号1或序列号9表示的氨基酸。
15.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂选自由含有fas-1结构域的多肽、抗-FEX-2抗体、三螺旋形成剂、核酶、与目的分子FEX-2mRNA具有同源性的双链RNA及FEX-2基因的反义核酸所组成的组。
16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述fas-1结构域来自哺乳动物。
17.根据权利要求16所述的方法，其特征在于，所述哺乳动物选自由人、大鼠以及小鼠所组成的组。
18.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述fas-1结构域来自选自由FEX-2、mpt70、mpt83、βig-h3、成骨细胞特异性因子2及FEX-1所组成的组中的蛋白质。
19.根据权利要求18所述的方法，其特征在于，所述含有fas-1结构域的多肽具有选自由序列号1至序列号66所组成的组中的氨基酸序列。
20.根据权利要求19所述的方法，其特征在于，所述含有fas-1结构域的多肽具有选自由序列号1至序列号14所组成的组中的氨基酸序列。
21.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述抗FEX-2抗体是多克隆抗体或单克隆抗体。
22.根据权利要求21所述的方法，其特征在于，所述单克隆抗体由杂交瘤(保藏号为KCTC10639BP)生成。
23.根据权利要求12所述的方法，其特征在于，所述炎症性疾病选自由炎症、炎症性肠病、糖尿病性眼病、腹膜炎、骨髓炎、蜂巢炎、脑膜炎、脑炎、胰腺炎、创伤性休克、支气管哮喘、鼻炎、鼻窦炎、中耳炎、肺炎、胃炎、肠炎、囊性纤维化、中风、支气管炎、细支气管炎、肝炎、肾炎、关节炎、痛风、脊椎炎、赖特尔综合征、结节性多动脉炎、过敏性血管炎、韦格纳肉芽肿病、风湿性多肌痛、巨细胞动脉炎、钙结晶沉积性关节病、假痛风、非关节性风湿症、滑囊炎、腱鞘炎、上髁炎(网球肘)、神经性关节病(夏科氏关节)、关节血肿、过敏性紫癜、肥大性骨关节病、多中心网状组织细胞瘤、脊柱侧凸、血色素症、镰状红细胞症及其他的血红蛋白病、高脂蛋白血症、低丙种球蛋白血症、甲状旁腺机能亢进、肢端肥大症、家族性地中海热、白塞氏病、系统性红斑狼疮、回归热、银屑病、多发性硬化症、败血症、败血症性休克、急性呼吸窘迫综合症、多器官衰竭、慢性阻塞性肺疾病、急性肺损伤及支气管-肺发育不良所组成的组。
24.一种用于抑制淋巴细胞与内皮细胞黏附的药物组合物，其含有FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂及药物可接受的载体。
25.一种用于预防或治疗炎症性疾病的药物组合物，其含有FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂及药物可接受的载体。
26.FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂在制备抑制淋巴细胞和内皮细胞黏附的药物中的用途。
27.FEX-2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂在制备预防或治疗炎症性疾病的药物中的用途。
28.一种抑制淋巴细胞和内皮细胞黏附的药物的筛选方法，其包括以下步骤(a)在检测试剂存在下或不在检测试剂存在下预培养表达FEX-2多肽的细胞；(b)在上述(a)步骤中的在检测试剂存在下预培养的细胞或不在检测试剂存在下预培养的细胞中添加淋巴细胞进行继续培养；以及(c)测定淋巴细胞与在检测试剂存在下预培养的细胞的黏附程度，并与淋巴细胞与不在检测试剂存在下预培养的细胞的黏附程度进行比较，确认所述待检试剂是否抑制淋巴细胞的黏附。
29.一种用于预防或治疗炎症性疾病的药物的筛选方法，其包括以下步骤(a)在待检试剂存在下或不在待检试剂存在下预培养表达FEX-2多肽的细胞；(b)在上述(a)步骤中的在待检试剂存在下预培养的细胞或不在待检试剂存在下预培养的细胞中添加淋巴细胞进行继续培养；(c)测定淋巴细胞与在待检试剂存在下预培养的细胞的黏附程度，并与淋巴细胞与不在待检试剂存在下预培养的细胞的黏附程度进行比较，确定所述待检试剂是否抑制淋巴细胞的黏附；以及(d)将上述(c)步骤中确认的抑制淋巴细胞黏附的待检试剂施用于患有炎症性疾病的动物以检查治疗效果。
30.一种抑制淋巴细胞和内皮细胞黏附的药物的筛选方法，其包括以下步骤(a)在待检试剂存在下或不在待检试剂存在下预培养淋巴细胞；(b)将在上述(a)步骤中的在待检试剂存在下预培养的淋巴细胞或不在待检试剂存在下预培养的淋巴细胞添加至表达FEX-2多肽的细胞中进行继续培养；以及(c)测定淋巴细胞与在待检试剂存在下预培养的细胞的黏附程度，并与淋巴细胞与不在待检试剂存在下预培养的细胞的黏附程度比较，由此确定所述待检试剂是否抑制淋巴细胞的黏附。
31.一种用于预防或治疗炎症性疾病的药物的筛选方法，其包括以下步骤(a)在待检试剂存在下或不在待检试剂存在下预培养淋巴细胞；(b)将在上述(a)步骤中的在待检试剂存在下预培养的淋巴细胞或不在待检试剂存在下预培养的淋巴细胞添加至表达FEX-2多肽的细胞中进行继续培养；(c)测定淋巴细胞与在待检试剂存在下预培养的细胞的黏附程度，并与淋巴细胞与不在待检试剂存在下预培养的细胞的黏附程度比较，确定所述待检试剂是否抑制淋巴细胞的黏附；以及(d)将上述(c)步骤中确定的抑制淋巴细胞黏附的待检试剂施用于患有炎症性疾病的动物以检查治疗效果。
全文摘要
本发明是关于预防或治疗炎症性疾病的方法及药物组合物。更具体地说，本发明涉及包括将FEX－2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂施用于所需受试者以抑制淋巴细胞和内皮细胞黏附的方法或炎症性疾病的治疗方法；含有上述FEX－2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂的药物组合物；上述FEX－2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂的用途；及以筛选FEX－2多肽与淋巴细胞黏附的抑制剂为特征的用于抑制淋巴细胞和内皮细胞黏附反应的药物或用于治疗炎症性疾病的药物的筛选方法。
文档编号A61K38/17GK101084006SQ200580042656
公开日2007年12月5日 申请日期2005年10月12日 优先权日2004年10月12日
发明者金仁山, 朴胜尹, 丁美娫 申请人:庆北大学校产学协力团