专利名称：3－(3－硝基－4－羟基)－丙烯酸乙酯抑制黄嘌呤氧化酶的医药用途的制作方法
技术领域：
本发明属于有机化学和药物化学领域，具体而言，本发明涉及3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯的制备方法，及其抑制黄嘌呤氧化酶作用的用途。
背景技术：
现代医学理论证实痛风病的致病因素之一是黄嘌呤氧化酶(EC1.2.3.2，简称为XO)。此酶是体内核酸代谢的一个重要酶，能催化次黄嘌呤和黄嘌呤生成尿酸和超氧阴离子，若机体不能及时清除产生的尿酸，使尿酸结晶盐在关节处沉积，就会引起痛风。如何从天然产物以及其衍生物中筛选出黄嘌呤氧化酶抑制剂先导化合物是开发治疗痛风病新药的重要任务。产生过多的超氧阴离子也可引起多组织受损，引起如炎症、风湿性关节炎、癌症、老化等病理性变化。因此测定化合物对XO的作用对发现新的XO抑制剂和其抗氧化作用有重要意义。
阿魏酸类化合物具有较强的抗氧化生物活性及XO抑制活性(Zhang，L.W.等，Chin.J.Struct.Chem.，(2003)，22，341；Talla，S.R.等，Biochem.Arch.，(1996)，12，245)，据此我们制备出系列阿魏酸衍生物并对这些化合物进行体外抑制黄嘌呤氧化酶的活性进行了测试。发现其中3-(3-氨基-4-羟基)-丙烯酸乙酯具有抑制黄嘌呤氧化酶活性，可以预期发展成为防治病变过程中产生自由基的疾病包括炎症疾病、自身免疫性疾病、放射治疗后遗症、肿瘤、心肌缺血、心肌肥厚、衰老、变态反应、动脉粥样硬化等疾病以及由黄嘌呤氧化酶引起的疾病包括痛风病的药物组合物。3-(3-氨基-4-羟基)-丙烯酸乙酯(CAS号86981-17-1)在两个专利中有过报道，其一是作为中间体制备1，3-氧氮杂环戊烷二酮和3-氧氮杂环戊烷二酮(专利申请号EP 612743)，另一也是作为中间体制备2-氨基苯酚类衍生物(专利申请号EP 81321)。
发明内容
本发明的目的是提供了3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯用于制备防治病变过程中产生自由基的疾病包括炎症疾病、自身免疫性疾病、放射治疗后遗症、肿瘤、心肌缺血、心肌肥厚、衰老、变态反应、动脉粥样硬化等疾病以及由黄嘌呤氧化酶引起的疾病包括痛风病等疾病的药物或药物组合物的用途。
本发明的另一目的是提供3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯的制备方法。
3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯的合成流程 该方法的合成工艺特征是以取代苯甲醛I为起始原料，在吡啶溶液中丙二酸酯缩合得到化合物II。其中，反应式中的溶剂优选四氢呋喃或乙醚，反应温度优选-10℃至室温；丙二酸酯是指丙二酸形成的1～8个碳的单酯或双酯，此处优选单酯，更优选丙二酸单乙酯；有机碱优选吡啶和哌啶。
具体实施例方式
3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯或其可药用盐及其溶剂化物可以与药学上常用的辐料或载体结合，制备得到具有防御自由基引起的损害活性的抗氧化组合物，可用于治疗一些病变过程中产生自由基的疾病，如炎症疾病、自身免疫性疾病、放射治疗后遗症、肿瘤、心肌缺血、心肌肥厚、衰老、变态反应、动脉粥样硬化等疾病的药物组合物。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯或其可药用盐及其溶剂化物可以与现已上市的抗自由基氧化剂药物如超氧化物歧化酶(SOD)等联合使用，制备得到具有防御自由基引起的损害活性的抗氧化药物组合物，用于治疗上述疾病。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯或其可药用盐及其溶剂化物还可以与现已上市的治疗痛风病药物如黄嘌呤氧化酶抑制剂别嘌醇等联合使用，制备得到具有治疗痛风病的药物组合物，用于痛风病的临床治疗。上述各类药物组合物可以采用注射剂、片剂、胶囊剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂、软膏剂等剂型药物。
本发明中所述剂型如片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂和软膏剂以及各种缓释、控释剂型都可以根据现已公认的药剂学常识常规制备而得，在这些公知知识和技术基础上制备出的含有本发明权利要求化合物的药物或药物组合物其他剂型都在本发明的保护范围内。
为了更好地理解本发明的实质和本发明所述化合物在药物开发上的应用前景，下面分别用实施例的形式说明3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯的制备过程，以及该化合物体外抑制黄嘌呤氧化酶的药理实验结果，说明其在制药领域中的新用途。必须说明，本发明的实施例及所采用的药效学模型是用于说明本发明而不是对本发明的限制。根据本发明的实质对本发明进行的简单改进，以及在本发明实施例所涵盖的病因基础上的简易扩充的其他适应症都属于本发明要求保护的范围。
实施例13-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯的制备 2.7克丙二酸单乙酯溶解于10毫升吡啶中，加入4-羟基-3-硝基苯甲醛(10mmol，溶于20毫升吡啶)，再加入1毫升哌啶，于120-125℃保温搅拌小时，减压蒸馏除去溶剂，残余物用氯化氨溶解，再用醋酸乙酯萃取(20毫升，三次)。用饱和氯化钠溶剂洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩得浅黄色油状物1.9克，收率80％。
Rf 0.50(石油醚∶乙酸乙酯＝2∶1)；1H NMR(400MHz，氘代氯仿)δ7.21(1H，d，J＝8.8Hz，H-5)，7.70(1H，dd，J＝8.8，2Hz，H-6)，8.26(1H，d，J＝2Hz，H-2)，10.73(1H，s，OH-4)；ESIMS m/z 276[M+K]+。
实施例23-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯对黄嘌呤氧化酶XO的抑制作用试验取SD大鼠，断头处死，迅速取出肝脏至预冷的磷酸缓冲液(100mM，pH 8.75)中，去除血管，剪碎后用磷酸缓冲液1∶1(w/v)稀释后在冰上直接匀浆，于-20℃保存作为酶原。化合物对XO的抑制作用测定采用酶联免疫法(ELISA)。样品孔中加入底物黄嘌呤(0.1mg/mL，600μL)，酶(30μL)，3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯用二甲亚砜溶解，用磷酸缓冲液稀释，每孔30μL，使其终浓度为40μg/mL，加入硝基兰四氮唑和吩嗪甲硫酸酯(30μL)，最后加入Triton X-100(0.4％，10μL)，在37℃中水浴保温2小时，于550nm波长下比色测定。化合物抑制率由样品OD值对于空白和对照OD值计算。
3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯对黄嘌砱氧化酶的半数抑制浓度IC50＝3.69×10-5M，而阳性对照别嘌醇的黄嘌呤氧化酶半数抑制浓度IC50＝2.35×10-4M。
结论3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯对黄嘌呤氧化酶的半数抑制浓度低于阳性对照别嘌醇，显示该化合物属于较高活性的黄嘌呤酶抑制剂。
权利要求
1. 3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯用于抑制黄嘌呤氧化酶的医药用途。
2.一种用于防治与黄嘌呤氧化酶相关疾病如痛风病的药物或药物组合物，其中含有治疗有效量的作为活性成分的根据权利要求1的化合物和药用辅料。
3.根据权利要求2的与黄嘌呤氧化酶相关疾病如痛风病的药物或药物组合物，其中所述剂型如片剂、胶囊剂、注射剂、气雾剂、栓剂、膜剂、滴丸剂、外用搽剂和软膏剂，以及根据现已公认的药剂学常识常规制备而得的各种缓释、控释剂型或纳米制剂。
4.根据权利要求1中3-(3-硝基-4-羟基)-丙烯酸乙酯的制备方法，即将式I化合物在有机碱作用下与丙二酸酯缩合制备得到式II化合物 其中，反应式中的溶剂优选四氢呋喃或乙醚，反应温度优选-10℃至室温；丙二酸酯是指丙二酸形成的1～8个碳的单酯或双酯，此处优选单酯，更优选丙二酸单乙酯；有机碱优选吡啶和哌啶。
全文摘要
本发明涉及3－(3－硝基－4－羟基)－丙烯酸乙酯在抑制黄嘌呤氧化酶方面的生物活性，及其医药用途。3－(3－硝基－4－羟基)－丙烯酸乙酯具有很强的黄嘌呤氧化酶抑制作用，因此可以期待其作为用于制备防治由黄嘌呤氧化酶引起的疾病包括痛风病的药物或药物组合物。本发明的药物组合物可以使用多种制剂形式。
文档编号A61P9/00GK1872041SQ20061009001
公开日2006年12月6日 申请日期2006年6月23日 优先权日2006年6月23日
发明者赵昱, 汪峰, 白骅 申请人:浙江海正天华新药研发有限公司