专利名称：一种水飞蓟宾的制备方法
技术领域：
本发明涉及水飞蓟宾的提取纯化工艺，特别是一种应用硅胶层析和结晶提取纯化水飞蓟宾的方法。
背景技术：
水飞蓟宾别名益肝灵、奶蓟素、西里马灵化学名2, 3-Dihydro-3- (4-hydroxy-3-methoxyphenyl) ~2~ (hydroxymethyl) _6_ (3,5,7-trihydroxy-4-oxobenzopyran-2-yl)benzodioxin分子式和分子量C25H2201Q，482.44<formula>formula see original document page 3</formula>性质类白色结晶性粉末。无臭、味微苦涩，有引湿性。易溶于丙酮、乙酸乙 酯、甲醇、乙醇，略溶于氯仿，几乎不溶于水。一水合物(甲醇-水)，mp. 180°C ；无水物， mp. 1580C (180°C分解)。药理作用水飞蓟宾有明显的保护和稳定肝细胞的作用，用于治疗急慢性肝炎、肝 硬化、肝中毒等病。对肝炎患者症状、肝功能均有明显的改善。具有稳定细胞及细胞内生物 膜的作用。具有抗辐射的作用。能抑制甲醛引起的腹膜炎。水飞蓟素(Silmyarin，水飞蓟总黄酮)是指从菊科药用植物水飞蓟种子的种 皮中提取所得的一种黄酮木脂素类化合物，呈黄色粉末，味苦。主要的活性成分有水 飞蓟宾(Silybin)、异水飞蓟宾(Isosilybin)、水飞蓟亭(Silychristin)和水飞蓟宁 (Silydianin)等四种同分异构体，有时也特指水飞蓟宾，其中水飞蓟宾含量为50 70%。我国水飞蓟素生产厂家众多，但技术工艺较为落后。水飞蓟宾的制备通常是用乙 酸乙酯法提取，该法水飞蓟宾含量少，收率低史劲松，孙达峰，顾龚平等.水飞蓟素提取工 艺的改进和探讨[J]，中国野生植物资源.2006，12 (25) :52-54。张守勤等《常温超高压提 取水飞蓟素的研究》报道了一种利用超高压技术提取水飞蓟素的方法，该法压力条件对提 取器的要求很高，使得投资成本大大升高；中国专利CN1317486《丙酮法生产水飞蓟素工艺》 报道了一种用丙酮提取，石油醚脱脂的制备水飞蓟宾的方法，该法中脱脂在提取之后，油脂 类成分会影响提取效果，使提取时间增加，且石油醚毒性较大，不利于扩大生产；又如中国 专利CN101260105《一种水飞蓟宾的提取方法》报道了一种由水飞蓟素开始，乙醇回流提取 制水飞蓟宾的方法，该法乙醇用量多，能耗大，生产成本高；再如王翠艳等《水飞蓟宾提取方法的研究》叙述了回流提取和超声提取两种制备水飞蓟宾的方法，脱脂都用石油醚且用量 大，用于生产对人体有很大危害。
发明内容
本发明的目的是为了提供一种工艺简单，溶剂毒性小，生产成本低，易于实现工业 化的水飞蓟宾提取方法。本发明的目的是这样来实现的①脱脂将水飞蓟种子粉碎为20 40目，加入正己烷脱脂3次，得脱脂粗料；②提取脱脂粗料加入稀乙醇回流提取2 3次，合并得提取液；③萃取提取液减压浓缩至无醇味，浓缩液用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯液；④硅胶层析将乙酸乙酯液与硅胶拌样烘干后上柱，以苯、苯-乙酸乙酯洗脱，合 并得到水飞蓟主要成分洗脱液；⑤脱色水飞蓟宾洗脱液减压浓缩为浸膏，以乙醇溶液搅拌加热直至全部溶解，力口 入活性炭，脱色0. 5 1小时，过滤，得脱色液；⑥浓缩结晶将脱色液减压浓缩至原体积的40 60%，放冷析出晶体，晶体用热 乙醇饱和溶解，放冷，析出水飞蓟宾，滤出水飞蓟宾，重复2 4次，即得白色结晶产品。上述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述正己烷每次用量为原料质量的8 10 倍量，每次脱脂时间为1. 5 2小时。上述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述稀乙醇浓度为40 50%，每次用量为 原料质量的4 6倍量。上述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述乙酸乙酯用量为原料质量的3 4倍量。上述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述硅胶柱体积为5L，硅胶为200 300目。上述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述分段洗脱过程为流速均保持5L/h， 先用苯洗脱硅胶直至流出液无色，再用6 4 1 (ν/ν)的苯-乙酸乙酯洗脱至无色，最后 用2 1 1 (ν/ν)的苯-乙酸乙酯洗脱至无色，2 1 1 (ν/ν)的苯-乙酸乙酯洗脱以每 份200ml分段收集，洗脱结束后用紫外光检测，将显色相同的水飞蓟主要成分洗脱液合并。上述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述脱色步骤乙醇溶液浓度为50 60%， 用量为洗脱液浓缩浸膏质量的6 8倍量。上述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述脱色步骤活性炭用量为溶液量的 0. 5 1%。上述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述结晶步骤热乙醇浓度为70 80%，温 度为60 70°C。本发明存在以下优点1)选用正己烷取代石油醚、工业汽油、氯仿等安全性较差的脱脂溶剂，使生产更安全。2)用硅胶层析和分段洗脱的方法能够以较小的能耗完成水飞蓟宾的初级纯化；3)乙醇重复结晶可以提高产品纯度，同时比甲醇的毒性更低。
下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
具体实施例方式实施例1 将水飞蓟种子粉碎为20目，取10kg(水飞蓟宾含量0.96% )加入80L正己烷，脱 脂3次，每次1. 5小时，滤出药渣为脱脂粗料。脱脂粗料中加40L40%稀乙醇回流提取3次， 合并提取液后减压浓缩至无醇味，加30L乙酸乙酯萃取，得萃取液。将萃取液与200 300 目硅胶拌样后上5L硅胶柱，以5L/h的流速先后用苯、4 1和2 1 (ν/ν)的苯-乙酸乙酯 分段洗脱，各自以流出液无色为终点，以每份200ml分段收集2 l(v/v)的苯-乙酸乙酯 洗脱液，洗脱结束后用紫外光检测，将显色相同的13 21段洗脱液合并，减压回收溶剂，得 浸膏113g。浸膏加入800ml 50%乙醇溶液加热搅拌至全部溶解，再加入8g活性炭，回流搅 拌，脱色0. 5小时，滤出活性炭，脱色液减压浓缩至约480ml，用60°C的70%热乙醇饱和溶 解，静置放冷，析出水飞蓟宾晶体，滤出晶体，再用相同状态热乙醇重复结晶2次，阴干得针 晶成品67g(水飞蓟宾含量98. 2% )。实施例2 将水飞蓟种子粉碎为40目，取10kg(水飞蓟宾含量0.99% )加入90L正己烷，脱 脂3次，每次1. 5小时，滤出药渣为脱脂粗料。脱脂粗料中加50L45%稀乙醇回流提取3次， 合并提取液后减压浓缩至无醇味，加35L乙酸乙酯萃取，得萃取液。将萃取液与200 300 目硅胶拌样后上5L硅胶柱，以5L/h的流速先后用苯、5 1和1 1 (ν/ν)的苯-乙酸乙酯 分段洗脱，各自以流出液无色为终点，以每份200ml分段收集1 l(v/v)的苯-乙酸乙酯 洗脱液，洗脱结束后用紫外光检测，将显色相同的13 21段洗脱液合并，减压回收溶剂，得 浸膏119g。浸膏加入900ml 55%乙醇溶液加热搅拌至全部溶解，再加入6g活性炭，回流搅 拌，脱色0. 6小时，滤出活性炭，脱色液减压浓缩至约450ml，用65°C的75%热乙醇饱和溶 解，静置放冷，析出水飞蓟宾晶体，滤出晶体，再用相同状态热乙醇重复结晶3次，阴干得针 晶成品69g(水飞蓟宾含量98. 5% )。实施例3 将水飞蓟种子粉碎为40目，取10kg(水飞蓟宾含量0.98%)加入100L正己烷，脱 脂3次，每次2小时，滤出药渣为脱脂粗料。脱脂粗料中加55L50%稀乙醇回流提取2次， 合并提取液后减压浓缩至无醇味，加35L乙酸乙酯萃取，得萃取液。将萃取液与200 300 目硅胶拌样后上5L硅胶柱，以5L/h的流速先后用苯、6 1和2 1 (ν/ν)的苯-乙酸乙酯 分段洗脱，各自以流出液无色为终点，以每份200ml分段收集2 l(v/v)的苯-乙酸乙酯 洗脱液，洗脱结束后用紫外光检测，将显色相同的13 21段洗脱液合并，减压回收溶剂，得 浸膏124g。浸膏加入1000ml 60%乙醇溶液加热搅拌至全部溶解，再加入5g活性炭，回流 搅拌，脱色1小时，滤出活性炭，脱色液减压浓缩至约400ml，用70°C的80%热乙醇饱和溶 解，静置放冷，析出水飞蓟宾晶体，滤出晶体，再用相同状态热乙醇重复结晶4次，阴干得针 晶成品68g(水飞蓟宾含量98. 7% )。实施例4 将水飞蓟种子粉碎为40目，取10kg(水飞蓟宾含量0.98%)加入100L正己烷，脱脂3次，每次2小时，滤出药渣为脱脂粗料。脱脂粗料中加60L50%稀乙醇回流提取2次，合并提取液后减压浓缩至无醇味，加40L乙酸乙酯萃取，得萃取液。将萃取液与200 300 目硅胶拌样上5L硅胶柱，以5L/h的流速先后用苯、4 1和1 l(v/v)的苯-乙酸乙酯 分段洗脱，各自以流出液无色为终点，以每份200ml分段收集1 l(v/v)的苯-乙酸乙酯 洗脱液，洗脱结束后用紫外光检测，将显色相同的13 21段洗脱液合并，减压回收溶剂，得 浸膏126g。浸膏加入1000ml 60%乙醇溶液加热搅拌至全部溶解，再加入IOg活性炭，回流 搅拌，脱色1小时，滤出活性炭，脱色液减压浓缩至约400ml，用60°C的70%热乙醇饱和溶 解，静置放冷，析出水飞蓟宾晶体，滤出晶体，再用相同状态热乙醇重复结晶3次，阴干得针 晶成品71g(水飞蓟宾含量99. 2% )。
权利要求
一种水飞蓟宾的制备方法，其特征在于包括以下几个步骤①脱脂将水飞蓟种子粉碎为20～40目，加入正己烷脱脂3次，得脱脂粗料；②提取脱脂粗料加入稀乙醇回流提取2～3次，合并得提取液；③萃取提取液减压浓缩至无醇味，浓缩液用乙酸乙酯萃取，取乙酸乙酯液；④硅胶层析将乙酸乙酯液与硅胶拌样烘干后上柱，以苯、苯-乙酸乙酯洗脱，合并得到水飞蓟主要成分洗脱液；⑤脱色水飞蓟宾洗脱液减压浓缩为浸膏，以乙醇溶液搅拌加热直至全部溶解，加入活性炭，脱色0.5～1小时，过滤，得脱色液；⑥浓缩结晶将脱色液减压浓缩至原体积的40～60％，放冷析出晶体，晶体用热乙醇饱和溶解，放冷，析出水飞蓟宾，滤出水飞蓟宾，重复2～4次，即得白色结晶产品。
2.根据权利要求1所述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述正己烷每次用量为原料 质量的8 10倍量，每次脱脂时间为1. 5 2小时。
3.根据权利要求1所述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述稀乙醇浓度为40 50%，每次用量为原料质量的4 6倍量。
4.根据权利要求1所述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述乙酸乙酯用量为原料质 量的3 4倍量。
5.根据权利要求1所述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述硅胶柱体积为5L，硅胶 为200 300目。
6.根据权利要求1所述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述分段洗脱过程为流速 均保持5L/h，先用苯洗脱硅胶直至流出液无色，再用6 4 1 (ν/ν)的苯-乙酸乙酯洗脱 至无色，最后用2 1 1 (ν/ν)的苯-乙酸乙酯洗脱至无色，2 1 1(ν/ν)的苯-乙酸 乙酯洗脱以每份200ml分段收集，洗脱结束后用紫外光检测，将显色相同的水飞蓟主要成 分洗脱液合并。
7.根据权利要求1所述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述脱色步骤乙醇溶液浓度 为50 60%，用量为洗脱液浓缩浸膏质量的6 8倍量。
8.根据权利要求1所述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述脱色步骤活性炭用量为 溶液量的0.5 1%。
9.根据权利要求1所述水飞蓟宾的制备方法，其特征在于所述结晶步骤热乙醇浓度为 70 80%，温度为60 70°C。
全文摘要
本发明涉及一种水飞蓟宾的制备方法。工艺步骤包括水飞蓟种子粉碎为20～40目，用正己烷脱脂3次。脱脂粗料用稀乙醇回流提取。提取液减压浓缩至无醇味，用乙酸乙酯萃取，酯相与硅胶拌样烘干后上柱，以苯、苯-乙酸乙酯洗脱，分段收集，合并得到水飞蓟主要成分洗脱液，减压浓缩，用乙醇溶液溶解，加活性炭搅拌脱色0.5～1小时，脱色液滤除活性炭，减压浓缩到原体积40～60％，放冷析出晶体，晶体用热乙醇结晶并重复2～4次，得到产品。采用本发明生产水飞蓟宾，工艺简单，溶剂毒性小，生产成本低，易于实现工业化。
文档编号C07D407/04GK101817816SQ200910264449
公开日2010年9月1日 申请日期2009年12月23日 优先权日2009年12月23日
发明者刘东锋, 张翼, 杨成东 申请人:南京泽朗医药科技有限公司