一类脱氢水飞蓟宾双酯类衍生物及其制备方法和用途的制作方法

专利名称：：一类脱氢水飞蓟宾双酯类衍生物及其制备方法和用途的制作方法一^S^K飞蓟^Xi^胜物及其伟恪方柳用途技术鄉或本发明属于有机化，QIIM七学领或，具体而言，本发明涉及一對M7K飞蓟宾观^l行生物離恪方法和用途。i^f七^Wl^^礙畔合成^"齒导到。本发明将i^系州七^M氧ttffi^大鼠乳f源彻干细鹏员伤体外，Ml行了肝细鹏员繊户活敞繊。i繊七鄉微鹏有傲户肝细鹏Pf娜干细胞修飾作用。本发明X^i^f七^Wm自由翻^S行了泖賦，货JKi:有体外清Pi^氧阴离子自由基、清除^^^m荆井自由基、綱咱由基诱导a繊4機顿盼活性。UU:活性表明i^f七创勿可以予鹏朋Tf恪郷^^治疗急胜慢糊干损伤^以及由氧自由基弓IM与氧自由^"关的期te理,S^的,。i^f七^M^见出很强的謝亢自由基弓起的PC12细鹏劍别乍用，即x浙^^辭转魏胞的rci2细^Mjm俗员彻斜^乍用。而且在同一^r，其清除自由割斜户细胞的能力比阳tt^照槲皮親强。说明其对傲户鹏申對旗化、防治^￥十顿呆;^#积极作用。J^^活^x表明i^f七^J可以预J朋刊IJ备予鹏早老醜蘇唭他与月新峰氧化對员相关的的繊。技赠景很^i由氧化弓起。^J5是由机体细,生和青除自由基之间的失卿躬I起的，可诱发多禾嚇。ftll奶l超转L努^i，如中风，帕錢疏，阿尔^i满。另夕卜它遞艮其它^^!3i径有关，如心M、自身^M，、月橢、病毒ft^(如aids、肝炎)。因此對錄湘^m化剂戯治疗由艱引起的各禾,的W^t径，因附^1化剂柳卿各是下一鹏己的治疗延长生命fi，方向之一。ffii!ft^出高效低毒附jm化剂，；ra是天然j^t^t以天然/7骨架白術生物，是开^m化作用机繊药的一斜維。自由基天然t^勿中，水飞蓟是少,ja个在i^^tn2i^的i^te一。三十多年的l(繊实验证明i^5具新触刀^m刺氐毒性(参阅FloraK.等人，AmJ.Gastroenterol.1998，93，139-143页；Sailer,R.等人，Drugs,2001，61(14)，2035-2063页)。7jC飞蓟中水飞蓟宾^Sl多，活性iHS高。i^i作用主魏以下几点。(一)抗自由翻性水飞蓟就于由ca，半学IM胺、If^禾唭懒干^tit^的肝损害具有傲;^乍用。1990年Lotteron等^随了在小f』干微粒体内，水飞蓟素能>由cafti射弓跑的体外脂^ii割级由还原型辅酶對虫弓起的过氧化作用i^t陵明水飞蓟素为链中断織化剂鄉自由MP叙U。(二)傲户肝细鹏莫:M^旨M^氧ft^^封糊鹏盼驗性，鹏干细鹏。还鄉臃真菌歸鬼^W月細a—鹅膏W!^W细祉特异受鹏结合！撇鹏肝细胞的攻击鹏臓！怖其肝胸盾环，从而增强肝细鹏謝于多禾衬员害因素附勵。(三)細干细胞的修复禾鹏水飞蓟宾itA^鹏可以与此l^受体賠，荆te激活，活化的受体可鹏彌干细胞核内薩齢酶l的活性，使RNA，曾强，促a^及蛋白质的合成，并间掛足进DNA船成，有利于肝细胞,复和再生。(四)抛橢作用各幹活瞎能氧化鸟卩，城8—^%11%誠DNA损伤，进而弓翻幗，水飞蓟宾作为一个输離自由繊质腿示了予鹏和治疗月働作用。水飞蓟^f七激具新触刀^m^，^骚由于其水溶性和生辦鹏肚的一些不足限制了i,的市场。故對办K飞蓟^f飾行生物，i媒冑鹏具有更高赫顿的離活性，以其赚取自挪炉权的新药，实属必要。本发明的目的鹏共一种具有織化、清除自由翻性、傲户肝鹏MF脏器质鹏伤、治疗早老1*症、i^的月衞Jc飞蓟宾观驗性化她具体而言，本发明樹共了一禾栻i戶际的膨ja蓟宾观徵胜物及^m用盐式I其中，n=l-5;X^m，R、H媳、雜、环縫、刺t^l代的芳基，式I中的7'，8'的立術勾型分别是或同时是R构型或S构型。本发明雌的式I化^^舌化激1-1:2-[2，3-二氢-3-(4-N，N-二Z^鍾甲酰甲離3-甲^^雜-2-羟甲蒼l,4-苯并^m^环"6-]-7-(4-N，N-二乙翻鍾甲酰甲tt"3-甲苯彰-3，5,-二I^4H-1-苯荆W^4-酮；化激I-2:2-[2，3-二氢-3-(4,赂縫甲酰甲3-甲氧基織-2-羟甲基-l，4-苯并Z^A环"6-]-7—(4-卩比咯烷基甲酰甲旨3-甲ftS^S)-3，5，-二羟H1-苯卿PH-酮；化激1-3:2-[2，3-二氢-3-(4-N-菊鍾甲酰甲旨3-甲氧基雜-2-羟甲基
发明内容-1，4-苯并Z^C环"6-]-7-(4-^荆錢甲酰甲旨3-甲^^^)-3，5，_二羟化激1-4:2-[2，3-二氢-3-(4-N-X^i錢甲酰甲tt"3-甲織-2-羟甲基-1，4-苯并二氧六环~6-]-7-(4-^对氯苯胺基甲酰甲氧基-3-甲氧基苯蜀-3，5，-二P^"4H-l-苯荆Wl4-酮；化合物1-5:2-[2，3-二氢-3-(4-N-对甲苯胺基甲酰甲-3-甲氧基苯基)-2-羟甲H4-苯并Z^A环"6-]-7-(4;-对甲ftS荆鍾甲酰甲tt-3-甲t^雜-3，5，-二羊鉴4H-1-苯荆tbfr4-酮；化合吻Ii2-[2，3-二氢-3-(4—N-对甲基菊錢甲酰甲緣3-甲氧基雜-2-羟甲奢l，4-苯并:^A环"6-]-7-(4-N-对甲基菊錢甲酰甲旨3-甲氧基苯墨-3，5，-二夢^"4H-l-苯荆砂i"4-酮；化合物1-7:2-[2，3-二氢-3-(4-N-2，4-二氯苯胺基甲酰甲氧蒼3-甲氧基苯基)-2-羟甲H，4-苯并Z^^环"6-]-二氢-7-(4-N-2，4-二m^i鍾甲酰甲氧3-甲^^雜-3，5，-二夢^4H-l-苯荆砂fr4-酮；化合物1-8:2-[2，3-二氢-3-(4-乙氧甲酰甲氧基-3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-l，4-苯并二默环~6-]-7-(4-乙氧甲酰甲緣3-甲竊苯基)-3，5，-二f幾-4H-1-苯荆砂^"4-酮；<formula>formulaseeoriginaldocumentpage8</formula>本发明的另一个目的^(共一禾拭i戶^的月M7ja蓟宾观^f行生物的伟恪方法。式i化溯離恪效提<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>其中，n=l_5;R、R媳、'藤、环縫、刺MM^代的芳基X,为卣素5^f内，鹏内，1化钾，MM七钠。^S/S溶齐伪四SP刘南，N，N-二甲基甲醐安，二甲Wl，Si^驢为室驢回流，,寸间为0.5-20小时。其中1-a^^g^然的^"合成的水飞蓟宾(silybin)以及本发明的另一个目的是提供了式I化^t/用于防治肝M,干脏器质性损伤及欺眹的肝ife^的用途。本发明的再一个目的^f共了一禾恰有式I化，的用于防治肝1肝脏器质掛员伤及期眹的肝ife^的,鹏。本发明的另一个目的鹏共了一禾辦式I化溯的用鹏于織化自由凝几审M)^、防治早老醜呆1^的用途。本发明的再4目的離共了一禾恰有式I化镧的用脇于媳化自由掛几制6Wi^、防治早老醜呆症的綱0|胞勿。本发明的又一目的^if共了式I化创勿的用恪由氧自由基弓|^^氧自由^t关的生理^^^親隄心血管浏亩血管^l^的用途；本发明的再一个目的^f共了一禾恰有式I化^4勿的用恪由氧自由基弓1^^与氧自由歸关的生理改变^^親提心血管&M血管病^I吻的药辦且m为了M^W本发明的实质，Tffi分别用^M列的形式说明化^^恪的过程，^M侈蛤出Pf樣性化溯的部^i刺七学及波i^^。必领说明，本发明的^M列翻^i兑明本发明麻^t本发明的限制。tl^本发明的实颇本发明进行繊^W属于本发明要求傲户的范围。娜!ll:化織H(2-[2，3-二氢-3-(4-N,N-二战魏甲酰甲it^3-甲難^S)-2-羟甲H，4-苯并Z^A环"6-]-7_(4-N，N-二乙基甲酰甲"3-甲^S,-3，5，一二l^"4H-l一苯荆砂t"4-,TOi恪OHO2.2克化糊I-a(水飞蓟宾)溶解于15新N,N-二甲基甲醐安中，力队l^，0.15克碘化钾，微半下力OA0.67克N,N-二Z^氯乙醐安，于室翻觉ffil夜，^Z劍至iJA30W"冰水中，析出黄包冗淀，用乙酸乙酉^^又，合取te用慨喰S;鹏，形K鹏肝燥，过滤，繊，得黄色固体经腺附顆廣鄉末1.2克，收率60%。Rf(氯仿:甲醇=50:1)=0.1;'H腿(400MHz，氖4仁甲:1.02(t，J二7.0Hz，3H，鹏，1.06(t，J二7.0Hz，3H，鹏，1.17(t，J=7.0Hz，3H，CH3)，1.224(t，J=7.0Hz，3H，CH3)，3.32(q，J=7.0Hz，2H，NCH2),3.37&J二7.0Hz，2H，鹏，3.42(q，J二7.0Hz，2H，咖，3.44(q,J=7.0Hz，2H，NCH2)，3.53(叫1H,H~9'a)，3.79(r^1H,H~9'b)，3.88(s，3H，0CH3)，4.251H，H-8'),4.95(s,2H，0CH2C0)，4.96(s，2H，0CH2C0)，5.02(d，J二8.0Hz，1H，H-7')，6.34(s，1H，阔，6.73(s，1H,H-8),6.8^7.946H，Ai^H)，12.61(s，1H，5K)H);ESH707[M+l]+。丰離^l例i相同6ti^法第i搭f中^l例2-7戶;f^化，<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>各化合物理化数据化合吻I-2(2-[2，3-二氢-3-(4-P[:赂藤甲酰甲,3-甲^^-2-羟甲基-1，4-苯并:i^A环"6-]-7-(4-吡咯縫甲酰甲緣3-甲縫苯基)-3,5,-二P膝4H-1-苯荆ttPfr4-,:Rf(氯仿:甲醇二50:1)=0.10;'H證(400MHz，氖4仁甲亚卿1.53(叫12H，CH2)，3.46(叫9H，NCH2，9'a)，3.75fe1H，H~9'b),3.86(s'3H，0CH3)，4.20(i^1H'H-8')，4.93(s，2H，0CH2C0)，4.95(s，2H，0CH2C0)，5.00(d，J二8.0Hz，1H,H-7')，6.30(s，J=2.0Hz'1H,H~6)，6.32(d，J=2.0Hz，1H，H-8)，6.86-7.13(n;6H，Ar"H)，12.05(s,1H，5"0H);ESI-MS703[M+l]+。化溯1-3(2-[2，3-二氢-3-(4-N-荆鍾甲酰甲緣3-甲雜織-2-羟甲基-1，4-苯并:^A环""6-]-7-(4-N-菊錢甲酰甲,3-甲^^S)-3，5，-二，鉴4H-1-苯荆砂i"4-酾Rf(氯仿:甲醇=50:1)=0.10;'H腿(400MHz，氘4仁甲3ep):1.53(n;12H，CH2)，3.40fe1H,9'a)，3.46(t，8H，NCH2)，3.56(n;1H，H~9'b)，3.86(s，3H，0CH3)，4.20(n;1H,8')，4.93(s'2H，0CH2C0),4.95(s，2H'0CH2C0)，5.00(d，J=8.0Hz，1H'H-7'),6.30(s，J二2,0Hz，1H，H"6)，6.32(d'J二2.0Hz,1H,H-8),6.86-7.1316H,Ar^H)，12.05(s，1H，5~OH);ESI~MS747[M+l]+。化激I-4(2-[2,3-二氢-3-(4-N-Xm^錢甲酰甲■3-甲^S*S)-2_羟甲H4-苯并zmA环"6-]-7-(4-N-X^m苯胺基甲酰甲ft^3-甲M苯基)-3，5,-二夢發4H-1-苯荆比喃-4-,:Rf(氯仿甲醇=50:1)=0.13;'H證(400MHz,気4仁甲):3.401H，9'a),3.58(a1H，H"9'b)，3.78(s，3H，0CH3)，4.26(rr^1H,8'),4.67(s，2H,0CH2C0)，4.85(s，2H，0CH2G0)，5.01(d，J二8,0Hz，1H,H—7')，6.50(s，J二2.0Hz，1H，H~6)，7.02(d，J二2,0Hz,1H,H-8)，6.80"7.77(m，14H,Ai^H)，12.05(s,1H,5~Oi);ESI~MS815[M+l]+。化合物1-5(2-[2，3-二氢-3-(4-N-对甲錢苯胺基甲酰甲ftS-3-甲苯基)-2-羟甲奢l，4-苯并Z^A环+]-7-(4廿对甲ftS荆鎮甲酰甲驗3-甲^^雜_3，5,-二萝银4H-l-苯荆砂fr4-醐Rf(氯仿:甲醇=50:1)=0.16;'H證(400MHz，気4仁甲3W):3.40(叫1H，9'a)，3.59(n^1H，FP9'b)，3.75(s，6H，0CH3)，3.77(s，6H，0CH3),4.27"1H，H-8')，4.62(s，2H，0CH2C0)，4.80(s，2H,0CH2C0)，4.95(d,J二8.0Hz，1H,H-7')，6.51(s，J=2.0Hz，1H，H~6),7.02(d'J=2.0Hz,1H,H-8)，6.86-7.13(n;14H，Arfl)，12.38(s'1H，5~0H);ESI~MS809[M+l]+。化合吻H(2-[2，3-二氢-3-(4-N-对甲基菊鍾甲酰甲,3-甲氧基-2-羟甲蒼l,4-苯并I^A环"6-]-7-(4-N-对甲基莉錢甲酰甲敏3-甲^苯基)-3,5，-二萝^4H-l-苯并妣喃-4-,Rf(氯仿甲醇=50:1)=0.13;'H賺(400MHz，氖4仁甲3EP):2.27(s，6H，CH3)，3.40fe1H,H"9'a),3.59fe1H，H~9'b)，3.78(s，3H，0CH3)，4.28fe1H,H-8')，4.65(s，2H，0CH2C0)，4.83(s，2H，0CH2C0)，4.96(d，J二8.0Hz,1H'H-7')，6.52(s,J=2.0Hz,1H，H~6)，7.03(d，J二2.0Hz，1H，H-8),6.86-7.13fe14H'Arfl)，12.40(s，1H，5~0H);ESI^MS775[M+l]+。化合物1-7:(2-[2，3-二氢-3-(4-N-2,4-二氯苯胺基甲酰甲,3-甲苯基)-2-羟甲蒼l，4-苯并^A环"6-]-二氢-7-(4-N-2,4-二fM鍾甲酰甲氧基-3-甲氧基苯基)-3，5，-二羟基-4H-1-苯并吡喃-4-酮)Rf(氯仿甲醇=50:1)=0.21;1H薩(400MHz,氖4仁甲亚,3.40(m,1H,Fh9'a)，3.60(m，1H，H"9'b),3.79(s，3H，0CH3)，4.29(n;1H,H-8')，4.75(s，2H，0CH2C0)，4.95(s，2H,謂C0)，4.97(d，J=8.0Hz,1H,H-7')，6.53(d，J=2.0Hz，1H，H~6)，7.03(d，J=2.0Hz,1H，H-8)，6.86-7.13(it;12H,Ai^H)，12.36(s，1H,5~0H);ESH885[M+l]+。^'J8:化鋤1-8([2-[2，3-二氢-3-(4-瑰甲酰甲驗3-甲^^越-2-羟甲ll，4-苯并^ftA环^-]-2，3-二氢-7_(4-乙氧甲酰甲~3-甲錢苯基-3，5，-二P鉴4H-1-苯荆Wfr4-翻)離恪OH0木離叙包例i相同ati^法，用原1職乙酸乙酉默替N,N-二z^氯乙醐安，^穀l]f七溯I-8:Rf(氯仿:乙酸乙酯:甲,25:1:0.25)=0.10;'H腿(400MHz,彌仁甲鹏1.23(t,J二7.2Hz,3H,鹏，1.31(t，J二7.2Hz，3H，鹏，3.58一1H，9'a)，3.86fe1H，H^9'b)，4.13(m，1H,H-8')，4.20(q，J=7.2Hz，2H，CH2CH3)，4.28(q，J二7.2Hz,2H，CH2CH3)，4.28(m,1H，H-8'),4.67(s，2H'Hl，4.82(s，2H，0CH2C0),5.99(d,J=8.0Hz，1H,0CH2C0)，6.35(s'1H，H-6)，6.41(s，1H，H-8)，6.96-8.01(n;6H，Ai^H)，12.50(s，1H，5~0H);ESI~MS653[M+l]+。式I化^^有多禾,的生性，本发明将it系歹i批^^t过氧ttaE大i!Lf源f^F细鹏员伤体外tMi4行了肝细鹏员倒^^活掛離，i^f七溯繊鹏有傲户肝细鹏nf娜干细胞修复的作用;本发明观繊七^^自由翻鹏亍了观赋，发王jTOr有体外清^W月离子自由基、清除v^M識苯肼自由基、，聯咱由基诱导:tl敏割^bt的活性，以上活性表明i^f七合物可以風期用^U备予郧M治疗急性優性肝损伤^^以及由氧自由基弓IM与氧自由^t关的期tl^aM^^的,;i^f七^舰彭见出很强的X^t自由基弓胞的pci2细鹏员伤作用，即)(#對训新瞎魏胞的rci2细^m^俗员傲斜a乍用，而且在同一^tr，紫鄯余自由謝斜户细胞的能力比附f叙寸照槲皮素更为^m，说明i^s^7jc飞蓟宾^i^i行生顿寸傲户臓转S)m化、防治老年醜呆蹄只极作用。本发明的式I化^^鹏用繊|鹏可以与药学上常用,斗;体^，帝J^穀惧剤斜户肝细胞急性和優附员伤甜4A人]fiM以用Tf郧方以及治疗肝U^的li^且^Kt^il品。J^^^且^MtMI品可以翻激剂、片剂、繊IJ、气翻、栓剂、翻、滴細、夕阅翻、软膏剂输Mm本发明的式I化^^]^用l^皿ijtt^j以与现ej;:市的肝脏f^^户湖干病治^ti^敏口联^x通旨、水飞蓟素、水飞蓟宾葡甲胺、布|、二氯乙酸二异丙月安、原卟啉钠(protopo卬hyrindisodium)、马洛替酯(raalotilate)、熊去韌MW^娜，鹏穀惧有傲户肝脏活性的组她研鹏朋于治疗急優醜毒断炎、慢断炎、##朋邗對七、月旨肪肝及中毒糊干损伤^口赫纖品。i^^W&^^維品可lMffi糊剂、片齐U、！^PJ、气，iJ、检剂、月MU、滴Mi，USM^，^SM!J见已公认的药齐lj^t识徵鹏恪而得的各彬邀畢、，^^型避,哜IJ。本发明的式l化^tl^]l5用aS^fM措勿可以与现eJ:市附亢自由^f七齐lJW鹏割^/樹機(SOD)^^糊，带J^穀惧郁方御自由基弓跑附员害活性e^mi^i^且^wt傲建品，用于治疗超氧阴离子自由基或期鹏自由基引^^自由基异常相关的期ti^理^^M舌縦、自身顿^i、月檷、心鹏她、心卿醇、鼓、变态鹏、动脉離衝七敏病。i^^!W且^tKt纖品可l^糊剂、片剂、月働J、气翻、栓剂、月餅j、滴M,Mim舰娜见已公认的歸麟识獄鹏恪而得的各禾嚼畢、赚剂鹏,厠。本发明的式I化^t^鹏用舰^fiJfW3SST以与现eJ:市離早老1^1^及^^1哋可林、多劍鬼齐、船也哥明、力拦他敏、黄颇划安、石粉咸甲^^f顿，帝J^穀惧郁方御自由基引起附员害、傲户臓瞎5活性的臓^t^^t傲建品，用于防治群'醜呆症以及欺眹的智力障石嫉病。±^^且^^繊品可以翻齒糊、片剂、it^吸柳占片莉直翻、伊働j、气翻、栓剂、翻、滴細、夕卜用翻、软膏齐翻^im包括OT现已公认的药剂^m只常规制备而得的各种缓释、控释剂型游内^u剂。艱是由机体细,生和清除自由基之间的失调所弓胞的，可诱发多禾嫉病。tt!OT^I超转S^^,如中风，巾繊疏，阿尔^^満。另夕卜它还跟其它鹏at^Si径有关，如心鹏、自身嫩fe^、月幗、病毒fe^(如AIDS、肝炎)。因此帮錄加Wim化齐lM^治疗由ftJl弓跑的各禾嚇的^^燧径。本发明用体外清除阴离^S氧化自由基的活性逸验；体外清除:i^^m苯肼自由基(1，卜diphenyl-2-picrylhydrazyl，DPPH)的活性i力验；测定化激对双敦JC肌戶膽PC12(大鼠肾上Pf^细贓)细鹏员伤附尉户作用；化娜卬制自由基诱导:tlia氧化物^W等逸险i兑明本发明权利要求中化^勿的i/im化活性。为了更好膨翻鉢发明的实质和本发明戶;M化^tt药物开^i:的应用前景，预以歸里势敏'折M^别用本发明中制搭出的化^(寸过氧ttaa大鼠乳鼠原彻干细鹏员伤体外t難的肝细胞损伤傲户活性、体外清除超氧阴离子自由基繊dpph自由繊性、撇咱由基诱导卿敏莉^性以湖由双勤k肌戶撤pci2(大鼠肾上pf^细贓)细鹏员伤附尉;^乍用的離实i^g果，说明^s制i^页域中的新用途。離刻奄例给出了4饿性化^的部分活臓据。必领说明，本发明的l5S^i列朋;f翻的药效對M^fi兑明本发明而不^x^:发明的限制。t^g本发明的实^i"本发明謝亍繊^a，以及在本发明势包例所涵盖的病因凝rh的简易r^的期tii3t^症都属于本发明要刺斜户的范围。離娜列l:化镧I-1体外瀞纖阴离子自由基的活性微化嫩-itffi^^阴离子自由基會幼,则7m顿鹏-N甲^應(phenazinemethosulfate-NADH)^^充，用四P^M^(nitrobluetetrazolium)还原效M^。用3S^有78iiM的NADH、5(M四f^E^和10yM甲^&在pFHI^8.0的16nMTris-HC1缓沖液中产生出超氧阴离子自由基，在不同鹏的化溯H繊腳生。超氧阴离子自由凝晒^5的彦翻^^t计在560nm波长下监测，槲艘鹏乍阳'断照繊。i鹏果M二。表~样品泖诚被(yg/ni)对超氧阴离子自由繊余率化溯H4029.48%槲錢4063.24%i繊果表明，化溯I-1具有一定的超氧阴离子自由難除作用，腿在同一^r,紫鄯餘娜有槲據高。结论i繊衞ja蓟宾观劇^i属于具有一窓,氧阴离子自由基育幼^m雄质。药理实施例2:化合物1-2体外清除二苯基苦基苯肼自由基(1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl,DPPH)的活性i力验DPPH的甲ll^磁517nm有强吸收值，Kl财j^im化斗舰原时，吸收值下降，吸^i低，其iJ^化作用趨虽。在250yLg体系中含有25"L盼^^J40pg/ni斷七激1-2，DPPH(0.4mg/mL)的甲酉^#液40uL及甲l^^液185uL，37。C水浴鹏30分钟后，在517nm奶则定吸光度。DPPH的甲,財目同浓度的槲分另^乍为阴性、阳f^t照。i^^吉果MH。転_样品观顿皴(卩g/mL)对超氧"j^子自由鶴除率化，1-24044.18%槲錢_^_87.42%_i^^果表明，化激I-2具有一定的DPPH自由鶴除作用，fS^在同一難除育幼没有槲歸高。结论鄉衞K飞蓟宾观徵七激属于具有一定清除DPPH自由基斷fiwim働质。舰娜列3:化，I-l对赚JC肌臓PC12细鹏员伤,排用活性i微肌^^种主要盼活性自由基Wttr体，它刚起中敏瞎S^ffl胞的Mt:，PC12细胞(大鼠肾上Hf^细鹏)可樹,申纟魏胞，因此常用它刺乍为石欣^转魏1^间^^附難，用mr测细胞的存活率，如菊糊他^W清除由肌引起的自由基ffif對辨瞎魏胞的作用，0Df歸，细胞存活率就高，fet就低。对/§#]#屑随^"法(XiaoqiuXiao等，NeurosciLett.1999，275:73-76)力似gfcffi则定化激飾斜户作用。PC12细鹏■Ji^掛歸，培养基中含10%胎牛血清，100U/mL青霉穀口100U/mL||§素。细胞以每孔6000个的密戯倒96孑版中，在37。C，50P/oCa激lS气的i^^l中i:薪36小时。细胞存活率用使ffiMI敫傲B鹏n改良的,法。细鹏圣36小时的孵育后，分另叻瞎厢己附七溯i-i的二甲3Mt液以^S梯戯nAJl船L中。作用2小时后力DAfi己的恥2(终IM^500umol/L)作用3小时，屈辦獻J)^i碌，弃去原:fe^i，力DAf附^^100uL,然后力nA腊10uL，3小时后，小匸吸去培鎌，力PA150卩LDMS0溶解甲臜，于570nm姐鎩；用槲^^作阳ttXt照，试麟果赚四。表四<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>逸麟果表明,化溯I-1具有很强的X^il逮自由基弓起的PC12细鹏员伤作用，即赠對湖新糊胞的PC12细鹏織俗员臓户作用。而且在同一^TF，紫鄯余自由謝斜户细胞的能力比P日ti^照槲^^高。结论i^K水飞蓟宾观駒七激属于具有翻辦對鹏转魏胞的PC12细胞作用鹏割機质。测定化^M肌戶傲PC12细鹏员伤的傲户作用可作为初^fi寸其傲户中鹏瞎魏鹏作用鹏故微七^t^见出对赚Jc损伤臓PC12细酺傲M乍用，说明^1^^^:证的治^1R极作用。舰娜化-化錄1-2鄉ij自由基诱导;tl敏割機顿的活性i微1.实^lf應月旨J^m化是自由超乍用于多不t魅胡旨IM的，，^4与自由基的ME相关，由于机^^mft化的酶系i辆每系飾斜户作用，使自由基不断产4X不断被蕭余。随^妳胀，体内附jm化齐杯断下降，清除自由翻育幼邀斩繊l，脂Mil氧化作用卯赠强，月旨Mil氧ttJ^曾多。因此，测定样品棚繊氧化作用，是fti^S化，i^繊^W断之一。2.化嫩-2卿咱由基诱导:tl敏氧似teOTi31勵干微粒腳J:(i)冊敫粒体的伟恪实验大鼠断头处死，aai取出肝脏，用^i^'i:祛审恪肝微粒体。(2)样蹄動刊EMft化國,在含FeSft(4ymol/L)与会鹏CVc(50umol/L)的1^f^冲液中力队200ug/ni微粒舯，以诱导产勉M:氧化，同日幼nA不l^t的i-2样品，力队iS^Hid讖中ihSi^力队1.5^f^代巴比魏100。C沸7jC浴20^4中，离C、，在532nm波长下测定<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>i5^果表明，化糊1-2具有很强,ij自由基诱导a敏氧俗勿械g九即x糊M"ifim俗员制斜户作用。而且在同一^T，M^fflWim俗员伤旨幼比阳傲寸照槲i^S虽。结论i^^M;Ja蓟宾^i^i^,属于具招虽謝斜户细機風提示欺有織化、1^^以及预鹏衞旗舰鼓^i的作用。離叙綱5:化激I-8对SD新生大f鹏干细鹏働损伤觀白嫩刊乍用i微取SD大fv新生乳翩干脏，审i鹏干细Mr液，离心3次，以ig^fS悬，即丽賴汰部分为肝实质细胞^^夜。将適干细胞悬働队96孔(每孔0.1毫升):t^t反中，置5%Cai^f肿，在37。C下;t薪12小时后，吸弃上清，加入0.6imDl/L的lia。作用1小时后，分别力0A高、中、低3种不度的1-8样品i^!5液，同时设凝诉鹏^^照i且。i"g^^束后，吸弃上清，,干细胞样品，570nm波长下用辦示仪i"m:傲户率，结果JK^。<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>i鹏果表明化條-8具有一定的傲户SD新生大f源概细鹏魏敦Jc损伤的育幼，艮附SD新狄Ui彻干细i^i)m俗员銜斜刊乍用。但在同一7，M^Mim俗员銜對户能力比附^t照槲^M氏；结论i^W水飞蓟宾观離激属于具输娜户新狄,概细Wim俗员働质。提示^c新WF护肝以及風期用^恪柳M治疗急性慢幽干损伤^i的作用。权利要求1.一种式I所示的脱氢水飞蓟宾双酯类衍生物及其可药用盐或其溶剂化物。式I其中，n＝1-5；X为氮或氧，R1、R2为氢、烷基、环烷基、取代或未取代的芳基，式I中的7′，8′的立体构型分别是或同时是R构型或S构型。2.職权禾腰求1的式I化鋤，他们是化激I-l:2-[2，3-二氢-3-(4,，N-二Z^錢甲酰甲維3-甲雜雜-2-羟甲H，4-苯并:i^A环^-]-7-(4-N，N-二乙勘錢甲酰甲旨3-甲氧基苯基-3，5，-二夢膝4H-l-苯荆砂i"4-酮；化激1-2:2-[2,3_二氢-3-(4-Pt略藤甲酰甲,3-甲^-2-羟甲基-1,4-苯并Z^^环"6-]-7-(4-吡咯麟甲酰甲緣3-甲^S^)-3，5，-二羟糾-1-苯荆險4-酮；化鋤I-3:2-[2，3-二氢-3-(4-N-^^甲酰甲敏3-甲織雜-2-羟甲基-l，4-苯并:^A环"6-]-7-(4-N-菊鎮甲酰甲敏3-甲^繊-3，5，-二羟Hl-苯荆險4-鹏化，_4:2-[2，3-二氢-3-(4-N-X^^甲酰甲驗3-甲雜糊-2-羟甲基-1，4-苯并二氧六环~6-]-7-(4-1^对氯苯胺基甲酰甲氧基-3-甲氧基苯敏-3,5,-二夢^"4H-l-苯荆砂i"4-酮；化合物1-5:2-[2，3-二氢-3-(4-N-对甲苯胺基甲酰甲旨3-甲M苯基)-2-羟甲|1，4-苯并I^A环+]+(4廿对甲^S荆錢甲酰甲緣3-甲^^^)一3，5,_二夢"朋一1一苯荆砂14一酮；化合吻P6:2—[2，3-二氢-3-(4-N—对甲基菊鍾甲酰甲,3—甲氧基趣一2-羟甲l，4-苯并:^A环"6-]-7-(4-N-对甲基菊安基甲酰甲旨3,氧基苯基-3,5,-二,^"4H-l-苯荆ttPfr4-酮；化合物1-7:2-[2，3-二氢-3-(4-N-2，4-二氯苯胺基甲酰甲氧^"3-甲氧基苯敏-2-羟甲H，4-苯并Z^A环"6-]-二氢-7-(4-R"2，4-二m^^甲酰甲氧好甲織雜-3，5，-二緣4H-1-苯荆,4-酮；化合物1-8:2-[2，3-二氢-3-(4-乙氧甲酰甲ft^3-甲氧基苯基)-2-羟甲基-1，4-苯并Z^环^-]-7-(4-乙氧甲酰甲3-甲fl^苯基)-3，5，-二夢淺普1-苯荆險4-酮；3.权禾腰求1中式1化^#恪方法，顿刮每式I-a和式I-b纟鄉眺《驟J<formula>formulaseeoriginaldocumentpage3</formula>其中n，R,，H,X的定义^t又禾IJ^求l中的式I;X,为卣素，船《1^^，Mft化钾，MM化钠；MiS歸伪四割刘南，N，N-二甲基甲二甲1，SMj^暂M5蹄荒，自寸间为0.5-20小时；I-a中2，3位和7'，8'的立鹏型分别题同时是R构鹏S构型。4.鹏又禾鹏12mtl衞K飞蓟娜激I化^舰糊性，其特点铋舌对过氧ttSIl大鼠乳鼠劇tff细鹏员伤体外fMM示出的肝细鹏员伤傲W乍用、体外阴离子自由基清除^:^^^荆井自由基、卿咱由基诱导a隨雄顿的作用以贼I化^#亢自由基弓胞的PC12细鹏员伤作用i^熟新转^fflW]pci2细EM示出em^tt^劍划默作用。5.職权禾鹏i2戶;Ma&K飞蓟宾观激I化溯用恪挪繊疗急性漫l^^劍^^、^fF护肝^tl的用途;用1]治由自由基引起敬目^14^^^紘自身嫩(Wi、月檷、心um、心胍醇、就、麟破、动脉,靴^i!W^用途；贩微七彌用銜默鹏峰、防治群1^症的繊用途。6.繊权禾麟5的用鹏銜穀,鹏户臓、防離^,、治疗心血管鹏血管;^imifeS^繊、和/綱11且她7.—种用刊恪離自由基、據化、微肝细鹏员伤及急慢鹏飾、傲户脑彬魏鹏员伤的繊且鋤，其含有作为活^^的治柳爐,鹏i2戶mt化，l或它们自七^^^用4^MW^:们的混，口鹏用辦斗。8.鹏权禾腰求57的^纖，刺以新剂、繊IJ、激剂、输U、栓剂、翻、滴細、贴片剂、皮下植翻、夕卜用翻、口服剂，M^OTJ见代审,界所么^n^^^^^iM^鹏脐iJ。全文摘要本发明涉及一种具有抗自由基氧化、保肝护肝、防治老年性痴呆症、抗衰老活性的脱氢水飞蓟宾双酯类衍生物及其可药用盐或溶剂化物。本发明还涉及制备式I化合物的方法及其药物组合物和医药用途。本发明的化合物对大鼠肝细胞损伤体外模型具有保护肝细胞的作用，可以预期作为防止肝脏损伤类药物用途；本发明的化合物具有体外清除超氧阴离子自由基和二苯基苦基苯肼自由基、抑制自由基诱导之脂过氧化物生成等生物活性，该类化合物还表现出很强的对抗自由基引起的PC12细胞损伤作用，因此可以预期成为防治由自由基引起的各种疾病之药物。文档编号A61K31/357GK101104616SQ20061009901公开日2008年1月16日申请日期2006年7月14日优先权日2006年7月14日发明者冯玉冰,峰汪,骅白,昱赵,龚景旭申请人:浙江大学