专利名称：：高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用的制作方法
技术领域：
：本发明属于中药
技术领域：
。具体涉及一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用。
背景技术：
：近年，心血管疾病的发病率逐年增加，据统计目前中国有高血压患者l亿多人，冠心病患者一千多万。心血管疾病逐渐成为危害人民健康的"第一杀手"。寻找和研制有效的心血管疾病治疗药一直是药物研究领域的重点。传统中药在本领域己显示了很强的优越性，其中较为著名的是丹参及其制剂。丹参(SalviamiltiorrhizaBunge)是传统的活血化瘀中药之一,有长期的临床应用基础。丹参注射液是临床上治疗冠心病、心绞痛、心肌梗塞、缺血性中风等疾病的常用药物。本发明人开展了丹参的水溶性成分的系统研究，发现丹参的水溶性有效成分均以盐的形式存在于生药材中，这些成分主要为丹参乙酸镁及其同系物紫草酸镁、迷迭香酸钠、丹参乙酸二钾、异丹参乙酸二钾、丹参素钾和紫草酸二钾等。通过活性筛选和药理学研究发现丹参乙酸镁和它的同系物均为活性成分，其中以丹参乙酸镁药理作用最强，它是丹参的主要活性成分，并首次阐明以丹参乙酸镁为主要成分的多酚酸盐是丹参中最重要的有效活性部位，本发明人已申报专利200510028740.7。经本发明人进一步研究，丹参多酚盐除了目前临床用于治疗冠心病等症状之处，又发现了它用于治疗脑缺血和缺氧等的新适应症。
发明内容本发明所要解决的技术问题在于研究设计高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用。本发明提供了一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用。本发明人将高含量丹参多酚酸盐5mg/kg大鼠静脉给药后，对大鼠大脑中动脉阻断造成局部脑缺血模型的梗塞面积较生理盐水组减小(P<0.05)。高含量丹参多酚酸盐10、20mg/kg组能显著减小大鼠局部脑缺血造成的脑梗塞面积(PO.Ol)。另外将沙土鼠双侧颈总动脉结扎再灌注可造成全脑缺血再灌模型，静脉注射高含量丹参多酚酸盐5、10mg/kg组沙土鼠分别在缺血再灌注6h、24h和2h的行为学评分明显低于生理盐水组评分(P0.05)。高含量丹参多酚酸盐20mg/kg组在2h、24h评分明显低于同时间生理盐水组评分(P0.05)，在4、6h评分与生理盐水组相比有显著差异(PO.Ol)。高含量丹参多酚酸盐能降低沙土鼠在缺血再灌注24h累积死亡率。本发明人又取小鼠分别单次静脉注射高含量丹参多酚酸盐10mg/kg、20mg/kg、40mg/kg以及灯盏细辛注射液22.5mg/kg，5分钟后观察各组小鼠低压缺氧的存活时间。试验结果高含量丹参多酚酸盐和灯盏细辛注射液对低压缺氧小鼠存活时间的延长作用有显著的统计学意义。本发明人还将高含量丹参多酚酸盐(12.5-400(ig/ml)对去甲肾上腺素诱发的兔基底动脉血管环收縮反应具有较显著的舒张作用，EC50值为58.5pg/ml。同时在缺氧24hr复氧4hr后，PC-12细胞受到损伤，高含量丹参多酚酸盐100、300、1000pg/ml可以明显改善细胞活力，对于PC-12细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用。因此上述结果表明高含量丹参多酚酸盐具有治疗脑缺血、缺氧的新适应症。本发明的高含量丹参多酚酸盐是通过下列方法制备的(1)丹参煎煮提取丹参药材粉碎后，依次以丹参生药重量的4倍量、2倍量和2倍量的水先后煎煮三次，每次2小时，合并三次提取液，冷至室温，离心过滤，滤液备用；(2)树脂分离将滤液缓缓流过装有丹参生药重量的3倍量的1300—1大孔树脂吸附柱，吸附完毕后，先用丹参生药重量的6倍量水洗去糖、蛋白质及无机盐；再以丹参生药重量的6倍量20%乙醇除去非丹参乙酸盐的丹参多酚酸盐类化合物，用薄层检测控制收集富含丹参乙酸盐的50%乙醇洗脱液；(3)二次醇沉将富含丹参乙酸盐的50%乙醇洗脱液，减压浓缩至1/10的丹参生药量后，搅拌下徐徐加入9/10丹参生药量的无水乙醇，静置两小时后，离心弃去沉淀；滤液浓縮至l/20的丹参生药量后，加入相当于19/20丹参生药量的无水乙醇，静置两小时，作为第二次醇沉，离心弃去沉淀，滤液减压浓縮至干，制得高含量丹参多酚酸盐；(4)高含量丹参多酚酸盐粉针剂制备-高含量丹参多酚酸盐粉末溶于40倍量水，通过0.2-0.4iim的超滤膜，滤液灌装于瓶内，冷冻千燥后即得产品。上述高含量丹参多酚酸盐粉针剂，其特征在于该粉针剂中丹参乙酸镁的含量为50%-95%，多酚酸盐有效部位含量近100%。其中所述步骤(2)的树脂为1300-1大孔树脂、D101型、AB-8型或RA型树脂。本发明首次公开了高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血缺氧药物中的应用。所述的药物是以高含量丹参多酚酸盐为活性成份与药用载体组成的注射剂。在临床上有较大的应用价值。图1.高含量丹参多酚酸盐对去甲肾上腺素或氯化钾诱导收縮的兔脑基底动脉血管的舒张作用。图2.高含量丹参多酚酸盐对缺氧复氧后PC-12细胞LDH释放率的影响。具体实施例方式实施l.对大鼠大脑中动脉阻断造成局部脑缺血模型的治疗作用试验目的观察高含量丹参多酚酸盐对大鼠大脑中动脉阻断造成局部脑缺血模型的影响。受试药物名称高含量丹参多酚酸盐(原料药)提供单位上海绿谷制药有限公司批号050701含量含丹参乙酸镁为81.1%配制方法高含量丹参多酚酸盐原料药用生理盐水分别配成5、10、20mg/ml，临用时新鲜配制。对照样品名称灯盏细辛注射液提供单位云南省生物制药厂批号20041224含量含总黄酮45mg(10ml/支)性状棕色澄明液体动物来源，种属，品系Wistar大鼠，由中国科学院上海实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(沪)2003-0003，饲养合格证号SYXK(沪)2003-0029。体重280土20g性别$动物总数50只试验方法大鼠用7%水合氯醛(400mg/kg，ip)麻醉后，仰位固定于手术板上。颈部正中切口，分离左侧颈总动脉(CCA)至暴露颈内动脉(ICA)、颈外动脉(ECA)分支，仔细分离ECA并将其枕动脉、甲状腺上动脉分支用电凝器电凝并剪断，分离到舌动脉和颌动脉分叉处结扎；分离ICA并将其颅外段唯一分支翼腭突动脉(Pterygopalatine)结扎。用动脉夹夹住ECA自CCA发出的起始处，在ECA远端靠结扎处剪开小口，插入一根直径为0.26111111的尼龙丝并疏松结扎，剪断ECA;以镊子夹住ECA断端并拉直使尼龙丝在ICA部分的长度应为22mm左右，说明尼龙丝已到达ICA分支到大脑中动脉(MCA)处，阻断了MCA的血液供应；将尼龙丝固定后，缝合手术切口，同时给予生理盐水或试药。缺血6h后，将大鼠断头处死，迅速取出大脑，去除小脑和脑干后用4。C生理盐水冲洗，去血污。将大脑自后向前切为厚度为2mm的冠状切片，立即置于2XTTC生理盐水中，避光37'C孵育30min。然后用10%中性甲醛固定已染色脑片1h。未受损的脑组织染为红色，梗塞区则因线粒体损害而不染色，呈白色。将脑片拍照扫描，用计算机辅助图象分析仪(T一90)按求不规则图形面积法测出每片脑片面积及梗塞区的面积，计算出梗塞灶的面积占总面积的百分比。剂量设置本品拟推荐临床剂量为100—200mg/次静脉滴注，按人体重70kg计算，最大临床剂量为1.4—2.8mg/kg/天；按大鼠体表面积折算相应剂量为6_12mg/kg，故本试验中低剂量设为5mg/kg，低、中、高剂量之比为l:2:4，相应的中、高剂量分别为10和20mg/kg。阳性对照用灯盏细辛注射液，剂量为15mg/kg。另设生理盐水对照组。每组动物数Wistar大鼠10只。溶剂对照静脉注射生理盐水按0.1ml/100g给药。给药途径静脉注射给药。给药次数均单次给药。观察指标及观察时间观察脑片总面积，梗塞灶面积，梗塞灶面积/脑片总面积之比。观察时间为给药后6小时。数据及统计学处理实验数据用^土SD表示，Student/test进行显著性检验。试验结果生理盐水对照组脑局灶性梗塞灶面积为117.5±30.0，梗塞灶面积/脑片总面积比值为0.192±0.045。高含量丹参多酚酸盐5mg/kg静脉给药后，其脑局灶性梗塞灶面积为96.8±30.0(与对照组比较P>0.05)，梗塞灶面积/脑总面积比值为0.146±0.043,较生理盐水组降低(P<0.05)。高含量丹参多酚酸盐10、20mg/kg组能显著减小大鼠局部脑缺血造成的脑梗塞面积(PO.Ol)。见表l和图l。结论高含量丹参多酚酸盐对大鼠局部脑缺血造成的脑梗塞有治疗作用。表1.高賴丹参多酚鹏静脉注麟药对大鼠大脑中动脉阻断模型的影响(x土SD，n=10)<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>*P〈0.05，**P〈0.01与生理盐水组比较实施2.对沙土鼠双側总动脉结扎再灌注^全脑缺血模型的治疗作用试验目的观察高含量丹参多酚酸盐对沙土鼠缺血再灌模型的影响受试药物名称高含量丹参多盼酸盐(原料药)提供单位上海绿谷制药有限公司批号050701含量含丹参乙酸镁为81.1%。配制方法高含量丹参多酚酸盐原料药用生理盐水分别配成5、10、20mg/ml，临用时新鲜配制。对照样品名称灯盏细辛注射液提供单位云南省生物制药厂批号20041224含量含总黄酮45mg(10ml/支)性状棕色澄明液体动物来源，种属，品系沙土鼠，由中国科学院上海实验动物中心提供，动物合格证号SCXK(沪)2003-0003，饲养合格证号SYXK(沪)2003-0029。体重70士15g性别$动物总数50只试验方法沙土鼠用乙醚麻醉后，切开颈中线皮肤，分离两侧颈总动脉，结扎两侧颈总动脉20min后，进行再灌注，同时给药。在手术过程中及未清醒以前，将沙土鼠置于加热板上保持体温在37°C。沙土鼠缺血再灌注行为学评分标准见表l.沙土鼠缺血再灌注模型行为学评分标准<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>剂量设置本品拟推荐临床剂量为100—200mg/次静脉滴注，按人体重70kg计算，最大临床剂量为1.4一2.8mg/kg/天；按大鼠体表面积折算相应剂量为6—12mg/kg，故本试验中低剂量设为5mg^cg，低、中、高剂量之比为l:2:4，相应的中、高剂量分别为10和20mg/kg。阳性对照用灯盏细辛注射液，剂量为15mg/kg。另设生理盐水对照组。每组动物数沙土鼠10只。溶剂对照静脉注射生理盐水按0.1ml/100g给药。给药途径静脉注射给药。给药次数均单次给药。观察指标及观察时间分别观察生理盐水组和给药组动物行为学评分及累积死亡数。观察时间分别为缺血再灌注后2，4，6，24小时。数据及统计行为学评分数据用^士SD表示，Mann-WhitneyUtest进行显著性检验；累积死亡率用％表示，卡方检验进行显著性检验。试验结果缺血再灌注后对照组或试药组分别静脉注射生理盐水和试药。高含量丹参多酚酸盐5、10mg/kg组沙土鼠分别在缺血再灌注6h、24h和2h的行为学评分明显低于生理盐水组评分(P0.05)。高含量丹参多酚酸盐20mg/kg组在2h、24h评分明显低于同时间生理盐水组评分(P0.05),在4、6h评分与生理盐水组相比有显著差异(PO.Ol)。高含量丹参多酚酸盐能降低沙土鼠在缺血再灌注24h累积死亡率，但无显著性差异。阳性对照灯盏细辛注射液1.5mg/kg组沙土鼠在缺血再灌注2h、4h、6h的行为学评分与生理盐水组相比有明显差异(P0.05)，结果见表2和3。结论高含量丹参多酚酸盐对沙土鼠缺血再灌注造成全脑缺血损伤有保护作用。表2.高含量丹参多酚酸盐对沙土鼠，后行为学评分的影响(x土SD)组别剂量(mg/kg)鼠数给药后时间(h)(只)24624生理盐7jC对照0.1ml/100g106.7±6.68.3±8.112.4±8314.7±8.6高含量丹参多酚酸盐102肚1.42肚1.14.8±5.7*5.6±7.7*10102.3±1.4*3.1±2.26.5±7.66.9±7.020101紙3*2.3±2.2**2.0±2.3**5.4±7.8*灯盏细辛注射液15102.6±2.2*3.0±2.8*4紙8*7.6±8.6*P<0.05，**P<0.01与生理盐水组比较表3.高含量丹参多酚酸盐对沙土鼠缺血，后的累积死亡率的影响组别剂量鼠数_给药后时间(h)生理盐水对照0.1ml/100g1010%30%50%70%高含量丹参多酚酸盐5100010%20%10100010%20%20100010%30%灯盏细辛注射液15100010%30%*P<0.05与生理盐水组比较实施3.高含量丹参多酚酸盐对小鼠低压缺氧能力的影响试验目的观察药物对小鼠低压缺氧存活时间的影响。受试药物名称高含量丹参多酚酸盐(原料药)提供单位上海绿谷制药有限公司批号050701含量含丹参乙酸镁为81.1%。配制方法高含量丹参多酚酸盐原料药用生理盐水分别配成l、2、4mg/ml，临用时新鲜配制。对照样品名称灯盏细辛注射液提供单位云南省生物制药厂批号20041224含量含总黄酮45mg(10ml/支)性状棕色澄明液体空白对照注射用生理盐水动物来源，品系，种属昆明种小鼠，由中国科学院实验动物中心提供。饲养合格i正号:SYXK(沪)2003—0029体重1820g性别$动物总数78只试验方法将给药组4只小鼠与对照组1只小鼠放入密封玻璃容器，负压为0.6kPa(358mbar)，观察小鼠呼吸停止作为死亡，以秒表记录小鼠存活时间。剂量设置本品拟推荐临床剂量为100—200mg/次静脉滴注，按人体重70kg计算，最大临床剂量为1.4—2.8mg/kg/天；按大鼠体表面积折算相应剂量为13—26mg/kg,故本试验中低剂量设为10mg/kg，低、中、高剂量之比为l:2:4，相应的中、高剂量分别为20和40mg/kg。阳性对照用灯盏细辛注射液，剂量为22.5mg/kg。另设生理盐水对照组。每组动物数15-16只给药途径单次静脉给药观察指标和观察时间单次静脉注射后5分钟进行实验，观察小鼠低压缺氧时的存活时间。数据及统计学处理实验数据用^土5Z表示，Studentttest进行显著性检验。试验结果高含量丹参多酚酸盐和灯盏细辛注射液对低压缺氧小鼠存活时间的延长作用有显著的统计学意义。结果见表l。表l.高含量丹参多酚酸盐对小鼠低压缺氧存活时间的影响组另u齐u量(mg/kg，iv)小鼠数存活时间(秒)空白对照组0.1ml/10g15777±332高含量丹参多酚酸10151736±693"20161674±576**40161605±841**灯盏细辛注射液22.5161423±779**结论高含量丹参多酚酸盐对低压缺氧小鼠存活时间有显著延长作用。实施4.高含量丹参多酚酸盐对兔基底动脉血管环张力的影响试验目的观察高含量丹参多酚酸盐对脑血管环张力的作用。受试药物名称高含量丹参多酚酸盐(原料药)提供单位上海绿谷制药有限公司批号050701含量含丹参乙酸镁为81.1%。配制方法高含量丹参多酚酸盐原料药用蒸馏水分别配成5、10、20mg/ml，临用时新鲜配制。实验药品和试剂去甲肾上腺素(购自Sigma公司)用蒸馏水临用时新鲜配制。戊巴比妥钠(购自中国医药集团化学试剂公司)用生理盐水配制。氯化钾等其它试剂均为市售分析纯。动物来源，种属，品系新西兰兔，由上海和平特种动植物繁殖场提供，动物合格证号SCXK(沪)2004-0004，中国科学院上海药物研究所动物词养合格证号SYXK(沪)2003-0029。体重23kg性别3动物总数10只实验方法及步骤兔耳缘静脉注射戊巴比妥钠麻醉后，颈动脉放血，迅速开颅取出基底动脉，放置于盛有K-H液培养皿中，剔去结缔组织后制成长2mm动脉环，置于37'C恒温的灌流浴槽中，持续通含有95%02+5%<:02混合气体，血管张力信号经张力换能器输入PowerLab系统(ADInstruments)进行实时分析处理与处理。给予前负荷0.3g，动脉环平衡1.52.0h，每20min更换一次新鲜K-H液。在正式实验开始前，加入60mo1/LKC1检验血管环的反应性(反复刺激23次)，收縮良好的用于实验。兔基底动脉血管,分别以去甲肾上腺素(NA)、KC1预收縮后给予不同剂量的高含量丹参多酚酸盐观察其张力变化，并计算EQo值。观察指标记录血管张力，以诱导剂(KC1或NA)引起收縮张力为100%效应，以加入试药后血管张力值计算血管张力百分率(％)。数据及统计学处理实验数据用^士&D表示，Studentftest进行显著性检验。实验结果高含量丹参多酚酸盐对去甲肾上腺素诱导兔脑基底动脉血管收縮的影响记录静息动脉环张力后，加入5-10mo1/L去甲肾上腺素收缩至最大值。累计加入12.5、25、50、100、200和400吗/ml高含量丹参多酚酸盐，描记量效曲线，计算其EC5o值为58.5pg/ml(结果见表l，图1)。高含量丹参多酚酸盐对氯化钾诱导兔脑基底动脉血管收縮的影响记录静息动脉环张力后，加入KC160mol/L收縮至最大值。向浴槽中以累计浓度方式加入IOO、200、400和800)Ltg/ml高含量丹参多酚酸盐，观察药物的量效关系，经计算，EC5o值为1839pg/ml(结果见表2，图l)。结论高含量丹参多酚酸盐浓度依赖性地舒张基底动脉血管，对去甲肾上腺素诱导的血管收縮具有显著的拮抗作用。表1.高含量丹参多酚酸盐对去甲肾上腺素诱导收缩后的脑基底动脉血管张力变化(n=10)高含量丹参多酚血管张力百分率对照组血管张力百分率酸盐(吗/ml)(%)(蒸馏水nl)(%)12.582.07±10.35*12.596.56±8.042570.23±17.06**2592.96士10.815063.58±19.31**5096.20±9.2010041.87±19.08**10088.00±12.5120027.21士24.01"200訓8±10.354004.15±6.77**40086.67±10.99高含量丹参多酚酸盐各浓度与相应等体积蒸馏水对照组相比*P<0.05,**P<0.01.表2.高含量丹参多酚酸盐对氯化钾诱导收缩后的脑基底动脉血管张力变化(n=10)_药物浓度(^g/ml)_血管张力百分率(％)10096.0±19.620093.2±19.940087.9±22.280068.1±20.5*一次给蒸馏水800nl实验结束时血管张力百分率为98.98±9.94%。高含量丹参多酚酸盐各浓度与此值相比*P<0.05.实施5.高含量丹参多酚酸盐对缺氧复氧后诱导PC-12细胞损伤的影响试验目的观察丹参酚酸盐对缺氧复氧后PC-12细胞损伤的影响受试药物名称高含量丹参多酚酸盐(原料药)提供单位上海绿谷制药有限公司批号050701含量含丹参乙酸镁为81.1%。配制方法高含量丹参多酚酸盐原料药用生理盐水分别配成5、10、20mg/ml，临用时新鲜配制。细胞来源，种属，品系大鼠嗜铬肾上腺细胞瘤细胞(PC-12)。由中国科学院上海药物研究所神经药理实验室提供。试验方法及步骤(1)PC-12细胞用含10%小牛血清，5%马血清的DMEM在37°C，5%0)2湿热培养箱中培养。培养2天的单层PC-12经0.25%胰蛋白酶消化液消化后，种在24孔板上，密度为105ceUs/ml。随机分为8组①正常对照组，②损伤对照组，③一⑧高含量丹参多酚酸盐3、10、30、100、300、1000ng/ml各浓度组。24h后，用D-Hanks液(NaCl8.00g/l，KC10.40g/l，Na2HP04.H200.06g/l，KH2HP040.06g/l，NaHC030.35g/1,Phenolred0.02g/1)漂洗2次，孵育在含1%BSA的290fiL含1%BSA的Krebs液(NaCl120mM，KC15.6mM,MgS041.2mM，NaH2P041.2mM，NaHC0325mM,glucose10mM，CaCl22.5mM)中。正常对照组在正常条件下培养28hr，其他组置于37"密闭的有机玻璃盒中充95。/。N2+5。/。C02混合气缺氧培养。24hr后，损伤对照组不加药，给药组中加入高含量丹参多酚酸盐，终浓度分别为1000，300，100，30，10和3pg/rnl，各组终体积为300nL，不足者以含1%BSA的Krebs液补足。再复氧(21%02)(2)LDH的释放率检测空白组标准组样品组2|xml/ml丙酮酸20|xl蒸馏水70|il5(^1各样品基质缓冲液250^1250^1辅酶I溶液混匀，37"水浴15min2，4二硝基苯肼溶液250^1250pl混匀，37。C水浴15min0.4mol/LNaOH溶液250(^12500pl混匀，室温放置3min440腿，lcm光径测定吸光度A440LDH活力(U/L)=[(Sample-Blank)/(Standard-Blank)l*2nmol/ml*1000ml20^150)^12500jxl计算公式LDH释放率=胞外LDH/(胞内LDH+胞外LDH)数据及统计学处理实验数据用^tSD表示，StudenUtest进行显著性检验。实验结果缺氧复氧对PC-12细胞造成显著损伤，损伤组LDH释放率较正常组增加24%(PO.01);高含量丹参多酚酸盐(3—1000吗/ml)表现浓度依赖性的降低PC-12细胞LDH释放率的作用，浓度为100、300、1000|ig/ml时，细胞LDH释放率分别为0.410±0.025(P<0.05)、0.388±0.029(P<0.01)、0.382±0.028(P<0.01)。提示高含量丹参多酚酸盐可以减轻细胞损伤，对于PC-12细胞缺氧复氧损伤具有一定的保护作用。结论高含量丹参多酚酸盐能抑制PC-12细胞因缺氧复氧引起的LDH释放率的升高，对缺氧复氧引起的PC-12细胞损伤具有保护作用。表3.高含量丹参多酚酸盐对缺氧复氧后PC-12细胞LDH释放率的影响(n=6)组别_LDH释放率_正常对照组(常氧)0.355±0.019损伤对照组(缺氧复氧)缺氧复氧+高含量丹参多酚酸盐3pg/ml缺氧复氧+高含量丹参多酚酸盐lOpg/ml缺氧复氧+高含量丹参多酚酸盐30pg/ml缺氧复氧+高含量丹参多酚酸盐100pg/ml缺氧复氧+高含量丹参多酚酸盐300pg/ml缺氧复氧+高含量丹参多酚酸盐1000|ag/ml0.440±0.01,0.435±0.0160.419±0.0200.416±0.0350.410±0.025*0.388±0,029**0.382±0.028**与正常对照组比较弁弁PO.01;与损伤对照组比较*PO.05;**P<0.01,权利要求1.一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用。2、根据权利要求1所述的一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用，其特征在于所述的高含量丹参多酚酸盐是通过下列方法制备的-(1)丹参煎煮提取-丹参药材粉碎后，依次以丹参生药重量的4倍量、2倍量和2倍量的水先后煎煮三次，每次2小时，合并三次提取液，冷至室温，离心过滤，滤液备用；(2)树脂分离-将滤液缓缓流过装有丹参生药重量的3倍量的1300"I大孔树脂、D101型、AB-8型或RA型树脂吸附柱，吸附完毕后，先用丹参生药重量的6倍量水洗去糖、蛋白质及无机盐；再以丹参生药重量的6倍量20%乙醇除去非丹参乙酸盐的丹参多酚酸盐类化合物，用薄层检测控制收集富含丹参乙酸盐的50%乙醇洗脱液；(3)二次醇沉将富含丹参乙酸盐的50%乙醇洗脱液，减压浓縮至1/10的丹参生药量后，搅拌下徐徐加入9/10丹参生药量的无水乙醇，静置两小时后，离心弃去沉淀；滤液浓縮至l/20的丹参生药量后，加入相当于19/20丹参生药量的无水乙醇，静置两小时，作为第二次醇沉，离心弃去沉淀，滤液减压浓缩至干，制得高含量丹参多酚酸盐；(4)高含量丹参多酚酸盐粉针剂制备高含量丹参多酚酸盐粉末溶于40倍量水，通过0.2-0.4nm的超滤膜，滤液灌装于瓶内，冷冻干燥后即得产品。3、根据权利要求1所述的一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用，其特征在于所述的药物是以高含量丹参多酚酸盐作为活性成分与药用载体制得的注射剂。4、根据权利要求1所述的一种高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血、缺氧药物中的应用，其特征在于所述的高含量丹参多酚酸盐粉针剂中丹参乙酸镁的含量为50%-95%，多酚酸盐有效部位含量近100%。全文摘要本发明提供了高含量丹参多酚酸盐在制备治疗脑缺血缺氧药物中的应用。所述的药物是以高含量丹参多酚酸盐为活性成份与药用载体组成的注射剂。在临床上有较大的应用价值。文档编号A61K36/537GK101209281SQ20061014809公开日2008年7月2日申请日期2006年12月27日优先权日2006年12月27日发明者刘梅英,王逸平申请人:绿谷(集团)有限公司;上海绿谷制药有限公司;上海绿谷生命园医药有限公司