专利名称：：酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌在制备防治口腔溃疡药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明涉及酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌的药物新用途，具休涉及酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌作为药物活性成份在制备治疗口腔溃疡和预防口腔溃疡复发的药物中的应用，属于生物药领域。
背景技术：
：口腔溃疡为最常见的口腔黏膜病，一般发病率在5%25%，反复发作，病程长者达数十年之久，造成病人极大痛苦，严重影响患者生活质量。传统医学认为其病因复杂，发病机制不清楚，可能与病毒、细菌、免疫学异常、精神神经、微循环障碍和遗传等闵素有关。目前还没有一种较为理想的药物治疗口肸溃疡，尤其预防口腔溃疡复发的药物临床上根本没有。许多药物都只能暂时缓解溃炀、疼痛等症状，但不久又会复发，并且有的药物长期应用副作用比较大，在治疗上尤其在预防复发上是医学上急需解决的难题。本发明的药物新用途解决了这一医学难题，不但能治疗口腔溃疡，应用达到一定的疗程还能够预防口腔溃疡复发，疗效显著，而且没有副作用，社会意义巨大，并申请此发明专利。
发明内容木发明人通过研究和分析发现是各种原因导致的肠道齒群紊乱，进而导致有害菌增多和黏膜免疫功能异常，引发的口肸溃疡。主要发病机理为肠道齒群紊乱，肠道有益菌减少，有害菌增加，有害菌产生的氨、粪臭素、吲哚等肠道毒素相应增加，产生的过多毒素造成人体黏膜免疫功能异常，黏膜分泌型lgA(SIgA)量及相关抗炎症因子减少，从而造成抗病毒、抗炎症能力降低，导致口腔溃疡。木发明人经深入的临床研究发明酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌单独或组合作为药物活性成份制成的活菌制剂由于能够恢复肠道菌群平衡，增加IgA等分泌量，恢复黏膜免疫功能，对治疗口腔溃疡具有独特的效果，短时间应用可以治疗口腔溃疡，长时间应用可以预防口腔溃疡复发，并且由于是益生菌对人体没有任何副作用。本发明所述酪酸梭菌选自但不限于酪酸梭菌(Clostridiumbutyricum)、CGMCC、保存编号0313.1。本发明所述凝结芽孢杆菌选自但不限于凝结芽孢杆茵(Bacilluscoagulans)、CGMCC、保存编号1207。本发明所述双歧杆菌选自但不限于婴儿双歧杆菌(Bifidobacteriuminfantis)、CGMCC、保存编号0313.2，长双歧杆菌(Bifidobacteriumlongum)、CGMCC、保存编号0313.5，短双歧杆菌(Bifidobacteriumbreve)、CGMCC、保存编号0313.6，两歧双歧杆菌(Bifidobacteriumbifidum)、CGMCC、保存编号0313.7。本发明以酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌为药物活性成份制成的制剂，可以是以酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌单独为药物活性成份分别制成相关剂型；也可以是酪酸梭菌与凝结芽孢杆菌组合，酪酸梭菌与双歧杆菌组合，凝结芽孢杆菌与双歧杆菌组合作为药物活性成份分别制成相关剂型；也可以是酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌与双歧杆菌三种菌组合制成相关剂型。本发明所述的酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌指活生物个体。本发明是以有效剂量的酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌根据上面所述单独或组合作为药物活性成份，按照一定的制剂工艺，加入常规的赋性剂、调味剂、崩解剂、防腐剂、润滑剂、湿润剂、黏合剂、溶剂、增稠剂、增溶剂等药物辅料，制成任何一种适合于临床上使用的剂型，如片剂、胶囊剂、颗粒剂、口服液体制剂等口服剂型。木发明所指有效剂量是指以酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌根据上面所述单独或组合作为药物活性成份，即以酪酸梭菌；凝结芽孢杆菌双歧杆菌；酪酸梭菌和凝结芽孢杆菌酪酸梭菌和双歧杆菌；凝结芽孢杆菌和双歧杆菌酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌和双歧杆菌等组合分别为药物活性成份制成的活菌制剂包含的总活菌数不能低于1X106CFU/g，一般在1X107CFU/g以上，最高可达到1X10l2CFU/g或1X1012CFU/g以上。本发明优选的制剂工艺为，先在液体培养基中接种菌种，进行培养或多级扩增培养，然后将液态培养物离心，收集湿菌泥，并将所述菌泥干燥、粉碎，得到干燥菌粉。将所得干燥菌粉与药用载体混合，制成最终剂型。由于木发明首次公开了以酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌为药物活性成份在制备治疗和预防口腔溃疡复发的药物中的应用，特别是在制备预防口腔溃疡复发的药物中的应用，因此，以酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌单独或组合作为药物活性成份与辅料组合制成药剂，只要是该药剂用于治疗口腔溃疡，特别是用于预防口腔溃疡复发，均属于本发明的保护范围。本发明的酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌在制成任何一种剂型时，均具有治疗口腔溃疡和预防口腔溃疡复发的作用。任何药剂，如果其组份中含有酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌中的一种或儿种成份制备成药，在其包装或说明书等标识上或者在其他任何宣传品上只要注明或提示具有治疗口腔溃疡和预防口肸溃疡复发的作用，则落入本发明的保护范围之内。本发明的酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆歯是益生菌。因此，也可以将酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌制成保健食品或保健药品。将酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌制成的保健食品或保健药品，如果在其包装或说明书等标识上或者在其他任何宣传品上只要注明或提示具有治疗口腔溃疡和预防口腔溃疡复发的作用，则落入本发明的保护范围之内。具体实施例方式药物制备例说明以酪酸梭菌为药物活性成分制成胶囊剂为例，说明制备方法。酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌按上而所述单独或组合作为药物活性成份，制备方法同下，制备方法不只局限以下的方法，公知的方法均可以。所配成的制剂含两种菌以上活性成份可分别发酵或混合发酵，然后制成单一组分菌粉或混合组分菌粉，最后按常规方法制备成所需的剂型。例l、酪酸梭菌活菌菌粉制备取酪酸梭菌活菌菌种管一支，溶于已灭菌装有10ml生理盐水和璃珠的100ml三角瓶中，活化10分钟，用lml无菌吸管吸取lml菌悬液接种装有50ml扩增培养基的250ml三角瓶屮，置摇摆床内37。C恒温振荡(190rpm)培养24小时，转接装有450ml扩增培养基2500ml档板三角瓶中，37'C恒温振荡培养24小时，镜检无杂菌后再转接于装有4.51^扩增培养基的种子罐中，厌氧培养(充气量3:1)24小时，镜检无杂菌后转接有45L发酵培养基的发酵罐屮，37C厌氧培养24小时，镜检芽孢率达80%以上，停止培养。用连续离心机，12000rpm离心。收集湿菌泥，称重，按l:1(w/v)添加适量脱脂奶粉等保护剂后，干燥，粉碎，常温保存备用。例2、酪酸梭菌活菌胶囊制备<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>将上述组份中1~3组中充分拌匀，然后利用常规灌装胶囊技术按单位剂量制成胶囊。试验例我们以口服酪酸梭菌活菌胶囊、口服凝结芽孢杆菌活菌片、口服双歧杆菌活菌片为例，介绍以酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌按上面所述单独或组合为药物活性成份制成的活菌制剂治疗口腔溃疡和预防口腔浈疡复发的疗效。由于酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌都是益生菌，作用机理相同，所以酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌按上而所述组合作为药物活性成份制成的活菌制剂与单独作为药物活性成份制成的活菌制剂治疗口腔溃疡和预防口腔溃疡复发的疗效相同或相近，所以在这里只介绍单独作为药物活性成份制成的口服酪酸梭菌活菌胶囊、口服凝结芽孢杆菌活菌片、口服双歧杆菌活菌片治疗口腔溃疡和预防口腔溃疡复发的疗效为代表。试验例1酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌治疗口肸溃疡和预防口肸溃疡复发疗效观察1对象与方法1.1病例资料经常复发的口腔溃疡患者15例，男10例，女5例，平均年龄38岁。溃疡复发史210年，每例患者平均毎年复发6次以上。口腔浪疡发作时，随机分入口服酪酸梭菌活菌胶囊治疗组、口服凝结芽孢杆菌活齒片治疗组、口服双歧杆菌活菌片治疗组，每组5例口腔浪疡患者，观察治疗口肸溃疡和预防口腔溃疡复发的疗效。1.2给药方法口服酪酸梭菌活菌胶囊，每粒420mg(含酪酸梭菌活菌数不低于1.0X10HCfU/g)，由青岛东海药业有限公司提供。3粒/次，一天2次。口服凝结芽孢杆菌活菌片，每片350mg(含凝结芽孢杆菌活菌数不低于l.OX10Vfu/g)，由青岛东海药业有限公司提供。3片/次，一天3次。口服双歧杆菌活菌片，每片350mg(含双歧杆茵活菌数不低于1.0X10HCfu/g)，由青岛东海药业有限公司提供。3片/次，一天3次。以上疗程均为2周。1.3观察方法设自身对照，观察治疗前后愦疡面积、疼痛程度和服用2周口腔溃疡的复发时间。1.4治疗口腔溃疡疗效评定标准(周平秀，孟祥勇.联合用药治疗复发性阿弗他溃疡的临床观察.华北煤炭医学院学报，2006，8:81-82)显效3天内溃疡愈合或明显縮小，疼痛消失；有效5天内溃疡愈合或明显縮小及疼痛消失；无效溃疡愈合或明显縮小均在7天后。1.5预防口腔复发评定标准显效臼肸溃疡发作，服用2周药物后，3个月内未复发。有效口腔溃疡发作，服用2周药物后，2个月内未复发。无效口腔溃疡发作，服用2周药物后，2个月内复发。2结果2.1治疗效果所有患者均在5天内溃疡愈合、疼痫消失，三组治疗口腔溃疡有效率均为100%。2.2预防口腔溃疡复发效果所有患者服药2周后，随访3个月，口腔溃疡均未复发，三组预防口腔溃疡复发有效率均达到了100%。且未发现任何副作用。3讨论溃疡是最常见的口腔粘膜疾病之一。有人偶尔发生，有人频繁发作，还有人从口腔溃疡开始，最终发展到白塞氏病综合症并导致了口腔肿瘤，专家们在临床屮发现复发性口腔溃疡的患者患口腔鳞癌发病率有逐年增高的趋势。对口腔溃疡的治疗方法虽然很多，但基本上都是对症治疗，目的主要是减轻疼痛，很难完全控制复发，传统医学认为要想完全避免其复发，可能性不大，而本发明的药物新用途通过恢复肠道菌群平衡，增强黏膜免疫功能，使治疗和控制口腔溃疡复发成为现实。并通过口服治疗口腔溃疡，解决了大部分治疗口腔溃疡的药物是局部用药，用药不方便的难题，且没有任何副作用。本发明在实施过程中所使用的微生物菌种已分别于1997年7月28日和2004年8月23日在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物屮心(北京市海淀区中关村北一条13号，中国科学院微生物研究所邮编100080)保藏，共六个下述微生物菌种，但木发明所述的酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌并不局限于这六种微生物菌种。(1)分类命名酪酸梭菌Clostridiumbutyricum，保存编号0313.1。(2)分类命名婴儿双歧杆菌Bifidobacteriuminfantis，保存编号0313.2。(3)分类命名长双歧杆菌Bifidobacteriumlongum，保存编号0313.5。(4)分类命名短双歧杆菌Bifidobacteriumbreve，保存编号0313.6。(5)分类命名两歧双歧杆菌Bifidobacteriumbifidum，保存编号0313.7。(6)分类命名凝结芽孢杆菌Bacilluscoagul肌s，保存编号1207。上述六个微生物菌种经该微生物中心检测，检测结果均为存活。权利要求1、酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌在制备治疗口腔溃疡和预防口腔溃疡复发药物中的应用，其中所述的酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌单独应用或组合应用作为药物活性成份制成活菌制剂。2、按权利要求l所述应用，其特征在于双歧杆菌包括婴儿双歧杆菌、长双歧杆菌、短双歧杆菌、两歧双歧杆菌。3、按权利要求l所述应用，其特征在于将有效剂量的权利要求1所述的酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌三种菌和药学上可接受的不同载体制成片剂、胶囊剂、散剂、口服液体制剂。4、按权利要求l所述应用，其特征在于将有效剂量的权利要求1所述的酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌两种菌和药学上可接受的不同载体制成片剂、胶囊剂、散剂、口服液体制剂。5、按权利要求l所述应用，其特征在于将有效剂量的权利要求1所述的酪酸梭菌、双歧杆菌两种菌和药学上可接受的不同载体制成片剂、胶囊剂、散剂、口服液体制剂。6、按权利要求l所述应用，其特征在于将有效剂量的权利要求1所述的凝结芽孢杆菌、双歧杆菌两种菌和药学上可接受的不同载体制成片剂、胶囊剂、散剂、口服液体制剂。7、按权利要求l所述应用，其特征在于将有效剂量的权利要求1所述的酪酸梭菌和药学上可接受的不同载体制成片剂、胶囊剂、散剂、口服液体制剂。8、按权利要求l所述应用，其特征在于将有效剂量的权利要求1所述的凝结芽孢杆菌和药学上可接受的不同载体制成片剂、胶囊剂、散剂、口服液体制剂。9、按权利要求l所述应用，其特征在于将冇效剂量的权利要求1所述的双歧杆菌和药学上可接受的不同载体制成片剂、胶囊剂、散剂、口服液体制剂。10、按权利要求3、4、5、6、7、8或9所述，其特征在于所述有效剂量是指制剂包含的总活菌数不能低于1X106CFU/g，一般在1X107CFU/g以上，最高可达到1X1012CFU/g或1X1012CFU/g以上。全文摘要本发明公开了酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌的药物新用途，具体涉及酪酸梭菌、凝结芽孢杆菌、双歧杆菌单独或组合作为药物活性成分制成活菌制剂在制备治疗口腔溃疡和预防口腔溃疡复发的药物中的应用。文档编号A61K35/74GK101134052SQ20061013848公开日2008年3月5日申请日期2006年11月17日优先权日2006年11月17日发明者崔云龙申请人:青岛东海药业有限公司;北京东方百信生物技术有限公司