专利名称：新型盐Ⅲ的制作方法
技术领域：
本发明涉及哌啶衍生物的盐、包含所述盐的药物组合物以及所述盐在 治疗中的用途。
背景技术：
趋化因子受体1 (CCR1)在受以下疾病影响的组织中高度表达不同的 自身免疫性疾病、炎性疾病、增生性疾病、过度增生性疾病和免疫介导的 疾病，例如哮喘、慢性阻塞性肺病、多发性硬化和类风湿性关节炎。因此， 利用本发明的盐，例如通过细胞活化和迁移来抑制CCR1介导的事件，这 被期望在治疗这些病症时是有效的。在制备药物制剂时，重要的是，活性化合物的形式使其可方便地处理 和加工，以便得到商业可行的制备工艺。就此而言，活性化合物的化学稳 定性和物理稳定性是重要的因素。活性化合物和包含其的制剂必须能有效 地贮存相当长的时段，而没有显示活性化合物的理化性质(例如化学成分、 密度、吸湿性和溶解性)的显著变化。此外，如果要将活性化合物加入例如通过干粉吸入器(如Turbuhaler⑧装 置)的肺部给药用制剂，则期望活性化合物能容易地微粉化以得到具有良好 流动性质并且包括高度细微结晶颗粒级分(即质量中值空气动力学直径 (mass median aerodynamic diameter)小于10 (孩丈米)的活性化合物颗粒的级 分)的粉末。这种级分能很深地进入肺部，从而加快和提高了活性化合物的 吸收。国际专利申请公开文本WO 03/051839 —般性地披露了具有CCR1拮抗 剂活性的某些哌啶基^"生物，具体为化合物4-({(25>3-[2-(乙酰氨基)-5-羟基 苯氧基]-2-羟基-2-曱基丙基}氨基)-1-(4-氯千基)哌啶及其可药用盐或溶剂化 物。在此申请中具体披露的这种化合物的唯一盐为二-三氟乙酸盐，这种盐 由于在性质上为无定形的，因而不适用于肺部给药的干粉制剂。现已令人惊讶地发现，可制备具有良好理化性质的化合物4-(((2Q-3-[2-(乙酰氨基)-5-羟基苯氧基]-2-羟基-2-曱基丙基》氨基)-l-(4-氯苄 基)哌啶的盐，其能配制在用于肺部给药的干粉制剂中。4-({(25>3-[2-(乙酰氨基)-5-羟基苯氧基]-2-羟基-2-曱基丙基}氨基)-1 -(4-氯节基)哌啶的结构如下所示〇H发明内容因而，本发明提供4-({(25>3-[2-(乙酰氨基)-5-羟基苯氧基]-2-羟基-2-曱 基丙基}氨基)-1-(4-氯苄基)哌啶的半富马酸盐(在下文中称为 7V-(2-[((2Q-3-([l-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基卜2-羟基-2-曱基丙基)氧基]-4-羟 基苯基}乙酰胺半富马酸盐，"所述半富马酸盐")。本发明也提供所述半富马酸盐(hemi-ftimarate salt)的溶剂化物(包括水合 物)。然而，所述半富马酸盐优选为无水的，并且优选为非溶剂化形式。在本发明的实施方案中，所述半富马酸盐或其溶剂化物具有结晶性质 (crystalline properties)，并且优选至少为50%结晶，更优选为至少60%结晶， 更更优选为至少70%结晶，最优选为至少80%结晶。结晶度可通过常规的 X射线衍射技术进行评价。在本发明的另一个实施方案中，所述半富马酸盐或其溶剂化物为50%、 60%、 70%、 80%或90%至95%、 96%、 97%、 98°/。、 99%或100%结晶的。所述半富马酸盐显示至少以下的特征X射线粉末衍射(XRPD)峰(以。2e 表达)(误差界限与有关X射线衍射的United States Pharmacopeia general chapter (USP941)—致，参见United States Pharmacopeia Convention. X-Ray Diffraction, General Test <941>. t/""ec/ 5^a^&s 尸/7ormaco/ e/a, 25th ed. Rockville, MD: United States Phan雄opeial Convention; 2002: 2088-2089):(1) 6.2、 10.7和12.5,或(2) 6.2、 10.7和18.8，或(3) 6.2、 10.7和18.0，或(4) 6.2、 10.7、 12.5、 18.0和18.8,或(5) 6.2、 10.7、 12.5、 18,0、 18.8、 19.7和19.8。可通过包括以下步骤的方法，制备所述半富马酸盐(i) 使仏{2-[((25)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-曱基丙基) 氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺与富马酸在合适溶剂或溶剂混合物(例如有机溶 剂，如极性溶剂，其实例包括曱醇、乙醇、正丙醇、异丙醇、丙酮和乙酸 乙酯)中接触，优选在搅拌的情况下接触，形成反应混合物，(ii) 得到1{2-[((25>3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-曱基丙 基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺半富马酸盐的沉淀，以及(iii) 从反应混合物分离沉淀。本发明的化合物可用作CCR1或MIP-la趋化因子受体活性的调节剂 [在本申请实施例部分所描述的人CCR1结合测定中7V-{2-[((25>3-{[1-(4-氯 苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-曱基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺二-三氟 乙酸盐的ICso低于50nM]，并且可将本发明的化合物给予哺乳动物包括人， 用于治疗自身免疫性疾病、炎性疾病、增生性疾病、过度增生性疾病和免 疫介导的疾病。这些病症的实例有1.呼吸道气道阻塞性疾病，包括哮喘，包括支气管哮喘、过敏性哮 喘、内源性哮喘、外源性哞喘、运动诱发性。孝喘、药物诱发性(包括阿司匹 林和NSAID诱发的)哮喘，慢性哮喘或顽固性(inverterate)嗜喘(例如，迟发 性译喘和气道高反应性)和粉尘诱发性哮喘，间歇性哮喘和持续性哮喘，以 及各种严重度的哮喘，及其它原因引起的气道高反应性；慢性阻塞性肺病 (COPD),例如不可逆性COPD;支气管炎，包括传染性支气管炎和嗜酸性 支气管炎；肺气肿；支气管扩张；嚢性纤维化；结节病；农民肺及相关疾 病；超敏感性肺炎；肺纤维化，包括隐原性纤维化肺泡炎、特发性间质性 肺炎、抗肿瘤治疗和慢性感染(包括结核病和曲霉病及其它真菌感染)并发的 纤维化；肺移植的并发症；肺血管的血管炎和血栓形成疾病及肺动脉高压； 镇咳活性，包括治疗与气道炎症和分泌情况相关的慢性咳嗽及医源性咳嗽； 急性、过敏性、萎缩性(atropic)鼻炎和慢性鼻炎，包括干酪性鼻炎、肥厚性 鼻炎、化脓性鼻炎、干燥性鼻炎和药物性鼻炎及血管运动性鼻炎；膜性鼻 炎，包括格鲁布性鼻炎、纤维性鼻炎和假膜性鼻炎及腺病性鼻炎；常年性(perennial)和季节性(过敏性)鼻炎，包括神经性鼻炎(花粉症)；鼻息肉病；急 性病毒感染，包括普通感冒和由呼吸道合胞病毒、流行性感冒、冠状病毒(包 括SARS)和腺病毒引起的感染；2. 骨和关节与骨关节炎/骨关节病相关或包括骨关节炎/骨关节病的关 节炎，包括原发性和继发性关节炎，例如先天性髋关节发育不良；颈和腰 脊推炎及腰背痛和颈部疼痛；类风湿性关节炎和斯蒂尔病(Still's disease); 血清阴性脊柱关节病，包括强直性脊柱炎、牛皮癣性关节炎、反应性关节 炎和未分化脊柱关节病；脓毒性关节炎和其它感染相关的关节病和骨疾病， 例如结核病，包括波特病(Potts， disease)和蓬塞综合征(Poncet，s syndrome); 急性和慢性晶体性滑膜炎，包括尿酸盐沉积病、焦磷酸钙沉积病和钙磷灰 石相关的腱、粘液嚢和滑膜炎症；贝切特病(Behcet，s disease);原发性和继 发性斯耶格伦综合征(Sjogren's syndrome);全身性硬化和局限性硬皮病；系 统性红斑狼痴、混合性结締组织病和未分化结締组织病；炎性肌病，包括 皮肌炎和多肌炎；风湿性多肌痛；幼年型关节炎，包括分布在任何关节的 特发性炎性关节炎及相关综合征和风湿热及其全身性并发症；血管炎 (vasculitis), 包括巨细胞性动脉炎、高安动脉炎(Takayasu，s arteritis)、丘-施 综合征(Churg-Strauss syndrome)、结节性多动脉炎、显微镜性多动脉炎和与 病毒感染、超敏反应、冷球蛋白和异蛋白相关的血管炎；背下部疼痛；家 族性地中海热、穆-韦综合征(Muckle-Wells syndrome)和家族性爱尔兰热 (Familial Hibernian Fever)、菊池病(Kikuchi disease);药物诱发性关节痛、腱 炎和肌病；和莱特病(Reiter，s disease);3. 由损伤(例如运动损伤)或疾病引起的疼痛和结締组织再造的肌肉骨 骼疾病关节炎(例如类风湿性关节炎、骨关节炎、痛风或晶体性关节病)、 其它关节疾病(例如推间盘变性或颞下颌关节变性)、骨再造疾病(例如骨质 疏松、佩吉特病(Paget，s disease)或骨坏死)、多软骨炎、硬皮病、混合性结 締组织病、脊推关节病或牙周病(例如牙周炎)；4. 皮肤牛皮癣、特应性皮炎、接触性皮炎或其它湿疹性皮肤病及迟 发型超敏反应；植物性和光照性皮炎；脂溢性皮炎、疱渗样皮炎、扁平苔 癣、萎缩性硬化性苔癣、坏疽性脓皮症、皮肤结节病、盘状红斑狼疮、天 疱疮、类天疱疮、大疱性表皮松解、荨麻疹、血管性水肿、血管炎、红斑、 皮肤嗜酸粒细胞增多、斑秃、男性型脱发、斯威特综合征(Sweet's syndrome)、韦-克综合征(Weber-Christian syndrome)、多形性红斑；蜂窝组织炎，包括传 染性和非传染性蜂窝组织炎；脂膜炎；皮肤淋巴瘤、非黑素瘤皮肤癌和其 它发育不良性损伤；药物诱发的疾病，包括固定性药疹；大疱性天疱疮； 色素层炎和春季结膜炎；5. 目艮睑炎；结膜炎，包括常年性(perennial)或春季过敏性结膜炎；虹 膜炎；前色素层炎和后色素层炎；脉络膜炎；自身免疫；影响视网膜的变 性或炎性疾病；眼炎，包括交感性眼炎；结节病；感染，包括病毒、真菌 和细菌感染；6. 胃肠道舌炎、龈炎、牙周炎；食管炎，包括返流；嗜酸性胃肠炎、 肥大细胞增多、克罗恩病(Crohn，s disease)、结肠炎包括溃疡性结肠炎、直 肠炎、肛门瘙痒；腹部疾病、肠应激综合征，以及具有远离肠作用的食物 相关的变态反应(例如偏头痛、鼻炎或湿瘆)；7. 腹部肝炎，包括自身免疫性、酒精性和病毒性肝炎；肝纤维化和 硬化；胆嚢炎；胰腺炎，包括急性和慢性胰腺炎；8. 生殖泌尿系统肾炎，包括间质性和肾小球性肾炎；肾病综合征；膀 胱炎，包括急性和慢性(间质性)膀胱炎和杭纳溃疡(Hunner's ulcer);急性和 慢性尿道炎、前列腺炎、附睾炎、卵巢炎和输卵管炎；女阴阴道炎；佩伦 涅病(Peyronie，s disease);勃起机能障碍(男性和女性)；9. 同种异体移植物排斥在例如肾脏、心脏、肝脏、肺脏、骨髓、皮 肤或角膜移植后或在输血后出现的急性和慢性同种异体移植物排斥；或慢 性移纟直物抗宿主病；10. CNS:阿耳茨海默病(Alzheimer's disease)和其它痴呆疾病包括CJD 和nvCJD;淀粉样变性病；多发性硬化和其它脱髓鞘综合征；脑动脉粥样 硬化和血管炎；颞动脉炎；重症肌无力；急性和慢性疼痛(急性、间歇性或 持续性疼痛，无论是中枢源性的还是外周源性的)，包括内脏痛、头痛、偏 头痛、三叉神经痛、不典型面痛、关节和骨痛、由癌症和肿瘤侵入引起的 疼痛、神经性疼痛综合征包括糖尿病性、疱渗后和HIV相关的神经病；神 经性肉样瘤病；恶性、感染性或自身免疫性过程的中枢和外周神经系统并 发症；11. 其它自身免疫性和变态反应性疾病，包括桥本曱状腺炎 (Hashimoto's thyroiditis),格雷夫其斤病(Graves， disease)、 I15]"《火森病(Addison'sdisease)、糖尿病、特发性血小板减少性紫瘋、嗜酸性筋膜炎、高IgE综合 征、抗磷脂综合征；12. 其它带有炎性或免疫性组成的疾病，包括获得性免疫缺陷综合征 (AIDS)、麻风病、塞扎里综合征(Sezary syndrome)和瘤外综合征；系统性红 斑狼痴(systemic lupus)、全身性红斑狼痴(erythematosus);瘤型麻风；I型糖 尿病、肾病综合征；13. 心血管影响冠脉和外周循环的动脉粥样硬化；心包炎；心肌炎； 炎性和自身免疫性心肌病，包括心肌结节病；缺血性再灌注损伤；心内膜 炎、心瓣炎和主动脉炎，包括传染性(例如梅毒性)的；血管炎；近端和外周 静脉的疾病，包括静脉炎和血栓形成包括深静脉血纟全形成及静脉曲张的并 发症；14. 肿瘤对一般癌症的治疗，包括前列腺、乳腺、肺(例如非小细胞 肺癌(NSCLC))、卵巢、胰腺、肠和结肠、胃、皮肤和脑肿瘤及鳞状肉瘤及 影响骨髓(包括白血病)和淋巴增生系统(例如何杰金(Hodgkin，s)和非何杰金 淋巴瘤)的恶性肿瘤；包括对转移性疾病和肿瘤复发及瘤外综合征的预防和 治疗；和15. 胃肠道腹部疾病、直肠炎、嗜酸性胃肠炎、肥<细胞增生、克罗 恩病、溃疡性结肠炎、显微镜性结肠炎、不确定性结肠炎、肠应激病、肠 应激综合征、非炎性腹泻、具有远离肠作用的食物相关的变态反应(例如偏 头痛、鼻炎或湿疹)。因而，本发明提供用于治疗用途的AH2-[((2^-3-([l-(4-氯千基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺半富马酸盐或其溶剂 化物。另一方面，本发明提供^-{2-[((25>3-{[1-(4-氯千基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-曱基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺半富马酸盐或其溶剂化物在制 备用于治疗的药物中的用途。在本申请说明书的上下文中，除非另有相反的具体说明，术语"治疗，， 也包括"预防"。术语"治疗的"和"治疗地"也可相应地解释。预防被认为与患有所述疾病或病症的先前发作的人员的治疗特别有 关，或被认为与处于所述疾病或病症的增加危险之中的人员的治疗特别有 关。处于形成具体疾病或病症的危险之中的人员，通常包括具有该疾病或病症的家族史的那些人员，或已经通过遗传学试验或筛选确定为对特别易 患该疾病或病症的那些人员。本发明也提供治疗患有炎性疾病的患者或者面临所述疾病危险的患者中所述疾病的方法，所述方法包括将治疗有效量的^-{2-[((25>3-{[1-(4-氯千 基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-曱基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺半富马酸 盐或其溶剂化物给予患者。本发明还提供治疗患有气道疾病(airways disease)例如可逆性阻塞性气 道疾病的患者或者面临所述疾病危险的患者中所述疾病的方法，所述方法 包括将治疗有效量的1{2-[((25>3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-曱基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺半富马酸盐或其溶剂化物给予患者。对于上述治疗用途，所给予的剂量当然随给药的模式、期望的治疗和 适应病症而变化，但通常的范围可为0.001 mg/kg至30 mg/kg。本发明的半富马酸盐或其溶剂化物可单独使用，但通常以药物组合物 的形式给予，在所述药物组合物中，所述半富马酸盐或其溶剂化物(活性成 分)与可药用辅料、稀释剂或载体混合一起。例如在"Pharmaceuticals - The Science of Dosage Form Designs", M. E. Aulton, Churchill Livingstone, 1988 中，描述用于选择和制备合适药物制剂的传统方法.基于给药模式，药物组合物可包括0.05至99。/。w(重量百分比)，更优选 为0.05至80%w,更更优选为0.10至70%w,甚至更优选为0.10至50%w 的活性成分，所有重量百分比均基于整个组合物。本发明也提供一种药物组合物，其包括^{2-[((25>3-{[1-(4-氯千基)哌 啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺半富马酸盐或 其溶剂化物以及混合有可药用辅料、稀释剂或载体。本发明还提供用于制备本发明药物组合物的方法，包括混合 1{2-[((25>3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-曱基丙基)氧基]-4-羟 基苯基}乙酰胺半富马酸盐或其溶剂化物及可药用辅料、稀释剂或载体。所述药物组合物可以局部给药(例如给药至皮肤或给药至肺和/或气道)， 例如以乳膏剂、溶液剂、混悬剂、七氟代烷(HFA)气雾剂和干粉制剂(例如在 称为Turbuhale^的吸入装置中的制剂)的形式局部给药；或全身给药，例如 以片剂、胶嚢剂、糖浆剂、粉剂或颗粒剂的形式口服给药；或溶液剂或混 悬剂的形式胃肠外给药；或皮下给药；或以栓剂的形式直肠给药；或经皮给药。在本发明的实施方案中，对本发明的半富马酸盐进行吸入给药。在另一个实施方案中，本发明的半富马酸盐通过干粉吸入器(dry powder inhaler) 给药。吸入器可以是单剂量的吸入器或多剂量的吸入器，并且可以是呼吸 马区动的干斗分吸入器(breath actuated dry powder inhaler)。当通过吸入给药时，本发明化合物(即半富马酸盐)的剂量范围通常可为 O.l吗至IOOOO吗、0.1至5000|ig、 0,1至IOOO吗、0.1至500|ig、 0.1至200吗、 0.1至200吗、0.1至IOO吗、0.1至50昭、5pg至5000fig、 5至1000jug、 5 至5004g、 5至200fig、 5至10(Vg、 5至50jig、 10至5000(ag、 10至1000 jig、 10至500吗、10至200吗、lO至lO(Hig、 10至50吗、20至5000(ig、 20至 1000pg、 20至500吗、20至200jag、 20至100pg、 20至50|ag、 50至5000吗、 50至1000pg、 50至500昭、50至200(ig、 50至100(ig、 100至5000昭、100 至1000(ig或100至500吗。本发明化合物的干粉制剂和加压HFA气雾剂可通过口或鼻吸入给药。 就吸入而言，化合物理想的是微细分散的。微细分散的化合物的质量中值 直径优选小于10并且可在分散剂(例如C8-C2Q脂肪酸或其盐(例如油 酸)、胆汁盐、磷脂、烷基糖、全氟化或聚乙氧基化表面活性剂或其它可药 用分散剂)的辅助下，将微细分散的化合物悬浮于喷射剂混合物中。一种可能性是混合微细分散的本发明化合物与载体物质例如单糖、二 糖或多糖、糖醇或另一种多元醇混合。合适的载体有糖例如乳糖、葡萄糖、 棉子糖、松三糖、乳糖醇、麦芽醇、海藻糖、蔗糖、甘露醇和淀粉。可供 选择地，微细分散的化合物可用另一种物质包衣。也可将该粉末混合物分 装到硬明胶胶嚢中，每个胶嚢均包含所需剂量的活性化合物。另 一种可能性是将微细分散的粉末制成球，所述球在吸入操作期间碎 裂。可将这种球化粉末装到多剂量吸入器(例如称为Turbuhale,)的储药器 中，其中计量给药单元计量出所需的剂量，所需的剂量然后会被患者吸入。 利用该系统，在存在或不存在载体物质的情况下，将活性化合物给予患者。对于口服给药，本发明的化合物可与辅料或载体，例如乳糖、蔗糖、 山梨醇、甘露醇；淀粉，例如马铃薯淀粉、玉米淀粉或支链淀粉；纤维素 衍生物；粘合剂，例如明胶或聚乙烯吡咯烷酮，和/或润滑剂，例如硬脂酸 镁、硬脂酸钙、聚乙二醇、蜡、石蜡等混合，然后压制成片。如果需要包衣片，那么如上所述制备的片芯可用浓的糖溶液包衣，所述糖溶液可包含 例如阿拉伯胶、明胶、滑石和二氧化钛。可供选择地，片可用溶解在易挥 发有机溶剂中的合适聚合物包衣。为了制备软明胶胶嚢，可将本发明的化合物与，例如植物油或聚乙二 醇混合。硬明胶胶嚢可包含所述化合物的颗粒，所述颗粒使用用于片剂的 任一上述赋形剂。也可将本发明化合物的液体或半固体制剂装到硬明胶胶用于口服给药的液体制剂的形式可以是糖浆剂或混悬剂，例如包含本 发明化合物以及余量为糖以及乙醇、水、甘油和聚丙二醇的混合物的溶液。 任选地，这些液体制剂可包含着色.剂、调味剂、糖精和/或作为增稠剂的羧 曱基纤维素或本领域技术人员已知的其它赋形剂。因此，本发明还涉及联合治疗，其中本发明的化合物或包含本发明化 合物的药物组合物或制剂与另 一种治疗剂或多种治疗剂同时或先后给予， 或与另 一种治疗剂或多种治疗剂 一起作为组合制剂而给予，用于治疗 一种 或多种所列病症。
具体实施方式
一般方法在Varian Unity/"ova 400 MHz (软件VNMR 6.1C和VNMRJ 1.1D;探 针Nalorac 5mm DG400-5AT)或Varian Mercw/j-VX 300 MHz (软件VNMR 6.1C;探针Varian 5mm AutoSWPFG)仪器上，在298 K记录'HNMR光谱。 将丙酮-^或二曱基亚砜(DMSO)-^的中间峰用作内标。将以下方法用于LC/MS分析MS仪器Agilent 1100系列，配备有APCI界面LC仪器Agilent 1100系列，配备有UV检测器VWD、自动采样器ALS、二元泵和脱气器LC柱Chromolith Speed ROD, RP-C18, 0 4.6 x 50 mm洗脱剂溶剂A.'水+0.1%三氟乙酸(TFA);溶剂B:乙腈+0.1%TFA条件LC:流速为2.5 ml/分钟，梯度为5至95% B，运行时间为3.6分钟，UV220nm;起给予。MS:正离子^r测，毛细管电压为3kV 实施例1制备^-{2-[((25>3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基氨基}-2-羟基-2-曱基丙基) 氧基卜4-羟基苯基}乙酰胺半富马酸盐(2:1盐)历时15分钟，将富马酸(2.13 g, 18.3 mmol)的曱醇(55 ml)溶液加至 搅拌的粗1{2-[((26>3-{[1-(4-氯卡基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-曱基丙基) 氧基]_4_羟基苯基}乙酰胺(24.0 g, 36.5 mmol;通过在pH 9用三氟乙酸提取 由相应的盐而得到)的曱醇(240 ml)溶液。当已添加约三分之二富马酸溶 液时，观察到沉淀开始形成。当已添加全部富马酸溶液时，停止搅拌，在 环境温度(20 。C)在密闭的烧瓶中将反应混合物放置过夜。用过滤漏斗分 离沉淀，用曱醇(3x50 ml)洗涤，然后在60。C真空干燥过夜，得到标题 盐(14.0 g, 73%),为灰白色固体。4画R (399.99 MHz， 5 8.91 (s， 1H)， 7.48 (d， 8.6 Hz， 1H)，7.38 (d, /= 8.5 Hz, 2H), 7.31 (d， /= 8.4 Hz, 2H), 6.50 (s, 1H), 6.42 (d, J= 2.5 Hz, 1H), 6.31 (dd, 8.6， 2.5 Hz, 1H)， 3.79 (s，强/厚合y!S"秀统，2H), 3.44 (s, 2H)， 2.88 (d, J= 12.2 Hz, 1H), 2.82-2.72 (m, 3H)， 2.64-2.55 (m, 1H), 2.02 (s, 3H)， 2.00-1.92 (m， 2H)， 1.91-1.83 (m, 2H), 1.47-1.35 (m, 2H), 1.23 (s, 3H)APCI-MS: m/z 462 [固+]NMR确认了；成与酸的化学计量为2:1。实施例2X射线粉末衍射分析 一般方法可根据标准方法，对所制备的样品进行X射线粉末衍射(XRPD)分析 (参见例^口 Giacovazzo et al.， eds., Fundamentals of Crystallography, Oxford University Press (1992)、 Jenkins & Snyder, eds., Introduction to X-Ray Powder Diffractometry, John Wiley & Sons, New York (1996)、 Bunn， ed.， Chemical Crystallography, Clarendon Press, London (1948)和Klug & Alexander eds., X-ray Diffraction Procedures, John Wiley & Sons, New York (1974》。如下所述得到在以上实施例1中描述的半富马酸盐(为无水形式)的X200680028626.7说明书第11/13页射线粉末衍射图将使用单色CuKa辐射(45 kV和40 mA)的Bragg-Brentano仲聚焦粉末X 射线衍射仪用于该分析。第一光学器件包含Soller狭缝和自动发散狭缝 (automatic divergence slit)。在测量期间i走转的零背景板(zero background plate) 上制备扁平的样品。第二光学器件包含Soller狭缝、自动防散射狭缝、接收 狭缝和单色器。衍射信号用成比例的氙气填充检测器检测。以连续的扫描 模式，采集2。^2es40。之间的衍射图，扫描步幅为0.016。 29，扫描速率为 4。2e/分钟。储存电子形式的原始数据。对原始或平滑处理过的衍射图进行 评价。领域技术人员;设置粉末x射线衍射仪的仪器参数，'从而使得能够采集与 所提供的数据相当的衍射数据。 获得的结果示于
图1中。实施例3差示扫描量热法(DSC)使用标准方法，例如H6hne, G W, H. et al (1996), Differential Scanning Calorimetry, Springer, Berlin中描述的那些方法，利用Q1000调节的温度差 示扫描量热仪(Modulated Temperature Differential Scanning Calorimeter, MTDSC)以"只加热(heatonly)"模式，用5 。C/分钟的斜线上升速率(ramp rate) 研究试验样品对升高温度的量热响应。在氮气气氛下，将约2至5mg试验 样品置于带有盖(没有任何折压)的铝杯中。众所周知的是，DSC开始温度和峰温度可由于样品纯度和仪器参数尤 其是温度扫描速率而变化。本领域技术人员能够设置差示扫描量热器的仪 器参数，从而使得能够采集与所提供的数据相当的衍射数据。测得在以上实施例1中描述的半富马酸盐的典型样品的熔化温度为189 。C士2。C (开始)。人CCR1结合测定 膜使用稳定表达重组人CCR1的HEK293纟田胞(HEK-CCR1)(获自ECACC)，制备包含CCR1的细胞膜。将膜贮存在-70 。C。将每批次的膜浓 度调整为10%特异性结合的33 pM [1251] MIP-la。
结合测定
将HEK-CCR1膜稀释在添加有17500单位/L杆菌肽(Sigma, Cat No B1025)的测定緩冲液pH 7.4 (137 mM NaCl (Merck, Cat No 1.06404)、 5.7 mM 葡萄糖(Sigma， CatNoG5400)、 2,7 mM KC1 (Sigma, CatNo P-9333)、 0.36 mM NaH2P04 x H20 (Merck, Cat No 1.06346)、 10 mM HEPES (Sigma, Cat No H3375)、 0.10/。(w/v)明胶(Sigma, CatNoG2625))中，将100 此稀释液加至 96孔过滤板(0.45 pm不透明的Millipore cat no MHVB N4550)的每个孔中。 添加12pL化合物的测定缓沖液(包含10%DMSO),使最终化合物浓度为1 x l(T55至1 x l(T95 M。某些孔(没有化合物)中包含12 冷的人重组MIP-loc (270-LD-050, R&D Systems, Oxford, UK)(在补充有10°/。 DMSO的测定缓沖 液中的最终浓度为10nM)，作为非特异性结合对照(NSB)。将12 ^具有10% DMSO的测定緩冲液加至某些孔(没有化合物)，以检测最大结合(BO)。
将[1251] MIP-la加至所有孔中，使其在测定緩冲液中稀释至各孔中的最 终浓度为33pM。然后，在室温将带有盖的板孵育1.5小时。孵育之后，真 空过滤(Multiscreen Resist Vacuum Manifold System, Millipore)清空各孑U用 200 pl测定緩冲液洗涤一次。洗涤之后，所有孔接受额外的50 闪烁液 (OptiPhase "Supermix"， Wallac Oy， Turko， Finland)。使用Wallac Trilux 1450 MicroBeta计数器，测量结合的[1251] MIP-la。窗设置(windows setting):低 5-高1020, 1分钟计数/孔。
计算置换百分比和IC50 将以下方程式用于计算置换百分比。
置4灸百分比=1 - ((cpm test隱cpm NSB) / (cpm B0 - cpm NSB)) 其中
cpm test =含有膜和化合物及[1251] MIP-la的一式两份孔中的平均 cpm(每分钟的计数)；
NSB =含有膜和MIP-la及[1251] MIP-la (非特异性结合)的孔中的平均
cpm;BO =含有膜和测定緩冲液及[1251] MIP-la (最大结合)的孔中的平均 cpm。
使用基于Excel的程序XLfit (2.0.9版)，将数据拟合成4-参数logistics 函数，推导出产生50%置换的化合物摩尔浓度(1<:50)。
权利要求
1.一种化合物，其为N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺半富马酸盐或其溶剂化物。
2. 权利要求1的化合物，所述化合物是无水的。
3. 权利要求2的化合物，所述化合物显示至少以下的特征X射线粉末 衍射峰(以。M表达)(1) 6.2、 10.7和12.5,或(2) 6.2、 10.7和18.8，或(3) 6.2、 10.7和18.0，或(4) 6.2、 10.7、 12.5、 18.0和18.8，或(5) 6.2、 10.7、 12.5、 18.0、 18.8、 19.7禾口 19.8。
4. 权利要求3的化合物，具有与图1所示基本上相同的X射线粉末衍 射图。
5. —种药物组合物，包括权利要求1至4中任意一项的化合物以及结 合有可药用辅料、稀释剂或载体。
6. 权利要求1至4中任意一项的化合物或权利要求5的药物组合物， 与干粉吸入器的组合。
7. 权利要求1至4中任意一项的化合物，其用于治疗。
8. 权利要求1至4中任意一项的化合物在制备用于治疗对趋化因子受 体1 (CCR1)活性的调节是有益的人类疾病或病症的药物中的用途。
9. 权利要求1至4中任意一项的化合物在制备用于治疗慢性阻塞性肺 病的药物中的用途。
10. 权利要求1至4中任意一项的化合物在制备用于治疗哮喘的药物中 的用途。
11. 治疗患有气道疾病的患者或面临所述疾病危险的患者中所述疾病 的方法，所述方法包括将治疗有效量的权利要求1至4中任意一项的化合 物或权利要求5的药物组合物给予患者。
全文摘要
本发明提供N-{2-[((2S)-3-{[1-(4-氯苄基)哌啶-4-基]氨基}-2-羟基-2-甲基丙基)氧基]-4-羟基苯基}乙酰胺半富马酸盐或其溶剂化物、包含所述盐或溶剂化物的药物组合物和所述盐或溶剂化物在治疗中的用途。
文档编号A61K9/72GK101238104SQ200680028626
公开日2008年8月6日 申请日期2006年7月31日 优先权日2005年8月2日
发明者博-戈兰·约瑟夫森, 朱利恩·乔范尼尼 申请人:阿斯利康(瑞典)有限公司