专利名称：：青蒿油及其制剂的医药用途的制作方法
技术领域：
：本发明属于中药
技术领域：
，具体涉及一种青蒿油^其制剂的医药用途，即青蒿油及其制剂用于治疗和预防艾滋病、流感:疱疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反应疾病的医药用途。
背景技术：
：现有技术中，青蒿为常用中药之一，其抗疟作用专属性较强，对慢性支气管炎也有疗效。关于青蒿的报道大多数是青萬素抗疟作用论述，到目前为止，尚未见到有关青蒿油具有抗菌抗病毒及解热尤其包括抗HIV在内的反转录病毒的报道
发明内容:本发明的目的在于提供青蒿油及其制剂的医药用途。本发明的目的是通过下述技术方案来实现的。本发明的青蒿油及其制剂的医药用途是指用于治疗和预防艾滋病、流感、疱疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反应疾病，所述青蒿油的制剂是指口服剂型、注射剂、外用剂型及各种缓控释剂型，口服剂型包括胶囊剂、片剂、滴丸剂、微丸剂、微囊剂、薄膜包衣片剂、糖衣片剂。本发明的入药方式可通过e-环糊精包合，制得3-环糊精包合物，制备方法可以是饱和水溶液法、研磨法、冷冻干燥法、超声波法，其中应用的缓释包衣技术包括PH依赖型缓释包衣技术、溶蚀延迟包衣技术、基于结肠酶降解缓释包衣技术等。本发明青蒿油的提取方法如下将青蒿生药粉碎(过10-60目筛)或青蒿生药提取青蒿素后的青蒿素母液，与水按一定比例(1:1-20)盛入带冷却装置的蒸馏器中，并接挥发油提取器，加热蒸馏器，收集挥发油。青蒿素母液的制备方法如下将青蒿生药加入石油醚或六号汽油提取，提取液上层析柱，将流出液回收溶剂得母液A;层析柱加入洗脱剂，洗脱剂石油醚乙酸乙酯=15-95:5，洗脱液浓縮结晶，将结晶液过滤得滤液和青蒿素重结晶产品，滤液回收溶剂后得母液B，将母液A和母液B合并得青蒿，母液。本发明的优点是提供了可期待用于治疗和预防艾滋病、流感、疱疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反应疾病的医药用途，并发现其具有很强的治疗和预防艾滋病、流感、疱疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反应疾病的作用特点。下面通过实施例进一步说明本发明，本发明不仅限于所述实施例。具体实施例方式青蒿素母液的制备将青蒿生药加入六号汽油提取，提取液上硅胶柱，将流出液回收溶剂得母液A;硅胶柱加入洗脱剂(石油醚乙酸乙酯=95:5)洗脱，直至将青蒿素洗脱完全，洗脱液浓縮结晶，将结晶液过滤得滤液和青蒿素重结晶产品，滤液回收溶剂后得母液B，将母液A和母液B合并得青蒿素母液。实施例二青蒿油杀灭HIV的试验青蒿油与HIV病毒(TCID,1.78X107ml)共孵育l小时后，用Biomerieux的HIV-1P24试剂盒测定抗原P24的量，从而推算出HIV病毒的量。抑制率二100X(l-测定的0D值/HIV病毒液对照)。青蒿油有体外杀灭HIV的活性青蒿油直接体外杀灭HIV的试验表明，青蒿油对HIV病毒有一定的直接杀灭的作用，在浓度为0.10mg/ml时，对HIV病毒的直接杀灭率达到了73%以上，抑制效果比较明显，见表l。表1HIV—1P24抗原检测法1佥测青蒿油对mv的杀灭作用<table>tableseeoriginaldocumentpage4</column></row><table>HIV病毒液对照1.894培养液对照0.001试剂盒阳性(80pg/ml)0.965试剂盒阴性0.006实施例三青蒿油体外抑制HIV-1的反转录酶的活性在有药物的溶液中加入反转录酶标准液，然后用Innovagen公司的Retrosys反转录酶活性测试试剂盒进行测定。抑制率二100X(1-测定的0D值/阳性对照)。青蒿油体外抑制HIV-1的反转录酶活性的试验表明，青蒿油对HIV-1的反转录酶有抑制作用，在浓度为0.10mg/ml时，对HIV-l的反转录酶的抑制作用达到了75.05%，见表2。表2青蒿油体外对HIV-1的反转录酶抑制作用的试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>青蒿油对受HIV感染的细胞的保护作用用HIV病毒感染MT4细胞，在细胞悬液中加入青蒿油，继续培养，四天后，用XTT法测定细胞的数量，与不加青蒿油的HIV感染的MT4细胞对比，从而计算出青蒿油对受HIV感染的细胞的保护作用。细胞被保护率二IOOX[I-(细胞+药-细胞+药+HIV)/(细胞对照-细胞+HIV)]。青蒿油对受HIV感染的细胞有较好的保护率。青蒿油在浓度为0.10mg/ml时，对细胞的保护率达到了52.47%，见表3。表3青蒿油对受HIV-1感染的细胞的保护作用的试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>实施例五青蒿油的体外抗乙肝的活性:用表达乙肝病毒抗原的H印G2.2.15细胞，在细胞悬液中加入青蒿油，继续培养，四天后，换培养液，继续培养两天,然后用乙肝表面抗原和e抗原测定试剂盒测定抗原的0D值。抑制率^00X(l-试验孔OD值/细胞对照OD值)，细胞存活率二100X(MTTOD值/H印G2.2.15细胞对照的0D值)。体外检测了青蒿油对乙肝抗原表达细胞H印G2.2.15的作用。结果发现，青蒿油可以抑制H印G2.2.I5细胞的表面抗原和e抗原的表达。青蒿油在250ug/ml时，对H印G2.2.15细胞的表面抗原的表达抑制率为70.16%，对H印G2.2.15细胞的e抗原的表达抑制率为68.52%，在这个药物浓度下细胞存活率达到77.51%,见表4、表5、表6。表4青蒿油体外对H印G2.2.15细胞的表面抗原表达抑制作用的试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表5青蒿油体外对H印G2.2.15细胞的e抗原表达抑制作用的试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表6青蒿油体外对H印G2.2.15细胞的毒性作用的试验结果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>实施例六青蒿油的抗菌活性青蒿油抗菌活性实验实验方法为琼脂二倍稀释法测定最小抑菌浓度(MIC)。试验菌为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、模仿葡萄球菌、人型葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、肺炎链球菌、链球菌。以上菌株来源为从医院收集的临床病人分离株。菌株用MH琼脂平皿划线接种，36-C培养1824小时，接种环沾取菌落于灭菌生理盐水小试管中，制备成浓度107cfu/ml的菌液。用MH琼脂制备含青蒿油1:10、1:20、1:40、1:80、1:160、1:320的平皿，同呵制备MH琼脂平皿为菌对照平皿。点种器沾取菌液点种与上述平皿上，置36"C孵箱培养1824小时观察结果。菌对照平皿所有点种部位有菌生长，含青蒿油平皿点种部位无菌生长的浓度即为最小抑菌浓度。结果见表7。表7青蒿油对各试验菌的最小抑菌浓度<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实施例七青蒿油的解热作用实验用健康合格日本大耳白家兔，-级，体重1.8kg2.5kg，雌雄各半。实验家兔测体温1次，选择体温在38.6~39.5°C24只，随机平均分成4组，每组6只。分别为模型组、低剂量组、中剂量组，高剂量组(分别为0.2%、0.4%、0.8%乳剂)，并编号标记。给药方式为口服灌胃，给药前1小时测定体温1次。模型组灌服蒸馏水，给药各组灌服各剂量实验药液，给药后立即于耳缘静脉注射伤寒、副伤寒甲乙三联疫苗lml/kg，(菌苗含量10"cfu/ml)，然后于0.5、1、2、4、6小时各测体温1次。计算各测定时间兔体温的变化(A'C)。用SPSSIO.O统计软件分析(见表l)。结果表明中剂量和高计量组给药1小时、2小时后体温的变化(A°C)与模型组有显著差异(P<0.05)。青蒿油中、高剂量有解热作用，见表8。表8各实验组给药后不同时间点体温变化<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>实施例八青蒿油e-环糊精包合物制备取e-环糊精100g，加蒸馏水400ml，研匀后加青蒿油的无水乙醇溶液25ml,充分研磨，冷藏放置过夜，抽滤，5(TC低温烘干，得青蒿油0-环糊精包合物94.2g。实施例九青蒿油片剂制备取青蒿油P-环糊精包合物lkg，加入羧甲基淀粉钠60g，制粒，加入硬脂酸镁3g，压片，即得成品。实施例十青蒿油微丸剂制备取青蒿油P-环糊精包合物lkg,加入适量粘合剂，搅拌均匀，郭蒸馏水制成软材，用中药自动制丸机挤压制丸，出条片上出条口孔径1.5-2mm，制得的湿丸在糖衣锅中旋转滚动，以增强其圆整度，即得微丸。实施例十一青蒿油胶囊制备取青蒿油0-环糊精包合物lkg，加入羧甲基淀粉钠60g，制粒，装入胶囊，即得成品。权利要求1、一种青蒿油及其制剂的医药用途，其特征在于是指青蒿油及其制剂用于治疗和预防艾滋病、流感、疱疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反应疾病的医药用途。2、根据权利要求1所述的青蒿油及其制剂的医药用途，其特征在于所述青蒿油的制剂是指口服剂型、注射剂、外用剂型及各种缓控释剂型，口服剂型包括胶囊剂、片剂、滴丸剂、微丸剂、微囊剂、薄膜包衣片剂、糖衣片剂。3、根据权利要求1所述的青蒿油及其制剂的医药用途，其特征在于所述入药方式是通过P-环糊精包合，制得P-环糊精包合物，制备方法包括饱和水溶液法、研磨法、冷冻千燥法、超声波法，其中应用的缓释包衣技术包括PH依赖型缓释包衣技术、溶蚀延迟包衣技术、基于结肠酶降解缓释包衣技术。4、根据权利要求1所述的青蒿油及其制剂的医药用途，其特征在于所述青蒿油的提取方法如下将青蒿生药粉碎或青蒿生药提取青蒿素后的青蒿素母液，与水埃1:1-20的比例盛入带冷却装置的蒸馏器中，并接挥发油提取器，加热蒸馏器，收集挥发油。5、根据权利要求1所述的青蒿油及其制剂的医药用途，其特征在于所述青蒿素母液的制备方法如下将青蒿生药加入石油醚或六号汽油提取，提取液上层析柱，将流出液回收溶剂得母液A;层析柱加入洗脱剂，洗脱液浓縮结晶，将结晶液过滤得滤液和青蒿素重结晶产品，滤液回收溶剂后得母液B，将母液A和母液B合并得青蒿素母液。全文摘要本发明属于中药
技术领域：
，具体涉及一种青蒿油及其制剂的医药用途，即青蒿油及其制剂用于治疗和预防艾滋病、流感、疱疹、肝炎及致病性微生物所引起的炎性反应疾病的医药用途，青蒿油的制剂是指口服剂型、注射剂、外用剂型及各种缓控释剂型，口服剂型包括胶囊剂、片剂、滴丸剂、微丸剂、微囊剂、薄膜包衣片剂、糖衣片剂，入药方式可通过β-环糊精包合，制得β-环糊精包合物，制备方法可以是饱和水溶液法、研磨法、冷冻干燥法、超声波法，其中应用的缓释包衣技术包括pH依赖型缓释包衣技术、溶蚀延迟包衣技术、基于结肠酶降解缓释包衣技术等。文档编号A61P31/00GK101313928SQ200710049229公开日2008年12月3日申请日期2007年6月1日优先权日2007年6月1日发明者薛永新申请人:薛永新