水飞蓟宾或其盐在制备增强alk-tki疗效、延缓其耐药的药物中的应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于医药用途领域，特别涉及水飞蓟宾或其盐在制备增强ALK-TKI疗效、 延缓其耐药的药物中的应用。
【背景技术】
[0002] 肺癌是目前人类因癌症死亡的主要原因，近年来其发病率和死亡率不断上升。非 小细胞肺癌（Non SmaLL CeLL Lung Cancer，NSCLC)占到了所有肺癌病例的80%-85%。 目前NSCLC的个体化治疗备受关注。研究表明，棘皮动物微管相关蛋白4/间变淋巴瘤激酶 (echinoderm microtubule-associated protein-like 4/anaplastic lymphoma kinase， EML4/ALK)在NSCLC的发生发展过程中起着非常重要的作用，EML4/ALK融合基因阳性的患 者占所有NSCLC患者的3 % -7 %。对于EML4/ALK融合基因阳性的晚期NSCLC患者，2013 年上市的肺癌分子革E向药物间变淋巴瘤激酶/酪氨酸激酶抑制剂（anaplastic lymphoma kinase/tyrosine kinase inhibitor, ALK-TKI)即克唑替尼，展现出了显著的治疗效果，一 线治疗与化疗相比PFS从7个月提高到10个月，它可以显著延长该类患者的生存期，使部 分晚期NSCLC患者的治疗获得了新的希望。AKK-TKI为代表的靶向药物对NSCLC患者的客 观有效率达60%，无进展生存达8-10月，总生存显著延长。尽管EML4/ALK融合基因阳性的 患者获益显著，但是这些患者往往在1-2年内出现对AKK-TKI的耐药，使得AKK-TKI的疗效 降低。目前临床上尚未出现有效的，能够增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的药物。因此，发 现有效的增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的药物具有非常重要的科学意义和临床价值。
[0003] 水飞蓟宾（siLybin)是从植物水飞蓟（SiLybumMarianimL. S. L)果实中提取的有 效成分，临床上主要用于治疗急慢性肝炎、肝硬变、脂肪肝、酒精引起的肝损伤、代谢中毒性 肝损伤、胆结石和脾脏病等。今年来公开了一些水飞蓟宾的新用途，例如CN101961329公开 了水飞蓟宾在制备抗雄性激素药物中的用途。CN1666739公开了水飞蓟宾或其盐在制备治 疗冠心病或用于增强治疗冠心病药物疗效中的应用。CN102727484公开了水飞蓟宾在制备 预防或治疗老年痴呆药物中的用途；等。然而，目前尚未发现有文献报道水飞蓟宾或其盐在 制备增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的药物中的应用。
【发明内容】
[0004] 本发明提供一种水飞蓟宾或其盐的新用途，即水飞蓟宾或其盐在制备增强 ALK-TKI疗效、延缓其耐药的药物中的应用。
[0005] 现有技术中公开了水飞蓟宾或其盐可制备治疗肝炎、肺炎、肺部肿瘤的药物中的 应用。但是从未有文献记载，水飞蓟宾或其盐可用于增强其ALK-TKI疗效、延缓ALK-TKI耐 药的报道。本发明经过实验得出水飞蓟宾或其盐能够显著增强ALK-TKI的疗效，并且能够 延缓ALK-TKI的耐药；水飞蓟宾还能够显著降低耐药细胞的侵袭性：使耐药株H2228-CR发 生侵袭的细胞数平均值从238至86个；此外，水飞蓟宾联合克唑替尼可显著减弱移植瘤的 生长；表明水飞蓟宾可显著增强克唑替尼的疗效。
[0006] 本发明所述的ALK-TKI优选克唑替尼或色瑞替尼，进一步优选ALK-TKI为克唑替 尼。
[0007] 克唑替尼对非小细胞肺癌的治疗有效率可达到60%，但是在服用克唑替尼1-2年 后，也会出现耐药性使得克唑替尼的疗效降低。但是目前还未发现有任何药物可克服克唑 替尼的耐药性，本发明经过大量的实验得出，水飞蓟宾或其盐可有效地逆转克唑替尼的耐 药性，从而使得克唑替尼的疗效增强。
[0008] 进一步改进的方案中，水飞蓟宾的盐优选水飞蓟宾葡甲胺、水飞蓟宾精氨酸或水 飞蓟宾组氨酸。更进一步的优选，所述盐选自水飞蓟宾葡甲胺。
[0009] 进一步的改进，所述水飞蓟宾或其盐的使用剂量为70-700mg/日。
[0010] 优选地，所述水飞蓟宾或其盐的使用剂量为300mg/日。
[0011] 本发明另一方面，提供了水飞蓟宾或其盐的制剂在制备增强ALK-TKI疗效、延缓 其耐药的药物中的应用。所述制剂优选为缓释制剂，进一步优选为缓释片。
[0012] 本发明另一方面提供一种增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的缓释片，该缓释片包 括重量份数为5-15份的水飞蓟宾或其盐和重量份数为20-50份的辅料。
[0013] 以上缓释片中，辅料包括辛基酚聚氧乙烯醚、海藻酸丙二醇酯、微晶纤维素、辛基 十二烷醇和羧甲基纤维素钠；所述辛基酚聚氧乙烯醚、海藻酸丙二醇酯和微晶纤维素与水 飞蓟宾或其盐形成微囊；所述缓释片各成分的重量份数为：
[0014] 水飞蓟宾或其盐 10
[0015] 辛基酸聚氧Zi錄_機 IQ 海藻酸丙二醇酯 12.5 微晶纤维素 2.5 羊基十二焼醇 3 羧甲基纤维素钠 6.
[0016] 本发明通过将水飞蓟宾或其盐制成微囊后延缓了水飞蓟宾的释放，使其释放能够 持续24h ;该缓释片在1、2、6、12和24小时的累积溶出百分率分别达到33-35%、68-70%、 80-82%、87-89 %和90%以上；并且通过与辛基酚聚氧乙烯醚、海藻酸丙二醇酯和微晶纤 维素制成微囊后，提高了水飞蓟宾的水溶性，促进了水飞蓟宾的吸收；同时还提高了缓释片 的稳定性，将缓释片置于温度为40±2°C和相对湿度75±5%的条件下放置6个月，缓释片 内水飞蓟宾或其盐的含量、缓释片的形状及崩解时限均未发生变化；置于25±2°C和相对 湿度60±10%的条件下放置36个月缓释片内水飞蓟宾或其盐的含量、缓释片的形状及崩 解时限均未发生变化。加入的辛基十二烷醇不但起到了粘合剂的作用还起到了润滑剂的作 用。
[0017] 本发明另一方面提供了缓释片的制备方法，该方法包括如下步骤：a.将水飞蓟宾 或其盐加入辛基酚聚氧乙烯醚和海藻酸丙二醇酯中，研磨至均匀，制得水飞蓟宾或其盐研 磨物；将微晶纤维素按体积比为1:3加入水中，制得水溶液；将水飞蓟宾或其盐研磨物和水 溶液混合均匀，于高速剪切乳化，制得水飞蓟宾或其盐初乳；将水飞蓟宾或其盐初乳置于高 压匀质机中乳化，制得水飞蓟宾或其盐乳液；将水飞蓟宾或其盐乳液喷雾干燥，制得粒径范 围为15-25 μπι的水飞蓟宾或其盐微囊；b.将水飞蓟宾或其盐微囊与羧甲基纤维素钠混合 均匀，制得混合粉；c.将3/4的辛基十二烷醇溶于无水乙醇中，加入混合粉，混合均匀，制软 材；
[0018] d.将软材过20目筛，制湿颗粒，将湿颗粒喷雾干燥，进行整粒，与剩余的辛基十二 烷醇混合均匀，压片，制得。
[0019] 本发明另一方面还提供了所述缓释片在制备增强ALK-TKI疗效、延缓其耐药的药 物中的应用。
[0020] 本发明的有益效果在于，获得了水飞蓟宾或其盐的新用途，用于增强ALK-TKI疗 效、延缓ALK-TKI耐药；从而增强非小细胞肺癌患者对ALK-TKI的敏感性，克服ALK-TKI容 易耐药的缺点，提高ALK-TKI的疗效；进而提高ALK-TKI的客观有效率达60% ;此外，通过 试验得出，水飞蓟宾只能增强克唑替尼等ALK-TKI对非小细胞肺癌的治疗效果，不能增强 其他类型的抑制剂例如索拉菲尼、厄洛替尼等对非小细胞肺癌的治疗效果；并且只会延缓 克唑替尼等ALK-TKI的耐药性，不会延缓其他类型的非小细胞肺癌抑制剂的耐药。
【附图说明】
[0021] 图1为EGFR-TKI敏感株H1650、EGFR-TKI耐药株H1650-M3对厄洛替尼的敏感性 实验结果；
[0022] 图2为ALK-TKI敏感株H2228对克唑替尼的敏感性实验结果；
[0023] 图3为ALK-TKI耐药株H2228-CR对克唑替尼的敏感性实验结果；
[0024] 图4为EGFR-TKI敏感株PC-9、EGFR-TKI耐药株PC-9GR对索拉菲尼的敏感性实验 结果；
[0025] 图5为ALK-TKI耐药株H2228-CR发生侵袭的侵袭性实验结果；
[0026] 图6为EGFR-TKI耐药株H1650-M3发生侵袭的侵袭性实验结果；
[0027] 图7为EGFR-TKI耐药株PC-9GR发生侵袭的侵袭性实验结果；
[0028] 图8为体内实验的各组裸鼠肿瘤变化情况示意图；
[0029] 图9肿瘤生长曲线图。
【具体实施方式】
[0030] 实施例1 一种水飞蓟宾缓释片
[0031] 水飞薊宾 IQg 辛基酚聚氧乙烯醚： IOg 海藻酸丙二醇酯 12. Sg 微晶纤维素 2. Sg 辛基十二烧醇 Sg 羧甲基纤维素钠 6g
[0032] a.将水飞蓟宾或其盐加入辛基酚聚氧乙烯醚和海藻酸丙二醇酯中，研磨至均匀， 制得水飞蓟宾或其盐研磨物；将微晶纤维素按体积比为1:3加入水中，制得水溶液；将水飞 蓟宾或其盐研磨物和水溶液混合均匀，于高速剪切乳化，制得水飞蓟宾或其盐初乳；将水飞 蓟宾或其盐初乳置于高压匀质机中乳化，制得水飞蓟宾或其盐乳液；将水飞蓟宾或其盐乳 液喷雾干燥，制得粒径范围为15-25 μ m的水飞蓟宾或其盐微囊；
[0033] b.将水飞蓟宾或其盐微囊与羧甲基纤维素钠混合均匀，制得混合粉；
[0034] c.将3/4的辛基十二烷醇溶于无水乙醇中，加入混合粉，混合均匀，制软材；
[0035] d.将软材过20目筛，制湿颗粒，将湿颗粒喷雾干燥，进行整粒，与剩余的辛基十二 烷醇混合均匀，压片，制得。
[0036] 实施例2 -种水飞蓟宾葡甲胺缓释片
[0037] 水飞蓟宾葡甲胺 IQg 辛基酚聚氧乙烯醚 IOg 海藻酸丙二醇酯 Igjg 微晶纤维素 Ejg 辛基十二燒醇 3g 羧甲基纤雛素钠 6g
[0038] 按照实施例1的方法制备。
[0039] 实验例1体外实验
[0040] 1.实验目的：水飞蓟宾能否提高ALK-TKI细胞株及其耐药株对ALK-TKI的敏感 性；
[0041] 2.实验方法：采用MTT方法计算肺癌细胞的活性；
[0042] 3.实验步骤：
[0043] (1)对 ALK-TKI 敏感株 Η2228 细胞、EGFR-TKI 敏感株 Η1650 细胞、ALK-TKI 耐药株 H2228-CR 细胞、EGFR-TKI 耐药株 H1650-M3 细胞、EGFR-TKI 敏感株 PC-9 细胞、EGFR-TKI 耐 药株PC-9GR细胞分别进行扩增，分别收集对数期人肺癌细胞株，用胰蛋白酶消化细胞，离 心细胞悬液，使细胞沉积下来；用培养基重悬细胞，计数；
[0044] (2)计数后将细胞密度稀释至2X 104/mL，用加样器在平底96孔板的各孔中加入 100 μ L细胞悬液，每孔含2000个细胞；将接种好细胞的96板放入5% C02, 37°C细胞培养箱 中过夜培养；
[0045] (3)次日配置30 μ M水飞蓟宾（M表不moL/L，μ M表不微摩尔μ moL/L，下同），加 入药物的浓度梯度，共设5个浓度，每个浓度设3个复孔；实验共12组，具体如下：
[0046] EGFR-TKI 敏感株 H1650 组：给予（20 μΜ、15 μΜ、10 μΜ、5 μΜ、2· 51 μΜ、0 μΜ)厄洛 替尼；
[0047] EGFR-TKI 敏感株 Η1650+ 水飞蓟宾组：给予（20 μ Μ、15 μ Μ、10 μ Μ、5 μ Μ、2· 51 μ Μ、 0 μ Μ)厄洛替尼+30 μ M水飞蓟宾；
[0048] EGFR-TKI 耐药株 Η1650-Μ3 组：给予（20 μΜ、15 μΜ、10 μΜ、5 μΜ、2· 51 μΜ、0 μΜ) 厄洛替尼；
[0049] EGFR-TKI 耐药株 Η1650-Μ3+ 水飞蓟宾组：给予（20 μ Μ、15 μ Μ、10