一种明胶代血浆及其制备方法

专利名称：：一种明胶代血浆及其制备方法
技术领域：
：本发明涉及一种明胶代血浆及其制备方法，更确切的说，本发明涉及以海狗皮为原料的明胶代血浆及其制备方法，是属于医学血液学领域里的血浆代用品及其制备方法。
背景技术：
：休克是临床上最常见的重症之一，烧伤、烫伤、严重创伤及出血的病人，损失大量的水分、盐类、血浆蛋白和血液有形成分等，如不及时予以补充，病人即会发生休克，生命将受到严重威胁。引起休克的共同途径是有效循环血量减少、微循环障碍及细胞能量代谢障碍，故输血、输液为抗休克的主要措施。但血液的来源、血液制品的质量、疾病的传播、以及保存等均影响着临床的应用。血浆代用品可以使血容量迅速恢复正常，且不受血型的限制，随着医药学的发展，血浆代用品已经成为临床治疗各种休克的首选药物之一。近年来血浆代用品在临床中的应用日趋广泛，除补充血容量外，还常作为自身输血和血液稀释的一种替代物。当前在医学临床中，普遍应用的代血浆是右旋糖酐、羟乙基淀粉和明胶代血浆。右旋糖酐临床应用的不良反应较多，如过敏反应、急性肾功能衰竭、蓄积作用、出血倾向、交叉配血实验的假凝集、加速血沉、抑制吞噬功能系统。羟乙基淀粉在生物学效应取决于它的平均分子量和羟乙基的取代度，较低相对分子质量的羟乙基淀粉的扩容强度小，较高相对分子质量的羟乙基淀粉在脏器内积存期较长，使红细胞聚集增加，出血时间延长，低取代的羟乙基淀粉在血液循环中易被血液淀粉酶所水解，在循环中存留时间较短，高取代羟乙基淀粉因停留时间过长会发生体内蓄积和凝血机制受损。而且这类代血浆的制备工艺复杂，工艺条件控制较难，成品产量少而价格高，其成份以低分子量为主，不参与体内代谢过程，无营养价值。研究表明，明胶代血浆具有最好的血液相溶性，即使大剂量输注，也几乎不影响凝血机制和纤维蛋白溶解系统，在临床应用中过敏反应症状也较血浆蛋白或右旋糖酐轻微，是优选的代血浆。明胶是一种衍生蛋白，它是一种类似血清蛋白的蛋白质。可供临床使用的明胶代血浆有3种，即氧化聚明胶(0PG)、脲联明胶、琥珀酰明胶(MFG)。氧化聚明胶(0PG)于1951年用于临床，但过敏反应发生率较高，Gordh等曾报道应用后发生过敏性休克死亡的病例，对血沉及血型鉴定亦有影响，现己少用。脲联明胶由于其溶液中钙离子浓度过高，使得在应用中会出现凝胶现象。琥珀酰明胶(MFG)是由牛胶原经琥珀酰化而成的胶体溶液，皮肤丘疹反应较多，且随着疯牛病的出现和全球蔓延，已不再用牛骨制备明胶。寻找新的胶原蛋白的来源、探索新工艺、制备安全有效的血浆代用品迫在眉睫。CN1055111中对一种驴皮胶代血浆及其制备方法进行了论述。该专利通过改进传统阿胶的制备工艺"原料的去脂、除热原处理，原胶熬制分离，原胶的除菌、除热原精制和代血浆配制"制备符合注射制剂要求的代血浆。该专利所精制的驴皮胶的胶凝点为-7.2°C，在O'C长期保存不冻结，且可制成冻干制品，便于储存运输，加入注射用水可在2min内完全溶解。对失血性休克有一定疗效，但因其原料来源受到限制，且发现体内有蓄积作用而放弃。CN1634572中公开了一种生物胶原注射液，系由香猪皮经消毒杀菌、蒸煮、提胶和纯化而成的一种生物胶原液，再配成注射液。此生物胶原注射液生物活性及相容性均很高。作为一种生物胶原液，无论稀溶液还是浓溶液，贮存期均很短，只适合就地销售。因此，不能远距离销售，从而不能达到急救的目的。海狗为海豹科动物竖琴海豹的俗称，栖居于北极和大西洋的北部。由于加拿大政府采取的保护措施，海狗的数量以每年7%的速度稳定增长。为保持海狗与鱼群之间的生态平衡，经加拿大政府批准，每年可以捕杀海狗。纽芬兰及其附近海湾每年可提供大约250000-282000张海狗皮。CN1457881公开了一种以海狗皮为原料应用"NaOH浸泡-H2S04浸泡-在HCl溶液中提取"的方法制备明胶代血浆，尽管所制备的明胶代血浆有一定的疗效，但由于海狗皮中胶原蛋白存在于真皮层，外周的表皮含有大量的黑色素，皮下层含有大量脂肪，这些不仅不是有效成分存在的部位，而且包裹着真皮，使各种试剂的作用效率大大降低，同时，若存留在终产品中，还会引起过敏等不良反应。因此，海狗皮的前处理至关重要。但在CN1457881中仅用NaOH和1"^04溶液浸泡且没有一个浸泡达到终点的判定方法，因此很难保证黑色素和脂肪完全除尽，从而影响所制备的明胶代血浆的质量。本发明人仍以原料丰富的海狗皮为原料，经过大量的实验，采用不同的提取方法，并对各步骤进行严格的在线监测，确保了所制备的明胶代血浆的质量，取得了更好的疗效，从而完成了本发明。
发明内容本发明的目的在于提供一种明胶代血浆，该明胶代血浆的渗透压和pH与血浆相近，具有与生理盐溶液相同的等渗性，在临床应用时能参与体内代谢，具有良好的扩充血容量、保持必要渗透压、改善微循环的作用，能够维持一定的血压，改善因有效循环血容量不足引起的休克等症状。可与其它静脉输液剂同时使用，其疗效明显，无溶血反应，无过敏反应，对静脉血管无刺激反应，无毒副作用，用药安全。本发明所述的明胶代血浆，其特征在于该明胶代血浆的蛋白含量为14-18mg/ml，优选15-17mg/ml。本发明产品明胶代血浆是以海狗皮为原料提取的分子量为25000-35000、分散度为2.0-3.0的明胶制备的蛋白溶液，本发明所述范围的蛋白含量能够提供人体所需的蛋白质，其疗效明显。本发明所述明胶代血浆的渗透压为300-335m0sm，pH为7.1-7.4。本发明产品明胶代血浆的渗透压和pH与血浆相近，具有与生理盐溶液相同的等渗性，可保持必要渗透压，能够维持一定的血压。本发明的另一目的还在于提供该明胶代血浆的制备方法，该方法包括如下1)海狗皮原料的预处理将冷冻保存的海狗皮解冻，刮去皮下脂肪层，切成块，在4-25匸温度下用碱的乙醇溶液浸泡至残油率小于1%后，水洗；然后用石灰水浸泡至皮料水提液的紫外扫描图谱无酪氨酸的特征吸收峰后，洗涤，再加入盐酸水洗至中性，得到经预处理的海狗皮；2)提取将上述经预处理的海狗皮绞碎，浸于NaOH溶液中，提取30-50小时得水解明胶粗品；3)纯化往上述粗品中加入盐酸至pH7.0-7.5，然后加入硅藻土，使硅藻土含量为0.3%(w/v)，过滤，取滤液得纯化的水解明胶原液；4)冷冻干燥将上述水解明胶原液冷冻干燥得水解明胶冻干粉末；5)配制明胶代血浆取水解明胶冻干粉末加生理盐水溶解即得海狗皮明胶代血浆。上述碱的乙醇溶液为NaOH-乙醇的混合溶液，步骤l)和步骤3)中所述的盐酸均为6mol/L盐酸，歩骤2)中所述的NaOH溶液为0.lmol/LNaOH溶液。本发明中碱的乙醇溶液，优选Na0H-乙醇的混合溶液。用NaOH溶液可以与原料海狗皮中的脂肪发生缓慢的皂化反应而使其脱脂，乙醇溶液可使难以分解的脂肪溶于其中，从而使脱脂更彻底。上述的NaOH-乙醇溶液为0.5-1.25mol/LNa()H和20%-95%乙醇的混合溶液，最好为0.75-1.25mol/LNa0H和40°/。-60%乙醇的混合溶液，优选1mol/LNa0H和50%乙醇的混合溶液。上述步骤1)所述的切成块为切成正方形小块，优选边长为2-4cm的小块。因为边长为2-4cm的小块可使原料海狗皮与NaOH-乙醇溶液更充分地接触，从而加强石灰水对海狗皮原料的浸泡和明胶的提取，但是也不能切得太小，因为切得太小，在用石灰水浸泡和水洗的过程中海狗皮原料容易流失。上述步骤2)中所述的NaOH溶液为0.lmol/LNaOH溶液。本发明采用在中性条件下，用O.1mol/LNaOH溶液进一步提取明胶，可大大缩短明胶的降解时间，縮短生产周期，提取的明胶质量也很高。这样不仅可以提高资源的利用率，降低生产成本，而且可以减少产品受污染的机会，保证产品的质量。血浆代用品除了需要有大分子物质提供胶体渗透压，还需要一定浓度的盐提供晶体渗透压，故选用0.1mol/LNaOH,并在纯化时用盐酸，可以中和提取时所用的NaOH溶液，这样形成的盐不仅可以提供晶体渗透压，还可以在产品的冷冻干燥过程中起赋形剂的作用。由于胶原蛋白存在于真皮层，外周的表皮含有大量的黑色素，皮下层含有大量脂肪，这些不仅不是有效成分存在的部位，而且包裹着真皮，使各种试剂的作用效率大大降低，同时，若存留在终产品中，还会引起过敏等不良反应。因此，海狗皮的预处理至关重要。现有技术中只是对海狗皮进行碱浸、酸浸，而没有一个浸泡达到终点的标准，这样很难保证黑色素和脂肪完全除尽，从而影响代血桨的质量。本发明中对原料的预处理进行了严格的在线监测，确保了明胶代血浆的质量。本发明中所采用的在线监测的方法如下(1)采用目测法判定经碱的乙醇溶液浸泡后的海狗皮的颜色由黑色变为棕红色，最终变为淡黄色；(2)采用索氏提取法测定残油率判定将经碱的乙醇溶液浸泡后的海狗皮剪碎，彻底清洗，沥干水分，置8(TC烘箱烘干4小时以除去大部分水分。置索氏提取器中以乙醚为溶剂，于5(TC恒温水浴回流6小时，测定圆底烧瓶的增重从而测得残油率。与同法操作的未处理的海狗皮作比较，以残油率0.1-1%达到浸泡终点。(3)应用紫外扫描图谱判定在用石灰水浸泡的过程中不同时间点取皮样，充分水洗后用热水抽提，抽提液经10.000rpm/min离心5min，取中层清液，以水为空白对照，测量和纪录200-350nm的吸收光谱。皮料水提液的紫外扫描图谱无酪氨酸的特征吸收峰。本发明中对海狗皮的预处理进行了严格的监测，确保了海狗皮脱脂脱色彻底，从而保证了所制备的明胶代血浆的质量。明胶的物理、化学性质不仅与平均分子量有关，而且更重要的是与其分子量分布有关。作为血浆代用品，明胶的分子量及其分布关系到血容量的扩充效果和其在血液循环中存留的时间。因此，测定海狗皮水解明胶注射液的分子量及分子量分布成为研究和控制其生产工艺及产品质量的一项重要工作。本发明中运用高效凝胶渗透色谱法测定本发明产品的分子量及分子量分布。测得的本发明产品的重均分子量为25000-35000、分散度为2.0-3.0，分子量分布图谱基本呈现对称的正态分布峰。分子量范围符合代血浆的要求，分散度大于1，表明本发明产品明胶分子大小不均，其优点在于其中较小分子易从肾小球滤过，在输入初期有促进利尿的作用；而较大分子则滞留在血管内，延长扩容效应。本发明产品明胶代血浆是具有一定分子量分布的蛋白溶液。氨基酸的组成分析是蛋白质化学研究中最基本的内容之一。测定该明胶代血浆的组成及含量，不仅为其药理学研究提供了物质基础，而且也是控制其制备工艺、保证产品质量稳定的有效手段。应用HPLC测定的本发明产品明胶代血浆的氨基酸组成和含量(每1000残基中氨基酸残基数)如下-门冬氨酸33.65谷氨酸56.64羟脯氨酸69.24丝氨酸34.14甘氨酸309.87组氨酸7.38精氨酸50.15苏氨酸13.25丙氨酸97.73脯氨酸186.86酪氨酸8.16缬氨酸26.06蛋氨酸8.88苯丙氨酸20.03色氨酸2.56赖氨酸24.58从海狗皮水解明胶的氨基酸组成和含量的分析中可以看出，海狗皮水解明胶中含有少量的色氨酸。虽然含量很低，但是肝细胞内质网上的多核糖蛋白体对色氨酸浓度极其敏感，微小的增加即可刺激其白蛋白的合成，从而补充大量流失的血浆蛋白；而其它氨基酸则仅仅是合成蛋白的"原料"。本发明产品明胶代血浆的渗透压和pH与血浆相近，具有与生理盐溶液相同的等渗性，在临床应用时能参与体内代谢，具有良好的扩充血容量、保持必要渗透压、改善微循环的作用，能够维持一定的血压，改善因有效循环血容量不足而引起的休克等症状。可与其它静脉输液剂同时使用，其疗效明显，无溶血反应，无过敏反应，对静脉血管无刺激反应，无毒副作用，用药安全。本发明产品的氨基酸成分中尤其还含有色氨酸。色氨酸是必需氨基酸中最重要的氨基酸，肝细胞内质网上的多核糖蛋白体对色氨酸浓度极其敏感，微小的增加即可刺激其白蛋白的合成。在患者的血浆蛋白大量流失的情况下输入一定量的本发明产品，即可刺激白蛋白的合成，从而补充患者流失的血浆蛋白'，具体实施方式以下通过试验例来进一步阐述本发明所述明胶代血浆的有益效果。这些试验例包括了本发明明胶代血浆的药效学试验和临床疗效观察试验。[试验例l]本发明明胶代血浆体外溶血性试验试验材料试验动物品系新西兰种白色家兔性另IJ:雄性体重2.4kg来源中国药品生物制品检定所实验动物中心家兔在实验动物室饲养观察1周后用于试验。合格证号京动质许字(2000)第017号受试药物及保存本发明产品，-2(TC冻存，临用前室温融化。溶剂0.9%氯化钠注射液(NS)为北京双鹤药业生产；蒸熘水(DDW)为中国药品生物制品检定所自制试验器材低速离心机(北京医用离心机厂)型号LD4-2恒温水浴锅(北京市长风仪器仪表公司)试管架、离心管、消毒注射器、吸管、灭菌玻璃珠试验方法血细胞悬液的制备采用心脏取血法取兔血10毫升，放入含灭菌玻璃珠的50ml三角烧瓶中同方向震荡IO分钟，除去纤维蛋白原，使成脱纤血液。加入生理盐水约80毫升，分装至10毫升刻度离心管中，摇匀，1500r/min离心5分钟，除去上清液，并调整沉淀的红细胞，使其在离心管中0.2ml刻度线上。再用生理盐水8毫升按上述方法洗涤并调整4次，至上清液无色透明为止。将所得红细胞加生理盐水至10ml即配成2%的血细胞混悬液(RBC)，供试验用。操作方法另取离心管7支，编号后分别加入2%红血球混悬液2.5ml;第1号管加入NS2.5ml作为阴性对照管；第2-7号管分别加入NS2.0-2.4ml;混匀后置37°C土5。C恒温水浴箱30分钟；分别再第2-7号管加入本发明产品0.5-0.lml及第7号管加入DDW2.5ml，使每支离心管容积均在5ml，混匀后继续在37'C土5'C恒温水浴箱中保温；每15分钟观察一次，1小时后改为每小时观察一次，共观察4个小时。如试管中的液体呈红色透明即为溶血；呈棕红色并有絮状沉淀即为凝集；上层液体清亮透明，下层是沉淀的红血球即为不溶血。试验结果与讨论第1-6号离心管上层液体清亮透明，下层是沉淀的红血球，未见溶血和凝聚；第7号离心管中的液体呈红色透明，管底有少量沉淀残渣被判定为溶血。即受试药品呈现与阴性对照相同的实验结果，无溶血和凝聚发生；阳性对照管呈澄明红色，底部有细胞碎屑，有溶血发生。实验结果表明本发明产品在体外接触红血球后不出现溶血和凝聚反应。详见表1和表2。表1.本发明产品体外溶血性试验描述<table>tableseeoriginaldocumentpage10</column></row><table>表2.本发明产品体外接触红血球的溶血作用观察<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>本发明产品为具有一定分子量分布的多肽溶液，用作血浆容量扩充剂供静脉滴注。溶血试验结果表明本发明产品在4小时内没有发生溶血和红细胞凝聚，表明本发明产品在该试验条件下不会引起血细胞形态改变，提示本发明产品的理化性质符合溶血试验的规定，可供注射使用。[试验例2]本发明明胶代血浆对家兔静脉注射给药血管刺激性试验实验材料实验动物品系新西兰种白色大耳家兔性另lj:雌雄兼用体重2.1-2.3kg来源中国药品生物制品检定所实验动物中心家兔在二级实验动物室饲养观察2天，选4只健康、无稀便的用于试验合格证号京动质许字(2000)第017号饲养环境实验动物为三级空气过滤送风，日光灯12小时自动照明，每笼1只家兔，笼具为不锈钢丝，体积30X30X40cm温度22-24。C湿度40-45%饲料中国药品生物制品检定所动物房自制饮水自由饮水受试药物及配制本发明产品，一20。C冻存，临用前室温融化。对照药物生理盐水实验器材固定液10%甲醛溶液；显微镜OLYPUS(H本)型号BX51TF5ml注射器实验方法给药白色大耳家兔4只。在兔夹上固定后，双侧耳缘静脉用75%乙醇涂抹消毒，用5只注射针头刺入，给药组分别缓慢注射本发明产品lOml(5ml/耳)，对照组注射等容积0.9%生理盐水，速度大约5min/耳。干棉球压迫止血5分钟。每天注射1次，在耳缘同一条静脉血管的远心端上连续给药7天，每天观察局部血管情况。组织学观察在第7天注射给药后的2小时，棒击家兔枕部头颅处死，死亡1小时待血液完全凝固后，剪取注射静脉血管近心端的双耳廓面积2X4cm各一块，浸泡在10%甲醛固定液中，经脱水、石蜡包埋、切片后制成标本玻片，再经H.E染色，显微镜下进行病理组织学观察。实验结果与讨论对照组和受试药组家兔在静脉注射后无全身性不良反应。第2次静脉注射给药后，肉眼观察局部血管皮下组织有少量出血引起的青紫色瘀斑，连续7天给药未见异常。病理组织学切片观察，对照组和受试药组注射部位血管及周围组织未见出血、水肿、'变性或坏死等刺激性反应。给药期间家兔的反应见表3。表3.家兔静脉注射给药血管刺激性实验现象描述<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>家兔静脉注射给药血管刺激性试验中，受试药品采用与临床制剂相同浓度连续7日推注家兔耳缘静脉，给药组和对照组注射部位局部血管肉眼未见明显异常变化，病理组织学未见血管存在刺激反应。提示受试药品即本发明产品符合注射给药部位刺激性试验的规定，可供注射使用。[试验例3]过敏性试验实验材料实验动物性体来别:豚鼠(SPF级DHP白色豚鼠)雌性280—320g中国药品生物制品检定所动物中心提供豚鼠在二级实验动物室饲养观察2天，选健康、无伤、无病的用于试验,京动质许字(2000)第017号合格证号饲养环境动物实验室为三级空气过滤送风，日光灯12小时照明。每笼8只，笼体积100X50X20cm,无菌锯末为垫料。温度22-24°C湿度40-45%饲料无菌饲料自由饮食饮水去离子水自由饮水受试药物及配制本发明产品，一20。C冻存:，临用前室温融化。对照药物生理盐水、牛血清白蛋白标准品(中国药品生物制品检定所)实验器材lml注射器、苦味酸标记液实验方法分组将18只豚鼠随机分为3组，每组6只，分别给以相应药品阴性对照组生理盐水(NS)阳性对照组牛血清白蛋白标准品14.8mg/支(中国药品生物制品检定所)，以生理盐水溶解使成为3mg/ml的溶液(ALB)受试药组本发明产品不稀释致敏用lml注射器分别吸取相应药物，在l，3,5天隔日腹腔注射，每只动物0.5ml/次，共3次。激发激发途径一次快速静脉内给药激发次数将每组6只动物分成两小组，每小组3只。分别在首次注射后第14曰及第21日二次激发。激发剂量相应药液lml。实验结果及讨论三次腹腔致敏注射给药后未见豚鼠精神、活动和行为出现异常；第14天或第21天静脉攻击注射给药后受试药组和溶剂对照组的豚鼠呼吸均匀、被毛不竖，无抓鼻、咳嗽、呕吐、喷嚏等症状，未见其它精神、行为的异常和过敏反应症状；阳性对照组则出现抓鼻、竖毛、喷嚏、干呕、咳嗽、呼吸困难、抽搐、窒息及死亡等一系列过敏反应症状。第21天攻击给药后豚鼠的过敏反应较第14天攻击给药的更为显著。详见表4。表4.本发明产品对豚鼠攻击致敏后的观察(出现反应的动物数)<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>本试验采用全身主动过敏试验，对致敏成立的动物体内静脉注射抗原，观察抗原与抗体结合后导致肥大细胞、嗜碱性粒细胞脱颗粒、释放活性介质而致的全身性过敏反应。供试药即本发明产品激发后15分钟内未发现豚鼠出现明显全身性过敏反应(如有竖毛、呼吸困难、喷嚏、干呕或咳嗽3声等现象中的两种以上者；或罗音、抽搐、虚脱或死亡现象之一者应判断为阳性)。提示本发明产品符合注射过敏性试验的规定，可供注射使用。[试验例4]本发明明胶代血浆治疗休克患者的临床观察l.一般资料收治休克患者共50例，这些患者或因内外出血、失血量过大、收縮压降至80ramHg,或脉压差小于20mmHg，或因严重创伤、烧伤处于休克状态。2.诊断标准重度休克收縮压在70,Hg以下，失血量在2000ml以上者；多器官，系统的严重创伤的休克患者。中轻度休克收缩压在70mmHg以上，失血量少于2000ml者；有明显原因的进行性休克代偿期，如进行性血气胸，(肝、脾破裂等)。3.治疗方法每例患者快速输注本发明代血浆500-1500ml。4.疗效评定标准显效血压回升，脉压差增大，循环迅速改善，休克在短期内得到纠正，并保持稳定。5.治疗结果见表5表5.输入本发明明胶代血浆后改善情况<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>以下通过实施例来进一步阐述本发明明胶代血浆的制备方法，所述的实施例是用于描述本发明，而不是限制本发明。[实施例1]1)海狗皮原料的预处理将冷冻保存的海狗皮解冻，刮去皮下脂肪层，清洗后切成边长为2cm的正方形小块。14'C下用lmol/LNaOH和50%乙醇的混合溶液浸泡15小时，海狗皮颜色为淡黄色，残油率为0.5%，彻底水洗。再在室温下用石灰水浸泡两周，皮料水提液的紫外扫描图谱无酪氨酸的特征吸收峰。然后用水充分洗涤，再加入6mol/L的盐酸，并水洗至中性。2)提取将经上述预处理的海狗皮绞碎，浸于O.1mol/LNaOH溶液中提取40小时得水解明胶粗品。3)纯化往上述粗品中加入6mol/L的盐酸至pH7.2。然后加入硅藻土，使硅藻土含量为0.3%(w/v)，过滤，取滤液得纯化的水解明胶原液4)冷冻干燥将上述水解明胶原液冷冻干燥得水解明胶冻干粉末。5)配制明胶代血浆取水解明胶冻干粉末500mg，加100ml生理盐水溶解即得海狗皮明胶代血浆。分子量为29960、分散度为2.9，渗透压为328m0sm，pH为7.2，运用BCA蛋白测定法测得的蛋白含量为16mg/ml。实施例2、3、4、5、6的操作步骤同实施例1，其中实施例2、3的步骤1)中的正方形小块为边长3cm的正方形小块，实施例4、5的步骤l)中的正方形小块为边长4cm的正方形小块，实施例6的步骤1)中的正方形小块为边长2.5cm的正方形小块，各工艺参数见附表。附表:<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>1)海狗皮原料的预处理将冷冻保存的海狗皮解冻，刮去皮下脂肪层，清洗后切成边长为2cm的正方形小块。14。C下用lmol/LK0H和50%乙醇的混合溶液浸泡15小时，海狗皮颜色为淡黄色，残油率为0.5%，彻底水洗。再在室温下用石灰水浸泡两周，皮料水提液的紫外扫描图谱无酪氨酸的特征吸收峰。然后用水充分洗涤，再加入盐酸水洗至中性。2)提取将经上述预处理的海狗皮绞碎，浸于0.15mol/LNaOH溶液中提取40小时得水解明胶粗品。3)纯化往上述粗品中加入盐酸至pH7.2。然后加入硅藻土，使硅藻土含量为0.3%(w/v)，过滤，取滤液得纯化的水解明胶原液。4)冷冻干燥将上述水解明胶原液冷冻干燥得水解明胶冻干粉末。5)配制明胶代血衆取水解明胶冻干粉末500mg，加100ml生理盐水溶解即得海狗皮明胶代血浆。分子量为29962、分散度为2.8，渗透压为327m0sm，pH为7.2，运用BCA蛋白测定法测得的蛋白含量为16mg/ml。权利要求1.一种明胶代血浆，是以海狗皮为原料提取的明胶制备的，其特征在于该明胶代血浆的蛋白含量为14-18mg/ml。2、根据权利要求1所述的一种明胶代血浆，其特征在于该明胶代血桨的蛋白含量为15-17呢/ml。3、根据权利要求1或2所述的一种明胶代血浆，其特征在于该明胶代血浆的渗透压为300-350m0sm，pH为7.1-7.4。4、一种如权利要求1-3任何一项所述的明胶代血浆的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤1)海狗皮原料的预处理将冷冻保存的海狗皮解冻，刮去皮下脂肪层，切成块，在4-25'C温度下用碱的乙醇溶液浸泡至残油率小于1%后，水洗；然后用石灰水在室温下浸泡至皮料水提液的紫外扫描图谱无酪氨酸的特征吸收峰后洗涤，再加入盐酸水洗至中性，得到经预处理的海狗皮；2)提取将上述经预处理的海狗皮绞碎，浸于NaOH溶液中，提取30-50小时得水解明胶粗n3)纯化往上述粗品中加入盐酸至pH7.0-7.5，然后加入硅藻土，使硅藻土含量为0.3%(w/v)，过滤，取滤液得纯化的水解明胶原液；4)冷冻干燥将上述水解明胶原液冷冻干燥得水解明胶冻干粉末；5)配制明胶代血浆取水解明胶冻干粉末加生理盐水溶解即得海狗皮明胶代血浆。5、根据权利要求4所述的明胶代血浆的制备方法，其特征在于步骤l)中所述的碱的乙醇溶液为NaOH的乙醇溶液。6、根据权利要求5所述的明胶代血浆的制备方法，其特征在于所述的NaOH的乙醇溶液为0.5-1.25mol/LNa0H和20%-95%乙醇的混合溶液。7、根据权利要求6所述的一种明胶代血浆的制备方法，其特征在于所述的混合溶液为0.75-1.25mol/LNa0H和40%-60%乙醇的混合溶液。8、根据权利要求7所述的一种明胶代血浆的制备方法，其特征在于所述的混合溶液为lmol/LNaOH和50%乙醇的混合溶液。9、根据权利要求4所述的一种明胶代血浆的制备方法，其特征在于步骤l)中所述的切成块为切成正方形小块，优选边长为2-4cra的小块。10、根据权利要求4所述的明胶代血浆的制备方法，其特征在于步骤2)中所述的NaOH溶液为0.lmol/LNaOH溶液。全文摘要本发明涉及一种明胶代血浆的制备方法，该明胶代血浆特征是以海狗皮为原料提取的分子量为25000-35000、分散度为2.0-3.0的明胶制备的蛋白溶液，该明胶代血浆的渗透压为300-350mOsm，pH为7.0-7.4，运用BCA蛋白测定法测得的蛋白含量为14-18mg/ml。该明胶代血浆的渗透压和pH与血浆相近，具有与生理盐溶液相同的等渗性，在临床应用时能参与体内代谢，具有良好的扩充血容量、保持必要渗透压、改善微循环的作用，能够维持一定的血压，改善因有效循环血容量不足引起的休克等症状。可与其它静脉输液剂同时使用，其疗效明显，无溶血反应，无过敏反应，对静脉血管无刺激反应，无毒副作用，用药安全。文档编号A61P7/00GK101254210SQ20071007958公开日2008年9月3日申请日期2007年3月1日优先权日2007年3月1日发明者徐康森,李荣立,飞林申请人:中国生化制药工业协会