专利名称：白芷总香豆素提取物及其制备方法
技术领域：
本发明属医药技术领域，具体涉及一种中药白芷的总香豆素提取物及制备方法、质量控制方法及其在医药和保健食品领域的应用。
背景技术：
白芷为伞形科当归属植物白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.etHook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss)Shan et Yuan的干燥根。主要功效为解表散风、通窍、止痛、燥湿止带、消肿排脓。现多用于外感风寒，头痛、鼻塞、鼻渊、风湿痹痛、带下过多、疮痈肿毒等证。现代药理实验表明白芷具有解热、镇痛、抗菌消炎、光敏、扩张冠脉和抗凝血等作用。
白芷中主要含有香豆素、挥发油等成分，药理研究表明香豆素类成分为其主要活性成分。迄今为止，国内外学者已从白芷中分离得到47个香豆素类成分，其中多为直线呋喃型香豆素。主要香豆素类化合物包括欧前胡素、异欧前胡素、比克白芷素(白当归素)、氧化前胡素、佛手柑内酯、珊瑚菜内酯、花椒毒酚、异氧化前胡内酯、比克白芷醚(白当归脑)、5-甲氧基-8-羟基补骨脂内酯、8-甲基-5-氧-(3-甲基-3-丁烯基)-补骨脂素、水合氧化前胡素、异紫花前胡苷、叔-O-甲基白当归素、紫花前胡苷、3’-hydroxy-marmesinin、白当归素-叔-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、白当归素-仲-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、花椒毒酚-8-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、tert-O-β-D-glucopyranosyl hera-lenol，蛇床子素、heptatriacontane、hergaptol、新白芷醚、7-去甲软木花椒素、7种双呋喃香豆素(dahuribirin A-G)、白芷灵、伞形花内酯、川白芷素、马美辛、东莨菪内酯、异白当归脑、新白当归脑、回芹内酯、8-甲氧基补骨脂素、东莨菪素-7-O-β-D-葡萄糖苷、别异欧前胡素、别欧前胡素、脱水比克白芷素、花椒毒素、水合比克白芷素、5-羟基-8-甲氧基补骨脂内酯等。
有关白芷化学成分的药理活性、应用及制备方法，目前公开的发明专利有“一种从白芷中提取的香豆素类有效成份在制备治疗高血压药物的应用及其提取方法”(申请号02114957.7)，发明内容为用超临界流体萃取方法提取白芷中的香豆素类有效成份及其在制备治疗高血压药物的应用，其中涉及的香豆素类成分仅为欧前胡素、异欧前胡素、氧化前胡素、比克白芷素、别欧前胡素，脱水比克白芷素。然而白芷中含有的香豆素类成分近50种，并具有多种药理活性，如解热、镇痛、抗炎作用，抗肿瘤作用，抗组胺作用，以及对皮肤和病原微生物的作用等。不同的香豆素药理活性也不相同，如欧前胡素、花椒毒酚、异欧前胡素、珊瑚菜内酯、别欧前胡素、氧化前胡内酯、异氧化前胡内酯7种呋喃香豆素有光毒活性，是白芷治疗银屑病的主要药效成分，欧前胡素和印度前胡素有降血压作用，花椒毒素、欧前胡素、水合氧化前胡素等，能增强肾上腺素和ACTH所诱导的脂肪分解作用，佛手柑内酯、水合氧化前胡素、白当归素具有抑制组胺释放的作用等。
本发明涉及的一种白芷总香豆素提取物，其特色之一在于本发明白芷总香豆素提取物包括的选择性基本成分为欧前胡素、异欧前胡素、5-羟基-8-甲氧基补骨脂内酯、佛手柑内酯，或其任何一种或数种的组合。该提取物还包括比克白芷素、水合氧化前胡素、异氧化前胡素、5-甲氧基-8-羟基补骨脂内酯、花椒毒酚等成分中的任何一种或数种的组合。其特色之二在于在制备方法上，采用了大孔吸附树脂分离富集技术。与前述专利公开方法有明显不同。
发明内容
本发明的目的在于提供一种白芷总香豆素提取物及其制备方法。
本发明所述白芷，来源于伞形科白芷属的任意一种植物。白芷为市售白芷饮片或伞形科当归属白芷或伞形科植物糙叶独活及其它任意一种白芷的变种植物的全部植株或任何部位，如根、根茎、茎、叶、花穗、果实等，其中优选的药材部位为这些植物的干燥根。上述的白芷包括未经任何炮制处理的原药材及饮片，还包括各种炮制加工产品，如晒白芷、烘干白芷、硫熏白芷、石灰白芷、白芷炭等。
本发明所述的白芷总香豆素部位，是指从上述任一植物的任何部位提取得到的，包含多种香豆素活性成分的组合物，其中优选的是从白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.或杭白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.)Benth.et Hook.f.var.formosana(Boiss)Shan et Yuan.的干燥根中提取制备得到的，含有多种香豆素类活性成分的组合物。
本发明涉及的白芷总香豆素提取物，是从中药白芷中提取的含有多种香豆素类活性成分的组合，其选择性基本成分为欧前胡素、异欧前胡素、5-羟基-8-甲氧基补骨脂内酯和佛手柑内酯，或其任何一种或数种的组合。
本发明涉及的白芷总香豆素提取物，除包括上述选择性基本成分外，还可包括比克白芷素、水合氧化前胡素、异氧化前胡素、5-甲氧基-8-羟基补骨脂内酯、花椒毒酚等成分中的任何一种或数种的组合。
作为白芷总香豆素提取物，其中各香豆素类成分百分含量的总和为5～100％(w/w)，其中优选含量为50～100％(w/w)。
作为白芷总香豆素提取物，欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯三种成分的含量占全部总香豆素含量的5～100％。
本发明还涉及所述白芷总香豆素提取物的制备工艺，它可以用以下任意一种方法，或这些方法的任意组合进行制备(1)溶剂提取法；(2)溶剂萃取法；(3)大孔吸附树脂法；(4)铅盐沉淀法；(5)柱色谱法；(6)液-液逆流分配色谱法。其中优选的方法为大孔吸附树脂法。
在使用这些方法进行制备时，一般包括以下几个步骤(1)提取所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及酯类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂。提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等。
优选的提取工艺为白芷药材加50～95％乙醇，回流提取1～3次，每次提取1～2小时，溶剂用量为5～15倍量(L/kg)。
(2)浓缩包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓缩等。
(3)干燥包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。
当采用溶剂萃取法进行制备时，一般先将提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质，然后用合适极性的溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是这些溶剂的混合物，萃取获得其中的总香豆素成分，得到总香豆素提取物。
当采用大孔吸附树脂法进行制备时，所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型，如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806、D4006、X-5、NKA-II、NKA-9等，其中优选的为弱极性或中等极性的树脂，如AB-8、HPD400、D101、D4006、X-5等。所用的洗脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等，其中优选的为0～100％乙醇。
优选的白芷总香豆素提取物树脂纯化工艺为选用AB-8、D101、D4006、X-5等中等极性或弱极性大孔吸附树脂作为纯化用树脂，白芷乙醇提取物用20～40％的乙醇溶散上样，上样液浓度0.8～8mg/mL(以总香豆素计)，吸附流速3～9BV/h，树脂柱径高比1∶6～1∶10，上样量为1.6～9.5mg/mL(以总香豆素计)，30～60％乙醇洗脱4～8倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.5～6BV/h，用70～95％乙醇洗脱3～10倍树脂体积，洗脱流速为3～9BV/h。
当采用铅盐沉淀法进行制备时，所用的铅盐试剂为醋酸铅或碱式醋酸铅，所用的脱铅剂为H2S、磷酸盐及硫酸盐等。
当采用柱色谱法进行制备时，其处理的对象可以是上述提取步骤所获得的产物，也可以是经上述溶剂萃取法、大孔吸附树脂法或铅盐沉淀法初步纯化后的产物。所用的固定相可以是硅胶、聚酰胺、氧化铝、葡聚糖(Sephadex系列或Sephadex LH-20系列)、C-8、C-18、活性炭、纤维素等，所用的洗脱剂因固定相的不同而不同，一般是由水、甲醇、乙醇、丙酮、氯仿、乙酸乙酯、石油醚、环己烷等组成的混合溶剂。
当采用液-液逆流萃取法进行制备时，其处理的对象可以是上述提取步骤的产物，也可以是经上述溶剂萃取法、大孔吸附树脂法或铅盐沉淀法初步纯化后的产物。一般先将提取物混悬于水中，然后用低极性的酯类、烷烃类或醚类溶剂(如石油醚、乙醚、己烷、汽油、乙酸乙酯等)萃取除去脂溶性杂质，然后用合适极性的溶剂，如氯仿、乙酸乙酯、丙酮、正丁醇等，或是这些溶剂的混合物，萃取获得其中的总香豆素成分，得总香豆素提取物。
该提取物可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍，用于制备药物或功能性食品，所制得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料等。
本发明质量控制方法可包括以下含量测定方法中的一种或两种1.总香豆素含量测定精密称取欧前胡素对照品3.91mg，置10ml量瓶中，加甲醇使其完全溶解并稀释至刻度，摇匀。分别吸取0.1、0.15、0.2、0.25、0.3ml，用甲醇稀释定容到5ml量瓶中，摇匀，在303nm波长处测定吸光度。以欧前胡素对照品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
取白芷总香豆素提取物适量，加95％乙醇溶解定容至250ml量瓶中，摇匀。精密吸取0.3ml，加95％乙醇定容至5ml量瓶中，摇匀。于303nm波长处测定吸光度，计算含量。
2.欧前胡素、异欧前胡素及佛手柑内酯含量测定(1)欧前胡素和异欧前胡素色谱条件色谱柱YWG-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；流动相乙腈-水(54∶46)；流速1.0ml/min；检测波长300nm；柱温室温。
标准曲线绘制精密吸取欧前胡素和异欧前胡素混合对照品溶液(含欧前胡素0.04614mg/ml，异欧前胡素0.01366mg/ml)0，2.0，4.0，6.0，8.0，14.0μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定欧前胡素和异欧前胡素色谱峰峰面积。以对照品进样量(μg)为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
含量测定取白芷总香豆素提取物适量，加95％乙醇溶解定容至250ml量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。精密吸取供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定色谱峰峰面积，外标一点法计算含量。
(2)佛手柑内酯色谱条件色谱柱YWG-C18柱(250mm×4.6mm，10μL)；流动相甲醇-四氢呋喃-水，梯度条件见表1；流速1ml/min；柱温室温；检测波长300nm。
表1梯度洗脱条件
标准曲线绘制精密吸取佛手柑内酯对照品溶液(0.0182mg/ml)2，4，8，12，16μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件，测定佛手柑内酯色谱峰峰面积。以佛手柑内酯对照品进样量(μg)为横坐标，色谱峰峰面积为纵坐标绘制标准曲线。
含量测定取白芷总香豆素提取物适量，加95％乙醇溶解定容至250ml量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。精密吸取上述供试品溶液10μL，注入液相色谱仪，测定各色谱峰峰面积，计算含量。
具体实施例方式
实施例1白芷总香豆素提取物制备工艺取白芷药材1kg，用60％乙醇提取2次，每次提取2小时，溶剂用量为10L。乙醇提取液回收溶剂，用20％乙醇溶散均匀后上AB8树脂柱，上样液浓度为0.8mg/mL，上样量为1.6mg/mL(以总香豆素计)，树脂柱的径高比为1∶10；吸附流速为2ml/min；上样后用5BV、浓度50％的乙醇除杂，除杂流速为2ml/min；最后用6BV 95％的乙醇洗脱，洗脱流速为3ml/min，收集洗脱液，回收溶剂，得白芷总香豆素提取物。测定白芷总香豆素提取物中总香豆素含量为56％，欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯三种成分的含量之和为15％。
实施例2白芷总香豆素提取物制备工艺取白芷药材2kg，用80％乙醇提取3次，每次提取1小时，溶剂用量为5L。乙醇提取液回收溶剂，用40％乙醇溶散均匀后上AB8树脂柱，上样液浓度为3mg/mL，上样量为9mg/mL(以总香豆素计)，树脂柱的径高比为1∶9；吸附流速为3ml/min；上样后用8BV、浓度30％的乙醇除杂，除杂流速为0.5ml/min；最后用70％的乙醇洗脱10倍树脂体积，洗脱流速为2ml/min，收集洗脱液，回收溶剂，得白芷总香豆素提取物。测定白芷总香豆素提取物中总香豆素含量为53％，欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯三种成分的含量之和为18.6％。
实施例3白芷总香豆素提取物制备工艺取白芷药材5kg，用90％乙醇提取3次，每次提取1小时，溶剂用量为10L。乙醇提取液回收溶剂，用30％乙醇溶散均匀后上AB8树脂柱，上样液浓度为1mg/mL，上样量为2.8mg/mL(以总香豆素计)，树脂柱的径高比为1∶8；吸附流速为1ml/min；上样后用8BV、浓度30％的乙醇除杂，除杂流速为1ml/min；最后用95％的乙醇洗脱8倍树脂体积，洗脱流速为1ml/min，收集洗脱液，回收溶剂，得白芷总香豆素提取物。测定白芷总香豆素提取物中总香豆素含量为61％，欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯三种成分的含量之和为22％。
实施例4白芷总香豆素提取物制备工艺取白芷药材10kg，用90％乙醇提取1次，每次提取2小时，溶剂用量为15L。乙醇提取液回收溶剂，用40％乙醇溶散均匀后上AB8树脂柱，上样液浓度8mg/mL，上样量为4mg/mL(以总香豆素计)，树脂柱的径高比为1∶6；吸附流速为3ml/min；上样后用4BV、浓度60％的乙醇除杂，除杂流速为1ml/min；最后用90％的乙醇洗脱10倍树脂体积，洗脱流速为3ml/min，收集洗脱液，回收溶剂，得白芷总香豆素提取物。测定白芷总香豆素提取物中总香豆素含量为59％，欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯三种成分的含量之和为19％。
实施例5白芷总香豆素片的制备白芷总香豆素提取物100g淀粉 100g上述组分混合均匀，加滑石粉适量，压制成1000片。
实施例6白芷总香豆素复方制剂的制备白芷总香豆素提取物100g延胡素生物碱提取物50g上述组分混合均匀，装入硬明胶胶囊中，共1000粒胶囊。
权利要求
1.一种白芷总香豆素提取物，其特征在于该提取物由中药白芷中提取获得，并包括选择性基本成分欧前胡素、异欧前胡素、5-羟基-8-甲氧基补骨脂内酯、佛手柑内酯，或其任何一种或数种的组合。
2.如权利要求1所述的白芷总香豆素提取物，其特征在于还可以含有比克白芷素、水合氧化前胡素、异氧化前胡素、5-甲氧基-8-羟基补骨脂内酯、花椒毒酚等成分中的任何一种或数种的组合。
3.如权利要求1所述的白芷总香豆素提取物，其特征在于白芷为市售白芷饮片或伞形科当归属白芷或伞形科植物糙叶独活及其它任意一种白芷的变种植物的全部植株或任何部位，如根、根茎、茎、叶、花穗、果实等，还包括各种炮制加工产品，如晒白芷、烘干白芷、硫熏白芷、石灰白芷、白芷炭等。
4.如权利要求1所述的白芷总香豆素提取物，其特征在于上述总香豆素类分含量总和以重量计为5～100％。
5.如权利要求4所述的白芷总香豆素提取物，其特征在于各香豆素类成分中欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯三种成分的含量占全部总香豆素含量以重量计为5～100％。
6.如权利要求1～4所述的白芷总香豆素提取物，其特征在于采用溶剂提取法、溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、铅盐沉淀法、柱色谱法、液-液逆流分配色谱法等任意一种方法，或这些方法的任意组合进行制备。
7.如权利要求6所述的白芷总香豆素提取物制备方法，其特征在于，在使用这些方法进行制备时，包括以下一个或几个步骤提取所用溶剂可以是水或任意一种醇类、酮类及脂类溶剂，或这些溶剂按一定比例组成的混合溶剂，或由这些溶剂与酸、碱、盐配成的酸性或碱性溶剂；提取方法可以是煎煮、加热回流、超声提取、冷浸、渗漉、微波提取、高压提取等；浓缩包括常压或减压条件下的薄膜蒸发、旋转蒸发及煎煮浓缩等；干燥包括真空干燥、喷雾干燥、冷冻干燥等。
8.如权利要求6所述的白芷总香豆素提取物制备方法，其特征在于当使用大孔吸附树脂法进行制备时，所用的大孔树脂可以是非极性、弱极性、中等极性、弱碱性或弱酸性等任意一种类型，如D101、D4020、HPD400、AB-8、S-8、HZ-806、D4006、X-5、NKA-II、NKA-9等，其中优选的为弱极性或中等极性的树脂，如AB-8、HPD400、D101、D4006、X-5等，所用的洗脱剂为水和含水的乙醇、甲醇、丙酮等，其中优选的为0～100％乙醇。
9.如权利要求8所述的白芷总香豆素提取物制备方法，其特征在于选用AB-8、D101、D4006、X-5等中等极性或弱极性大孔吸附树脂作为纯化用树脂，白芷乙醇提取物用20～40％的乙醇溶散上样，上样液浓度0.8～8mg/mL(以总香豆素计)，吸附流速3～9BV/h，树脂柱径高比1∶6～1∶10，上样量为1.6～9.5mg/mL(以总香豆素计)，30～60％乙醇洗脱4～8倍树脂体积进行除杂，除杂流速为1.5～6BV/h，用70～95％乙醇洗脱3～10倍树脂体积，洗脱流速为3～9BV/h。
10.如权利要求1所述的提取物的应用，其特征在于，该提取物可以单独或与其它任何中西药物或食物按任意比例配伍，用于制备药物或功能性食品，所制得的药物或功能性食品可以是胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、口服液、糖浆、冲剂、酒剂、注射剂、膏剂、散剂、饮料等。
全文摘要
本发明公开了一种从中药白芷中提取得到的总香豆素提取物及其制备方法。该提取物包括的选择性基本成分为欧前胡素、异欧前胡素、5－羟基－8－甲氧基补骨脂内酯、佛手柑内酯，或其任何一种或数种的组合。该提取物还包括比克白芷素、水合氧化前胡素、异氧化前胡素、5－甲氧基－8－羟基补骨脂内酯、花椒毒酚等成分中的任何一种或数种的组合。该提取物可由溶剂提取法、溶剂萃取法、大孔吸附树脂法、铅盐沉淀法、柱色谱法、液－液逆流分配色谱法等任意一种方法，或这些方法的任意组合制备获得。所制得的白芷总香豆素提取物中各种香豆素类成分百分含量的总和为5～100％(w/w)，其中欧前胡素、异欧前胡素、佛手柑内酯三种成分的含量占全部总香豆素含量的5～100％(w/w)。
文档编号A61P29/00GK101062069SQ20071011131
公开日2007年10月31日 申请日期2007年6月18日 优先权日2007年6月18日
发明者石任兵, 刘斌, 曾琳琳 申请人:石任兵, 刘斌