蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂用于治疗炎性疾病、急性肺损伤和双相性精神障碍的用途的制作方法

专利名称：蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂用于治疗炎性疾病、急性肺损伤和双相性精神障碍的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及新的治疗策略，该策略通过施用蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂用于治疗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病，特别是脓毒症和急性肺损伤，以及双相性精神障碍。
背景技术：
已经知道蛙皮素/胃泌素释放肽(GRP)受体系统(即蛙皮素/胃泌素、它们的受体和受体-介导的信号途径的组分)涉及数个方面的CNS功能的调控(Yamada等，Mol.Psychiatry 7，113-117(2002))、涉及神经精神障碍如精神分裂症(Mellar等，Peptides 25，585-588(2004))和孤独症(Ishikawa-Brush等，Hum.Mol.Genet.6，1241-1250(1997))、涉及癌的发展(Schwarts-mann，G.，Lung Cancer46，129(2004)；Szepeshazi等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94，10913(1997))，以及涉及慢性支气管炎(Meloni等，Int.J.TissueReact.14，195-201(1992))和肺纤维化(Lemaire等，Neuropeptides20，63-72(1991))的发病机理。
另外已经知道蛙皮素/GRP系统对免疫系统有数种作用。例如，据报道GRP体外诱导肥大细胞增殖和趋化性(Genton等，AmericanJournal of Surgery 186，253-258(2003)；Subramaniam等，Am.J.Respir.Crit.Care Med.168，601-611(2003))以及作为刺激物或抑制剂调控淋巴细胞、吞噬细胞和天然杀伤细胞的功能(Medina等，Mechanisms of Ageing and Development 102，249-261(1998)；Medina等，Neuropeptides 33，173-179(1999)；De Ia Fuente等，Immu-nology 73，205-211(1991)；Medina等，Neuropeptides 32，549-555(1998))。而且，看上去GRP对成年小鼠的巨噬细胞的运动性、摄入和过氧化物产生具有刺激作用，强化脂多糖(LPS)活化的肺泡巨噬细胞释放IL-1(De Ia Fuente等，Life Sciences 67，2125-2135(2000)；De Ia Fuente等，Immunology 73，205-211(1991)；Lemaire等，Neuropeptides 20，217-223(1991))。
尽管与上述涉及GRP的作用相关的确切细胞内途径仍未确定，已经报道GRP对鼠腹腔白细胞的某些作用是通过蛋白激酶C的活化来介导(Del Rio等，Regul.Pept.49，185-193(1994))。而且，已知蛙皮素(GRP的一种同系物)刺激环氧合酶-2(COX-2)在肠上皮细胞系中表达。蛙皮素刺激的COX-2表达需要Ca2+的增加、胞外信号调节激酶(EPK)-1和-2以及p38MAPK的活化和转录因子Elk-1、ATF-2、c-Fos和c-Jun的增加的激活和表达(Guo Y.-S.等，J.Biol.Chem.276，22941-22947(2001))。
在过去的几年里，蛙皮素/GRP受体系统已经成为抗癌疗法(Schwartsmann，G.，Lung Cancer 46，129(2004)；Szepeshazi等，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.94，10913(1997)、美国专利5,244,883和5,369,094)和神经精神障碍(Ishikawa-Brush等，Hum.Mol.Genet.6，1241-1250(1997)和Mellar等，Peptides 25，585-588(2004))的一个有希望的药物靶标，并且以及投入了巨大的力量来开发蛙皮素/GRP拮抗剂。如今，已经知道了数种类型的蛙皮素/GRP拮抗剂，其主要属于多肽化合物类型。其实例包括公开于美国专利5,244,883的九肽化合物、公开于美国专利5,369,094中的九肽化合物、P物质的类似物(Coy等，J.Biol.Chem.263，5056(1988))和GRP的类似物(20-27)(Heimbrook等，J.Biol.Chem.264，11258(1989))。
然而，蛙皮素/GRP拮抗剂改善炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病，特别是脓毒性休克和急性肺损伤的治疗潜力仍旧未知。(全身性)炎症的出现是与众多医学疾病相关的严重问题并且认为是许多病例中死亡的原因。然而，目前可利用的抗炎策略仅在产生垂危患者中产生不大的临床效果(BLUE Journal)。这仅次于数种因素，包括与这些疾病相关联的异质性炎症应答(Hotchkiss & Karl，New Engl.J.Med.348，138-150(2003))和临床前试验的误导性设计(Ritter等，Lancet364，498-499(2004)；Polderman等，Lancet363，1721-1723(2004))。
例如，脓毒性休克已经成为加强监护病房中发病率和死亡率最频繁的原因之一(Sands等，JAMA 278，234-240(1997))。尽管一般由感染引发，脓毒症的发病机理的特征是可引起致死性多器官衰竭的爆发性全身炎症应答(Hotchkiss & Karl，New Engl.J.Med.348，138-150(2003))。脓毒症的常规治疗由支持血压、器官血流和通气，同时加强抗生素和清除感染源组成。尽管在理解脓毒症发病机理及其治疗中有显著进展，脓毒症休克引起的死亡率在过去数十年内改善很小。
双相性精神障碍(也称为躁狂抑郁病)是一种脑障碍，它引起个体心境、精力和发挥功能的能力产生不同寻常的变化。与每个人经历的正常起伏不同，双相性精神障碍的症状是严重的。它们可以导致人际关系破坏、工作或学习表现下降，甚至是自杀。关于双相性精神障碍的综述和其它参考可以在National Institute of Mental Health(NIMH)出版物“Bipolar disorder”(NIH出版号为02-3679，2001年印刷，2002年9月再次印刷)中找到，其也可以从http://www.nimh.nih.gov/publicat/NIMHbipolar.pdf获得。
在任何给定年份中，超过2百万美国成人，或约百分之一的年龄18岁及以上人群具有双相性精神障碍。双相性精神障碍通常在青少年晚期或成年早期产生。然而，一些患者在儿童期就出现症状，而一些患者在晚年才出现这些症状。这常常不被认为是疾病，并且人们在得到正确诊断和治疗前可能要忍受多年。如同糖尿病或心脏病，双相性精神障碍是一种长期疾病，在整个人生中必须仔细看护。
双相性精神障碍引起巨大的心境波动-从明显的“高涨”和/或易怒到悲哀和绝望，再回到先前的状态，在这期间常常有一段正常。在心境改变的同时也会发生严重的精力和行为的变化。心境高涨或者低落的阶段被称作躁狂和抑郁发作。
躁狂症(或躁狂发作)的体征和症状包括“精力、活动和不安的增加；心境过度“高涨”、明显的心情好、欣快；极度易怒；思维奔溢和语速加快，思想跳跃；注意力分散，难以集中；睡眠需要减少；对于个人的能力和力量持有不现实的信念；判断力差；无节制花费；异常形为持续时间增长；性欲增加；药物滥用，特别是可卡因、酒精和睡眠药物；煽动的、侵犯的或攻击的行为；否认错误”。
如果一天大部分时间(几乎每天持续一周或更长时间)，高涨的心境伴随三种或更多其它症状发生时，则诊断为躁狂发作。如果心境为易怒，则必须表现另外4种症状。
抑郁(或抑郁发作)的体征和症状包括“持续悲伤、焦虑或者空虚；无望或悲观的感觉；罪恶感或无价值感或无助感；对曾经喜爱的活动丧失兴趣或愉快感，包括性生活；精力减退，虚弱或“迟缓”的感觉；注意力集中困难、记忆困难，或者作决定困难； 不安或易激怒；睡眠过多或者无法入睡；食欲改变和/或无故的体重减轻或增加；并非躯体疾病或创伤引起的慢性疼痛或者其他持久的身体症状；死亡和自杀的想法或企图”。
如果5种或更多种这些症状持续一天大部分时间(几乎每天，为期2周或更长)，则诊断为抑郁发作。
一种轻度到中度的躁狂称作为轻躁狂(hypomania)。轻躁狂的患者会感到情况良好并且伴随很好的生活功能和增强的工作效率。因此，即使家庭成员或朋友有感到患者的心境波动可能存在双相性精神障碍，但患者往往否认。然而，不进行正确的治疗，轻躁狂的患者可能会转变为严重的躁狂或者抑郁。
有时候，严重的躁狂或者抑郁发作包括精神病的症状(或者精神病性症状)。常见的精神病性症状是幻觉(听幻觉、视幻觉，或者其他感觉器官感受到不存在的事物)和妄想(错误的、不能被逻辑推理影响或人通常的文化所解释的强烈信念)。双相性精神障碍的精神病性症状是当时极端心境状态的反映。例如、夸大妄想(如相信某人是总统或者具有特殊能力或者财富)可能会在躁狂阶段产生；自罪或无价值妄想(相信某人被毁灭或者贫穷或者犯有一些严重的罪)可能会在抑郁阶段产生。具有这些症状的双相性精神障碍患者有时候会被误诊为精神分裂症(另一种严重的精神病)。
把双相性精神障碍的不同心境状态考虑为一种症状谱或者连续状态可能是有帮助的。在一端是严重的抑郁，之后是中度的抑郁，再是轻度的抑郁(短期状态人们称之为“蓝色忧郁”，如果是慢性的则称为“心境恶劣”)。然后是正常的或者平衡的心境状态，接着是轻躁狂(轻度或中度的躁狂)，以及严重的躁狂。
然而，一些人的躁狂和抑郁症状可能同时发生，称之为混合型双相性精神障碍。混合型的双相性精神障碍症状常常包括激动、睡眠障碍、明显的食欲改变、精神病性症状，以及自杀观念。患者可能感到很悲伤、无望，同时又感到极度的精力充沛。
双相性精神障碍可能会引起精神障碍之外的其他一些问题，例如，酒精或物质滥用，学习或工作表现下降，或者人际关系受限。事实上，这些问题可能是心境障碍的一种征象。
流行性、高自杀风险以及社会和经济成本使双相性精神障碍成为一种主要的公共卫生危害。
因此需要备选的药物用于治疗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病，如脓毒症和急性肺损伤以及双相性精神障碍。
发明概述本发明提供了蛙皮素/胃泌素释放肽(GRP)拮抗剂，该拮抗剂适合用于制备用于治疗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病以及脑障碍，特别是双相性精神障碍疾病的药物组合物。本发明的蛙皮素/GRP拮抗剂特别适用于治疗脓毒症和急性肺损伤和不同型和/或亚型的双相性精神障碍，例如躁狂症、急性躁狂症、严重躁狂症、轻躁狂、抑郁症、中度抑郁症、心境恶劣、严重抑郁症、躁狂和/或抑郁发作、精神病/精神病性症状(例如幻觉、妄想)、混合型双相性精神障碍(mixedbipolar state)、I型双相性精神障碍(bipolar I disorder)、II型双相性精神障碍(bipolar II disorder)和/或快速循环型双相性精神障碍。
本发明是基于意外的发现，即在体内，用蛙皮素/GRP拮抗剂治疗削弱了TNF-α和IL-1β的血清水平并提高了在炎性疾病中，特别是在“建立的”脓毒症中的存活率，甚至是在所述疾病发作后才开始治疗时。而且，根据本发明的蛙皮素/GRP拮抗剂在建立的急性肺损伤(ALI)模型中减小由气管内滴入脂多糖(LPS)诱导的肺损伤。因而，本发明的蛙皮素/GRP拮抗剂提供了一种备选的治疗策略用于治疗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病，特别是脓毒症和急性肺损伤。
本发明另外是基于这样一个意外发现，即在体内，用蛙皮素/GRP拮抗剂治疗在建立的急性躁狂症/双相性精神障碍的模型中防止了d-苯丙胺诱导的过度兴奋。因而，本发明的蛙皮素/GRP拮抗剂提供了一种备选治疗策略用于治疗或预防脑障碍，优选双相性精神障碍，并且特别是不同型和/或亚型的双相性精神障碍，例如躁狂症、急性躁狂症、严重躁狂症、轻躁狂、抑郁症、中度抑郁症、心境恶劣、严重抑郁症、躁狂和/或抑郁发作、精神病/精神病性症状(例如幻觉、妄想)、混合型双相性精神障碍、I型双相性精神障碍、II型双相性精神障碍和/或快速循环型双相性精神障碍。
根据本发明，使用的蛙皮素/GRP拮抗剂属于多肽类化合物，并且优选为如美国专利No.5,244,883和5,369,094中公开的那些九肽。最优选地，本发明的拮抗剂是H-D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Leu-NH2(下文中表示为RC-3095)或3-苯基-丙酰基-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Thz-NH2(下文中表示为RC-3940-II)。
在本发明的一个优选实施方案中，使用了两种或多种不同的蛙皮素/GRP拮抗剂用于制备药物组合物，该药物组合物用于治疗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病。
在本发明的另一个优选实施方案中，使用了两种或多种不同的蛙皮素/GRP拮抗剂用于制备药物组合物，该药物组合物用于治疗或预防脑障碍，优选双相性精神障碍，以及特别是不同型和/或亚型的双相性精神障碍。
在一进一步优选的实施方案中，本发明的蛙皮素/GRP拮抗剂或其可药用盐以每kg体重0.01-10mg的日剂量施用给患者，其中施用的优选途径是皮下施用。
在一进一步的实施方案中，本发明的蛙皮素/GRP拮抗剂适合与其它药品组合使用以用于治疗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病。
在一更进一步的实施方案中，本发明的蛙皮素/GRP拮抗剂适合与其它药品组合使用以用于治疗或预防脑障碍，优选双相性精神障碍，以及特别是不同型和/或亚型的双相性精神障碍。
通过参考下面的本发明详述，实施例和下面描述的附图，可以更全面的理解本说明书。
附图简述

图1显示了胃泌素释放肽(GRP)受体拮抗剂RC-3045对建立的脓毒症中的存活率的影响。让成年雄性Wistar大鼠接受盲肠结扎和穿孔(盲肠结扎穿孔法，CLP)，并在双盲随机设计中分成两组1)基本支持(每6小时30.0mg/kg头孢曲松+每6小时25.0mg/kg克林霉素，进行三天，在第一天每12小时加上30ml/kg盐水重新配置)；2)基本支持加上RC-3095治疗(5mg/kg一天一次，进行两天)。所有治疗在手术操作后6小时开始。在10天期间记录存活率。数据显示为动物存活率百分比(组1中n＝32，组2中n＝40；*p＜0.01 Kaplan-Meier曲线；cox-回归分析)。
图2显示了与脓毒反应相关的主要器官中的硫代巴比妥酸反应物质含量。将大鼠进行假手术或让其接受盲肠结扎穿孔法(CLP)。如实施例中描述的，将CLP动物分组接受“基本支持”、有“基本支持”的RC-3095或仅接受盐水。如实施例中描述的，CLP后24小时将心脏、回肠、肝脏、肺和肾脏摘除用以测定硫代巴比妥酸反应物质含量。值表示为平均值±S.D.(每组n＝6)。*不同于假手术，p＜0.05**不同于CLP，p＜0.05图3显示了与脓毒反应相关的主要器官中的蛋白质羰基含量。将大鼠进行假手术或让其接受盲肠结扎穿孔法(CLP)。如实施例中描述的，将CLP动物分组接受“基本支持”、有“基本支持”的RC-3095或仅接受盐水。如实施例中描述的，CLP后24小时将心脏、回肠、肝脏、肺和肾脏摘除用以测定蛋白质羰基含量。值表示为平均值±S.D.(每组n＝6)。
*不同于假手术，p＜0.05**不同于CLP，p＜0.05图4显示了盲肠结扎穿孔法(CLP)后2 4小时的组织病理学发现。如实施例中描述的让大鼠接受CLP并分组接受“基本支持”或具有“基本支持”的RC-3095。如实施例中描述的，CLP 24小时后摘除心脏(没有显示)、回肠(A和B)、肝脏(没有显示)、肺(C和D)和肾脏(E和F)用于组织病理学分析。代表性例子(n＝3)。进行CLP的A、C和E大鼠接受“基本支持”。进行CLP的B、D和F大鼠接受“基本支持”+RC-3095(苏木精和曙红X 400)。
图5显示了由脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤后肺中的蛋白质羰基和硫代巴比妥酸反应物质含量。如实施例中描述的，让大鼠曝露于LPS或盐水并用RC-3095治疗。如实施例中描述的，急性肺损伤诱导后24小时，摘除肺用于测定蛋白质羰基和硫代巴比妥酸反应物质含量。值表示为平均值±S.D.(每组n＝6)。
*不同于盐水，p＜0.05**不同于LPS，p＜0.05
图6显示了在大鼠中通过RC-3095预防苯丙胺(AMPH)-诱导的过度兴奋。数据为在开放区域探索过程中横越和直立的平均值±SEM数目。给动物腹膜内注射10ml/kg的盐水(SAL，0.9％NaCl)或RC-3095(0.1、1.0或10.0mg/kg)，随后腹膜内注射SAL或苯丙胺(AMPH，2mg/kg)。*p＜0.05，显著不同于两次注射SAL的对照组。
在附图中，相同或相似元素用相同的参考符号表示，以易于理解本发明。
发明详述本发明涉及使用蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂制备药物组合物，所述的药物组合物用于治疗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病，优选脓毒症和急性肺损伤。
本发明进一步涉及使用蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂制备药物组合物，所述的药物组合物用于治疗或预防脑障碍，优选双相性精神障碍，并且特别是不同型和/或亚型的双相性精神障碍。
根据本发明，应该理解，术语“炎性疾病”或“免疫-介导的炎性疾病”在此使用时，分别表示涉及炎性过程的任何疾病状态，所述的炎性过程即涉及免疫系统的细胞如T淋巴细胞和B淋巴细胞、巨噬细胞、肥大细胞、天然杀伤细胞等，同时伴随或不伴随白介素和/或细胞因子产生的过程。因而，在本发明上下文中，应该理解，医学疾病“脓毒症”和“急性肺损伤”以及“脓毒性休克”、“类风湿性关节炎”、“溃疡性结肠炎”、“节段性回肠炎”、“癌性炎症性浸润(oncologicinflammatory infiltration)”、“银屑病关节炎”和其它疾病属于“炎性疾病”或“免疫-介导的炎性疾病”的定义，因为它们全部涉及炎性反应。在脓毒症的情况中，例如，其发病机理的特征是可以引起致死性多器官衰竭的爆发性系统性炎症应答。
根据本发明，应该进一步理解，术语“双相性精神障碍”或“不同型和/或亚型的双相性精神障碍”在此使用时，分别包括已知为双相性精神障碍及其各种形式和/或亚型的一部分、涉及双相性精神障碍及其各种形式和/或亚型、显示双相性精神障碍及其各种形式和/或亚型的症状等的任何状态或疾病。因而，在本发明的上下文中，应该理解，医学疾病“躁狂症、急性躁狂症、严重躁狂症、轻躁狂、抑郁症、中度抑郁症、心境恶劣、严重抑郁症、躁狂和/或抑郁发作、精神病/精神病性症状(例如幻觉、妄想)、混合型双相性精神障碍、I型双相性精神障碍、II型双相性精神障碍和/或快速循环型双相性精神障碍”及其它状态或疾病属于“双相性精神障碍”或“不同型和/或亚型的双相性精神障碍”的定义，因为所有这些疾病都涉及或是双相性精神障碍的特定类型。
而且，本发明提供术语“病状、状态、疾病或障碍的治疗”，当在此使用的，也覆盖实际的治疗以及维持治疗和预防人以及哺乳动物的复发。
根据本发明的一个优选的实施方案，具有对抗蛙皮素或蛙皮素样肽的拮抗剂性质的美国专利5,244,883、CA 2,097,192或WO 92/09626公开的多肽化合物，如GRP、神经介肽C等，可用作蛙皮素/GRP拮抗剂。本发明的这些蛙皮素/GRP拮抗剂由下面的通式(I)表示X-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-psi-A9-Q(I)其中
Q是NH2或OQ1，其中Q1是氢、C1-10-烷基、苯基或苯基-C7-10-烷基；X是氢，连接A1的α氨基至侧链羧基(如果A2中存在)的单键或式R1CO-的基团，其中R1选自(a)氢、C1-10-烷基、苯基或苯基C7-10-烷基；(b)R2(R3)N-，其中R2是氢、C1-10-烷基、苯基或苯基-C7-10-烷基，R3是氢或C1-10-烷基；和(c)R4-O-，其中R4是C1-10-烷基、苯基或苯基-C7-10-烷基；A1是D-、L-或DL-pGlu、Nal、Phe、Thi、Tyr、Tpi、Hca、Hpp、Mpp、Trp或在苯环上用一个或多个选自以下的成员取代的Trp卤素、NO2、NH2、OH、C1-3-烷基和C1-3-烷氧基，其中卤素是氟、氯和溴；A2是Asn、Dpa、Gln、His、MeHis、His(Bz)、His(Z)或式Dpa(X)、Asp(Y)、Glu[-]和Glu(Y)的基团，其中X同上，Y是-OR5或-N(R6)R7，其中，R5是氢、C1-3-烷基或苯基；R6是氢或C1-3-烷基；R7是氢、C1-3-烷基或-NHCONH2，以及[-]是连接侧链羧基(如果A2中存在)和A1的α氨基的单键，其中X是单键；A3是Nal、Pal、Tpi、Trp、MeTrp、Trp(For)或在苯环上用一个或多个选自以下的成员取代的Trp卤素、NO2、NH2、OH、C1-3-烷基和C1-3-烷氧基，其中卤素是氟、氯和溴；A4是Ala、MeAla或Gln；A5是Val或MeVal；A6是Gly、Phe或D-Ala；A7是His、MeHis、His(Bz)、His(Z)、Lys(Z)或Pal；A8是Leu或Phe的还原等排体(reduced isostere)；A9是Leu、Phe、Tpi、Trp或在苯环上用一个或多个选自以下的成员取代的Trp卤素、NO2、NH2、OH、C1-3-烷基和C1-3-烷氧基，其中卤素是氟、氯和溴；前提是如果A9是Leu或Phe，则A1不是D-Nal或DL-Phe并且如果A1是D-Nal或DL-Phe，则A9不是Leu或Phe；以及其与可药用酸形成的盐。
在上述式(I)的化合物中，化合物H-D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Leu-NH2(RC-3095)最优选用于本发明中。
根据本发明的另一优选的实施方案，在美国专利5,369,094中公开的多肽化合物可用作蛙皮素/GRP拮抗剂。本发明的这些蛙皮素/GRP拮抗剂用下面的通式(II)表示X-A1-A2-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-A9-Q (II)其中
Q是NH2或-OQ1，其中Q1是氢、C1-10-烷基、苯基或苯基-C1-10-烷基；X是氢，连接A1的α氨基至A2的3-丙酰基部分上的γ-羧酸部分(当A2是Glu[-]时)的单键或式R1CO-的基团，其中R1选自(a)氢、C1-10-烷基、苯基、苯基-C1-10-烷基、p-H1-苯基、p-H1-苯基-C1-10-烷基、萘基、萘基-C1-10-烷基、吲哚基、吲哚基-C1-10-烷基、吡啶基、吡啶基-C1-10-烷基、噻吩基、噻吩基-C1-10-烷基、环己基或环己基-C1-10-烷基、其中H1是F、Cl、Br、OH、CH3或OCH3；(b)R2(R3)N-，其中R2是氢、C1-10-烷基、苯基或苯基-C1-10-烷基，R3是氢或C1-10-烷基；(c)R4-O-，其中R4是C1-10-烷基、苯基或苯基-C1-10-烷基；A1是D-或L-氨基酸残基，所述残基选自Phe、p-H1-Phe、pGlu、Nal、Pal、Tpi、Trp或在苯环上由一个或多个选自卤素、NH2或C1-3烷基的成员取代的Trp；或假如X＝R1CO-，则A1是连接R1CO-的酰基至A2的α氨基的肽键；A2是Gln、Glu[-]、Glu(Y)或His，其中[-]是单键，当X是单键并且A2是Glu[-]时，所述的[-]连接A2的3-丙酰基部分上的γ-羧酸部分与A1的α氨基，Y是(a)-OR5，其中R5是氢、C1-10-烷基或苯基；或(b)-N(R6)R7，其中R6是氢或C1-3-烷基，R7是氢、C1-3-烷基或-NHCONH2，以及Leu-psi-是Leu的还原形式，其中C＝O替换为-CH2-，这样该-CH2-部分与邻接的A9残基的α氨基的键是假肽键；A9是Tac、MTac或DMTac；以及其与可药用酸形成的盐。
在上述式(II)的化合物中，化合物3-苯基-丙酰基-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Thz-NH2(RC-3940-II)最优选用于本发明中。
根据本发明，根据式(I)或(II)的化合物可以以可药用盐或酸的形式存在。其实例包括酸加成盐，所述的加成盐选自盐酸盐、硫酸盐、马来酸盐、酒石酸盐等，优选醋酸盐、扑酸盐和三氟醋酸盐。
在本发明的另外的优选实施方案中，一种或多种如上定义的蛙皮素/GRP拮抗剂，特别是RC-3095用于制备药物组合物，所述的药物组合物用于预防脑障碍，优选双相性精神障碍，并且特别是不同型和/或亚型的双相性精神障碍如躁狂症、急性躁狂症、严重躁狂症、轻躁狂、抑郁症、中度抑郁症、心境恶劣、严重抑郁症、躁狂症和/或抑郁症发作、精神病/精神病性症状(例如幻觉、妄想)、混合型双相状态、I型双相性精神障碍、II型双相性精神障碍和/或快速循环型双相性精神障碍，其中所述的蛙皮素/GRP拮抗剂，并且特别是RC-3095用作情绪稳定剂，特别是抗躁狂剂，其也可以预防双相性精神障碍(例如躁狂症和/或抑郁症和/或其不同亚型)的新发作。
在本发明的一个另外优选的实施方案中，如上定义的两种或多种不同的蛙皮素/GRP拮抗剂的混合物可用于制备药物组合物，所述的药物组合物用于对抗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病和/或脑障碍，优选双相性精神障碍，和/或特别是不同型和/或亚型的双相性精神障碍。例如，在炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病的治疗和/或脑障碍(优选双相性精神障碍)和/或特别是不同型和/或亚型的双相性精神障碍的治疗或预防中，施用的蛙皮素/GRP拮抗剂可以是与或不与根据本发明的一种或多种其它蛙皮素/GRP拮抗剂一起的RC-3095或RC-3940-II，其中所述的拮抗剂也可作为医药试剂盒施用。取决于要治疗的炎性疾病和/或脑障碍，本发明的药物组合物也可以含有用于相同疾病或其它疾病的其它活性成分/药物。
本发明的蛙皮素/GRP拮抗剂适合与其它药品组合使用以用于治疗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病。这类药品在用本发明的蛙皮素/GRP拮抗剂治疗前和/或期间和/或之后施用。所述的药品也可以与所述蛙皮素/GRP拮抗剂一起作为医药试剂盒施用。
这类其它药品可以是-非类固醇抗炎药(NSAID)。它们可以选自(但不限于)阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬和COX-2抑制剂如塞来考昔和伐地考昔。
-止痛药。它们可以选自(但不限于)对乙酰氨基酚、右丙氧芬、mepeidine、吗啡。
-糖皮质激素或泼尼松。
-缓解疾病的抗风湿性药物(DMARD)。它们可以选自(但不限于)硫唑嘌呤、青霉胺、氯喹、羟氯喹、柳氮磺吡啶、甲氨蝶呤、可注射和口服金。
-生物反应调节剂。它们可以选自(但不限于)阿那白滞素、阿达木单抗(adaliumumab)、依那西普、英夫利昔单抗。
本发明的蛙皮素/GRP拮抗剂进一步适合与其它药品组合使用以用于治疗或预防脑障碍，优选双相性精神障碍和/或特别是不同型和/或亚型的双相性精神障碍。这类药品在用本发明的蛙皮素/GRP拮抗剂治疗前和/或期间和/或之后施用。所述的药品也可以与所述蛙皮素/GRP拮抗剂一起作为医药试剂盒施用。
在这方面，这类其它药品可以是例如通常用来帮助控制双相性精神障碍的“情绪稳定剂”。数种不同类型的情绪稳定剂可以利用。通常，双相性精神障碍患者持续用情绪稳定剂长期(数年)治疗。当需要时加入其它药物，通常在较短时期内，用于治疗尽管使用了所述情绪稳定剂仍产生的躁狂症或抑郁症发作。
这类情绪稳定剂的非限制性实例是●锂●抗惊厥药物，例如丙戊酸盐(Depakote)或卡马西平(Tegretol)●更新的抗惊厥药物，包括拉莫三嗪(Lamictal)、加巴喷丁(Neurontin)和托吡酯(Topamax)。
●非典型抗精神病药物，包括氯氮平(Clozaril)、奥氮平(Zyprexa)、利培酮(Risperdal)、喹硫平(Seroquel)和齐拉西酮(Geodon)。
●苯二氮杂类药物如氯硝西泮(Klonopin)或劳拉西泮(Ativan)。
●镇静药物，如唑吡坦(Ambien)。
本发明的药物组合物适合用于治疗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病，如脓毒症、急性肺损伤、脓毒性休克、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、节段性回肠炎、癌性炎症性浸润、银屑病关节炎和/或用于治疗或预防脑障碍，优选双相性精神障碍，以及特别是不同型和/或亚型的双相性精神障碍如躁狂症、急性躁狂症、严重躁狂症、轻躁狂、抑郁症、中度抑郁症、心境恶劣、严重抑郁症、躁狂和/或抑郁发作、精神病/精神病性症状(例如幻觉、妄想)、混合型双相状态、I型双相性精神障碍、II型双相性精神障碍和/或快速循环型双相性精神障碍，其含有如上提及的至少一种蛙皮素/GRP拮抗剂作为活性成分。除了至少一种蛙皮素/GRP拮抗剂，本发明的药物组合物可以含有合适的可药用载体、稀释剂和/或佐剂，所述的载体、稀释剂和/或佐剂有助于将活性成分加工成制剂和/或有助于测定药物动力学。关于配制药物制剂的技术的进一步细节是本领域技术人员所熟知的。
所述的蛙皮素/GRP拮抗剂包含于本发明的药物组合物中，所述的药物组合物适合以治疗有效量用于治疗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病和/或脑障碍以达到期望的目的。包含于要施用用于治疗的药物组合物中的各种蛙皮素/GRP拮抗剂的实际总剂量取决于，例如，上述疾病的性质和阶段、患者的年龄和性别、施用的特点和治疗的持续时间。对于本发明的药物组合物，每千克体重0.01-10mg、优选每千克体重0.015-1.5mg、更优选每千克体重0.03-0.3mg的日剂量的至少一种蛙皮素/GRP拮抗剂是合适的，其中所述蛙皮素/GRP拮抗剂的日剂量可以一次施用或两次或多次亚剂量施用。
根据本发明的药物制剂可以作为液体、半固体或固体药物剂型、作为溶液剂、悬浮剂、乳剂、凝胶剂、软膏剂、泡沫剂、糊剂、气雾剂、粉剂等施用。合适的施用途径可以，例如，包括经皮肤、静脉内、肌内、皮下、intrasanally等施用。优选的施用途径是皮下施用。优选地，受治疗的受试者是动物，优选哺乳动物，并且最优选是人。
本发明化合物如根据通式(I)或通式(II)的化合物的作用周期可以根据实际的治疗需要通过合适的方法延长。该目标可以通过化学或制药手段达到。获得延长作用周期的实例是使用移植片和脂质体、生成低溶解性的盐和络合物或使用结晶悬浮剂。
本发明通过以下实施例的方式更详细的解释，然而却不限于以下实施例。
实施例I)在此，本发明的发明人证明了所述蛙皮素/GRP拮抗剂RC-3095用于治疗炎性疾病类风湿性关节炎的治疗潜力。
他们进一步证明了所述蛙皮素/GRP拮抗剂RC-3095用于治疗两种炎性疾病即脓毒症和急性肺损伤的治疗潜力。针对RC-3095对巨噬细胞的作用的试验揭示，RC-3095削弱活化的巨噬细胞释放促炎细胞因子TNF-α和IL-1β。
在充分建立的试验性脓毒症的模型中，在体内，甚至是当所述疾病发作后才开始治疗时，使用蛙皮素/GRP受体拮抗剂RC-3095的治疗削弱了TNF-α和IL-1β的血清水平并提高了炎性疾病中，特别是在“建立的”脓毒症中的存活率。而且，发现蛙皮素/GRP拮抗剂RC-3095在建立的急性肺损伤(ALI)模型中减小了由气管内滴入脂多糖(LPS)诱导的肺损伤。
而且，据显示，所述的蛙皮素/GRP拮抗剂RC-3095削弱了与脓毒症反应相关的数种器官中的氧化损伤和ALI中肺的氧化损伤。众所周知，活性氧簇(ROS)展示了数种与脓毒性休克相关的促炎特性(Salvemini等，Br.J.Pharmacol.127，685-692(1999)；Fantone&Ward，Am.J.Pathol.107，395-418(1982)；Ritter等，Oxidativeparameters and mortality in sepsis induced by cecal ligationand perforation，Int.Care Med.(2003))。除了其促炎作用，ROS具有许多细胞毒性机制，并且诱导核酶聚(腺苷-5′-二磷酸-核糖)聚合酶的活化、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)和三磷酸腺苷(ATP)的损耗，这导致如脓毒性休克中表现的不可逆转的细胞损伤(Szabó等，Trends Pharmacol.Sci.19，287-298(1999))。抗氧化剂抑制TNF的释放、促炎细胞因子的活化、细胞凋亡和坏死(Peristeris等，CellImmunol.140，390-399(1992))。
而且，RC-3095可以削弱炎性浸润、肠道细菌移位，并且这些作用可以，部分地，负责证明了的保护作用。试验数据暗示，RC-3095没有体现出直接的抗氧化剂或抗生物剂效果。
因而，以下试验结果表现了新的治疗策略，所述的治疗策略是用于治疗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病，特别是脓毒症、急性肺损伤、脓毒性休克、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、节段性回肠炎、癌性炎症性浸润、银屑病关节炎等疾病。
1.1.示例性实施方案RC-3095组合物成分 量/单位
RC-3095醋酸盐 约6.36mg-7.17mg(对应6mg RC-3095碱)δ内酯葡糖酸 约3.5mg甘露醇约96mg每单位总重量约106.27mg该组合物由4ml注射管形瓶中的白色冻干的饼状物组成。一个注射管形瓶将用2ml水重构用于注射。
施用一个女性类风湿性关节炎的患者，49岁，从3月22日开始用6mg的RC-3095治疗，每天两次。皮下施用。在初始探视时，该患者表现为关节疼痛3级，关节炎症2级和抑郁症2级。
在开始使用RC-3095前，她已经皮下施用甲氨蝶呤，一周一次，以及使用糖皮质激素。
她每两周进行体格检查和实验室检查。在大约使用RC-3095一周后，她改善了其症状和生活质量。不良的反应仅在局部(淋巴结和瘙痒)。
疾病活动度打分-DAS3月22日探视DAS＝6.693月29日探视DAS＝7.201.2.试验步骤体内试验根据国立卫生研究院指导和根据巴西的本地伦理委员会的批准进行。所有的试验使用大鼠中的试验模型进行。
1.2.1盲肠结扎穿孔(CLP)模型将如先前描述的进行了盲肠结扎穿孔术(CLP)(Ritter等，Crit.Care Med.32，342-349(2004))的2-3月大的雄性Wistar大鼠用于本试验。通过腹膜内施用，将大鼠用氯胺酮(80mg/kg)和赛拉嗪(10mg/kg)的混合物麻醉大鼠。在无菌条件下，进行3cm的中线剖腹术使得盲肠与连接的肠暴露。在其底部，低于回盲瓣处用3.0丝线将盲肠紧紧地结扎，并用14号针穿孔一次。然后轻轻挤压盲肠从穿孔部位挤出少量粪便。然后将盲肠放回腹膜腔内并用4.0丝线缝合该剖腹手术。在该模型中的脓毒性大鼠产生由革兰氏阴性肠道生物引起的菌血症(Roesler等，Trends Pharmacol.Sci 25，241-242(2004))。
为了进行生化测量和组织病理学分析(见下面)，通过CLP让24只大鼠产生脓毒症。将动物分成4组1-假手术，或2-CLP，或3-CLP+“基本支持”(GLP后6小时和12小时后以50ml/kg皮下施用盐水+从CLP后6小时开始每6小时以30mg/kg皮下施用头孢曲松和以25mg/kg皮下施用克林霉素，进行3天)，以及4-与组3一样以5mg/kg皮下施用RC-3095，从CLP后6小时开始一天一次进行两天。GLP后3小时和12小时后从尾静脉提取血液用于测定生化血浆标记物(见下面)。治疗施用24小时后，通过断头杀死大鼠，随后从血液(通过心脏穿刺)、肺、肝脏、肾脏、心脏、回肠和肠系膜淋巴结采集样品，将所述样品立即在-70℃下保存直至用于测定硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)和蛋白质羰基的形成(作为氧化损伤的指数)，或将样品固定用于随后的组织病理学分析(见下面)。
将在如先前描述的酸-热反应过程中形成的硫代巴比妥酸反应物质(TBARS)作为氧化逆境的一个指数。简而言之，将所述样品与三氯乙酸10％和硫代巴比妥酸0.67％(Sigma Chemical，St.Louis，MO)混合并然后在沸水浴中加热15分钟。用1，1，3，3-四甲氧基-丙烷作为外标准通过测定535nm处的吸光度测定TBARS。结果表示为每毫克蛋白质的丙二醛当量(Lowry测定法)。此外，如先前描述的我们测定了对蛋白质的氧化损伤。简而言之，通过加入20％三氯乙酸沉淀蛋白质并再溶解于二硝基苯肼(Sigma Chemical，St.Louis，MO)中并在370nm处读取吸光度。
在CLP24小时后用商业提供的试剂盒(R&D systems，Minneapolis，MN)通过ELISA测定TNF-α、IL-1β和IL-10的血清水平。器官损伤的血清标记物(天冬氨酸转氨酶(AST)、血清谷-丙转氨酶(ALT，血清谷-丙转氨酶(SGPT)的别名)、尿素、肌酐、淀粉酶、脂酶)通过商业提供的试剂盒(Labtest，Sao Paulo，Brazil)在CLP后3、12和24小时用商业提供的试剂盒(Labtest，Sao Paulo，Brazil)测定。由进行盲测的研究者进行所有的这些分析。对于固定后的组织病理学分析(histopathological analyse)，将切下的肝脏组织包埋入石蜡中并然后按常规用苏木精和曙红染色。由进行盲测的有经验的病理学家进行组织病理学分析。
对于肠道细菌移位的指数，从每个动物收集肠系膜淋巴结并匀化。将所述匀浆物的十倍系列稀释物涂布在血琼脂平皿上并在37℃下孵育24小时。对出现的菌落进行计数来测定每克淋巴结的细菌数目。
存活率在单独组的动物检测。在第一种方法中，进行CLP的动物随机分组以在GLP诱导前1小时(n＝22)或之后1小时(n＝25)接受蛙皮素/GRP拮抗剂RC-3095，不使用“基本支持”。在第二组试验中，分析使用“基本支持”的RC-3095的效果，其更接近临床实践。将动物用CLP攻击并用“基本支持”(n＝32)(CLP后6小时和12小时以50ml/kg皮下施用盐水+从CLP后6小时开始每6小时以30mg/kg皮下施用头孢曲松和以25mg/kg皮下施用克林霉素，进行3天)或用“基本支持”和RC-3095(n＝40)(以5mg/kg皮下施用，从CLP后6小时开始一天一次进行两天)治疗。在所有这些试验中，包括了一个假手术组和不进行治疗的CLP组用于对照。在10天期间记录动物的死亡率。
1.2.2ALI(急性肺损伤)模型将重约250-300g的成年雄性Wistar大鼠用于本试验。通过腹膜内注射氯胺酮(80mg/kg)麻醉大鼠并通过气管内以100μg/100g体重的剂量滴入脂多糖(LPS)诱导急性呼吸窘迫综合征(ARDS)(Escherichia coli 055B5；Sigma Chemical，St.Louis，MO)。
在滴入LPS后12小时，杀死大鼠并如先前描述的进行支气管-肺泡灌洗(BAL)。将BAL液体(BALF)离心(1000g 10分钟)并分析得到的无细胞上清液的不同生化参数(见下面)。细胞沉淀用于测定总细胞计数和分类计数(见下面)。在一个单独组的动物中，如上面描述的诱导ARDS来分离肺组织。滴入LPS后12小时，杀死大鼠并从肺分离样品并立即在-70℃下保存直至测定氧化逆境参数或在4％福尔马林液中固定用于如前所述的组织病理学分析。
将动物分成三组组1-滴入等渗盐水，组2-用盐水治疗的ALI，组3-用RC-3095治疗的ALI(ALI后3小时，皮下注射5mg/kg)(n＝36)。为了估计肺泡细胞损伤和肺泡毛细血管膜受损的程度，测定了BALF总细胞计数和分类计数、BALF蛋白质和乳酸脱氢酶(LDH)含量。用吉姆萨染料或台盼蓝不相容染料染色，用Neubauer计数器估计BALF细胞。BALF总蛋白含量通过Lowry测定法测定。BALF总LDH含量通过商业提供的试剂盒(LabTrade，Brazil)用分光光度计测定。
1.2.3巨噬细胞的TNF-α、IL-1β和IL-10释放腹膜巨噬细胞从新鲜分离的Wistar大鼠(正常大鼠或CLP后4小时的大鼠)腹膜渗出液制备。为了分离巨噬细胞，将10mL补充有2％热灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基(Sigma Chemical，St.Louis，MO)中的2×107个腹膜渗出液在37℃下在培养皿中培养60分钟(refCCM)。然后将巨噬细胞在补充有10％热灭活胎牛血清的RPMI-1640培养基中另外培养4小时。在该阶段后将从正常大鼠分离的巨噬细胞曝露于LPS(100ng/ml，4小时)并分组接受蛙皮素/GRP拮抗剂RC-3095(1μg/ml或10μg/ml)或不接受。6小时后回收培养基用于测定TNF-α、IL-1β和IL-10。将分离自进行了CLP的动物的巨噬细胞如上描述进行培养并用或不用RC-3095处理6小时。在该阶段后回收培养基用于测定TNF-α、IL-1β和IL-10。
1.3.结果和讨论1.3.1蛙皮素/GRP拮抗剂调控TNF-α、IL-1β，但不是IL-10从巨噬细胞的释放将大鼠腹膜巨噬细胞的原代培养物用内毒素刺激并用蛙皮素/GRP拮抗剂RC-3095处理。蛙皮素/GRP拮抗剂削弱了LPS-诱导的TNF-α和IL-1β在巨噬细胞的培养基中的积聚。该效果在10μg/ml时更显著(表1)，但在1μg/ml时是明显的(数据没有显示)。在两种剂量试验中蛙皮素/GRP拮抗剂均没有干扰抗炎细胞因子IL-10的释放(数据未显示)。当研究来自CLP大鼠的腹膜巨噬细胞时，这些结果类似。CLP-激活的巨噬细胞释放的TNF-α和IL-1β，但不是IL-10得以削弱，在10μg/ml浓度时得到50％的最大抑制(表1)。1μg/ml的RC-3095也削弱了TNF-α和IL-1β从CLP-活化的巨噬细胞的释放(数据没有显示)。
表1.由从曝露于LPS(100ng/ml)的正常大鼠分离的或从进行了CLP并且用或没有用RC-3095(10μg/ml)处理的动物分离的腹膜巨噬细胞释放的TNF-α和IL-1β。
M-LPS-分离自曝露于LPS的正常大鼠的腹膜巨噬细胞M-LPS+RC-如M-LPS，用RC-3095处理M-CLP-从CLP大鼠分离的腹膜巨噬细胞M-CLP+RC-如M-CLP，用RC-3095处理*不同于M-LPS或M-CLP，p＜0.05这些数据证明蛙皮素/GRP拮抗剂RC-3095抑制巨噬细胞释放TNF-α和IL-1β并且这样可以阻断数个与脓毒症过程相关的过程。有趣地是，RC-3095不调控抗炎IL-10的释放，这暗示由蛙皮素/GRP调控的细胞内途径对促炎细胞因子有选择性。
1.3.2蛙皮素/GRP拮抗剂治疗提高试验性脓毒症中的存活率为了测定用蛙皮素/GRP拮抗剂RC-3095治疗是否可以削弱脓度症过程中TNF-α和IL-1β的循环水平，进行了CLP，由于其引起了多微生物感染产生的致死性腹膜炎(Ritter等人，Crit，CareMed.32，342-349(2004))，其为人脓毒症的临床相关动物模型。诱导脓毒症后6小时(大鼠显示出脓毒症体征的时候)开始治疗。这种延缓施用RC-3095在脓毒症诱导后24小时削弱了TNF-α和IL-1β的循环水平(表2)。
如同显示的巨噬细胞释放的IL-10，RC-3095没有在脓毒症过程中调控IL-10的循环水平(数据没有显示)。当与基本支持一起施用时，这种延迟的RC-3095施用明显提高了存活率(图1)。当与“基本支持”比较时，CLP后6小时施用RC-3095(一天一次施用一天)没有改善死亡率(数据没有显示)，但在接受一天一次的RC-3095(两天)的动物中保护作用明显(图1)。没用基本支持，CLP前1小时或后1小时施用RC-3095显著地提高了存活率约50％(数据没有显示)。这些保护效果可能与胰腺中的损伤(通过淀粉酶的循环水平评估)、肝脏中的损伤(通过天冬氨酸氨基转移酶(AST)的循环水平和谷丙转氨酶(ALT)的血清水平评估)的削弱相关以及较小程度上与肾脏中的损伤(通过尿素和肌酐的循环水平评估)相关(表2)。
通过蛙皮素/GRP拮抗剂RC-3095治疗削弱了与脓毒反应相关的数种器官中的氧化损伤，这通过TBARS和蛋白质羰基水平来评估(图2和3)。这种效果在肾脏、回肠和心脏中更明显(图2和3)。RC-3095治疗可以削弱一些组织病理学改变，这通过在光学显微镜可观察到。蛙皮素/GRP拮抗剂减少了回肠炎性浸润(Fig.4A和4B)、肺泡性水肿和炎性浸润(图4C和4D)和肾小管坏死的轻度发生(图4E和4F)。对回肠损伤的保护进一步通过肠系膜淋巴结中的细菌数三倍的减少而得以证明(数据未显示)。
表2.CLP后器官损伤和炎性应答的血清生化标记物
CLP-脓毒症组(n＝6)BS-用基本支持处理的脓毒症组(n＝6)RC-3095-用基本支持+RC-3095处理的脓毒症组(n＝6)
*不同于CLP组，p＜0.05**不同于BS组，p＜0.051.3.2.1蛙皮素/GRP拮抗剂处理削弱了试验性急性肺损伤中的损伤为了测定蛙皮素/GRP拮抗剂RC-3095在炎性疾病的其他动物模型中的作用，在通过LPS诱导的急性肺损伤(ALI)的试验模型中进行了试验。急性肺损伤(ALI)诱导后的RC-3095处理部分地保护了肺实质免于LPS-诱导的氧化损伤(图5)。蛙皮素/GRP拮抗剂削弱了由LPS诱导的肺泡炎性浸润和肺泡渗出。炎性细胞的BALF含量、LDH和蛋白质含量支持这些发现(表3)。施用RC-3095减少了BALF总炎性细胞含量(表3)和蛋白质溢出(表3)。此外，RC-3095处理减少了BALFLDH含量(作为肺泡细胞损伤的指数)(表3)。
表3.气管内LPS后12小时大鼠的BALF中的细胞和生化参数
对照-滴入盐水(n＝6)LPS-LPS诱导的急性肺损伤(n＝6)LPS+RC-LPS诱导的急性肺损伤+RC-3095(n＝6)*不同于对照，p＜0.05**不同于LPS，p＜0.05II)
在此，本发明的发明人通过躁狂症的鼠模型(苯丙胺在大鼠中诱导的过度兴奋)证明了蛙皮素/GRP拮抗剂RC-3095用于治疗或预防脑障碍，特别是双相性精神障碍的治疗潜力。
尽管目前没有合适的动物模型用于双相性精神障碍(BD)，但已经提出了躁狂症的一些简单的行为模型。这些是基于过度兴奋，过度兴奋是可以在动物中模拟的躁狂症的一个核心症状。已经提出由d-苯丙胺诱导的过度兴奋是有用的躁狂症模型，因为引发的行为可以通过施用本身不会降低活动能力的剂量的锂或抗癫痫药而削弱。低剂量的苯丙胺(如0.5-4.0mg/kg)引起活动能力的增加，而高剂量(如5.0-10.0mg/kg)诱导了定型行为(Einat等，2000；Machado-Vieira等，2004；Frey等，2005)。病例报告已经暗示由苯丙胺在人中诱导的欣快效果可以通过施用锂削弱。实际上，由苯丙胺诱导的腹侧纹状体多巴胺释放的程度与人受试者中快感反应(hedonic response)正相关(Strakowski等，1998；Anand等，2000)。
蛙皮素(BN)是从两栖动物皮肤纯化的一种活性肽。该肽在哺乳动物中也可以有活性并且其药理学作用延伸至多种生理学方面。蛙皮素样肽的受体是在多个脑区、肺和消化道中表达的G-蛋白偶联受体(对于最近的综述，参见Moody和Merali，2004)。BN样肽已经涉及数种类型的人的癌的发病机理的证明已经导致开发了BN/GRP受体拮抗剂如RC-3095作为潜在的抗癌药物(Radulovic等，1991)。蛙皮素样肽调控CNS功能的数个方面，包括摄食、饱满感、厌恶、奖赏、焦虑以及学习和记忆过程(Roesler等，2004)。
通过建立急性躁狂症/双相性精神障碍的大鼠模型，证明RC-3095可作为一种备选治疗策略用于治疗或预防脑障碍，优选双相性精神障碍，并且特别是不同型和/或亚型的双相性精神障碍，例如躁狂症、急性躁狂症、严重躁狂症、轻躁狂、抑郁症、中度抑郁症、心境恶劣、严重抑郁症、躁狂和/或抑郁发作、精神病/精神病性症状(例如幻觉、妄想)、混合型双相性精神障碍、I型双相性精神障碍、II型双相性精神障碍和/或快速循环型双相性精神障碍。
II.1材料和方法动物。使用了来自一个室内育种群体的总共120只雄性Wistar大鼠(2.5-3个月大，体重220-340g)。将它们圈养在塑料笼内，5只一个笼，任意提供水和食物，处于12-小时的白天/黑夜循环(7:00开始亮灯)。所有的试验步骤是根据NIH Guide for the Care and Useof Laboratory Animals和Brazilian Society for Neuroscience andBehavior(SBNeC)recommendations for animal care进行。
药物和药理学方法.将d-苯丙胺(AMPH，2.0mg/kg)和RC-3095(Dr.J.Engel，Zentaris GmbH，Germany赠送)溶解于盐水中(SAL，0.9％NaCl)。在施用前立即制备所有溶液。给动物以10ml/kg腹膜内(i.p.)注射SAL或RC-3095(0.1、1.0或10.0mg/kg)，接着30分钟后通过腹膜内注射SAL或AMPH(1,0mg/kg)。因而，得到的试验组是SAL/SAL；SAL/AMPH，RC-3095 0.1mg/kg/AMPH、RC-3095 1.0mg/kg/AMPH、RC-3095 10.0mg/kg/AMPH、RC 3095 0.1mg/kg/SAL；RC-3095 1.0mg/kg/SAL；和RC-3095 10.0mg/kg/SAL。
过度兴奋试验.将动物置于40×60cm的开放区域，周围由50cm高的围墙包围，围墙用褐色胶合板制成，前面是一面玻璃墙。开放区域的地面由黑线分成12个相等的矩形。将动物轻轻地放在左后角，并让其探索该场地5分钟。记录横越黑线和直立的次数。将跨越和直立的次数作为过度兴奋的量度(Frey等人，2005)。
统计分析.所有数据表示为平均值±S.E.M。通过ANOVA测定试验组中的差异。通过Tukey检验进行多重比较。在所有试验中，p值少于0.05认为表示统计显著性。
II.2结果和讨论AMPH增加的运动和直立行为在预先用SAL+RC 3095处理的大鼠中，所有使用的剂量都防止了AMPH-相关的过度兴奋(图6)。RC-3095的施用没有改变其它行为的测量值，表明RC-3095在用AMPH治疗的大鼠中的效果与镇静不相关。
本结果表明，全身性施用RC-3095展示了抗躁狂效果。这些效果在由苯丙胺诱导的急性躁狂症的动物模型中得以显示。尽管双相性精神障碍的动物模型在有效性方面存在众所周知的局限性(Frey等，2005；Machado-Vieira等，2004；Einat等，2000)，众所周知AMPH在BD患者(Anand等，2000)以及健康自愿者(Strakowski和Sax.，1998)中诱导了躁狂症状。
尽管BD的确切病理生理学远没有阐明，最近的研究已经证明BD与调控神经可塑性和存活的细胞内信号途径中的变化相关。与BD的发病机理相关的细胞信号途径包括蛋白激酶C(PKC)和促分裂原活化蛋白激酶(MAPK)途径(Manji和Lenox，2000；Manji和Chen，2002)，它们也受到BN/GRP受体的重要调控(Hellmich等，1999；Moody和Merali，2004)。许多对急性躁狂症的治疗如锂、丙戊酸盐和非典型抗精神病药物也用于预防双相性精神障碍的新的发作。总的来说，所述的结果提供了临床前证据，即BN/GRP受体拮抗剂如RC-3095可以体现抗-躁狂和情绪稳定性质并且可以用于治疗或预防BD。
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权利要求
1.蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于治疗炎性疾病和免疫-介导的炎性疾病。
2.根据权利要求1的用途，用于治疗脓毒症、急性肺损伤、脓毒性休克、类风湿性关节炎、溃疡性结肠炎、节段性回肠炎、癌性炎症性浸润、银屑病关节炎。
3.蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂在制备药物组合物中的用途，所述药物组合物用于治疗或预防脑障碍，特别是双相性精神障碍和/或其不同型和/或亚型。
4.根据权利要求3的用途，用于治疗或预防躁狂症、急性躁狂症、严重躁狂症、轻躁狂、抑郁症、中度抑郁症、心境恶劣、严重抑郁症、躁狂和/或抑郁发作、精神病/精神病性症状(例如幻觉、妄想)、混合型双相性精神障碍、I型双相性精神障碍、II型双相性精神障碍和/或快速循环型双相性精神障碍。
5.根据权利要求1-4任意一项的用途，其特征在于所述蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂是通式(I)的化合物X-A1-A2-A3-A4-A5-A6-A7-A8-psi-A9-Q (I)其中Q是NH2或OQ1，其中Q1是氢、C1-10-烷基、苯基或苯基-C7-10-烷基；X是氢，连接A1的α氨基至侧链羧基(A2中如果存在)的单键或式R1CO-的基团，其中R1选自(a)氢、C1-10-烷基、苯基或苯基-C7-10-烷基；(b)R2(R3)N-，其中R2是氢、C1-10-烷基、苯基或苯基-C7-10-烷基，R3是氢或C1-10-烷基；(c)R4-O-，其中R4是C1-10-烷基、苯基或苯基-C7-10-烷基；A1是D-、L-或DL-pGlu、Nal、Phe、Thi、Tyr、Tpi、Hca、Hpp、Mpp、Trp或在苯环上用一个或多个选自以下的成员取代的Trp卤素、NO2、NH2、OH、C1-3-烷基和C1-3-烷氧基，其中卤素是氟、氯和溴；A2是Asn、Dpa、Gln、His、MeHis、His(Bz)、His(Z)或式Dpa(X)、Asp(Y)、Glu[-]和Glu(Y)的基团，其中X同上，Y是-OR5或-N(R6)R7，其中R5是氢、C1-3-烷基或苯基；R6是氢或C1-3-烷基；R7是氢、C1-3-烷基或-NHCONH2，以及[-]是连接侧链羧基(如果A2中存在)和A1的α氨基的单键，其中X是单键；A3是Nal、Pal、Tpi、Trp、MeTrp、Trp(For)或在苯环上用一个或多个选自以下的成员取代的Trp卤素、NO2、NH2、OH、C1-3-烷基和C1-3-烷氧基，其中卤素是氟、氯和溴；A4是Ala、MeAla或Gln；A5是Val或MeVal；A6是Gly、Phe或D-Ala；A7是His、MeHis、His(Bz)、His(Z)、Lys(Z)或Pal；A8是Leu或Phe的还原等排体；A9是Leu、Phe、Tpi、Trp或在苯环上用一个或多个选自以下的成员取代的Trp卤素、NO2、NH2、OH、C1-3-烷基和C1-3烷氧基，其中卤素是氟、氯和溴；前提是如果A9是Leu或Phe，则A1不是D-Nal或DL-Phe并且如果A1是D-Na l或DL-Phe，则A9不是Leu或Phe；以及其与可药用酸形成的盐。
6.根据权利要求5的用途，其中所述的拮抗剂是H-D-Tpi-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Leu-NH2(RC-3095)。
7.根据权利要求1-4任意一项的用途，其特征在于所述蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂是通式(II)的化合物X-A1-A2-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-A9-Q(II)其中Q是NH2或-OQ1，其中Q1是氢、C1-10-烷基、苯基或苯基-C1-10-烷基；X是氢，或当A2是Glu[-]时是连接A1的α氨基至A2的3-丙酰基部分上的γ-羧基部分的单键，或式R1CO-的基团，其中R1选自(a)氢、C1-10-烷基、苯基、苯基-C1-10-烷基、p-H1-苯基、p-H1-苯基-C1-10-烷基、萘基、萘基-C1-10-烷基、吲哚基、吲哚基-C1-10-烷基、吡啶基、吡啶基-C1-10-烷基、噻吩基、噻吩基-C1-10-烷基、环己基或环己基-C1-10-烷基，其中H1是F、Cl、Br、OH、CH3或OCH3；(b)R2(R3)N-，其中R2是氢、C1-10-烷基、苯基或苯基-C1-10-烷基，R3是氢或C1-10-烷基；(c)R4-O-，其中R4是C1-10-烷基、苯基或苯基-C1-10-烷基；A1是D-或L-氨基酸残基，所述残基选自Phe、p-H1-Phe、pGlu、Nal、Pal、Tpi、Trp或在苯环上由一个或多个选自卤素、NH2或C1-3烷基的成员取代的Trp；或A1是连接R1CO-的酰基至A2的α氨基的肽键；假如X＝R1CO-A2是Gln、Glu[-]、Glu(Y)或His，其中[-]是单键，当X是单键并且A2是Glu[-]时，所述的[-]连接所述A2的3-丙酰基部分上的γ-羧基部分与A1的α氨基，Y是(a)-OR5，其中R5是氢、C1-10-烷基或苯基；或(b)-N(R6)R7，R6是氢或C1-3-烷基，R7是氢、C1-3-烷基或-NHCONH2，以及Leu-psi-是Leu的还原形式，其中C＝0替换为-CH2-，这样该-CH2-部分与邻接的A9残基的α氨基的键是假肽键；A9是Tac、MTac或DMTac；以及其与可药用酸形成的盐。
8.根据权利要求7的用途，其中所述的拮抗剂是3-苯基-丙酰基-Gln-Trp-Ala-Val-Gly-His-Leu-psi-Thz-NH2(RC-3940-II)。
9.根据权利要求1-8任意一项的用途，其特征在于所述药物组合物包含两种或多种不同的蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂。
10.根据权利要求9的用途，其特征在于所述蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂作为药物试剂盒施用。
11.根据权利要求1-9任意一项的用途，其特征在于所述蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂与其它药品组合施用，所述的其它药品在用蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂治疗前和/或期间和/或之后施用。
12.根据权利要求11的用途，其特征在于所述药品是-非类固醇抗炎药(NSAID)，其选自阿司匹林、吲哚美辛、布洛芬和COX-2抑制剂如塞来考昔和伐地考昔，-止痛药，其选自对乙酰氨基酚、右丙氧芬、mepeidine、吗啡，-糖皮质激素或泼尼松，-缓解疾病的抗风湿性药物(DMARD)，其选自硫唑嘌呤、青霉胺、氯喹、羟氯喹、柳氮磺吡啶、甲氨蝶呤、可注射和口服金，-生物反应调节剂，其选自阿那白滞素、阿达木单抗、依那西普、英夫利昔单抗。
13.根据权利要求11的用途，其特征在于所述药品是-情绪稳定剂，-锂，-抗惊厥药物，例如丙戊酸盐、卡马西平、拉莫三嗪、加巴喷丁和/或托吡酯，-非典型抗精神病药物，例如氯氮平、奥氮平、利培酮、喹硫平和/或齐拉西酮，-苯二氮杂类药物如氯硝西泮和/或劳拉西泮，-镇静药物，如唑吡坦。
14.根据权利要求11-13任意一项的用途，其特征在于所述蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂和所述药品作为药物试剂盒施用。
15.根据权利要求1-14任意一项的用途，其特征在于所述蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂或其可药用盐以每kg体重0.01-10mg、优选0.015-1.5mg、更优选0.03-0.3mg的日剂量施用。
16.根据权利要求1-15任意一项的用途，其特征在于所述蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂组合物经皮下施用。
全文摘要
本发明涉及蛙皮素/胃泌素释放肽拮抗剂在制备药物组合物中的用途，所述的药物组合物用于治疗炎性疾病和免疫－介导的炎性疾病，特别是脓毒症、急性肺损伤和类风湿性关节炎以及用于治疗或预防脑障碍，优选双相性精神障碍，并且特别是不同型和/或亚型的双相性精神障碍如躁狂症、急性躁狂症、严重躁狂症、轻躁狂、抑郁症、中度抑郁症、心境恶劣、严重抑郁症、躁狂和/或抑郁发作、精神病/精神病性症状(例如幻觉、妄想)、混合型双相状态、I型双相性精神障碍、II型双相性精神障碍和/或快速循环型双相性精神障碍。特别是，具有对抗蛙皮素或蛙皮素样肽(如胃泌素释放肽)的拮抗剂性质的特异性九肽可以用于治疗炎性疾病和免疫－介导的炎性疾病以及脑障碍。
文档编号A61P19/02GK101090731SQ200580043185
公开日2007年12月19日 申请日期2005年12月15日 优先权日2004年12月17日
发明者G·施瓦特曼, R·勒斯勒尔, F·戴尔皮佐尔, J·L·克韦多, F·考普钦斯基 申请人:赞塔里斯有限公司